PONTIFICIA UNIVERSIDAD CATÓLICA DEL ECUADOR

FACULTAD DE MEDICINA

CARRERA DE BIOQUÍMICA CLÍNICA

Laboratorio de Biología Molecular

Alumna: Tania Pinargote Grupo: 2

Fecha de entrega: martes, 26 de noviembre de 2019

PRACTICA NO8

LA ELECTROFORESIS EN GEL DE AGAROSA

Resumen
En el laboratorio de biología molecular, se realizó el procedimiento de electroforesis en gel de
agarosa por medio del armamiento de la cámara electroforética, esta se componía de una
dilución de agarosa junto con TAE 1X; con esto, se armó la cubeta de electroforesis y se
sembraron las muestras correspondientes cuidando que no se rompiera el gel, luego se sometió
a corriente eléctrica, para que se separen los ácidos nucleicos.

Seguido a la realización del procedimiento, por medio del equipo Gel doc, permitió la
observación de la digitalización del gel de electroforesis gestionando imágenes obtenidas de las
calles formadas por cada muestra.

Objetivos
Entender por medio del procedimiento de electroforesis en gel de agarosa la separación y
purificación de moléculas de ADN, para observar en el equipo de software, la gestión de una
imagen en donde muestran las calles que se forman como marcadores de tamaño de cada
muestra.

Introducción
La electroforesis en geles de agarosa es un método muy usado en laboratorios de biología
molecular relacionando conocimientos sobre el trabajo con ácidos nucleicos. “Mediante la
electroforesis podemos separar fragmentos de ADN y ARN en función de su tamaño,
visualizarlos mediante una sencilla tinción, y de esta forma determinar el contenido de ácidos
nucleicos de una muestra, teniendo una estimación de su concentración y grado de entereza”.
(Fierro, 2019)

Este método es empleado para realizar la separación de macromoléculas en función a la carga

eléctrica, como también al tamaño y entre otras propiedades físicas. “El término electroforesis
describe la migración de las partículas cargadas bajo la influencia de un campo eléctrico”, (Obed,
2014) y es así como cuando se aplica corriente eléctrica, las moléculas, tienen la capacidad de
atravesar la placa de gel. La electroforesis en gel de agarosa es un método utilizado para la
separación, purificación y la identificación de fragmentos de ADN, por otro lado “el ADN puede
localizarse en el gel tiñendo con una concentración baja de bromuro de etidio, que es un agente
intercalante fluorescente que se utiliza como colorante”. (Obed, 2014)
El análisis que se obtiene de la reacción se realiza con los termocicladores por medio de un
software que genera gráficas “en donde se muestran todos los datos necesarios para conocer
si la reacción fue exitosa”. (Ibarra, 2013)
Procedimiento experimental

Programas
Gel doc
Materiales
Micropipetas
Puntas de micropipetas
Cámara de electroforesis
Peine para la cámara de electroforesis
Fuente de poder
Cinta adhesiva
REACTIVOS
Bromuro de etidio
Agarosa sólida
TAE 1 X
Agente intercalante
Agua destilada
MUESTRA
Se utilizó muestras de ADN extraídas en procedimientos anteriores
Amplicones (7,6,5,3,3 y 1)

Procedimiento
Se preparó la solución con volumen final de 700 ml de TAE 10X a 1X 70 ml mas agua destilada
630 ml, cada mesa del laboratorio pesó 0,8 g de agarosa, mientras unos compañeros realizaban
esta preparación, se procedió a arar la camara de electroforesis; se mezcló la agarosa junto con
la solución preparada y fue sometida a temperatura alta en un microondas por 1 a 2 minutos
hasta que se visualizó que no se presentaran grumos, se agregó el agente intercalante en la
agarosa y se homogenizó en un erlenmeyer; se agregó la solución de agarosa despues de dejar
reposar hasta que se enfriara por 5 minutos y luego fue colocada en la camara, seguido fue
llevada a refrigeración hasta que se solidificó, donde se desarmó la camara.

En la primera calle formada por el peine, se colocó el marcador de peso molecular y en las otras
calles fue colocado azul de bromofenol junto con la muestra.

