Universidad Distrital Francisco José de Caldas

Facultad de ciencias y educación,

Proyecto curricular Licenciatura en química.
Bioquímica – Adís Ayala

RESULTADOS PRACTICA 10
CUANTIFICACIÓN DE PROTEINAS POR EL MÉTODO DE BIURET

1. Establezca los tipos de reacciones químicas que se dan para la detección de proteínas en este experimento.

Se cuantifica la formación de un complejo estable entre proteínas y cobre (II). El complejo presenta un color violeta
característico, que se puede observar a 310nm o 540-560nm, el cual se da por la coordinación de un átomo de cobre con
cuatro átomos de nitrógeno; el complejo se basa en la desprotonación de los grupos amida para formar el enlace con el
cobre (II) o por el establecimiento de un enlace coordinado entre el metal y los pares de electrones libres de los átomos de
oxígeno y de nitrógeno del péptido. Después de la adición del reactivo de cobre se requiere de tiempo para desarrollar una
coloración de Biuret estable; es necesario considerar la posible influencia de aminoácidos libres que forman buffer en
configuración tris y amoniaco (Fuentes 2012).
Se basa en la formación de un complejo coloreado entre el Cu 2+ y los grupos NH de los enlaces peptídicos en medio
básico. 1Cu2+ se acompleja con 4 NH, siendo la intensidad de coloración directamente proporcional a la cantidad de
proteínas (enlaces peptídicos).

Figura 1. Formación del compuesto

de coordinación en la determinación de
proteínas por el método de Biuret

2. Anexe el grafico de la curva de calibración corregida por mínimos cuadrados y los valores de la Tabla 1 Anexo 10
con los valores de intercepto, pendiente, coeficiente de correlación y concentración de proteínas para las diferentes
muestras.

Grupo 7 ABS ABS- BLANCO FD [] g/dL [] mg/mL [] ug/uL [] ng/uL

Blanco 0,371 0 - 0 0 0 0
−5
Patrón 1 0,56 0,189 - 2,5 2,5 x 10 25 25000
−5
Patrón 2 0,628 0,257 - 5 5 x 10 50 50000
Patrón 3 1,074 0,703 - 10 1 x 10−4 100 10000
Plasma 0,594 0,223 1/2 7,198 7,198 x 10−5 71,98 71980
Suero 0,621 0,25 1/2 7,977 7,977 x 10−5 79,77 79770
MP 0,841 0,47 - 7,189 7,189 x 10−5 71,89 71890
MP orina 0,435 0,064 - 6,568 6,568 x 10−5 65,68 65680
a - 0,0136
b 0,0688
r 0,972
 Figura 2. De izquierda a derecha: curva de calibración y curva de calibración con muestras interpoladas

3. Determine en cuales de las muestras tratadas no se hallaron valores normales y discuta.

Las proteínas totales séricas se pueden separar en dos grandes grupos la Albúmina y las Globulinas. La albúmina es la
proteína de más concentración en la sangre, transporta muchas moléculas pequeñas y mantiene la presión sanguínea;
mientras las globulinas se pueden dividir en alfa-1, alfa- 2, beta y gamma globulinas; la albúmina representa el 60% de las
proteínas que contiene el suero y el resto son las globulinas. La determinación de proteínas totales se realiza para evaluar
la posible presencia de enfermedades nutricionales, enfermedades del riñón o del hígado, siendo su rango de referencia
6.4 a 8.2 g/dL (Fiñada, 2001), es así que de acuerdo a los valores anteriormente mencionados las muestra analizadas se
encuentran dentro del rango de referencia, indicando que las muestras del paciente se encuentra dentro de los valores
normales.

Normalmente, las proteínas en orina son 30% albúmina, 30% globulinas séricas y 40% proteínas tisulares, de las cuales el
mayor componente es la proteína de Tamm-Horsfall; es así que este perfil puede alterarse en condiciones que afectan
tanto la filtración glomerular como la reabsorción tubular. Aproximadamente 15 Kg de proteínas pasan diariamente a
través del riñón de un adulto; sin embargo, gracias a la barrera glomerular selectiva, en la orina sólo se excretan hasta 150
mg al día (20 mg/dL), cifras mayores se consideran proteinuria (Adler, 2005); la cual puede ser un hallazgo tanto
incidental y transitorio, como la manifestación de una enfermedad renal primaria o sistémica con compromiso de los
riñones. Teniendo en cuenta que puede representar la manifestación de una enfermedad renal crónica y ser un factor de
riesgo independiente para el desarrollo de enfermedades cardiovasculares y mortalidad (Arroyave, 2007),
Cabe resaltar que la concentración de proteínas en la orina depende del estado de hidratación del paciente y raras veces
excede los 150 mg al día (20 mg/dL) en adultos, cifra sobre la cual se considera que existe proteinuria; al presentar niveles
inferiores a 150 mg en las muestras de orina indica que el paciente se encuentra dentro de los valores normales.

4. Establezca que indica a nivel metabólico un aumento o disminución de las proteínas plasmáticas o séricas.
Argumente sus resultados con los reportados por otros artículos.

