CUESTIONARIO DE HIDRATOS DE CARBONO PARA DESARROLLO EN CASA Y DISCUSIÓN EN CLASE

1.- A partir del cuadro de los diferentes tipos de hexosas presentado en el pdf de la clase y los
apuntes, diferencie hexosas neutras de ácidas, realizando un listado de a lo menos 5 de cada una
y argumentando brevemente su selección.

Hexosas neutras: Presentan grupos reactivos no acídicos. Glucosa, manosa, fucosa, galactosa y
ácido siálico.

Hexosas ácidas: Se pueden dividir en sulfatadas (sulfomucinas epiteliales) y no sulfatadas

(sialomucinas).

Se han estratificado con un grupo carboxilo o uno fosfato y de este punto son ácidos, pero
también tenemos la configuración del ácido neuroaminico que tiene el grupo carboxilo (acido) en
el carbono. Sirve para identificar una hexosa o mucosubstancia neutra de otra acida. Decimos que
la manosa, glucosa, galactosa, la fructosa y el ácido neuroaminico son las principales hexosas
neutras. Por otro lado, tenemos los ácidos uronicos como el glucolon y llanuron (¿?) que se tiñe
con colorantes básicos (cationes). Las características de las mucosustancias neutras es que son PAS
positiva.

Existe un mucosustancia o residuo de monosocaridos (glucosa…) que terminar en ‘il’. El ácido

neuroaminico está entre los hongos, es decir, se puede identificar con colorantes básicos o bien
pueden ser metacromaticos, como las sialomucinas que tienen ácido siatico e independiente o no
que estén oxacetilados este grupo siempre lo presenta.
Por otro lado, la PAS positividad está dado por los carbonos 7, 8 y 9. Acá esta lo interesante
porque en el caso del ácido neuroaminico que es PAS positiva, AT positiva y AB positiva y tiene
metacromasia positiva

2.- Describa en no más de cuatro líneas cómo opera el método de PAS y qué tipo de
mucosubstancias pone de manifiesto.

El método de PAS consiste en utilizar una solución acuosa de ácido periódico al 1% para oxidar
grupos glicol (OH) y así obtener grupos aldehídos, los cuales serán reconocidos por el reactivo de
Schiff. Este método permite reconocer mucosustancias neutras.

El método permite visualizar mucosustancias neutras a partir de glicoles presentes en las hexosas
neutras, las que rinden grupos aldehídos que con posterioridad son reconocidos por el reactivo de
Shiff.

*si un alcohol se oxida suavemente se observa un aldehído y si a este se sigue oxidando se obtiene
un alcohol primario. Cuando se trata al grupo aldehído con 5BrU se reduce, por lo tanto el reactivo
de shiff se encuentra con un grupo OH en vez de un grupo CHO.*

En PAS estándar ocurre con ácido peryodico al 1% a temperatura ambiente, pero también existe
PAS especializados para ácido sialico, ácido uronicos pero acá son más prolongados, y las hexosas
neutras que son residuos de polisacáridos
3.- Estime que método de PAS (sea este, el tradicional o el especializado), sería efectivo para
poner de manifiesto las siguientes hexosas:

a) Acido Neuramínico (NANA): PAS especializado. Se modifica concentración del agente oxidante y
el tiempo.

b) Galactosa: PAS convencional.

c) Acido glucurónico: PAS especializado. Se modifica tiempo y temperatura.

d) Fucosa: PAS convencional.

*Método estandar: con ácido peryodico al 1% por 10’ a T° ambiente + tratamiento con reactivo de
shiff
*Para NANA: los nana tienen 9 carbonos que en la cadena lateral no están acetilados. Las
condiciones de oxidación debe ser a ___ y 5’ o bien el acido peryodico puede ser al 0,004% M por
30’. Es decir, la sensibilidad que tienen los ácidos neuroaminicos o sialicos es mucho más alta con
respecto a las hexosas neutras y por supuesto los ácidos glucoronicos. Donde los grupos laterales
se oxidan mucho más rápido, por eso se debe bajar la concentración del ácido. No así las hexosas
que necesitan horas
*Para ácido glucuronico:

