Parasitologia Guia de Practica 2017-Ii

R
USMP
FACULTAD DE MEDICINA HUMANA
DEPARTAMENTO ACADEMICO DE CIENCIAS BASICAS
PARASITOLOGIA
GUIA DE PRACTICA
HELMINTOS
Lombrices Teni a
Esquistosomas
ALUMNO : …………………………………………………………….
PROFESOR:................................................ GRUPO: ………...
LIMA-PERU
2017-II
FMH-USMP-Parasitologia 2017
PROPIEDAD INTELECTUAL: Departamento Académico de Ciencias Bésicas-USMP

RESPONSABLE DE LA ASIGNATURA: Dra. Maritza M. Calderén Sénchez
GUIA ELABORADA POR: Dr. Juan A. Jiménez Chunga
LIMA - PERU
2017-II
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CONTENIDO
Paginas
PRACTICA 1
NORMAS DE BIOSEGURIDAD
I. INTRODUCCION
La bioseguridad es un conjunto de medidas probadamente eficaces para evitar la
adquisicion accidental de infecciones con patogenos contenidos en las muestras, asi
como los riesgos relacionados con la exposicion a agentes quimicos, fisicos y/o
mecanicos a los que esta expuesto el personal en los laboratorios.
Sólo si las personas que trabajan en los laboratorios conocen las normas de
bioseguridad y las aplican, pueden determinar su propia seguridad, la de sus compañeros
y de la colectividad. El personal de laboratorio debe cumplir con las normas de
bioseguridad y los directivos de la institucién deben cumplir con brindar las facilidades
para que éstas sean aplicadas.
Conocer las principales normas para proteger la salud de las personas que
puedan estar expuestas a riesgos relacionados con la exposicion a agentes biologicos,
quimicos, fisicos, y otros en los laboratorios de ensayos, biomédicos y clinicos.
II. AGENTES DE RIESGO

El personal de laboratorio diariamente realiza muchas actividades que pueden
causar enfermedad o daño en él o en las personas que trabajen en ambientes cercanos,
e incluso en sus familiares y la comunidad. Estas enfermedades pueden ser causadas
por:
- Agentes biológicos, transmitidos por ingestión, inhalación, inoculación y por contacto
directo a través de piel o mucosas.
- Agentes fisicos y mecanicos, como las temperaturas extremas, radiaciones ionizantes,
contactos eléctricos o conexiones defectuosas y vidrios resquebrajados de recipientes
dañados o tubos rotos.
- Agentes quimicos que pueden ser corrosivos, tóxicos, carcinogénicos, inflamables,
explosivos.
III. PRINCIPIOS BASICOS DE BIOSEGURIDAD

El término contención se utiliza para describir métodos seguros para manejar
materiales infecciosos en el ambiente de laboratorio donde son manipulados o
conservados.
El objetivo de la contención es reducir o eliminar la exposicién de quienes trabajan
en laboratorios u otras personas y del medio ambiente externo a agentes potencialmente
peligrosos.
IV.NIVELES DE CONTENCION
El elemento más importante de la contención es el cumplimiento estricto de las

prácticas y técnicas microbiológicas estandar de procesamiento de las muestras de
laboratorio. Cuando las prácticas de laboratorios no son suficientes para controlar los
riesgos asociados a un agente o a un procedimiento de laboratorio particular, es
necesario aplicar medidas adicionales.
Estas medidas adicionales corresponden a los equipos de seguridad diseñados
para la proteccion del personal y practicas de manejo adecuadas (barrera primaria), un
diseño de la instalación y caracteristicas de la infraestructura de los locales (barrera
secundaria). Estos niveles estan definidos de la siguiente manera:
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• Contención Primaria:
Constituyen la primera linea de defensa cuando se manipulan materiales
biológicos, quimicos y/o fisicos.
Las barreras de contención primaria son:
- Equipos de proteccion personal (EPP).
- Técnicas de laboratorio estandar y normas de higiene personal.
- Inmunizacion (vacunación).
- Esterilizacion y desinfección de instrumentales y superficies.
Es la protección del personal y del medio ambiente inmediato contra la exposición a
agentes infecciosos y/o productos quimicos de riesgo. Es provista por una buena técnica
microbiologica y el uso apropiado del equipo de seguridad. El uso de vacunas aumenta el
nivel de proteccién personal.
• Contención secundaria:
Se refiere al diseño y construcción de un laboratorio, l o que en seguridad biológica
se conoce como contencion o barrera secundaria, contribuye a la protección del personal
de laboratorio, personas que se localizan fuera del laboratorio y protege a las personas
de la comunidad frente a posibles escapes accidentales de agentes infecciosos.
Los modos de transmision en el laboratorio pueden ser insidiosos y algunas veces
complicados, debido a que los vehiculos y rutas de transmision difieren de los modos
clasicos. El personal de Laboratorio esta frecuentemente expuesto a niveles muy altos de
los agentes infectantes, por to que los periodos de incubación pueden ser mas cortos que
los del mismo tipo de infeccién provocada por una exposicién corriente.
TIPOS DE LABORATORIO CON RELACION AL NIVEL DE BIOSEGURIDAD (NBS)

NBS 1:
El personal de laboratorio cuenta con una capacitación especifica acerca de los
procedimientos realizados en el laboratorio y es supervisado por una persona con
capacitacion general en microbiologia o una ciencia relacionada. Adecuado para agentes
biologicos del grupo 1.
NBS 2:
Se aplican normas similares al NBS 1 y es adecuado para trabajos que involucran
agentes biológicos de riesgo 2 con potencial moderado para el personal y el medio
ambiente.
NBS 3:
Es aplicable a las instalaciones clinicas, de diagnóstico, enseñanza, investigación
o produccion en las que se llevan a cabo trabajos con agentes biológicos del grupo 3 que
pueden producir una enfermedad grave o potencialmente como resultado de la
exposición por via de inhalación.
NBS 4:
Debe aplicarse para trabajar con agentes peligrosos y exóticos que poseen u n
riesgo individual alto de producir infecciones de laboratorio transmitidas por aerosoles y
enfermedades mortales. El laboratorio de nivel de bioseguridad 4 tiene caracteristicas
especiales de ingenieria y diseño para evitar la diseminacién de los microorganismos en
el medio ambiente. Este NBS permite manipular agentes biológicos del grupo 4.
CLASIFICACION DE LOS MICROORGANISMOS POR GRUPO DE RIESGO