De acuerdo a Gazzaneo, y colabores en su artículo Albúmina sérica como indicador negativo de estrés metabólico en
pacientes pediátricos con sepsis. Estado Anzoátegui del 2005 se establece la disminución de la albúmina sérica como
indicador negativo de estrés metabólico.
La disminución de los niveles de albúmina ocurre comúnmente en una variedad de enfermedades tales como síndrome
nefrótico enfermedades hepáticas, infecciones agudas y malnutrición. Sin embargo se ha demostrado
hipoalbuminemia en pacientes que cursan patologías asociadas a estrés metabólico, siendo la causa más frecuente en
pediatría las infecciones que producen Síndrome de Respuesta Inflamatoria Sistémica (SIRS).
La síntesis diaria de albúmina es de 12 a IS gramos y se lleva a cabo en los ribosomas unidos al retículo endoplásmico
de los hepatocitos, su vida media es de 20 días. Una vez sintetizada es liberada en las cisternas del retículo
endoplásmico, y llevada por esta vía hacia el complejo de Golgi, del cual sale en vesículas secretoras que se unen a la
membrana plasmática antes de su secreción en el sinusoide, mientras el hígado sintetiza además, otras' proteínas
plasmáticas, entre ellas las globulinas, que constituyen un pool funcional altamente activo, con una vida media de la 3
días.
La albúmina no se distribuye libremente en el compartimiento intersticial. El espacio físico ocupado por la matriz
intersticial de colágeno y glucosaminoglicanos está parcialmente excluido en lo que se refiere a su distribución (4). La
sobrehidratación de la matriz intersticial parece inducir de forma adicional una alteración/disgregación de ésta, que a
 su vez aumenta aún más el espacio de distribución intersticial, con la consiguiente hipoalbuminemia (4, 8). La
hipoalbuminemia puede inducir alteraciones en el intercambio de fluido extracelular a través de la membrana capilar
por disminución de la presión oncótica plasmática y facilitación del paso de líquido del compartimiento plasmático al
extracelular
La respuesta de fase aguda durante el estrés metabólico, se caracteriza entre otras cosas por una reorganización en la
producción hepática de proteínas. Ésta consiste en un incremento agudo y extenso de la producción de varias
proteínas, con la consiguiente elevación plasmática de ellas; estas proteínas se han denominado "proteínas de fase
aguda" y tienen por función la protección del medio interno en situaciones de estrés. En situaciones de estrés, la
síntesis de albúmina decrece y sus concentraciones plasmáticas bajan, independientemente de la suplencia de
aminoácidos al hígado, de cambios en la distribución del pool o de los volúmenes de líquidos del organismo. Mientras
persistan estas condiciones, sus niveles séricos irán decreciendo hasta cifras muy bajas.
En conclusión, la albúmina ha sido considerada una "proteína de fase aguda negativa" debido a que sus
concentraciones séricas tienden a descender en situaciones de estrés metabólico como trauma, cirugía y sepsis,
aparentemente debido a una disminución de su síntesis. Una hipótesis planteada en el documento menciona que la
alteración/disgregación de la matriz intersticial inducida por citoquinas, sería la responsable del incremento en el
espacio de distribución intersticial para la albúmina, con el consiguiente escape transcapilar. Esto es sustentado por el
aumento de hialuronato sérico en pacientes con sepsis, el cual se ha relacionado en proporción directa con el grado de
severidad.

5. Establezca cuales son los valores mínimos y máximos que se pueden detectar en proteína al separarlas en geles
SDS PAGE si se realiza tinción con nitrato de plata y con azul de Coomasie.

6. Adjunte los resultados de la Tabla 2 Anexo 10, calcule el volumen y el factor de dilución que debe aplicar a las
diferentes muestras para detectarlas en electroforesis SDS- PAGE por los métodos de tinción propuestos y
determine cuál es el más conveniente.

BIBLIOGRAFÍA

Adler, S. G., & Fairley, K. (2005). The patient with hematuria & proteinuria & abnormal finding on urinary
microscopy. Robert w. Schrier, editor. Manual of nephrology. Philadelphia: Lippincott Williams wilkins

Arroyave, N. V., & Gómez, M. A. (2007). Proteinuria. Medicina & Laboratorio, 13(07-08), 327-344.

Fiñana, I. T., Cejudo, A. G., & Fernández, E. (2001). pH y amortiguadores: Tampones fisiológicos. Amortiguadoras, 3, 1-
11.

Fuentes Paredes, F., Quispe Díaz, I., & García Baltazar, J. (2012). Estandarización del método de Biuret para cuantificar
proteínas totales en suero antibotrópico polivalente producido en el Centro Nacional de Productos Biológicos del INS.

Gazzaneo, M.; Tineo, E.; Chapín, Y.; Vizcaíno, R.; Gerardino, O.; Rodríguez, Y. Albúmina sérica como indicador
negativo de estrés metabólico en pacientes pediátricos con sepsis. Estado Anzoátegui Archivos Venezolanos de
Puericultura y Pediatría, vol. 68, núm. 1, enero-marzo, 2005, pp. 7-14