Eficiencia de inmovilización de β amilasa en Celite-545

• El presente estudio implica la inmovilización directa de β-amilasa parcialmente

purificada de I. batata en un soporte económico, Celite-545. Por lo tanto, el costo de la
purificación enzimática se minimiza. Celite-545 es una tierra de diatomeas inorgánica
mecánicamente estable, no tóxica y no biodegradable que se ha utilizado ampliamente
para inmovilizar diversas enzimas y proteínas. La unión de la β amilasa al soporte se
vio significativamente afectada por el cambio en el pH. La enzima se adsorbió al
máximo a un pH de 6.0 y retuvo 244 U de la actividad de la β-amilasa g-1 de Celite-545
con 83% de actividades preservadas (Tabla 1). En la literatura, para la β-amilasa
inmovilizada, se dan varios valores para las capacidades de unión y las actividades
preservadas. Por ejemplo, cuando se logró la inmovilización de la β-amilasa de batata
en perlas de quitosano y soporte basado en esferón, las actividades preservadas se
informaron como 59% y 76%, respectivamente. Además, se observó un 49% de
eficiencia inmovilizada al inmovilizar la β-amilasa de cebada en el polímero de
poliacrilamida.

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Análisis espectroscopía infrarroja de transformada de Fourier FT-IR

Los espectros FT-IR de Celite-545 y Celite-545 adsorbido β-amilasa se utilizan para investigar la
interacción entre la enzima y el soporte (Fig. 1).

• El pico de intensidad principal a 1079.63 cm-1 se debe a la vibración de estiramiento

asimétrica de Si-O-Si de Celite-545.

• La banda a 791.57 cm-1 se atribuye al estiramiento simétrico de la estructura del anillo

de tetraedros (SiO) 4 .

• La vibración de H2O causada por los enlaces de hidrógeno de la proteína con los
grupos de silanol se presenta en 1639.48 cm-1.

• Además, el pico a 3362.70 cm-1 debido al estiramiento de C-H indicó fuertes

interacciones de enzima con Celite-545.

• El pico de intensidad de la vibración de estiramiento de Si-O-Si a 1079.63 cm-1 se

redujo a 1074.20 cm-1 cuando la enzima se adsorbió a la superficie de soporte.

Análisis AFM Fuerza atómica microscópica

• La visualización de la topografía de la superficie del soporte y la enzima adsorbida con

AFM reveló una cantidad significativa de moléculas de enzima inmovilizadas en el
soporte (Fig. 2). Los grupos funcionales existentes en la superficie Celite-545 también
se verificaron mediante espectroscopía FT-IR. Utilizamos la distancia de pico a valle en
estas imágenes como un indicador de la rugosidad de la superficie. La superficie de
soporte, antes de la inmovilización de la β-amilasa, era lisa (Fig. 2a), en comparación
con las superficies inmovilizadas con enzimas. Es evidente que a medida que avanza la
inmovilización aumenta la rugosidad de la superficie de soporte, lo que podría verse
por el aumento del valor de pico a valle (Fig. 2b). La rugosidad de la superficie de la
muestra es una característica importante y debe jugar un papel importante en la
actividad enzimática. Esta observación es consistente con las de informes anteriores.