Agente biológico del grupo 1
Es poco probable que cause una enfermedad en el hombre. Es decir, los que no
producen enfermedad en el ser humano y de susceptibilidad conocida y estable a los
antimicrobianos. Ejemplo: E. coli K12, Saccharomyces cerevisiae, microorganismos que
se utilizan en la industria de la alimentacion para la elaboracién de quesos, embutidos,
entre otros.
Puede causar una enfermedad en el hombre y puede suponer un peligro para los
trabajadores, siendo poco probable que se propague a la colectividad y existiendo
generalmente profilaxis o tratamiento eficaz. Como algunos que, perteneciendo a la
propia flora habitual del hombre, son capaces de originar patologia infecciosa humana de
gravedad moderada o limitada. Ejemplo: Staphylococcus epidermidis, Salmonella sp,
entre otros. Parasitos: los estados infecciosos de los parasitos han causado infección por
ingestión, penetración por la piel o mucosas o inyección accidental. Las preparaciones
que se saben libres de los estados infectivos no requieren de este nivel de contención.
Ejemplo: Trypanosoma cruzi, Cryptosporidium, Necator, Strongyloides, Taenia solium.
Puede causar una enfermedad grave en el hombre y presenta un serio peligro
para los trabajadores, con riesgo de que se propague a la colectividad y existiendo frente
a él generalmente profilaxis o tratamiento eficaz. Implican patologia grave, de dificil y
largo tratamiento, que pueden curar con secuelas y ocasionalmente producir la muerte. El
mayor y más frecuente peligro que entrañan éstos es la infección adquirida a través de
aerosoles y por fluidos biolégicos. Ejemplo: M . tuberculosis, Brucella sp, Coxiella burneti,
Influenza A N1H1, entre otros.
El laboratorio debe tener caracteristicas de diseño e ingenieria especiales. Sin
embargo, se reconoce que algunas instalaciones existentes pueden no presentar todas
las caracteristicas recomendadas para el nivel de bioseguridad 3 (por ejemplo, zona de
acceso con doble puerta y penetraciones selladas).
En esta circunstancia, se puede lograr un nivel de seguridad aceptable para la
práctica de procedimientos de rutina. La decisión de implementar esta modificación a las
recomendaciones del nivel de bioseguridad 3 debe solamente tomarla el coordinador o
jefe del laboratorio.
Aquel que causando una enfermedad grave en el hombre supone un serio peligro para
los trabajadores, con muchas probabilidades de que se propague a la colectividad y sin
que exista generalmente frente a él profilaxis o tratamiento eficaz.
Normalmente son microorganismos de dosis infectiva baja y altamente contagioso.
Ejemplo: Arenavirus como el que produce la fiebre de Lassa, Machupo, Ebola, Hantavirus
y el VIH.
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PRECAUCIONES DE TRABAJO
1. Las puertas del laboratorio deberan estar cerradas y el acceso al mismo deben
estar restringido mientras se lleven a cabo trabajos con materiales biológicos. La
puerta deben portar emblemas que digan: "Prohibido pasar, Peligro biologico".
2. El laboratorio debera ser mantenido limpio, ordenado y libre de materiales
extraños.
3. No se permitira comer, beber, fumar y/o almacenar comidas asi como el uso de
cualquier otro item personal (Ej. cosméticos, cigarrillos) dentro del area de trabajo.
4. Usar bata, chaqueta o uniforme dentro del laboratorio. Esta ropa protectora
debera ser quitada inmediatamente antes de abandonar el area de trabajo.
Antes de iniciar la tarea diaria asegurese que la piel de sus manos no presente
cortes, raspones y otras lastimaduras, en caso que asi sea cubrir la herida de
manera conveniente antes de colocarse los guantes.
6. Usar guantes de latex de buena calidad para todo manejo de material biológico o
donde exista aunque sea de manera potencial el riesgo de exposición a sangre o
fluidos corporales. Cambiar los guantes de latex toda vez que hayan sido
contaminados, lavarse las manos y ponerse guantes limpios. Una vez usados los
guantes de latex deberan ser colocados dentro del recipiente con solucion
decontaminante.
7. No tocar los ojos, nariz o piel con las manos enguantadas.
8. No abandonar el laboratorio o caminar fuera del lugar de trabajo con los guantes
puestos.
9. El uso de agujas, jeringas y cualquier otro instrumento similar deben ser
restringido a su uso indispensable. Las agujas y otros elementos punzantes
deberan ser descartados en un recipiente resistente y destinado a tal fin.
10. Todas las muestras deben ser tratadas como altamente infecciosas para evitar
posibles contagios.
11. Los procedimientos deberan ser realizados de manera tal que sea nula la creación
de aerosoles, gotas, salpicaduras, etc.
12. Bajo ninguna circunstancia se pipeteara sustancia alguna con la boca, para ello se
usaran pipeteadores automaticos.
13. Las superficies del area de trabajo deberan ser decontaminadas cuando se
termine la tarea diaria. Usando para tal efecto una solución de hipoclorito de sodio
en concentracion adecuada.
14. El recipiente para decontaminar especimenes deben contar con tapa de
seguridad para todo traslado fuera del lugar de trabajo. En ese caso el exterior del
recipiente debera ser mantenido fibre de toda contaminacion con sangre usando
solucién decontaminante.
15. El desecho de los fluidos organicos puede efectuarse por las cañerias habituales
una vez que estos hayan sido convenientemente decontaminados.
16. Lavar las manos con jabon (líquido o sólido suspendido) y agua inmediatamente
después que el trabajo haya sido terminado. Si los guantes de latex estan
deteriorados, lavar las manos con agua y jabón después de quitarlos.
17. Informe inmediatamente a su superior de cualquier accidente ocasionado con
elementos del laboratorio.
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PRACTICA 2
METODOS DE DIAGNOSTICO PARASITOLOGICO
I. INTRODUCCION
Puesto que el diagnóstico de la parasitosis intestinal depende del hallazgo de
huevos o larvas de helmintos y quistes o trofozoitos de protozoos en heces, la colección y
el manejo adecuado de las muestras son indispensables para la busqueda e
identificacién de los parasitos en el laboratorio.
Son factores que interfieren en el examen, la ingestién de medicamentos previa a
la colección y las muestras viejas o conservadas en forma inadecuada. La cantidad de
heces para un examen rutinario es del tamafio de una nuez o de cinco a seis cucharadas.
Las muestras se depositan en un recipiente de boca ancha, con tapa hermética y limpia,
no debe contaminarse con agua, orina o cualquier otro material extraño; no debe
obtenerse de la taza del banó, ni del suelo. En lactantes, la muestra se obtiene mediante
la cucharilla recta.
Las muestras deben ser etiquetadas con el nombre del paciente, hora de
colección y fecha. Generalmente se recomienda examinar tres muestras en serie y en
dias sucesivos. Las heces blandas, diarreicas y liquidas, deben examinarse dentro de las
primeras horas de haber sido colectadas, si esto no es posible, las heces deben
depositarse en una solución conservadora. Ej.: Formol 10%, alcohol polivinilico (PVA),
merthiolate — yodo (MIF) o fenol-alcohol-formol (PAF). Las heces formadas pueden ser
examinadas durante el mismo dia de su coleccion. Si no es posible pueden ser
refrigeradas durante 24 horas o conservadas (una parte de material fecal por tres de la
solución conservadora).
DIAGNOSTICO
1. Examen directo
Principalmente se busca en muestras frescas, la presencia de formas evolutivas
de parasitos de tamaño microscópico sean estos trofozoitos, quistes de protozoos:
Entamoeba histolytica, Giardia intestinalis, Balantidium coli, etc.; asi como larvas
(Strongyloides stercoralis), o huevos de helmintos: Ascaris lumbricoides, Trichuris
trichiura, Hymenolepis nana, Taenia sp., Fasciola hepatica, etc.).
Elementos normales: En un examen microscópico suelen encontrarse como

