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5.5cromatografiadeliquidos 7806 PDF
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Líquidos
Elba Rojas Escudero
ERE
¿¿¿ Ab o Ad ???
Temario
• Fundamentos
– Definiciones básicas
– Aspectos teóricos
• Instrumentación
– Elementos básicos
– Columnas
– Inyectores
– Detectores y sistemas acoplados
• Análisis
– cualitativo y cuantitativo
Cromatografía de líquidos
Gas Líquido
Columna Plano
CPG CFG
Tipos de CL
• PM < 2000
• Cromatografía de intercambio iónico
• Adsorción: líquido-sólido
• Partición: líquido-líquido
– Cromatografia en fase normal
– Cromatografia en fase inversa
• PM > 2000
• Cromatografia de exclusión por tamaño
Requisitos de la muestra
• “Limpia”
• Compuestos iónicos
• Compuestos Termolábiles
Instrumentación
Bomba de Gradiente
Fase móvil
alta presión de elución
Muestra Inyector
Columna
Control de
temperatura
Detector Registrador
Fase móvil
FM
FE
Inyector Detector
Proceso Cromatográfico
• La fase móvil fluye, arrastrando consigo los
solutos
• Los solutos se reparten entre ambas fases
• Dimensiones
– Longitud: 30, 50, 75, 100, 150, 300 mm
– Diámetro: 2.1, 3.9, 5, 7.8 mm
– Tamaño de partícula: 3, 5, 10 µm
– Forma de la partícula: irregular o esférica
Dimensiones de la
columna
di
dp
Fase estacionaria
(columna)
• Empaque
– Sílica gel, C8, C18, Ciano, Amino,
Resinas, Polímeros
• Carga de Carbón 5-20 % w/w
• Intervalo de pH = f (FE)
• Límite de presión de trabajo
• Compatible con la fase móvil
Fase estacionaria
Soportes de la FE
Permeación o exclusión
Cuidados de la columna
• Instalación
• Introducción de muestras “limpias”
• Contaminación por fase móvil o muestra
• Almacenarla y guardarla de forma
adecuada
• Lavarla después de utilizarla con
disoluciones reguladoras de pH
Precauciones
• No exceder la presión de trabajo
• Cambios bruscos de presión
• Intervalo de pH adecuado
• No utilizar H+ y OH- concentrados
• Filtrar la muestra y la fase móvil
• w de la muestra=f (dimensiones de la
columna)
Cromatografía
• Fase Normal
– FE polar
– FM No-polar
• Fase Inversa
– FE No-polar
– FM polar
Cromatografía
de fase inversa
• FE
– Sílica químicamente modificada con
grupos no-polares: hidrocarburos
saturados: C18 octadecil, C8 octil,
C4 tetrametil, C2 dimetl
• FM
– Mezclas: agua/disolventes orgánicos
H2O +(CH3OH, THF, CH3CN)
Cromatografía
de fase inversa
NO son Estables
Fases estacionarias
• Fases químicamente unidas (“Bonded
phases”)
– Unidas al soporte por enlaces covalentes
– Mayor eficiencia que las Fases impregnadas
– Costo elevado
– Son estables
Cromatografía
de fase inversa
• Ventajas
– Reproducibilidad en las separaciones
– Estabilidad de la FE (pH ≤ 7)
– Mezclas: acuosos/orgánicos H2O
+(CH3OH, CH3CH2OH, CH3CN)
Fuerza del eluyente
Viscosidad del eluyente
Polaridad
Polaridad
Detectores
• Indice de refracción
• Ultravioleta-Visible
• Fluorescencia
• Electroquímico
• Radioactividad
• Infrarrojo
• Espectrómetro de masas
Instrumentación
Bomba de Gradiente
Fase móvil
alta presión de elución
Muestra Inyector
Columna
Control de
temperatura
Detector Registrador
Elución
Problema general de
la elución
Gradiente de elución
Gradiente de elución
Elución con alta presión
Elución
Equipo con gradiente de
elución
Proceso Cromatográfico
Mm m m M
m m M
Proceso Cromatográfico
Mm
m M M
M M
m m M M
Separación de los solutos
H = f (v)
Ensanchamiento de
banda
Ensanchamiento de la
banda
Transferencia de masa en la FE
Ensanchamiento de la
banda
Transferencia de masa en la FM
“movimiento”
Ensanchamiento de la
banda
Transferencia de masa en la FM
“estancada”
H= f (ensanchamiento de
la banda)
k´ 2 vt
HL = 2γ DM / v HS = 2 a
1+k´
HF = 2λdp HD = Ωvdp2 / DM
HM = HF + HD
H=L/N
H = HL + HS + HM + HSM
H = HS + HM + HSM
Ventajas
Formación de derivados
ERE
Derivados
• Fuera de línea
• En línea
• Pre-columna
• Post-columna
Equipo para la formación
de derivados
FM
FE
FM
FE
Aplicaciones
ERE
CCF - CLAE
FE = f (diámetro interno)
Diferente λ
Cambio de λ
Aplicación
Aminas
Aplicación
Fluorescencia
Polar - No polar
¿¿¿ Qué sucedió ???
Sensibilidad
Sensibilidad
Peso molecular
Propiedades = f (PM)
Oligosacáridos
Oligoglucosa
Ejemplos
Campo Mezclas típicas
Fármacos Antibióticos, sedantes,
esteroides, analgésicos
Bioquímica Aminácidos, proteínas,
carbohidratos, lípidos
Alimentos Edulcorantes, antioxidantes,
aflatoxinas, aditivos
Contaminantes Pesticidas, herbicidas, PCB,
fenoles
Química Drogas, venenos, alcohol en
forense sangre, narcóticos