Facultad de Ingeniería

Equipos de laboratorio

Reporte de Espectrofotometría

Clisman Jiménez 30941200

Lunes 10 de Febrero del 2020

 Objetivos

 Comprender el funcionamiento del espectrofotómetro

 Observar la estructura interna del espectrofotómetro, analizar sus

posibles fallas y evaluar el mantenimiento correctivo y preventivo del
espectrofotómetro considerando los repuestos a cambiar en dicho
mantenimiento
 Introducción

La espectrofotometría es un método científico utilizado para medir la

interacción de la radiación electromagnética con la materia, midiendo la
intensidad de la luz cuando un haz luminoso que pasa a través de la solución
de acuerdo a la longitud de onda utilizada.
El espectrofotómetro, es un equipo que utiliza el principio de
espectrofotometría, construido mediante procesos modernos y avanzados en
su fabricación; es uno de los principales instrumentos de diagnóstico e
investigación. Utiliza la luz de una lámpara de características específicas, esta
es guiada a través de un dispositivo que selecciona y separa luz de una
determinada longitud de onda y la hace pasar por una muestra. La intensidad
de la luz que sale de la muestra es almacenada y comparada con la intensidad
de la luz que incidió en la muestra, a partir de esto se calcula la transmitancia
de la muestra, el cual depende de factores como la concentración de la
sustancia.
Cabe destacar que entre la espectrofotometría se pueden considerar las
pruebas de glucosa, TGO, TGP (transaminasas), albumina, urea, ácido úrico,
LDH, creatinina, etc. Cada prueba tiene distintas absorbancias, y distinto
método de medición, ya puede ser de dos puntos, cinética o punto final.
Hay varios tipos de espectrofotómetros, puede ser de absorción atómica o
espectrofotómetro de masa. Este instrumento tiene la capacidad de proyectar
un haz de luz monocromática a través de una muestra y medir la cantidad de
luz que es absorbida por dicha muestra. Esto le permite al operador realizar
dos funciones:

1. Dar información sobre la naturaleza de la sustancia en la muestra.

2. Indicar indirectamente qué cantidad de la sustancia que nos interesa está
presente en la muestra.
 Marco teórico
El principio del espectrofotómetro, se basa tomando la luz como una forma de
energía electromagnética, con una velocidad constante de 3*10^8 y se
representa con la siguiente ecuación:
C
V 0=
N

Donde:
v = velocidad a través del medio por el que pasa la luz y
n = índice de refracción del medio, cuyo valor oscila, por lo general, entre 1,0 y
2,5

cabe mencionar que en la lámpara encontramos unos tornillos que tienen la

función de ajustar la posición de la lámpara y la inclinación de la misma, es
importante tomar una fotografía o tener mente fotográfica en el desarmado del
mismo ya que debido a los distintos tamaños de los tornillos, a veces tiende a
complicarse un poco.
1. Ciertos criterios a considerar es que no se debe tocar el filamento
2. Se tiene una temperatura considerablemente alta
3. Existe una posición y enlazamiento de cables de cierto orden que se
debe respetar.
4. El tiempo a considerar para obtener la mayor cantidad luminosa es de
30 minutos.
5. Siempre se debe colocar la fecha de cambio de lámpara en una zona
relativamente visible

Si mencionamos los consumibles del equipo de espectrofotometría entre ellos

tendríamos el papel térmico, agua destilada, copitas, bandeja donde se colocan
las cubetas y se rotulan
Componentes de un espectrofotómetro

Lámpara Bomba ventiladora Cable de monocromador

peristáltica fibra óptica
Filtros Placas Disipador de Fuente de prisma
procesadora calor luz
Celda de Motor de Caño de la Sistema espejos
flujo(flow rueda de lámpara detector
cell) filtros con
fotocelda
Impresora Fuente de Condensadore Fusibles puertos
térmica poder s

Con respecto a la bomba peristáltica cabe mencionar que se coloca la

manguera sobre los rodillos de esta manera se puede ajustar para obtener
cada milímetro de gota para aprovechar su vida útil.

En la siguiente imagen podemos observar el diagrama óptico básico de un

espectrofotómetro

Mantenimiento preventivo de un espectrofotómetro

1. Limpiar externamente el espectrofotómetro, incluyendo los controles,

pantallas o metros de medición. Esto se puede realizar con una pieza de tela
fina humedecida con agua destilada.

2. Verificar cable de alimentación

3. Revisar el fusible de protección. Antes de abrir el alojamiento del fusible,
comprobar que el espectrofotómetro esté apagado y que sus contactos se
encuentren limpios y en buen estado. Si es necesario reemplazarlo, colocar
uno nuevo con las mismas características del recomendado por el fabricante.