elementos normales estructuras reconocibles y otras no, fruto de la ingestión de
alimentos. Las mas frecuentes son: Fibras vegetales, Cristales de oxalato de calcio,
Granos de almidón, esporas de hongos, fosfato amónico—magnesio, granos de polen,
fibras musculares lisas, fibras musculares estriadas, cristales de acidos grasos, grasa
neutra, abundantes bacteria.
II. MATERIALES
• Muestras de heces frescas/fijadas en formol 10%
• Lamina portaobjeto y laminilla cubreobjeto.
• Mondadientes
• Guantes y mascarillas
• Suero fisiológico (SF) 0.85%
• Lugol
• Papel lente
• Frasco con desinfectante para descartar material (clorox, fenol)
• Microscopio de luz
Procedimiento
1. Recolecte la muestra de heces en un envase limpio y tapela. Asegurese de no mezclar
papel higiénico u orina con la muestra.
2. Transporte la muestra hasta el laboratorio a temperatura ambiente.
3. Coloque una gota de salina en una lámina portaobjeto.
4. Añada una cantidad pequeña de muestra de heces utilizando un aplicador de madera y
mézclela con la solución salina. Proceda igual agregando lugol.
5. Situe un cubreobjetos sobre la muestra y examine bajo el microscopio (10X y 40X).
6. Evalué la muestra y determine si hay parasitos presentes. El diagnostico definitivo se
logra demostrando la presencia de parasitos. En algunas ocasiones es necesario hacer
examenes repetidos en dias consecutivos antes de establecer que la muestra esta
negativa.
Esquema:
SF Lugol
Tincion
Movilidod
Vocuolos
(Trofozoitos)
Niicleos
2. Métodos de concentración
Este método permite concentrar quistes de protozoarios, larvas y huevos de
helmintos contenidos en las heces, para obtener una mayor cantidad de parasitos
mediante centrifugación, sedimentación, o flotación. Las mas usadas son Sedimentacion
espontanea, Ritchie, Willis, Faust, entre otras.
A. Métodos de Flotación
Técnica de Willis
Este método se basa en la propiedad que tiene algunos quistes de protozoarios y
huevos de helmintos de flotar en la superficie de una solucion saturada de cloruro de
sodio debido a su menor densidad.
Material
• Muestra de heces fresca.
• Tubo de ensayo y gradillas
• Lamina portaobjeto y cubreobjeto.
• Solución saturada de Cloruro de sodio (NaCl)
• Frasco con desinfectante para descartar material (clorox, fenol, lugol)
• Lugol.
• Microscopio de luz.
Procedimiento
Colocar en un tubo de prueba uno o dos gramos de heces. Añadir 4 ml de
solución saturada de NaCl. Emulsionar con una bagueta y completar con la misma
solucion el tubo hasta que en el borde se forme un menisco, déjelo reposar durante 20
minutos.
Se toma la muestra cubriendo el tubo con un cubreobjeto, en el se adhieren los
protozoarios. Hacer una observacion microscopica de la muestra en una lamina con lugol.
B. Método de centrifugación y flotación

