El método de inactivación de los carbapenemicos para la detección de carbapenemasas se

fundamenta en la capacidad que tienen las carbapenemasas de hidrolizar carbapenemicos

para su procedimiento se utiliza un asa de 10ul en donde se va a tomar una cepa aislada
sembrada en agar Mueller Hinton incubada por un dia y en 400ul de agua destilada,
agregándole un disco Meropenem de 10ug en la suspensión e incubar por 2 horas a 35°C.

Después el disco será colocado en agar Mueller Hinton que debe estar sembrado con una cepa
de E. coli ATCC25922 de forma masiva con una escala de 0,5 McFarland, luego incubar a 35°C
por 6 horas, e pueden utilizar como controles de la técnica a Klebsiella pneumoniae ATCC BAA-
1705 y Klebsiella pneumoniae ATCC BAA1706 como controles positivo y negativo
respectivamente.

En la interpretación es negativo para carbapenemasas cuando existe el halo de inhibición y

será positivo cuando no se encuentra dicho halo de inhibición.
La sensibilidad y especificidad es mayor al 99% para la detección de carbapenemasas KPC,
NDM, VIM, IMP, IMI, SPM y OXA en Enterobacterias, pero la especificidad es baja para
Acinetobacter. (21)

Método modificado de inactivación de carbapenemes con el agregado EDTA

(e CIM): esta técnica identifica si la carbapenemasa es metalo B-lactamasas o MBL. Se debe

realizar junto con el método mCIM, su resultado se valida cuando el mCIM es positivo y se
aplica solo en Enterobacterias. Para el procedimiento es similar al MIC y se lo hace juntamente
con el eCIM. Para cada aislamiento se coloca 20ul de EDTA (0.5M) en un tubo con 2ml de caldo
tripticasa soya, finalmente coloque el disco meropenem del tubo del MIC y del eCIM en una
sola placa hisopada con la cepa E. coli ATCC 25922. (21)

Para su interpretación es positivo si el halo de inhibición es ≥ 5 mm del eCIM y mCIM; mientras

que es negativo cuando el halo de inhibición es ≤ 4mm de eCIM y mCIM. (21). Para mejor
comprensión:

• CIM negativo – eCIM no interpretar -------------- carbapenemasa negativo

• CIM positivo – eCIM negativo -------------- serin carbapenemasa

• CIM positivo – eCIM positivo ------------ MBL

• CIM indetermindo ----- eCIM no interpretar----- repetir o considerar otra técnica. (21)

Test de ácido borónico o ABP: es un inhibidor selectivo de las serin carbapenemasas tipo A. Se
efectúa una suspensión de la cepa bacteriana en estudio (0.5 McFarland) para inocular en agar
Mueller Hinton. Luego, colocar el disco de ácido 3-Fenil Borónico en el centro y junto a este
con 2cm de distancia a cada lado colocar los discos carbapenémicos, todos los discos quedan
en sentido horizontal. (15) (18)

Para la interpretación, el resultado es positivo cuando existe un sinergismo entre el ácido

borónico y los carbapenémicos debido a la presencia de las serin carbapenemasas. (15) (18)

Test de ácido etilendiaminotetraacético o EDTA: actúa como agente quelante gracias a que se
combina con iones metálicos para crear complejos cíclicos no iónicos. Los discos constituidos
con EDTA detectan las carbapenemasas de tipo Meta Beta lactamasa (MBL). (15) (18)

En el procedimiento, la cepa que se está estudiando se estandariza en una escala de 0,5

McFarland para luego sembrar de forma masiva en agar Mueller Hinton y de ahí se coloca un
disco con EDTA en el centro y a ambos lados los discos carbapenémicos como imipenem y
meropenem a una distancia de 15 mm. Un resultado es positivo si hay la presencia de un
sinergismo entre los discos carbapenémicos y el disco con EDTA, ya que posee
carbapenemasas tipo MBL. (15) (18)

CONTROL DE CALIDAD

Control de calidad interno

Se lo debe hacer frecuentemente usando las cepas ATCC. Para las Enterobacterias se emplean
las cepas de Escherichia coli ATCC 25922, mientras que en la Pseudomona aeruginosa se usa la
Pseudomona aeruginosa ATCC 27853. La interpretación se realiza siguiendo las tablas dadas
por el CLSI. (19) (15)

E. coli ATCC 25922 P. aeruginosa ATCC 27853

Antimicrobiano Difusión mm

Ertapenem (10ug) 29-36 13-21

Meropenem (10ug) 28-35 27 -33

Imipenem (10ug) 26-32 20-28

Tabla 2. Fuente: Instituto de Salud Pública del Gobierno de Chile. CLSI 2017. (15) (19)

CMI ug/mL

Antimicrobiano E. coli ATCC 25922 P. aeruginosa ATCC 27853

Ertapenem 0,004 – 0,015 -

Meropenem 0,008 -0,06 0,12 - 1

Imipenem 0,06 -0,25 1-4

Tabla 3. Fuente: Instituto de Salud Pública del Gobierno de Chile. CLSI 2017. (15) (22)

Control de calidad externo

Se encargan de valorar los métodos analíticos y monitorear el desempeño de cada uno de los
laboratorios, asegurando que estos apliquen un mantenimiento de calidad analítica; lo hace
identificando errores y planteando acciones correctivas. (23) (22)

Los encargados de hacer cumplir este parámetro son el PEEC, para cual los laboratorios deben
ser anexados al Programa de Evaluación Externa de Calidad (PEEC) del INSPI (Instituto Nacional
de Investigación en Salud Pública), haciendo que los laboratorios tengan una participación
activa y regular, mejorando la fiabilidad de los resultados. El programa funciona a través del
envió de muestras de control al laboratorio y deben analizar lo indicado, al finalizar envían los
resultados al PEEC, estos darán observaciones para evitar errores en la entrega de resultados.
(23)

En el caso de presentar resultados positivos para Enterobacterias en diferentes pruebas

fenotípicas, los laboratorios deben enviar las cepas al INSPI para confirmación de esos
resultados. La confirmación de resistencia que es reportada se efectúa mediante: (15)

• Confirmación de susceptibilidad a carbapenémicos,

• Test fenotípicos para la detección de carbapenemasas

• Estudio molecular por PCR a cepas con resultados fenotípicos positivos

• Determinación de genes (15)