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Micro
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Introducción
Los microorganismos los podemos encontrar en el agua, el aire, el polvo, las plantas, animales,
ambientes hostiles como profundidades marinas, en el cuerpo humano se encuentran
constituyendo la microflora normal, cuya presencia es beneficiosa para nuestro organismo. En
general proliferan donde encuentran alimento, humedad y temperatura adecuada (Rivas, 2009).
Según Prescott et al (2002), para que las bacterias crezcan adecuadamente en un medio de cultivo
artificial debe reunir una serie de condiciones como son: temperatura, grado de humedad y
presión de oxígenos adecuados, así como un grado correcto de acidez o alcalinidad. Un medio de
cultivo debe contener los nutrientes y factores de crecimiento necesarios y debe estar exento de
todo microorganismo contaminante.
Muchas especies bacterianas son tan parecidas morfológicamente que es imposible diferenciarlas
sólo con el uso del microscopio; en este caso, para identificar cada tipo de bacteria, se estudian
características bioquímicas sembrándolas en medios de cultivo especiales. Así, algunos medios
contienen un producto que inhibe el crecimiento de la mayoría de las especies bacterianas, pero
no la de un tipo que deseamos averiguar si está presente. Otras veces el medio de cultivo contiene
determinados azúcares especiales que sólo pueden utilizar algunas bacterias. En algunos medios
se añaden indicadores de pH que cambian de color cuando uno de los nutrientes del medio es
fermentado y se generan catabolitos ácidos. Si las bacterias son capaces de producir fermentación,
generan gases que pueden ser apreciados cuando el cultivo se realiza en un tubo cerrado (Madigan
et al, 2004).
Metodología
Se realizaron una serie de muestreos utilizando distintos medios de cultivo (ARE, APD, AS) en el
Laboratorio de Microbiología del Instituto Tecnológico de Costa Rica para evidenciar la
omnipresencia de los microorganismos
Para la preparación de las placas de agar, se fundó el agar en agua hirviendo al estar totalmente
disuelto se colocó en baño María a 60° C, se procedió a rotular las placas de Petri según el método
y agar utilizado. El agar disuelto se dejó enfriar a temperatura cachete, antes de repartir cada agar,
al APD se le agregó 2 ml de ácido tartárico. Se chorreó ARE en tres placas de Petri y APD en dos
placas de Petri, se dejó enfriar con la tapa cerrada hasta que el agar solidifique.
En el muestreo ambiental, se tomó una placa de ARE y otra de APD, retiradas las tapas se dejaron
expuestas al aire del laboratorio durante 20 min. Transcurrido el tiempo se puso a incubar en
posición invertida a 35° C por 48 hrs.
Se tomó una placa de ARE, dividida en partes iguales con marcador permanente, se pasó un dedo
sucio sobre la superficie de una mitad de la placa y luego se pasó un dedo limpio (lavadas la
manos) por la superficie de la otra mitad. Rotulada debidamente la placa se procedió a incubar en
posición invertida a 35° C por 48 hrs.
Para el muestreo de la cabellera se tomó una placa de ARE, se destapó y se sacudió el cabello
sobre la superficie del agar, se tapó y se puso a incubar en posición invertida a 35° C por 48 hrs.
El muestreo de superficie, se realizó tomando un hisopo estéril el cual se sumergió en CN, con el
hisopo húmedo se tomó una muestra de alguna superficie, preferiblemente horizontal, y luego se
paso el hisopo suavemente sobre la superficie de una placa de APD. Rotulada correctamente se
puso a incubar a 35° C por 48 hrs.
Por ultimo el muestreo de rostro, se tomó un hisopo estéril el cual se sumergió en CN, con el
hisopo húmedo se tomó una muestra de la cara, bigote o borde del pelo y para luego pasarlo
suavemente sobre la superficie de una placa de AS, rotulada la placa se colocó en posición
invertida en la incubadora a 35° C por 48 hrs.
Resultados
Cuadro 1. Resultados observados en los diferentes muestreos y medios de cultivo. Laboratorio de
Biología ITCR.
Medio de Cultivo Muestreo Observaciones
AS Rostro Placa 1: mayoría halo
transparente, algunas con halo
verde amarillo.
Placas 2 y 3: mayoría halo
transparente, también sin
halo.
ARE Medio Ambiente 20 colonias entre blancas y
amarillas. Hubo hongos.
ADP Medio Ambiente Solamente 3 hongos.
ARE Cabello Colonias blancas y amarillas,
aisladas y en grupos.
ADP Superficie 23 hongos de diferentes
tamaños.
ARE Dedo Limpio y Dedo Sucio Dedo Limpio:
aproximadamente 100
colonias blancas pequeñas
muy agrupadas.
Dedo sucio: 3 colonias blancas
aisladas.
Discusión
El medio agar sangre (AS) es una combinación de un agar base con el agregado de 5 %
de sangre ovina, en esta práctica se usó para ver la capacidad hemolítica de los microorganismos.
El término hemólisis se refiere a la desintegración de los eritrocitos y este tipo de lisis se puede
clasificar observando los halos hemolíticos alrededor de las colonias. A sabiendas de lo anterior, en
la placa de AS número uno hay bacterias hemolíticas alfa y beta, mientras que en las otras dos
placas hubo bacterias hemolíticas beta y gamma (Chávez et al, 2006).
Otro medio usado fue el agar Papa Dextrosa (APD), fue utilizado para el cultivo de hongos, ya que
es un medio selectivo, o sea favorece el crecimiento de microorganismos particulares. Se adicionó
ácido tartárico para bajar el pH del medio a 3.5 ± 0.1 y así inhibir el crecimiento bacteriano
(Prescott et al, 2002). Contrario a esto, el agar de Recuento Estándar es un medio utilizado para el
recuento de bacterias en general (Rivas, 2009), por lo que se utilizó meramente para evidenciar la
omnipresencia de los microorganismos, gracias a los muestreos de medio ambiente y superficies.
En la prueba de los dedos se observó un mayor crecimiento en el dedo limpio ya que según M.
Rojas (entrevista personal, Febrero 27, 2009) al lavarse las manos se elimina la grasa que los cubre,
dejando expuestas las bacterias endógenas. Además todas las placas de Petri fueron incubadas a
37°C, durante 48 horas, estas condiciones para propiciar un mejor desarrollo de los
microorganismos cultivados.
Conclusiones
El medio de cultivo agar papa dextrosa al ser selectivo permitió evidenciar el crecimiento de
hongos.
Los medios de cultivos selectivos permiten el crecimiento microbiano específico, como el APD y AS.
Bibliografía
Chávez, M; G, Livia; E, Muñoz; M, Otiniano; M, Luján & J, Castro. 2006. Evaluación comparativa de
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Revista medica Vallejiana. Vol 4. No. 2. 148-154p.
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Prescott, L.; Harley, J. & Klein, D. 2002. Microbiología. 4 ta edición. Editorial Mc Graw- Hill
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Rivas, O. 2009. Folleto del Curso de Laboratorio de Microbiología Aplicada. Editorial Tecnológica,
ITCR. Cartago, Costa Rica. 69p.