Técnica de Faust modificada
Se basa en que los quistes y/o huevos de los parasitos flotan en la superficie por
ser de menor densidad que el sulfato de zinc a 33,3%, cuya densidad es 1180. Es util
para la busqueda de quistes y/o huevos de parasitos y excepcionalmente se observan
larvas. Se recomienda controlar la densidad del sulfato de zinc y usar agua filtrada para el
lavado previo de la muestra.
Materiales
• Tubo de ensayo 13 x 100 mm
• Gradillas
• Sulfato de Zinc USP 33,3 g
• Agua destilada tibia 100 ml
• Muestra de heces frescas
• Lugol
Procedimiento
1. Preparar una suspensión fecal en un tubo de prueba, completar el volumen a 10
ml con agua destilada.
2. Centrifugar a 2500 RPM durante un minuto y decantar el sobrenadante; repetir el
procedimiento anterior tres veces (hasta que el sobrenadante este claro).
3. Agregar la solucion de sulfato de zinc 2 ml, mezclar bien y completar con la misma
solución.
4. Centrifugar a 2500 RPM.
5. Luego con un asa de platino tomar una o dos asadas del material flotante
(superficie) y colocarlo una lamina portaobjeto.
6. Agregar una gota de lugol y cubrir la preparación con una laminilla cubreobjeto
7. Observar al microscopio.
Pelicula
superficial
Sulfato de Zinc
Sedimento de
C. Método de concentración: Ritchie

Se basa en la concentración de quistes y huevos por sedimentación mediante la
centrifugación, con ayuda de formol (fijador) y éter (disuelve las grasas de las heces) para
separar y visualizar los elementos parasitarios.
Procedimiento:
1. Se mezcla 1 g de heces con 8 ml. de solución salina en un tubo. Homogenizar.
Centrifugar a 2000 RPM (revoluciones por minuto) por 2-3 minutos y decantar
(repetir 2 veces, hasta que el sobrenadante este claro).
2. Decantar el sobrenadante y agregar at sedimento 6 ml. de formol at 10%.
Homogenizar. Reposar 5 minutos.
3. Luego se agrega 3 ml. de éter sulfidrico y se agita con cuidado (usar un
tampón).
4. Centrifugar 3 min. a 3000 RPM.
5. Se rompe la capa de detritus y se decanta.
6. Se toma una gota del sedimento y se prepara el examen directo con lugol.
Eter
Restos Lipidos
disueltos
(detritus)
Formalina
Sedimento
Parasitos
D. Técnica de Graham
Se usa para la busqueda de huevos de Enterobius vermicularis y consiste en
aplicar el lado adhesivo de un pedazo de cinta sobre el area perianal, despegar el mismo
y volver a pegarlo sobre la lamina portaobjeto.
En el laboratorio, se desprende la cinta engomada del frotis perianal por un
extremo, se agrega solución de tolueno, hidróxido de sodio 2% en solución salina,
aplicando 1 ó 2 gotas de la sustancia elegida que clarificara la muestra y que permitira
una mejor observación de los huevos y/o adultos de E. vermicularis. Es necesario
observar la lámina en su totalidad. Observar al microscopio, huevos de otros helmintos,
principalmente huevos de Taenia sp., Ascaris lumbricoides, Trichuris trichiura entre otros.
3. METODOS DIAGNOSTICOS DE HEMO E HISTOPARASITOS

Después de las heces, la sangre es la muestra más estudiada. La presencia de
parasitos puede no ser constante. Los métodos "estandar" mas empleados son:
Extensién fina y preparacién de gota gruesa. Otras posibilidades: Extension en fresco,
Movilidad (Trypanosomas). Familiarizar al estudiante con las diferentes técnicas de
deteccion directa para el diagnostico de hemo e histo-parasitos.
METODOS DE EXAMENES PARA INVESTIGACION DE PARASITOS HEMATICOS

Para estos examenes se utiliza sangre extraida del pulpejo del dedo o de la vena
en este caso se debe utilizar con anticoagulante y las preparaciones pueden ser hechas
en extension o frotis en gota gruesa.
Frotis
• Se prepara de modo que las células sanguineas se dispongan planas sobre la
superficie del vidrio.
• Se pretende que las células no se amontonen, que su espesor no supere una
célula.
• Todos los elementos quedan un poco aplanados (x tamaño).
• Las proteinas séricas (incluyendo la hemoglobina) deben fijarse previamente
• Estas preparaciones son muy u tiles para estudiar detalles de hematies y parasitos
sanguineos.
• Principal limitación: Escasa cantidad de sangre estudiada.
Gota gruesa
• Contiene entre 6-20 veces más cantidad de sangre que la extensión.
• Se extiende sobre un area de aproximadamente 15 x 12 mm.
• No se fija antes de la tinción.
• Se somete a un tratamiento de deshemoglobinización.
• La rotura de los hematies y la pérdida de su hemoglobina permite la observación
microscopica de otras estructuras, incluyendo parasitos.
• Resulta u til para diagnostico rapido de parasitemias leves.
• No es muy adecuado para estudios morfologicos f inos.
Importante:
• Portaobjetos limpios y bien desengrasados.
• Sangre fresca.
• Puncion dedo.
• Puncion lóbulo de la oreja.
• Puncion venosa en realización inmediata.
• Realización extensión.
• Secado al aire, eventualmente estufa 37º C.
• Fijacion (previa a tinción) o no.
Coloracién de frotis con colorante Wright

- Cubra el frotis con el colorante.
- Déjelo actuar 1 o 2 minutos (EI alcohol metilico que es el disolvente del colorante actua
como fijador)
- Luego agregue una gota de agua taponada y sin que se derrame mezcle bien soplando
suavemente, deje reposar de 5 a 7 minutos,
- Lavar con chorro débil de agua corriente y déjese secar.
- Observar con objetivo de inmersion y aceite de inmersión.
Coloracién de gota gruesa