Resultados y análisis.

marcador
de peso
molecular
Muestras
Amplicones
 Imagen 1.1 Se observa la presencia de amplicones, el marcador de peso molecular y algunas
muestras que se pudieron visualizar
Orden de las muestras
1. MPM
2. DNAzol (isopado buccal)
3. AND E. coli por ebullición
4. ADN bacteriano purelink
5. DNAzol
6. ADN de fresa
7. ADN mini kit
8. Amplicón 7
9. Amplicón 6
10. Amplicón 5
11. Amplicón 3
12. Amplicón 3
13. Amplicón 1

Análisis

En la realización de gel de electroforesis, se observa como un degradado, ya que dependiendo

del tamaño de la molécula es como migrará en el gel y se observará en la imagen, los amplicones
al haber migrado hasta abajo del gel, significa que su peso molecular es inferior a las otras
muestras, tomando en cuenta que “Cuando los amplicones son corridos en el gel, éstos deben
ser cargados junto con un marcador molecular que contenga un número determinado de
segmentos de ADN conocidos, lo que facilita la identificación de los amplicones y si su tamaño
corresponde con el esperado”, (Ibarra, 2013) sin embargo, cabe recalcar que no se podía
visualizar correctamente la migración de las muestras, ya que debido a interferencias o a la mala
realización del procedimiento de realización del gel, no se pudo visualizar las calles con la
migración, en base a lo que menciona Luis A. Colihuinca Llancapan “La movilidad de las
moléculas de ADN durante la electroforesis también se puede ver influenciada por la
concentración del gel de agarosa, ya que a menor concentración de agarosa la electroforesis
presenta una mayor migración de las moléculas”, (Llancapan, 2012).

Conclusiones
Se logró comprender la importancia de la realización del procedimiento de electroforesis en gel
de agarosa, conociendo el método para la separación y purificación de ADN, sin embargo se
puede concluir que hay que considerar las diferentes variables que pueden alterar en la
visualización de las bandas en el proceso de utilización del equipo Gel doc, ya que también el
tiempo que se dejó en la cámara de electroforesis, la concentración de la agarosa o el voltaje
puede repercutir en los resultados que se esperan.

No se logró concluir con el cálculo del tamaño de las bandas, ya que no se obtuvieron los
tamaños de las bases (Kb) esperados en el procedimiento de lectura con el equipo Gel doc.

Cuestionario o consulta a realizar

1. ¿Qué es un agente intercalante de ADN y cuantos conoce?
Son ligandos que se disponen apilados entre los pares de bases, sus interacciones con
las bases nitrogenadas son de tipo electrostático o de van Der Waals y en ocasiones
mediante la formación de enlaces de hidrógeno. (Pascual, 2004)
 Bromuro de etidio, que fue usado en el laboratorio para la realización de la práctica, “e
introduce entre las bases apiladas del DNA, abre un poco la doble hélice, provoca un
desenrollamiento local”. (BIOMODEL, 2019)

2. ¿Qué indican la intensidad de las bandas en el gel?

Indican que las macromoléculas de la muestra son separadas al utilizar diferencia de
potencial eléctrico, esto provoca el desplazamiento en base a la carga eléctrica, “que
adicionalmente por fenómenos de fricción y difusión producidos por cambios de
temperaturas, no es homogéneo”, (Niño, 2017) esto significa que indican que tan
concentrado esté la muestra.

3. Calcular los tamaños de sus bandas obtenidas en su experimento y adjuntar la imagen

al informe
No se puede calcular el tamaño de las bandas, ya que en el proceso de realización se
pudieron presentar interferencias que no permitían ver una correcta visualización de las
bandas. (se puede visualizar la formación de las bandas en la imagen 1.1 en la sección
de resultados)

BIBLIOGRAFÍA
BIOMODEL. (2019). Electroforesis de proteínas y de ácidos nucleicos. Obtenido de
http://biomodel.uah.es/tecnicas/elfo/inicio.htm

Fierro, F. (2019). Electroforesis de ADN. Obtenido de

https://micrositios.inecc.gob.mx/publicaciones/libros/710/electroforesis.pdf

Ibarra, V. C. (2013). Fundamentos de la reacción en cadena de la polimerasa (PCR) y de la PCR

en tiempo real. Obtenido de https://www.medigraphic.com/pdfs/invdis/ir-
2013/ir132d.pdf

Llancapan, L. A. (2012). ELECTROFORESIS EN GEL DE AGAROSA PARA MUESTRAS DE ADN.

Obtenido de file:///C:/Users/cliente/Downloads/90458136-Electroforesis-en-Gel-de-
Agarosa.pdf

Niño, C. S. (2017). Color Bands Detection on a Gel Electrophoresis Image in one Dimension
Applying a Location Algorithm Based on Maximums and Minimums.
doi:doi.org/10.15332/iteckne.v14i2.1766

Obed, A. (2014). ELECTROFORESIS DE ÁCIDOS NUCLEICOS EN GEL DE AGAROSA. Obtenido de

file:///C:/Users/cliente/Downloads/209635327-Electroforesis-en-Gel-de-Agarosa.pdf

Pascual, T. (2004). Técnicas empleadas para el estudio de la interacción entre agentes

antitumorales y el DNA. Obtenido de http://scielo.isciii.es/pdf/onco/v27n2/04.pdf