Si se quiere que a partir del reactivo de shiff convencional diferenciar los acidos siaticos y
neuroaminicos de las hexosas neutras se debe hacer un bloqueo de hexosas neutras. La
Fenilhidrasina bloquea los grupos aldehídos. Entonces si se considera un proceso de oxidación
estandar se va a tener pas positividad tantos de las hexosas y los acidos sialicos (entre estos, esta
el acido neuroaminico), entocnes como diferenciamos entre estas dos hexosas? A través de una
reacción de bloqueo quimico usando la fenilhidrasina que forma un compuesto como la
fenilhidrasona que es un compuesto mmuy estable, entre los grupos glicoles que dan ____ a dos
shock y ahí se establece un complejo a través de la fenilhidrasina que es una denilhidrasona, e este
punto es muy estable. No asi en el ácido neuroaminico donde solo se gener aun grupo aldehído y
no bloquea al grupo aldehído de los acidos sialicos. Recuerden que los grupos aldehídos en los
acidos sialicos, se generan solamente a partir de la cadena laterar (7, 8, 9)

4.-¿Cuáles serían las principales diferencias de procedimiento y los resultados obtenidos se

pueden encontrar entre el método de PAS y el de Feulgen?
Feulgen es específico para ADN identificando desoxirribosa. Ocurre una hidrólisis ácida donde se
liberan bases púricas y actúa en el carbono 1 de la pentosa rompiendo el enlace glucosídico. Los
grupos aldehídos son reconocidos por el reactivo de Schiff.

El método de PAS también cuenta con una hidrólisis suave para oxidar el grupo OH a aldehído.
Identifica mucosustancias neutras.

En ambas el reactivo de Schiff se une al aldehído y recupera el color. Son métodos selectivos y
específicos.

5.- ¿Qué pruebas histoquímicas serían efectivas para poner de manifiesto una glicoproteína que
presenta un ácido siálico N-acetilado?

Se utiliza un reactivo seudo-Schiff (Tionina) y Schiff (Fucsina) para poder discriminar, si para una
misma localización, existe la coexistencia o no, de residuos de ácido siálico acetilados y no
acetilados. Se realiza una secuencia de 4 pasos con dos oxidaciones y dos inubaciones (el primero
con seudo-Schiff). La coloración in situ se puede dar: Magenta (Schiff convencinal), azul (seudo-
Schiff) y púrpura (cuando ambos se combinan).

* La oxiloacetilacion se da a nivel de la cadena lateral del acido sialico, el acido neuroamino es una
acido sialico n acetilado. Por lo que sirve un pas convencional o especializado

6.- ¿Qué procedimiento histoquímico sería el más adecuado para diferenciar un residuo rico en
NANA de una hexosa neutra?

Se utiliza la reacción con Fenilhidrazina. En el caso de ácidos siálicos, el grupo aldehído obtenido por
la oxidación de la cadena lateral se trata con Fenilhidrazina. La Fenilhidrazona obtenida es inestable
en el medio ácido que da el reactivo de Schiff, se regenera el grupo aldehído y se mantiene la PAS
+.

En hexosas neutras, la Fenilhidrazina actúa en los dos grupos aldehídos, forma un compuesto cíclico
estable que bloquea irreversiblemente los grupos aldehídos. Así es posible diferenciar la PAS +
proveniente de ácidos siálicos de la generada por hexosas neutras. Se usa Schiff convencional.

* Se puede usar fenilhidrazina o un pas especializado para ácido sialico

7.- ¿De qué manera, mediante el método de PAS podría ponerse de manifiesto un ácido siálico
Oacetilado en el carbono 8 y 9?, resuma el procedimiento.

HIO4- : Primera oxidación con ácido peryódico.

BH4- : Reducción con Borohidruro de sodio.
KOH: Saponificación con Hidróxido de potasio.
HIO4- : Segunda oxidación con ácido peryódico.
Azul (Tionina): NANA + ácido siálico acetilado en C9.
Magenta: Ácido siálico acetilado en C8.
Púrpura: Ácido siálico acetilado, sólo en C7, acetilado C7 y C8, acetilado en C7, C8 y C9.
*¿Si esta acetilado en el carbono 7 nos va a dar pas positividad de forma convencional? No, hay
que saponificar, luego se oxida y rinde un solo aldehído que es identificable con el reactivo de
Shiff. Es decir, que queda el grupo CHO a nivel del carbono 7.
Cuando tenemos algun grado de acetilación en cualquiera de los tres carbonos, la estrategia más
básica es la saponificación para liberar el ester y recuperar el grupo hidroxilo
*La saponificación es la desisterificacion (¿?), se recupera la configuración glicol, por lo tanto.