- Para colorear con Wright, la preparación debe ser previamente hemolizada, para l o cual
a la preparacién ya seca, se Ie agrega agua y se deja un tiempo hasta que toda la
hemoglobina de los globulos pase al agua.
- Verter el agua suavemente y dejar secar.
- Colorear en la forma indicada para el frotis.
- Si se usa el colorante Giemsa, se sumerge el portaobjeto en el colorante, sin hemólisis
previa, luego del tiempo necesario (variable segun el colorante) se lava con cuidado y se
deja secar.
ESQUEMAS (PRACTICA 2)
PRACTICA 3
CARACTERISTICAS MORFOLOGICAS DE
PROTOZOARIOS Y HELMINTOS
I. INTRODUCCION
Los parasitos intestinales se identifican rutinariamente por sus caracteristicas
morfológicas en los analisis de laboratorio de la materia fecal, conocidos como
examen coprológico, mediante observacion microscópica en montajes humedos con
solucion salina o con solución de lugol como colorante.
También se pueden hacer extendidos para realizar posteriormente coloraciones
permanentes, como la coloración de hematoxilina férrica o la coloración tricrómica de
Gomori, los cuales facilitan la identificación al revelar detalles estructurales no
detectables en los montajes humedos.
En algunos casos se pueden tomar biopsias intestinales para identificar la
patologia producida por el parasito y observarlo en el tejido, en este caso se puede
utilizar la coloracién de hematoxilina-eosina, que aunque no es una coloracion
especifica para parasitos permite detectar algunos detalles del parasito buscado.
Los protozoos intestinales se presentan generalmente bajo tres formas de vida:
1. El trofozoito o forma vegetativa, que generalmente es el que produce la patologia.
2. El quiste o forma de resistencia que desarrolla el parasito para poder sobrevivir en

condiciones adversas.
3. El prequiste que es una forma intermedia.
Todos los protozoos que se transmiten por via oro-fecal presentan formas
quisticas, mientras los que se transmiten por contacto intimo o por vectores,
generalmente no presentan esta forma de resistencia.
En el intestino humano se pueden encontrar protozoos patógenos y protozoos

comensales, la aparición de estos ultimos puede deberse a varios factores como son
las condiciones de salubridad e higiene y factores inmunológicos; su aparición, aunque
no amerita tratamientos para su erradicacion, puede dar una idea de estas condiciones
en los pacientes, por Io tanto en los analisis de laboratorio general mente se informa su
presencia.
MATERIAL
• Heces frescas/fijadas en formol 10%

• Laminas coloreadas con hematoxilina férrica, tricromica de Gomori de frotis de
heces
• Pipetas, baguetas, guantes, mascarilla
• Suero fisiologico 0.85% y lugol
• Aceite de inmersion, laminas portaobjeto y laminillas cubreobjeto
• Papel lente
III. CARACTERISTICAS DE ALGUNOS PARASITOS INTESTINALES
Conocer microscópicamente las caracteristicas morfológicas de los principales

parasitos del intestino humano en extendidos de materia fecal en montaje húmedo.
1. Quiste de Entamoeba coli

2. Quiste de Endolimax nana
3. Quiste de lodamoeba butschlii
4. Quiste de Chilomastix mesnili
5. Quiste de Giardia intestinalis
6. Quiste de Blastocystis hominis
7. Huevo de Fasciola hepatica
8. Huevo de Taenia sp.
9. Huevo de Hymenolepis nana
10. Huevo de Ascaris lumbricoides
11. Huevo de Trichuris trichiura
12. Huevo de Enterobius vermicularis
13. Huevo de Ancylostoma duodenale y/o Necator americanus (uncinarias)
14. Huevo de Diphyllobothrium sp.
15. Larva de Strongyloides stercoralis
Observacién a 100X y 400X de aumento (Figura 1 y 2).
1. Entamoeba coli. t i e n en los quistes, de mayor tamaño de 10 a 35 micras

(um) de diametro con mas de cinco nucleos y presencia, en ocasiones de
barras cromidiales finas como astillas en el citoplasma. En las preparaciones
teñidas con lugol se suele apreciar vacuolas yodófilas.
2. Endolimax nana.“ El quiste oval o redondeado de 8-10 um de tamaño,

generalmente, presenta cuatro nucleos. La preparacion teñida con lugol permite
observar los nucleos como puntos mas brillantes.
3. lodamoeba butschlii.“ El trofozoito m ide de 8 a 20 micras y el quiste de 5 a 14 pm.

En las preparaciones teñidas con hematoxilina férrica o Gomorri-Trichrome se
observa una vacuola vacia en el citoplasma y el nucleo presenta un cariosoma
grande que emite fibrillas hacia la membrana nuclear. En la preparacién teñida
con lugol, la vacuola se aprecia tenida (color marron) debido a su contenido de
glicógeno (vacuola yodofila).
4. Giardia intestinalis”. El quiste es ovalado y m ide de 10 a 12 pm en su diametro

mayor, en las preparaciones teñidas con lugol, tiene una membrana quistica doble
y se distinguen de dos a cuatro nucleos, el axostilo y en ocasiones los cuerpos
parabasales.
5. Chilomastix mesnili”. El quiste tiene forma redondeada con una prominencia que to
asemeja a un limón y mide de 6 a 10 um, presenta doble membrana y en su
interior se observa los elementos descritos en el trofozoito.
6. Blastocystis hominis. Mide alrededor de 8-10 um. Presenta gran vacuola central
que ocupa el 50 a 95% de las células y restringe el citoplasma a un espacio
periférico que contiene los nucleos en número de 2 a 5.
7. Ascaris lumbricoides.” Huevo: forma ovalada con cubierta mamelonada. Identificar

