INGENIERÍA EN BIOTECNOLOGÍA

DEPARTAMENTO DE CIENCIAS DE LA VIDA Y LA AGRICULTURA

INGENIERÍA EN BIOTECNOLOGÍA
BIOQUÍMICA I

Práctica II

TEMA:

LIPOSOMAS

DOCENTE: DR. PETRONIO GAVILÁNEZ

INTEGRANTES:

AYALA GABRIELA
COBO ROBERTO
MEJÍA EMILY
YANEZ ZASKIA

NRC: 4778

FECHA DE REALIZACIÓN: 09 de julio de 2018

FECHA DE ENTREGA DE INFORME: 14 de julio de 2018

 1. Tema:
Formación de liposomas a partir de lecitina de soya

2. Objetivos:
 Realizar la formación de liposomas a partir de lecitina de soya.
 Diseñar un perfil del experimento donde plantea y define el problema, preguntas,
objetivos, metodología, resultados, conclusiones, discusión.
 Aplicar el perfil elaborado en la práctica para la formación de liposomas
comprobando su estructura por el microscopio óptico.
 Trabajar en equipo a través del grupo conformado e interactúa con conocimientos de
otras asignaturas.
 Elaborar un informe en el que comunica sus resultados, además de utilizar la
herramienta de plataforma virtual.

3. Hipótesis:

Un liposoma tiene forma totalmente esférica(redonda), posee membrana interna y externa

y un almidón presenta forma irregular - asimétrica(ovalados/cóncavos/triaguláres).
La lecitina de soya es un agente emulsificante, evita la separación del lípido con el agua.

4. Introducción:

Los liposomas son pequeñas vesículas artificiales de forma esférica que se pueden crear
a partir del colesterol y los fosfolípidos naturales no tóxicos. se describieron por primera vez
a mediados de los años 60. Hoy en día, son una reproducción, reactivo y herramienta muy
útil en diversas disciplinas científicas, incluidas las matemáticas y la física teórica, la
biofísica, la química, la ciencia coloidal, la bioquímica y la biología. Desde entonces, los
liposomas han llegado al mercado. Entre varios nuevos y talentosos sistemas de
administración de fármacos, los liposomas caracterizan una tecnología avanzada para
suministrar moléculas activas al sitio de acción, y en la actualidad, varias formulaciones están
en uso clínico. La investigación sobre la tecnología de los liposomas ha progresado desde las
vesículas convencionales hasta los "liposomas de segunda generación", en los que se
obtienen liposomas de circulación larga modulando la composición, el tamaño y la carga de
los lípidos de la vesícula. Los liposomas con superficies modificadas también se han
desarrollado usando varias moléculas, como glicolípidos o ácido siálico (Kunisawa J, 2005).

Debido a su tamaño y carácter hidrofílico e hidrofílico (además de la

biocompatibilidad), los liposomas son sistemas prometedores para la administración de
fármacos. Las propiedades de los liposomas difieren considerablemente con la composición
de los lípidos, la carga superficial, el tamaño y el método de preparación Además, la elección
de los componentes bicapa determina la "rigidez" o "fluidez" y la carga de la bicapa. Por
ejemplo, las especies de fosfatidilcolina insaturadas de fuentes naturales (fosfatidilcolina de
huevo o soja) proporcionan bicapas mucho más permeables y menos estables, mientras que
los fosfolípidos saturados con largas cadenas de acilo forman una estructura de bicapa rígida,
bastante impermeable (ANdreas W, 2011; 2011:9).
Debido a su biocompatibilidad, biodegradabilidad, baja toxicidad y aptitud para atrapar tanto
fármacos hidrófilos como lipofílicos (Johnston MJ, 2007;1768) y simplificar el suministro
de fármacos a tejidos tumorales específicos del sitio (Hofheinz RD, 2005; 16 ), los liposomas
tienen una tasa aumentada como sistema de investigación y comercialmente como fármaco -
sistema de entrega. Se han realizado muchos estudios sobre liposomas con el objetivo de
disminuir la toxicidad del fármaco y / o dirigirse a células específicas (Hemanthkumar M,
2011).

La tecnología de encapsulación liposomal (LET, por sus siglas en inglés) es la técnica de

administración más novedosa utilizada por los investigadores médicos para transmitir
fármacos que actúan como promotores curativos en los órganos corporales asegurados. Esta
forma de propuesta del sistema de entrega se enfoca en la entrega de combinaciones vitales
al cuerpo. LET es un método para generar espumas submicroscópicas llamadas liposomas,
que encapsulan numerosos materiales. Estos 'liposomas' forman una barrera alrededor de su
contenido, que es resistente a las enzimas en la boca y el estómago, soluciones alcalinas,
jugos digestivos, sales biliares y flora intestinal que se generan en el cuerpo humano, así
como a los radicales libres. El contenido de los liposomas está, por lo tanto, protegido de la
oxidación y la degradación. Esta barrera protectora de fosfolípidos o barrera permanece
intacta hasta que los contenidos del liposoma se entregan a la glándula, órgano o sistema
objetivo exacto donde se utilizarán los contenidos (Stano P, 2004; 14).

