PONTIFICIA UNIVERSIDAD CATÓLICA DEL ECUADOR

FACULTAD DE MEDICINA

CARRERA DE BIOQUÍMICA CLÍNICA

Laboratorio de Biología Molecular

Alumna: Tania Pinargote Grupo: 2

Fecha de entrega: martes, 17 de septiembre de 2019

PRACTICA NO2

TÉCNICAS DE MICROPIPETEADO

Resumen
Para la práctica sobre técnicas de micro-pipeteo, el profesor realizó una introducción acerca del
manejo de micropipetas donde se diferenció cada una de ellas por medio de la capacidad en
microlitros (ul) que pueden contener de muestra y para la práctica específicamente se usaron
dos tipos de técnicas de pipeteo la directa para muestras líquidas y la reversa para muestras
densas y espumosas, luego se dispuso de muestras previamente preparadas por el profesor
donde se preparó y se seleccionó el material disponible en la mesa de trabajo, se realizó el
manejo de pipetas en sustancias con densidades y medidas volumétricas diferentes tomando
en cuenta de cada sustancia el tipo de técnica correspondiente a ella; adicionalmente a los tubos
donde se realizaron las técnicas de pipeteo, se practicó el manejo de la pipeta en una placa de
micro-elisa donde se constató el manejo de micropipetas que correspondía ya que mayormente
correspondía en la experimentación con pipetas de distintos volúmenes; finalmente se
observaron los resultados del uso de los materiales y se limpió correspondientemente el área
de trabajo.

Objetivos
Se aprenderá, entenderá e identificará la utilización y manejo de las micropipetas con diferentes
técnicas para la toma de muestras de densidades variables correspondientes a utilizar en el área
de Biología Molecular.

Introducción
Para las técnicas de pipeteo abarca diferentes medios que ayudan con la dosificación de líquidos
de una manera más rápida y precisa, con esto, se logra precisamente la absorción de cantidades
variables de líquidos, las pipetas al ser la base en la realización de múltiples experimentos, es
necesario saber si es que la pipeta no funciona correctamente ya que puede causar errores en
los análisis de resultados.

“En el uso de los materiales para laboratorios de biología molecular, tomando énfasis en las
micropipetas, darán el conocimiento en su manejo que debe ser exacto en cada una de las
actividades en las prácticas de laboratorio, donde al momento de utilizarlos teniendo el cuidado
del equipo ya que especialmente es considerado con un alto grado de sensibilidad, fragilidad, y
costo”. (Loaiza Faustino, 2011)
Procedimiento experimental

Equipos y materiales utilizados

• se utilizaron dos micropipetas, una de 100 a 1000 ul y otra de 0,1 a 2 ul

• se utilizaron puntas blancas correspondiente a 0,1 a 2ul y azules correspondientes a 50
a 1000 ul
• se utilizaron 14 tubos de vidrio, 3 tubos de 0,5 ml y una placa micro-elisa

Procedimiento experimental

Inicialmente se prepararon las soluciones que debían ser utilizadas en la práctica, seguido de la
selección de 8 tubos donde se separaron las soluciones por la técnica de pipeteado a usar.

Para las soluciones densas o espumosas como el aceite y la suspensión jabonosa, se utilizó la
técnica de reversa, para esta técnica, según LAMARKT “la aspiración inicial de la muestra
requiere que se presione el émbolo hasta el segundo paro y entonces libere a su posición de
descanso. En este punto la muestra es dispensada presionando el émbolo hasta el primer paro.
Después de dispensar, una porción de la muestra permanecerá en la punta porque la aspiración
hasta el segundo paro permite contener más volumen de la solución que el volumen
configurado”. (LAMARKT, 2019)

Para las soluciones líquidas como el agua destilada se utilizó la técnica directa considerado una
técnica estándar, este modo solo se usa el primer tope del embolo para absorber la sustancia y
para liberarla debe volver a ser presionado el embolo hasta que se deposite todo el volumen de
la solución.