huevo: Fértil, infértil, decorticado.
Trichuris trichiura.” Huevo: de forma eliptica, de color parduzco cuya dimensión

alcanza de 40 a 50 u m en su diametro mayor. Presentan una envoltura gruesa y
con tapones en ambos polos.
9 Enterobius vermicularis.“ Huevos: distinga la forma plana-convexa a cada lado y el

tamano que alcanza de 50 a 60 um de largo por 20 a 30 um de ancho; en el
interior reconozca la larva.
10. UNCINARIOSIS: lnfeccién intestinal producida por los nematodos Ancylostoma

duodenale y Necator americanus, conocidos como anquilostomoideos; se
localizan en el intestino delgado del hombre sobre todo en el yeyuno.
a. El término uncinaria se refiere a la curvatura del extremo anterior a manera
de gancho, con capsula bucal con dientes (Ancylostoma) o placas
cortantes (Necator).
b. Ancylostoma duodenale y Necator americanus‘. Huevo: de uncinarias de
forma oval, con cascara delgada y traslucida y con blastémeros; miden de
60 a 70 u m por 30 a 40 u m.
11. Taenia sp‘. Huevo: de forma esférica, de 35 a 40 u m de tamaño, con una cascara
gruesa y radiada conteniendo un embrion hexacanto u oncésfera en este distinga
los ganchos.
12. Diphyllobotrium sp.” Huevo: de forma ovalada y distinga en ellos la cubierta

gruesa y en uno de sus polos el opérculo. Los huevos de D. pacificum miden 50-
60 x 36-40 um, mas pequeñas que D. latum (59-75 x 42-45 um).
13. Hymenolepis nana Huevo: de 30 a 40 um de diametro, que se caracteriza por

presentar corteza gruesa, transparente, membranas, provista de dos mamelones
polares de donde nacen tres pares de filamentos, contiene un embrion hexacanto
con ganchos dispuestos en paralelo.
14. Fasciola hepatica.” Huevo de 120 a 150 um, de forma ovalada, con cubierta gruesa
y en uno de sus polos el opérculo.
15. Strongyloides stercolaris.“ Larva rabditoide: OBSERVE en preparados de heces

larvas de 200 um de longitud; en la parte anterior localice capsula bucal corta y un
esofago con un bulbo posterior.
PRACTICA 4
IDENTIFICACION DE AMEBAS INTESTINALES
I. INTRODUCCION
Las amebas son organismos eucariontes unicelulares. Presentan locomoción por
seudópodos. Su ciclo biológico incluye dos fases: trofozoito (forma móvil y vegetativa) y
quiste (forma inmovil y de resistencia). Su reproducción es por fusión binaria y multiple. La
forma infectante es el quiste mientras que las formas diagnosticas son tanto quistes como
trofozoitos. La via de infección de estas parasitosis es la oral y el mecanismo de
transmision es la ingestion de alimentos contaminados con quistes. Amebas del género
Entamoeba son las que pueden parasitar el lumen intestinal del hombre: Entamoeba
histolytica, Entamoeba dispar, Entamoeba polecki, Entamoeba coli y Entamoeba
hartmanni. De estas solo E. histolytica es reconocida como patégena (Figura 3).
AMEBA PATOGENA
Entamoeba histolytica
Caracteristicas morfológicas
Presenta dos formas evolutivas: Trofozoito: viven en el intestino grueso del ser
humano pudiendo invadir y atravesar la mucosa intestinal. Mide de 15 a 30 um. El
trofozoito ameboideo con membrana citoplasmatica, un citoplasma dividido en una parte
externa hialina y transparente casi sin granulaciones (ectoplasma) y otra interna muy
granulada con organulos celulares (endoplasma). EI núcleo es esférico y con cromatina
muy pequeña en el centro (puntiforme), llamado cariosoma. Ademas presenta cromatina
adherida a la cara interna de la membrana nuclear, distribuida en forma más o menos
homogénea. Quiste: forma de resistencia, se eliminan at exterior con las heces. El quiste
maduro tetranucleado es la forma infectante y mide de 10 a 20 um de diametro. Los
estadios de prequiste con 1-2 núcleos con las caracteristicas nucleares descritas en la
forma vegetativa y cuerpos cromidiales con extremos romos.
Diagnóstico parasitológico
Examen microscopico de muestra de heces, para demostrar la presencia de
trofozoitos o quistes mediante el examen directo de la muestra en solucién salina, lugol o
coloración (tricrómica de Gomori o hematoxilina férrica) o su demostración en biopsia de
la mucosa intestinal o hepatica.
AMEBAS NO PATOGENAS
+ Entamoeba coli
• Se ubica en el ciego y colon y su incidencia es muy alta. Trofozoito de 15-50 u m.
Rango usual 20-25 um. Coloreado con hematoxilina férrica: citoplasma granular
indiferenciado. Bacterias en las vacuolas alimenticias. Diagnóstico: nucleo con
aglomeraciones irregulares de cromatina periférica, con cariosoma grande y de
posicion excéntrica. Quiste: De 10-35 um. Rango usual de 12-15 um.
Redondeados u ovales con doble envoltura. Ocho núcleos como maximo, visibles
facilmente. En los quistes inmaduros se observan los cuerpos cromidiales en
forma de aguja y haces de extremos irregulares. Vacuolas de glicogeno de color
caoba al teñirse con lugol.
trofozoitos o quistes mediante el examen directo de la muestra en solución salina, lugol o
coloracion (tricrómica de Gomori o hematoxilina férrica).
+ lodamoeba butschlii
• Ubicada en el intestino grueso del hombre. Quiste: mide de 5-20 pm, presenta una
vacuola de glucógeno, de bordes irregulares. Posee un núcleo único relegado a
una posición lateral por la vacuola caracterizada por carecer de cromatina
periférica con cariosoma grande central de bordes irregulares.
quistes mediante el examen directo de la muestra en solución salina, lugol o coloracion
(tricrómica de Gomori o hematoxilina férrica).
Endolimax nana
• Es la ameba más pequeña del intestino. Quiste: Mide de 5-14 pm. Presenta cuatro
nucleos sin cromatina periférica y con un gran cariosoma ubicado hacia un lado
del núcleo.
quistes mediante el examen directo de la muestra en solución salina, lugol o coloracion
(tricrómica de Gomori o hematoxilina férrica).
+ Blastocystis hominis
• Es un protozoario que habita el intestino del hombre y de otros animales.
Asociado a sintomatologia gastrointestinal inespecifica. Posee pseudópodos de
locomoción y de alimentacion; se multiplica por fusión binaria, endodiogenia,
esquizogonia. Presenta tres formas morfológicas diferentes: vacuolar, granular y
ameboide.
• Mide alrededor de 8-10 pm. Presenta gran vacuola central que ocupa el 50 a 95%
de las células y restringe el citoplasma a un espacio periférico que contiene los
nucleos en número de 2 a 5.
II. MATERIAL
• Muestras de heces fijadas en formol 10% con quistes de amebas
• Laminas portaobjeto
• Laminillas cubreobjeto
• Lugol
• Laminas coloreadas con hematoxilina férrica o tricrómica: Entamoeba histolytica
(quiste y trofozoito), Entamoeba coli, (quiste y trofozoito), lodamoeba butschlii,
(quiste y trofozoito), Endolimax nana, (quiste y trofozoito), Blastocystis hominis