4. Colocar el instrumento en la configuración operacional.

5. Accionar el interruptor de encendido para permitir un funcionamiento por

cinco (5) minutos. Verificar lo siguiente:
a) Si las lámparas o indicadores piloto funcionan.
b) Si el indicador de lectura permanece en cero (0).
c) Si la luz de la fuente funciona.
Al finalizar el procedimiento de verificación es necesario calibrar y pasar control

6. Verificar que la lámpara esté limpia y en buen estado. Si no funciona, instalar

una nueva, con las mismas especificaciones de la original. En los
espectrofotómetros modernos, el estado de la lámpara es detectado
automáticamente mediante el software que controla el estado y el
funcionamiento. Nunca se debe tocar el bulbo de la lampara
del equipo, por lo que es fácil determinar en qué momento es necesario
cambiar la lámpara. Efectuar el cambio de la lámpara y realizar el ajuste
posterior siguiendo el procedimiento recomendado por el
fabricante.

7. Realizar una prueba de corriente de fuga en las posiciones de encendido y

apagado.
a) Verificar el polo a tierra y la polaridad correcta.
b) Verificar la polaridad correcta sin polo a tierra.
c) Verificar la polaridad inversa sin polo a tierra.
8. Medir la sensibilidad del equipo.

9. Calibrar el panel frontal del espectrofotómetro siguiendo las instrucciones del

fabricante.

10. Medir la sensibilidad del equipo.

Fuente de luz:
La fuente de luz que ilumina la muestra debe cumplir con las siguientes
condiciones: estabilidad, direccionalidad, distribución de energía espectral
continua y larga vida. Las fuentes empleadas son: lámpara de wolframio
(también llamado tungsteno), lámpara de arco de xenón y lámpara de deuterio
que es utilizada en los laboratorios atómicos.

Monocromador:
El monocromador aísla las radiaciones de longitud de onda deseada que
inciden o se reflejan desde el conjunto, se usa para obtener luz monocromática.
Está constituido por las rendijas de entrada y salida, colimadores y el elemento
de dispersión. El colimador se ubica entre la rendija de entrada y salida. Es un
lente que lleva el haz de luz que entra con una determinada longitud de onda
hacia un prisma el cual separa todas las longitudes de onda de ese haz y la
longitud deseada se dirige hacia otra lente que direcciona ese haz hacia la
rendija de salida.

Compartimiento de Muestra:
Es donde tiene lugar la interacción, R.E.M con la materia (debe producirse
donde no haya absorción ni dispersión de las longitudes de onda). Es
importante destacar, que, durante este proceso, se aplica la ley de Lambert-
Beer en su máxima expresión, en base a sus leyes de absorción, en lo que
concierne al paso de la molécula de fundamental-excitado.

Detector:
El detector, es quien detecta una radiación y a su vez lo deja en evidencia, para
posterior estudio. Hay de dos tipos:
a) los que responden a fotones;
b) los que responden al calor

Registrador:
Convierte el fenómeno físico, en números proporcionales al analito en cuestión.

Fotodetectores
En los instrumentos modernos se encuentra una serie de 16 fotodetectores
para percibir la señal en forma simultánea en 16 longitudes de onda, cubriendo
el espectro visible. Esto reduce el tiempo de medida, y minimiza las partes
móviles del equipo.
 Conclusiones

Con la visita que se llevó a cabo en el Hospital escuela logramos observar el

funcionamiento del espectrofotómetro con mayor claridad, ya que no solo
observamos su sistema eléctrico y electrónico, sino también el flujo que este
sistema tiene para proporcionar valores de absorbancia razonables.
Cabe destacar que la celda de flujo se observaba en malas condiciones, pero a
pesar de su apariencia se determinó que aún puede proporcionar valores
aceptables ya que la parte dañada no afecta el valor de lectura de la celda.
También se logró observar un sensor en el rotor de filtros, la manguera de la
bomba peristáltica, la lámpara de 12w, el cable de fibra óptica, entre otros. Al
ser un equipo amigable con el usuario y con el técnico, la parte que define las
condiciones de los parámetros bajo los criterios de los insertos dados por el
fabricante, se vuelve un poco tedioso de programar, ya que se tiene que tomar
en cuenta la longitud de onda, que tipo de medición es.

Se logro observar la estructura interna del espectrofotómetro el cual incluía,

una fuente de poder, una bomba peristáltica, una lámpara, una celda de flujo,
un foto detector o sistema detector, ventiladora, mangueras, placas
electrónicas, cabe mencionar que de las siguientes se puede reemplazar la
celda de flujo, la ventiladora, la lámpara, la bomba peristáltica y las mangueras,
de lo que se pueda dar limpieza podría ser la celda de flujo, pero esta seria con
un extremo cuidado ya que la celda de flujo es muy delicada y una mala
limpieza podría dar una mala lectura de la substancia, se podía cebar el
sistema con agua destilada y hacer una lectura de blanco de muestra para
observar la absorbancia.

La espectrofotometría es uno de los principios de medición más utilizados en la

industria medica sobre todo en el área de laboratorio debido a que su principio
radica en la medición de la absorción de una sustancia, tomando en cuenta que
gran parte de los resultados en los equipos actuales de laboratorio se debe a la
celda de flujo (flow cell) por donde pasa el líquido de la substancia, debido a su
precisión y su apertura.

El espectrofotómetro es un instrumento usado en la física óptica que sirve para

medir, en función de la longitud de onda, la relación entre valores de una
misma magnitud fotométrica relativos a dos haces de radiaciones. También es
utilizado en los laboratorios de química para la cuantificación de sustancias y
microorganismos.