8.- ¿Cuáles son las principales pruebas histoquímicas utilizadas para el reconocimiento de
mucosubstancias ácidas?

Alcian Blue, Hierro coloidal, reacción metacromática con colorantes básicos (Tionina, azul de
metileno, azul de Toluidina, Safranina O).

En primer lugar, hay que diferenciar las pruebas para mucosustancias nutras de las acidas. Existen
principalmente tres métodos alcian blue, cualquier colorante básico como el azul de toluidina (que
también sirve para evaluar metacromasia) y el tercer método es el alcian blue más el cloruro de
magnesio con pH5 con concentración critica de electrolitos (para evaluar ácidos). En algunos casos
se puede sumar algo equivalente al alcian blue como es el hierro coloidal.

*Existen glucoproteínas que son consideradas mucosustancias neutras (proteínas que están
conformando cadenas de oligosacáridos con residuos de monosacaridos neutros) y
mucosustancias acidas. Y mayoritariamente ahí se pueden encontrar sulfomucinas, sialomucinas
(en las acidas)

9.- ¿Qué efectos ejercería en la basofilia con Azul de Toluidina la metilación por 2 horas a 60°C del
ácido hialurónico? ¿Se ve afectada la metacromasia? Argumente al respecto.

La metilación anula reversiblemente la basofilia dependiente de carboxilos y sulfatos a 60°C por 4

horas y es irreversible para sulfatos a 60°C-70°C por 24 horas. Se puede discriminar el radical ácido
en la basofilia. *solo se metiló.

10.- ¿Tendría los mismos resultados en el ejemplo anterior, el hecho de que usted, luego de
metilar, saponifique?

No, porque la saponificación (hidrólisis alcalina) puede hacer reversible la metilación. Se puede
recuperar la basofilia dependiente de sulfatos.

Sólo para los carboxilos. El primer prosedimeinte es solo saponificar y no hay coloración de los
grupos carboxilados y sulfatados. La diferencia es que si queremos desbloquear o desterificamos,
ahí recuperamos solamente los grupos carboxilos, los otros se hidrolizan. Si hacemos metilacion
sin saponificación realmente bloqueamos químicamente, pero si metilamos y saponificamos
tenemos la posibilidad de recuperar los grupos carboxílicos, no así los sulfatos
Esquema básicos de
Con metilación: siempre llega a alcian blue que puede ser a ph 1 o a ph2,5
Sin metilacion:
Si metilo y no saponifico no hay coloración
Si metilo y desaponifico: deseterifico y dejo solo los carboxilos y no los sulfatos

¿A que pH debo tener coloración?: al pH 2,5, porque acá se expresan los grupos carboxílicos

11.- ¿Qué efectos podría tener sobre un glucosaminoglicano como la heparina el mismo
procedimiento de metilación por 24 horas a 60°C con saponificación?

La heparina es un glicosaminglicano acido sulfatado. No se tiñe, porque los sulfatos no se

recuperan luego de ser metilados y saponificados, por lo que no hay coloración de la heparina

*¿Cuál es el elemento que se está afectando para que el resultado final de todo esto sea la
octocromasia y no la matecromasia?: porque la temperatura es una variable crítica? porque en la
temperatura ocurre el fenómeno de la polarización, destruye cualquier afán por polamerizar el
colorante metacromatico. Entonce spor mucha carga electroestática que exista, si no están las
condiciones de estabilidad para que por un lado forme puentes de hidrógenos (por el medio
acuoso) y uniones de corto alcance (entre los monómeros) lo único que se obtiene es la
octocromasia, porque no es posible que el colorante interactue como monómero frente al
cromotopo y generar un efeto hipso o batoponico (es decir, cambiar el espectro de absorción que
tenga). Cuando es ipso, el espectro de absorción se dirige hacia longitudes de ondas mas pequeñas
(el color se debilita) y el efecto batopronico es cuando se desplaza hacia longitudes de ondas mas
largas (hacia el infrarrojo. el color se intensifica).*

12.- ¿Cuál sería el valor del uso de glicosidasas en la histoquímica de los hidratos de Carbono? Dé
ejemplos.