(quiste).
• Aceite de inmersión
• Papel lente
AMEBAS DE VIDA LIBRE
I. INTRODUCCION
Las amebas de vida libre (AVL) se encuentran ampliamente distribuidas en la
naturaleza. Se han detectado amebas de vida libre en redes publicas de agua, albercas,
estanques, lagos, rios, aguas termales, lodos, suelos desnudos y encharcados, canales
artificiales, aguas de desecho industrial, redes de agua potable, agua embotellada,
unidades dentales, de dialisis, fisioterapia, y aire acondicionado, asi como en materia
fecal de diversos animales. Algunas especies pueden encontrarse en aguas saladas.
Adicionalmente, Naegleria y Acanthamoeba han sido aisladas en tracto respiratorio de
sujetos con y sin datos de infeccién en vias respiratorias. Las AVL son capaces de
producir enfermedades en el hombre como la meningoencefalitis amebiana aguda o
primaria (Naegleria fowleri) y la meningoencefalitis amebiana cronica o granulomatosa
(Acanthamoeba castellani y Balamuthia mandrilaris) (Figura 4).
Acanthamoeba castellani y Balamuthia mandrilaris
• Acanthamoeba castellani se caracteriza por presentar dos formas morfológicas
diferentes: el trofozoito y el quiste.
• Los trofozoitos son pleomórficos, de 15-45 um de diametro. En el citoplasma se
distinguen un nucleo central y abundantes vacuolas. El caracter distintivo de los
trofozoitos es la presencia de seudópodos puntiagudos llamados acantopodios.
• Los quistes miden 10-15 um de longitud. Se caracterizan por poseer un solo
nucleo y una pared doble, en donde la capa externa es de forma irregular y la
interna es poligonal. También se observa la presencia de poros llamados ostiolos.
• Balamuthia mandrilaris se caracteriza por presentar dos formas morfológicas
diferentes: el trofozoito y el quiste. Los trofozoitos son pleomórficos, de 12-60 um
de diametro. En el citoplasma se distinguen de 1-2 núcleos cada uno con 2-3
cuerpos nucleares. Los quistes son esféricos y miden 12-30 um de longitud. Se
caracterizan por poseer un solo nucleo y una pared triple.
• La demostración microscópica de los trofozoitos o quistes es la base del
diagnostico. Los examenes histopatologicos de biopsias de cerebro, piel o cornea
son recomendados.
• También se recomienda el diagnóstico por imagenes (tomografia axial
computarizada, resonancia magnética).
• Se puede cultivar las amebas en un medio con baja concentración de nutrientes
en el cual se ha sembrado previamente bacterias coliformes (Medio xenico).
• Los examenes de líquido cefalorraquideo o los extendidos coloreados con la
tincién de Wright o Giemsa no se recomiendan pues son poco sensibles.
+ Naegleria fowleri
• Naegleria se caracteriza por presentar tres formas morfológicas diferentes: el
trofozoito, la forma flagelada y el quiste.
• Los trofozoitos son pleomórficos, de 10-25 um de longitud. En el citoplasma se
distinguen un nucleo central y abundantes vacuolas. El caracter distintivo de los
trofozoitos es la presencia de seudópodos redondeados llamados lobopodios.
• Bajo ciertas condiciones del medio, principalmente por la concentracién de iones,
los trofozoitos pueden adoptar una forma biflagelada.
• Los quistes son esféricos y m iden 7-14 um de diametro. Se caracterizan por