Seguido se agregaron a cada tubo los volúmenes solicitados en la guía de laboratorio; finalmente
con la placa micro-elisa se pipeteo 1 ul en una fila de la placa para practicar el manejo de las
pipetas.

Resultados y análisis.
El equipamiento y el uso de las técnicas apropiadas en el uso de micropipetas está
estrechamente relacionado con la calibración apropiada del equipo, existen varias condiciones
que puedan afectar la exactitud del volumen requerido que se encuentra estrechamente
relacionado al modo de dispensación

“Otros elementos como la técnica de pipeteo correcta y las condiciones ambientales también
influyen en los resultados, la exactitud y la precisión son esenciales en la realización de tomas
de muestras utilizando micropipetas”. (TOLEDO, 2019)

Conclusiones
Para una toma de muestra correcta con micropipetas, se comprendieron las diferentes técnicas
que se utilizan, por lo tanto, una correcta selección de instrumentos que influyen en gran parte
a los resultados de investigación significativamente, sin embargo, la exactitud depende de la
forma en como el operario manipule el volumen conociendo a detalle los procedimientos de las
técnicas que se deben emplear, para así lograr tener resultados confiables.
Gráficos

Imagen 1.1 Se observan los materiales que se utilizaron en la práctica de laboratorio

Imagen 1.2 Se observan los tubos con los volúmenes solicitados en la guía de laboratorio

Cuestionario o consulta a realizar

• ¿Qué es precisión? De ejemplos referentes a la práctica
Es la dispersión de un conjunto de valores que son obtenidos de mediciones repetidas
de una magnitud. En cuanto a la menor sea la dispersión, mayor la precisión. (Creative
Commons Attribution, 2019) Por ejemplo la medición de la muestra en los volúmenes
que se deben dispensar
• ¿Qué es exactitud? De ejemplos referentes a la práctica
Hace referencia que mientras más cerca del valor real se encuentra el valor medido, está
estrechamente relacionada con el sesgo de una estimación., cuanto menor es el sesgo
 más exacto es una estimación. (Creative Commons Attribution, 2019)por ejemplo la
calibración de las micropipetas
• ¿Qué es error sistemático? De ejemplos referentes a la práctica
Es aquel que se considera constante en el proceso de medida afectando a todas las
medidas de un modo definido y es el mismo para todas ellas, por ejemplo al calibrar la
micropipeta y elección errónea de la técnica a utilizar. (UGR, 2019)
• Escriba los errores frecuentes en el micropipetrado
1. No tomar en cuenta el tipo de viscosidad de la muestra
2. Dispensar diferentes muestras con una misma punta
3. No utilizar las técnicas de pipeteo correspondiente al tipo de muestra
4. Dispensar las muestras con rapidez o pipetear deprisa causando burbujas

Bibliografía

Creative Commons Attribution. (2019). Precisión y exactitud. Obtenido de

file:///C:/Users/cliente/Downloads/142441218-Precision-y-exactitud-pdf.pdf

LAMARKT. (2019). Tips de Laboratorio Técnicas de Pipeteo. Obtenido de

https://0201.nccdn.net/4_2/000/000/04b/787/Tips-de-Laboratorio---Tecnicas-de-
Pipeteo.pdf

Loaiza Faustino, L. M. (2011). Obtenido de file:///C:/Users/cliente/Downloads/57168384-

reporte-de-practica-no-4-pipeteo.pdf

TOLEDO, M. (2019). a herramienta definitiva de conocimientos para los expertos en pipeteo.

Obtenido de https://www.mt.com/mx/es/home/library/guides/rainin-pipettes/rainin-
pipetting-handbook.html

UGR. (2019). TÉCNICAS AUXILIARES DE LABORATORIO. Obtenido de

https://www.ugr.es/~andyk/Docencia/TEB/Errores.pdf