5. Marco teórico:
Los lípidos son un grupo heterogéneo de sustancias entre sí, sus características principales
es que son escasamente solubles en agua, pero sí lo son en los solventes orgánicos ya que
tienen poca polaridad en sus moléculas (Blanco, 2012).

Los fosfolípidos
Son moléculas anfipáticas, que forman parte de las membranas celulares y cumplen
importantes funciones biológicas. Se extraen de diferentes fuentes, una de las más empleadas
en la industria biofarmacéutica, cosmética y alimenticia, es la planta de Soya a partir de la
cual por diferentes métodos de extracción, se obtienen los fosfolípidos con alta pureza. Los
fosfolípidos son producidos y comercializados por diferentes compañías con un alto precio
en el mercado. Se emplean como medicamentos, suplementos nutricionales y en la
elaboración de sistemas de liberación, de diferentes compuestos con propósitos biomédicos.
(Herrera & Alarcón, 2011).

Bicapa lipídica
Es una membrana delgada hecha de dos capas de lípidos moléculas. Estas membranas
son láminas planas que forman una barrera continua y delimitan a las células. La membrana
celular de todos los organismos vivos y muchos virus está compuesta de una bicapa lipídica,
como son las membranas que rodean el núcleo de la célula y otras estructuras subcelulares.
Es la barrera que mantiene a iones, proteínas y otras moléculas compartimentadas y les
impide la libre difusión. Las bicapas lipídicas son ideales para este papel porque, aunque son
sólo de unos pocos nm de espesor, son impermeables a la mayoría de las moléculas solubles
en agua, son especialmente impermeables a los iones, lo que permite a las células regular las
concentraciones de electrolitos y pH mediante el bombeo de iones a través de sus membranas
mediante el uso de proteínas llamada bombas de iones. (Andersen & Roger, 2007).

Bicapa lipídica. Obtenida de: http://www.forest.ula.ve/~rubenhg/permeabilidad/

Liposomas
Los liposomas son vesículas preparadas artificialmente, de tamaño nanométrica y de
forma esférica con una fase acuosa interna rodeada por una o más bicapas lipídicas,
constituidos por moléculas anfipaticas derivadas o basadas en la estructura de los lípidos de
las membranas biológicas. Estos lípidos se forman, generalmente, a partir del enlace éster de
dos cadenas hidrocarbonadas con la molécula del glicerol o también pueden estar
constituidos por la unidad hidrofóbica ceramida (esfingolípidos). Esta parte hidrofóbica se
une a una cabeza polar hidrofílica que puede contener grupo fosfato (fosfolípidos) o algunas
unidades azúcares (glicolípidos). Las cabezas polares de los lípidos biológicamente
relevantes pueden ser: fosfatidil-colina, fosfatidil-etanolamina, esfingomielina; cargadas
negativamente: ácido fosfatídico, fosfatidil-glicerol, fosfatidil serina, fosfatidil-inositol,
cardiolipina y glicolípidos cargados negativamente o no. (Vasudevan & Sreekumari, 2011).
Liposomas estructuras. Obtenido de: https://www.researchgate.net/figure/Figura-14-Esquema-de-un-liposoma-a-vista-
de-su-bicapa-lipidica-b-vista-de-un_fig2_320271161

Clasificación de liposomas:
Para la clasificación de los liposomas en función de sus características fisicoquímicas, se
tiene en cuenta: su tamaño, y el número de bicapas que conforman la pared del liposoma
Unilaminares pequeños (SUV): su tamaño está entre 20-70 nm; presentan un solo
compartimento central acuoso y una pared de fosfolípidos.
Unilaminares grandes (LUV): su tamaño va de 70-400 nm; estos también poseen
un solo compartimento acuoso y una sola pared de fosfolípidos.
Vesículas multilaminares (GUV, MLV): su tamaño va entre 10-100 nm; está
formado por múltiples paredes de fosfolípidos y varios compartimentos acuosos
concéntricos. (Merino, 2001)
 Clasificación de los liposomas. Obtenido de: https://www.monografias.com/trabajos94/inyectables-liberacion-
controlada/inyectables-liberacion-controlada2.shtml

