Objetivos

- Producir células competentes a partir de la célula modelo de Escherichia coli DH5α.

- Incorporar el plásmido pUC alid a las células competentes obtenidas.
- Evaluar la eficiencia de transformación teniendo en cuenta la variación final en el tiempo.
TEÓRICO

Metodología

Se realizó una siembra en una placa de agar LB, haciendo estrías para aislamiento de colonias de
una cepa de E. coli, se incubó durante 10 horas a 37°C. Se inoculó una colonia aislada en 5 ml de
caldo LB y se incubó durante 15 horas a 37°C. Posteriormente, se transfirieron 2.5 ml del cultivo
‘ON’ a un erlenmeyer de 250 ml con 50 ml de caldo LB (preincubado a 37°C). Se incubó a 37°C con
agitación rotacional (250 rpm) hasta que el cultivo alcance una densidad óptica de 0.4 - 0.6 a 600nm.
Se transfirieron 1.5 mL a tubo eppendorf y se dejó enfriar en hielo durante 10 minutos, luego se
centrifugó a 4.000 rpm por 10 minutos, se desechó el sobrenadante en un frasco de vidrio.
Inmediatamente, se resuspendieron las células en la mitad del volumen inicial (0.75ml) de CaCl2
100 mM preenfriado en hielo, se resuspendió por golpeteo del tubo sobre la palma de la mano. Se
mantuvo la suspensión de células en un baño de agua - hielo durante 20 minutos. Se centrifugó a
5.000 rpm durante 5 minutos a 4°C. Luego, se retira el sobrenadante, se resuspendió en 1/20 del
volumen inicial (37,5 μl) de CaCl2 100 mM; se mantuvo en hielo durante 10 minutos. Se adicionó al
tubo el ADN plasmídico disuelto en 1 µl. Se mezcló suavemente, golpeando el tubo con los dedos
durante 5 segundos, se mantuvo el tubo en hielo durante 5-10 minutos, posteriormente, se colocó
el tubo en baño de agua a 42°C durante 30 segundos o 45 segundos o 60 segundos o 75 segundos o
90 segundos, luego de transcurrido el tiempo se enfrió inmediatamente en hielo durante 2 minutos.
Se adicionaron 50 µl solución salina y de incubó a 37°C durante 2 horas. Finalmente se transfirió
todo el contenido del tubo a la placa de Petri con el medio Lauri Bertani modificado con ampicilina
solidificado y se extendió el volumen con asa de Drigalsky estéril, se incubó la placa invertida a 37°C
durante toda la noche

Análisis de resultados

La transformación de células de tipo bacteriano es una de las formas en la que los microorganismos
han logrado su evolución, la forma en que consiguen resistir a diferentes factores como los
antibióticos y alcanzar altos grados de patogenicidad, por lo general, la mayoría de los plásmidos
(incluso los diseñados para células de mamíferos) tienen un origen de replicación bacteriano y un
gen de resistencia a antibióticos para usar como un marcador de selección.1 De esto se deriva la
importancia en el campo de la microbiología y la biología molecular.
1. Alberto Checa Rojas. (2018). Método: Células competentes y transformación. 2019, Octubre
7, Conogasi.org Sitio web: http://conogasi.org/articulos/metodo-celulas-competentes-y-
transformacion/