Se usan para el reconocimiento de moléculas de carácter ácido. Por ejemplo, la acción de la

hialuronidasa pudiera demostrar que la basofilia de una sustancia es dependiente del ácido
hialurónico (molécula carboxilada) al determinarse que después del tratamiento enzimático, gran
parte de la coloración decae significativamente al ser coloreada con posterioridad con el colorante
ácido. La neuroaminidasa puede aportar información acerca de su contenido de NANA,
monosacárido ácido responsable de la basofilia en mucinas epiteliales (sialomucinas).

Un estudio de la basofilia, demuestra que se trata de una mucosustancia alcian blue positiva
débilmente a pH1 e intensamente a pH2,5, luego se realiza una concentración química de
electrolitos con una concetracion baja de cloruro de magnesio 0,2% ya pierde la coloración,
después realiza estudios de metilación y luego de saponificar es capaz de recuperar la basofilia.
Entocnes, hay una mucosustancia aacida que hay que reconocer y solo se tiene la enzima de
hialorumidasa. ¿Qué puede aportar este examen?: la mucosustancia que está dando color ya no lo
está haciendo, siempre que la sustancia sea ácido hialuronico, si no, no es ácido hialuronico.
*La sustancia pas positiva ¿Qué es? ¿Cuál es la naturaleza?: glucosa, manosa, o glicógeno
(polisacarido). ¿Cómo diferenciamos que la pas positividad sea de la naturaleza glicogenica o no
glicogenica?: si el resultado luego del tratamiento con una glicosidasa llamada diastasa de uina
alfa amilasa y el resultado es pas positivo y pas diastasa negativo, significa que no es glicógeno

13.- Imagine que realizando un H/E, usted descubre un material intensamente basófilo en la
matríz extracelular de un tumor. ¿Qué propiedades histoquímicas de esa sustancia podría usted
poner de manifiesto mediante un estudio de basofilia? ¿De qué métodos histoquímicos haría uso?

Al utilizar un colorante básico a diferentes valores de pH:

pH bajo (0.5-1.0): Radicales ácidos esteres sulfatos.
pH (2.5-4.0): Además de los grupos sulfatos, se manifiestan grupos carboxilos y otras
mucosubstancias ácidas.

Métodos de bloqueo, como el uso de la temperatura o metilación, permitirían discriminar entre un

radical y otro.

La acción de enzimas sirve para determinar si la basofilia proviene de sustancias de carácter ácido y
no de los radicales, por ejemplo:
- Hialuronidasa demuestra que la basofilia provine del ácido hialurónico, así como la neuraminidasa
aporta información del contenido de NANA (monosacárido ácido responsable de la basofilia en
mucinas epiteliales o sialomucinas).
(Tabla de glicosidasas para hidratos de carbono).
14.- Sin considerar el método de PAS: ¿Que método histoquímico le sería de utilidad para
determinar que una glicoproteína presenta un alto contenido de residuos de L-fucosa?

Al ser la L-fucosa una lectina, se pueden conjugar a digoxigenina con posterior incubación de un
anticuerpo monoclonal anti-digoxigenina. Luego, el sitio de unión de manifiesta por sistema de
detección.

Ejemplo: La imagen de la izquierda muestra la detección de glucosamina mediante la lectina WGA

biotinilada y su posterior revelado de la peroxidasa unida a avidina (color marrón). (Derecha)
Detección de fucosa mediante la lectina AAA unida a digoxigenina. Mediante un anticuerpo contra
la digoxigenina unido a fosfatasa alcalina se pone de manifiesto la localización de la fucosa (color
azul).
https://mmegias.webs.uvigo.es/6-tecnicas/5-lectinas.php

15.- ¿Por qué razón, tanto las hifas como las esporas de un hongo pueden ponerse de manifiesto
con el método de PAS?, ¿Opera un principio similar cuando con el mismo método se ponen de
manifiesto las membranas basales?

Las hifas y las esporas se puede colocar en manifiesto por pas debido a que las paredes de los hongos
presentan celulosa que es polisacarido que es una Mucina neutra que se puede reconocer con pas

16.-¿De qué manera usted tiene la certeza que el contenido de una vacuola intracelular PAS (+)
corresponde a una glicoproteína neutra y no a glicógeno?

en el caso para poder identificar hexoxas neutras y presencia de glicoles es importante considerar
las muestras de pas normal y pas diastasa, En cambio si utilizas pas diastasa y no observas coloración
en la muestra quiere decir que no existe presencia de grupos glicoles ya que para que pas se pueda
ver de color magenta tiene que haber dos grupos oh juntos.