Aplicaciones de los liposomas

Diversos estudios realizados analizan el empleo de los liposomas en la liberación de
fármacos, la terapia génica y como inmuno-adyuvantes. El uso de los liposomas como
vehículos de fármacos se ha dirigido a reducir los efectos tóxicos colaterales de las drogas en
órganos sensibles, tales como corazón y riñones, y a lograr una direccionalización a tejidos
específicos tales como los tumorales. La inclusión de lípidos catiónicos en la composición
liposomal ha potenciado su capacidad para mediar la transfección en la terapia génica. La
racionalidad que existe en el empleo de los liposomas en inmunizaciones y en el diseño de
vacunas se basa en su capacidad para liberar la molécula antigénica en células específicas del
sistema inmunológico y estimular una respuesta inmune. (Lanioa, Sánchez, & Leal, 2009)

Lecitina o fosfatidil colina

Es un fosfolípido con nitrógeno. Las posiciones alfa y beta son esterificadas con los
ácidos grasos, el ácido fosfórico se une en la tercera posición para formar el ácido fosfátidico,
el grupo fosfato se esterifica a la base cuaternaria nitrogenada, colina las moléculas de la
lecitina se comportan como zwitterion. (Vasudevan & Sreekumari, 2011).

Lecitina. Obtenido de: http://www.biologiasur.org/index.php/lipidos-3/90-lipidos/126-lipidos-3-soluciones

Fosfolipasas
Son una clase de enzimas que hidrolizan los enlaces éster presentes en los fosfolípidos.
Dependiendo del enlace éster que escinden se clasifican como A1, A2, B, C o D. Las
fosfolipasas C y D son consideradas fosfodiesterasas. (García & Cardona, 2009)

Las fosfolipasas A1: Hidrolizan el enlace éster entre el primer acilo y el glicerol.
Las fosfolipasas A2: Hidrolizan el enlace éster entre el segundo acilo y el glicerol.
Las fosfolipasas B: Hidrolizan el enlace éster del primer acilo y del segundo acilo
con el glicerol.
Las fosfolipasas C: Hidrolizan el enlace éster entre el glicerol y el grupo fosfato.
Las fosfolipasas D: Hidrolizan el enlace éster entre el fosfato y el grupo variable.

6. Materiales y reactivos:
Muestras:
Capsulas de lecitina.

Equipos:
- Vortex
- Baño María
- Microscopios
- Centrífuga

Materiales de protección personal:

Mandiles. Mascarillas con filtro de gases. Guantes de látex.

Reactivos:
- Aceite de inmersión
- Almidón
- Dodecil sulfato de sodio
- Lugol
- Agua destilada
- Amilasa salival

Materiales e insumos:
 - Tubos de ensayo pequeños
- Vasos de precipitación 25 mL
- Porta y cubreobjetos
- Varillas de vidrio
- Gradillas

Organismos: No aplica

7. Metodología:
Se preparó la solución de lecitina con 10ml de Histo-Clear y una cápsula de lecitina
Se Etiquetó 4 tubos de ensayo y adicionales la sustancias según indica el siguiente cuadro:

Tubo 1 2 3 4
Lecitina (mL) 1 1 ---- ----
Almidón (mL) 1 1 1 1

Se agitó los 4 tubos anteriores en el Vortex durante 5 minutos cada uno, evitando la formación
de espuma.
Se colocó los tubos en el Baño María a 45°C, hasta obtener un gel viscoso
Se tomó una gota del tubo 1 y 3 y observar al microscopio
Se obtuvo de los estudiantes una muestra de 4ml de amilasa salival y colocar 1ml en cada
tubo.
Se puso los tubos en Baño María nuevamente en aproximadamente 37°C durante 20 minutos
de ser posible.
Se sacó los tubos y añadir 2mL de agua destilada a cada tubo de ensayo.
Y luego se centrifugó a 4000 rpm durante 5 minutos y desechar el sobrenadante con ayuda
de una pipeta Pasteur.
Ya desechado el sobrenadante se procedió a colocar SDS (mL) de la siguiente forma.

Tubo 1 2 3 4
SDS (mL) ---- 1 ---- 1
Se añadió 1 gota de lugol a cada tubo para observar que color adopta cada uno y tomar una
gota para proceder a observar nuevamente en el microscopio.
 8. Resultados:
Resultados primarios: Anota con positivo según el tubo de ensayo y si tiene o no presencia
de liposomas.

Tubo 1 Tubo 2 Tubo 3 Tubo 4

Negativo Positivo Negativo Positivo

9. Discusión:

Análisis de los resultados

En el tubo Nº 1 se encuentra la disolución de lecitina y almidón, en la experiencia con

el microscopio con lente 40x se observó estructuras esféricas cuyo interior tenía color rojo-
anaranjado, y su borde de color morado, característico del almidón, las vesículas lipídicas se
caracterizan por sus estructura esférica rodeada de una bicapa lipídica.