*utilizamos una reacción enzimática con pas diastasa (alfa amilasa) de modo que si se tratase de
glicógeno la reacción sería Pas diastasa negativo.

Pas diastasa + o – da relación que la mucosustancia neutra es o no glicogenica, es decir, si es pas

positiva la reacción no es glicogenica, en cambio, si es pas negativa, la reacción es glicogenica.
Significa que la muestra la traté con la enzima que degrada glicógeno y resistió la positividad, no la
anule, es decir, si resistió la acción enzimática, no es glicogenica. En cambio, frente al pas y el
previo tratamiento con enzima esta se hace negativa, es decir, no tengo coloración magenta ,
degradé la sustancia neutra, quiere decir que es glicogenica.
En una mucosustancia neutra glicogenica y otra no glicogenica, ambas tienen glicoles lo que hace
posible que en cambas pudiese haber pas positividad, la diferencia es que uno es un polisacárido y
el otro podría ser una glicoproteína.

17.- ¿Qué aspectos de las moléculas de carbohidratos ponen de manifiesto las lectinas a diferencia
de las ofrecidas por los métodos químicos como el PAS o el Alcian Blue? Resuma la metodología
que hace uso de las lectinas.

Las lectinas son proteínas que tienen secuencias de aminoácidos que son capaces de reconocer
los glucidos terminales que forman parte de oligosacaridos , por lo cual las lectinas reconocen
glicoconjugados de forma directa Ese es su mecanismo a diferencia del alcian blue que a través de
uncolorante podemos entrar en contactos con grupos ácidos y el pas que a través de una
oxidación poder dejar libre los grupos cho y poder ser reconocidos con el reactivo schiff para
poder poner en manifiesto carbohidratos. En Que es el pas con saliva a una muestra de pas
diastasa lo que debería ocurrir si existen grupos glicoles es que exista coloración ósea se observa
de color magenta la muestra. Los residuos de los monosacáridos, la manosa, la glucosa como
molecula, a diferencia de los otros reactivos, el monosacárido está poniendo en manifiesto
radicales, los grupos químicos, que puede ser el aldehído o un carboxilo que se oxida a aldehído.

Cual es la estrategia que existe cuando uno trabaja con lectinas? Por ejemplo si quisiéramos
tener una visión conjugada con un fluoroforo. Podríamos tener la lectina conjugada con un
fluoroforo (en vez de anticuerpo primario, la lectina y si esta conjugada con fluorosceina queda
hasta ahí.) , si esta conjugada con biotina el 2dario debería tener un anticuerpo anti biotina, y por
ultimo el revelado.

18.- ¿Qué son las glicogenosis y las mucopolisacaridosis?, investigue al respecto y confeccione un
cuadro resumen del tema.

Mucopolisacaridosis: Se producen por una deficiencia de las enzimas necesarias para la

degradación de los mucopolisacárisdos, glicosaminoglicanos (GAG), lo que origina un aumento de
su eliminación en orina. El depósito en los ligamentos, tendones y cápsula articular da lugar a
contracturas articulares. Las formas atenuadas se presentan con escasa sintomatología orgánica o
incluso con expresión monosintomática articular.

problema a nivel lisosomal, no tiene las enzimas necesarias funcionales , el problema se produce
cuando los gliosaminglicanos comienzan a acumularse en el sistema macrocitico macrofagico, por
lo que la función inmune se ve alterada, órganos comienzan a acumular mucho (ej: medula osea,
hígado, bazo) el trastorno se produce por el deposito y por la no disposición de estos
componentes para la constitución de un sistema esquelético normal. La cual en algunos casos se
puede asociar a déficit intelectual.

Enfermedad de san Filipo es por mucopolisacaridosis? (investigar)

Glicogenosis: enfermedad metabólica que tiene que ver con el metabolismo del glicógeno.
*glicógeno es un polímero que tiene una enzima que polimeriza a la glucosa, y otra que es la alfa
1,6, el problema puede estar en alfa 1,4 o 1,6, si tenemos problemas en estas tendremos
problemas en romper el glucógeno y generar glucosa. Por lo que habrá hipoglicemia y mucho
glicógeno el cual se podría almacenar en el hígado y causar hepatomegalia, y si hay células que se
están acumulando en el sistema macrofagico, podríamos tener esplenomegalia , y en el musculo
esquelético podríamos tener macroglosia.