En el tubo Nº 2, y en el tubo Nº4 se añadió amilasa salival que después de

centrifugarlo y colocar SDS, en la experiencia con el microscopio (objetivo 40X) se observó
la presencia de vesículas lipídicas, a pesar de la existencia de almidón no se observó
estructuras tetraédricas esto según (Sánchez, 2009) se debió porque se produjo una hidrólisis
completa.

En el tubo Nº 3 se observa estructuras tetraédricas teñidas de color violeta, lo que se

confirma que no se formó liposomas, por ausencia de un detergente que separe los
componentes de la fosfadilcolina.

10. Conclusiones:

 Para la elaboración de liposomas la suspensión del fosfolípido es fundamental, ya que

debido a sus propiedades anfipáticas, pueden formar una bicapa lipídica en un medio
acuoso.
 Para la identificación de los compartimientos acuosos se utilizó almidón, debido que
con presencia del reactivo de lugol, este se tiñó de color azul, dejando sin color a los
liposomas.
 Los lípidos son moléculas insolubles en agua, pero solubles en solventes inorgánicos,
como el limoneno, el cual interfirió en la ruptura de la bicapa lipídica y facilitó la
formación de esferas lipidicas.
 11. Cuestionario:

¿Qué son los liposomas?

Los liposomas son esferas huecas acuosas rodeadas por una membrana conformada por una
bicapa lipídica, sus diámetros tienen valores de 20 nm y 500 um aproximadamente
(LIPOMIZE, 2017) .Pueden almacenar una sustancia lipofílica o hidrofílica debido a que se
componen de lípidos y agua fundamentalmente.
¿Cómo se forman los liposomas?
Para formar liposomas existen varios métodos, pero la forma más general de formarlos es
utilizando fosfolípidos y colocarlos en una mezcla acuosa orgánica, para luego ser expuesta
a evaporación con el fin de eliminar el disolvente orgánico y obtener los liposomas (Madrigal,
2010), es decir que se introduce los fosfolípidos en una bicapa lipídica que forma la vesícula
con determinadas propiedades similares a las membranas celulares bilógicas.
¿Qué tamaño tienen los liposomas formados?
El tamaño de los liposomas formados varía entre 70 a 400 nm
¿Cuál es la función del limoneno u octanol en la formación de liposomas?
El limoneno es un terpeno con propiedades antioxidantes y no tóxico; este fue utilizado como
el disolvente orgánico en donde se colocó la lecitina de soja y los fosfolípidos pudieron
originar micelas, dando inicio al proceso de formación de liposomas.
¿Qué es la lecitina?
Se denomina lecitina a la fosfatidilcolina, a un determinado grupo de fosfolípidos cuya
propiedad principal es ser emulgente de grasas (Mifarmacia S.L., 2007)

12. Bibliografía:

ANdreas W, K. V. (2011; 2011:9). Tecnología de liposomas pra fines industriales. J Drug

Deliv.
Hemanthkumar M, S. V. (2011). Tecnología de encapsulación liposomal un novedoso
sistema de administración de fármacos diseñado para la preparación de fármacos
ayurvédicos. IRJP.
Hofheinz RD, G.-V. S. (2005; 16 ). fármacos anticancerosos encapsulados en liposomas.
En Medicamentos contra el cáncer (págs. 691-707). doi: 10.1097 /
01.cad.0000167902.53039.5a.
Johnston MJ, S. S. (2007;1768). Caracterización de la retención de fármaco y
propiedades farmacocinéticas de nannopartículas liposómicas que contienen
dihidrofosomielina. Biochim Biophys Acta. doi:10.1016.
Kunisawa J, M. T. (2005). El liposoma fusogénico libera nanopartículas encapsuladas
para la liberación de genes controlados citosólicos. . En J Lanzamiento de control.
(págs. 105:344-353). doi: 10.1016 / j.jconrel.2005.03.020.
LIPOMIZE. (2017). www.lipomize.com. Obtenido de www.lipomize.com:
http://www.lipomize.com/es/liposomas-que-son
Madrigal, G. (17 de Noviembre de 2010). liposomas.wordpress.com. Obtenido de
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Mifarmacia S.L. (24 de Marzo de 2007). www.mifarmacia.es. Obtenido de
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lecitina
Sánchez, M. (2009). Revista Cubana de Fisica. Obtenido de
http://www.revistacubanadefisica.org/RCFextradata/OldFiles/2009/vol.26-
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Stano P, B. S. (2004; 14). Nuevos liposomas que contienen análogos de camptotecina
(gimatecan) preparados mediante el método de inyección de etanol. En J
Liposome Res. (págs. 87-109). doi: 10.1081 / LPR-120039794.

13. Anexos:

Imagen N°1 Imagen N°2

TUBO N°1

TUBO N°3