El problema acá es cuando necesita ocupar la reserva no la tiene disponible.

Von Glerke es una enfermedad recesiva no asociada al déficit intelectual y tener en consideración
la prevalencia y en que consiste este grupo de enfermedad.

19.- Qué método(s) histoquímico(s) serían de utilidad para la orientación diagnóstica y que
estructuras se destacarían en lesiones como:

(a) Onicomicosis: Positivo para métodos de PAS y Argentafin. (Estrato córneo).

(b) Urticaria: Positivo para metacromasia con AT y AB a pH 1.

asociada a procesos alérgicos o de hipersensibilidad

Alergia asociada a IgE  histamina  mastocitos o células cebadas

(c) Microangiopatía diabética: Positivo para PAS. (Pared capilar).

(d) Mastocitoma canino cutáneo: : neoplasia de células redondas que corresponden a mastocitos,
diagnostico se hace con la metacromasia dada por la heparina

(e) Enfermedad de Paget: Positivo para PAS. (Epidermis). compromiso epidérmico por un
carcinoma ductal mamario, (neoplasia epidermotropica o mucotropica) el cual se manifiesta
clínicamente por exema de pezón y/o aereola que no cede al tratamiento con corticoides. En una
citología tendríamos células epidérmicas y entre ellas células grandes con nucleos hipercromaticos
con aspecto de huevo frito las que correspondían a las células de paget que indicaban este
carcinoma.

*estos son el primer signo clínico que indica un compromiso más severo de la enfermedad.

*el exema luego evoluciona a ulcera.

20.-Realice un pequeño resumen conceptual respecto al fenómeno de la metacromasia.

Considere: tipos de cromótropos; tipos de colorantes; condiciones de la solución colorante.

21.- Qué condiciones de fijación favorecen la insolubilidad del glicógeno y evitan el artefacto de
“streaming”. (¿En que consiste este artefacto y por qué se produce?). Responda lo mismo para los
Proteoglicanos.

Glicógeno hepático.

Las condiciones óptimas de fijación consideran el uso de cortes delgados (no superiores a 3mm de
espesor), en mezclas fijadoras de base alcohólica (etanol) en presencia de ácido pícrico (Bouin
alcohólico a baja temperatura de 4°C).

Así se evitaría la formación de artefactos “streaming”, que ocurre cuando el lioglicógeno se

solubiliza en solución acuosa y el desmoglicógeno se desplaza hacia uno de los polos del hepatocito.

Proteoglicanos.

La insolubilización se logra haciendo uso de sales de plomo o agregando sales de amonio cuaternario
como el Cloruro de Cetilpiridinium (CPC) a la solución acuosa de Formaldehído al 10%. El CPC se une
a los grupos carboxilos y sulfatos de los proteoglicanos, generando un efecto precipitador muy
efectivo, el cual, se combina con el efecto fijador de las proteínas ejercido por el Formaldehído.

streaming: artefacto de fuga. Se tiene el hepatocito, tenemos el nucleo y el glicógeno se acumula

y polariza hacia un lado, se desplaza hacia un lado siguiendo la corriente de difusión con el tejido
fijado.

Se necesita utilizar soluciones alcoholicas que incorporen el acido pícrico y a baja temperatura (4 a
8) así evitamos el desplazamiento.

Proteínas que forman parte del desmoglicogeno forman ------ sales con esas proteínas. Y las
soluciones alcoholicas insolubilizan el glicógeno, especialmente el lioglicogeno.

*cuando hacemos pas y tenemos marcación inespecífica o mucho fondo, pudiera ser que hubiese
grupos aldehídos preexistentes que no fueron generados por la oxidación, cuando uno fija el tejido
en glutaraldehido, uno de estos se une a la proteína, pero el otro queda libre y este puede generar
artefacto, para esto necesitamos bloquear el más recomendado es por hidruro de sodio que va a
generar un alcohol primario, y ya que la oxidación solo se produce cuando hay 2 hidroxilos juntos,
hay glicolisis no alcoholes primarios.

*El resumen de la metacromasia esta bien planteado en los apuntes