poseer un solo núcleo y una pared delgada sin la presencia de poros.
• El mecanismo de transmisién se lleva a cabo en aquellos individuos que toman
baños de aguas contaminadas con estas amebas: lagos, piscinas, embalses,
corrientes termales, manantiales. Estas amebas en algunos casos pueden
penetrar a través de la lámina cribosa del etmoides, pudiendo alcanzar el cerebro
y las meninges causando graves cuadros de necrosis e inflamacion.
Observaciones experimentales inducen a pensar que la infeccién por Naegleria se
contrae por penetracién de los microorganismos a través de la nariz o a través del
neuroepitelio olfatorio
• La demostracion microscópica de los trofozoitos es la base del diagnóstico. Se
recomienda realizar examenes de liquido cefalorraquideo (LCR) o extendidos
coloreados con la tincién de Wright o Giemsa.
• Si la muestra de LCR resulta negativa, se puede recurrir a examenes
histopatológicos de biopsias cerebrales o diagnostico por imagenes (tomografia
axial computarizada).
• Se puede cultivar las amebas en un medio con una baja concentracién de
nutrientes en el cual se ha sembrado previamente bacterias coliformes.
• Las técnicas serologicas tiene poco valor diagnostico pues la respuesta inmune
demora en aparecer. Se ha probado la técnica de inmunoensayo enzimatico
(ELISA) y la inmunofluorescencia indirecta (IFI).
II. MATERIAL
+ Laminas coloreadas con hematoxilina férrica o tricrómica de Gomori:
Acanthamoeba castellani, Balamuthia mandrilaris, Naegleria fowleri
• Papel lente
ESQUEMAS
PRACTICA 5
IDENTIFICACION DE FLAGELADOS Y CILIADOS
INTESTINALES
I. INTRODUCCION
Parasitos caracterizados por poseer flagelos en su forma de trofozoito, los cuales
les sirven para la locomoción. Desde el punto de vista clinico, podemos dividirlos según la
localización anatómica donde se suelen encontrar en flagelados intestinales, genitales,
hematicos y tisulares. Entre los flagelados intestinales la especie mas importante es
Giardia intestinalis, parasito que se localiza en el duodeno y que se multiplica por division
longitudinal. En los niños provoca cuadros diarreicos, aunque a veces pueden encontrarse
en heces sin estar asociado a patologia alguna. Otras especies de flagelados intestinales
menos frecuentes son: Trichomonas hominis, Chilomastix mesnilii (Figura 5).
Los ciliados son protozoarios que se caracterizan por la forma de cilios para su
locomocion, ademas tienen como caracteres de valor diagnostico dos nucleos, citostoma
y citopigio. La transmision de los ciliados ocurre por ingestion de quistes en alimentos o
agua contaminada con residuos fecales. Cuando se ingieren los quistes, estos pasan al
tracto intestinal inferior, se desenquistan e inician su multiplicación como trofozoitos que
se alimentan.
La forma infectante es el quiste mientras que las formas diagnósticas son tanto
quistes como trofozoitos. La via de infeccién de estas parasitosis es la oral y el
mecanismo de transmisión es la ingestión de alimentos contaminados con quistes.
A. IDENTIFICACION DE FLAGELADOS INTESTINALES

Giardia intestinalis
Se localiza en el duodeno, tiene un estadio de trofozoito y otro de quiste. El
trofozoito mide 10-20 um. Es periforme de simetria bilateral con dos nucleos ovales y
cuatro pares de flagelos, dos axostilos y dos cuerpos parabasales y un disco suctorio. El
quiste mide 8-19 um (promedio 10-14 um). Son ovoides que contienen 4 núcleos
pequeños, restos de flagelos y cuerpo parabasal, el citoplasma esta claramente separado
de la pared quistica.
Hallazgo de trofozoitos o quistes en las heces. En las láminas coloreadas estudie
las caracteristicas de ambos estadios.
Chilomastix mesnilli
Flagelado intestinal no patógeno. EI trofozoito, piriforme de 6-20 um, tiene un
núcleo, citoplasma grande, forma ancha que se extiende hasta la mitad del cuerpo. El
quiste, mide 6-24 um con apariencia de limón contiene un solo nucleo.
En las muestras de heces formoladas observe quistes. En las láminas coloreadas
estudie las caracteristicas del trofozoito y quiste.
B. IDENTIFICACION DE CILIADOS
Balantidium coli
El ú nico ciliado que infecta al hombre. Parasita el intestino grueso. El trofozoito es de
forma ovoide y tiene de tamaño promedio de 70 x45 um, y puede alcanzar un tamaño de
150-200 micras, en su extremo anterior esta el citostoma y en el posterior el citopigio.
Tiene un núcleo grande reniforme que es el macro nucleo, uno mas pequefio y vacuolas
contractiles. Los cilios que son los órganos de locomoción estan implantados en la
membrana celular. El quiste tiene pared quistica gruesa transparente y es casi esférico
con un diametro promedio de 55 pm (50-70 pm), tiene un macro nucleo reniforme y un
micro nucleo.
La balantidiosis requiere de un diagnóstico clinico diferencial con otros agentes
infecciosos que producen colitis o disenteria. Principalmente entamoebosis, disenteria
bacilar y colitis ulcerativa. El diagnóstico de laboratorio se realiza por el examen de
heces, al observarse los trofozoitos moviles al examen directo, en heces diarreicas, o los
quistes en heces no diarreicas.
II. MATERIAL
• Heces frescas/formol 10%
• Laminas coloreadas con hematoxilina férrica o tricrómica de Gomori: Giardia
duodenalis (quiste y trofozoito), Chilomastix mesnilli (quiste y trofozoito),
Balantidium coli (quiste y trofozoito).
• Pipetas, baguetas, suero fisiologico y lugol.
• Aceite de inmersión, láminas y laminillas.
• Microscopio de luz.
• Papel lente.
PRACTICA 6
IDENTIFICACION DE ESPOROZOARIOS INTESTINALES Y
TISULARES
I. INTRODUCCION
Son protozoarios del Phylum Apicomplexa pues con microscopia electrónica se
visualiza una estructura denominada complejo apical (conoide, anillo polar, roptrias,
microtubulos). Tienen ciclos complejos (monoxenos, heteroxenos), donde intervienen
diversas etapas evolutivas sexuadas y asexuadas: esporozoitos, merozoitos, gametos
que forman el ooquiste o cigote. En su mayoria son agentes oportunistas porque para
ejercer su acción patogena requieren condiciones favorecedoras en el hospedero.
En los coccidios intestinales (Cryptosporidium, Cyclospora, Cystoisospora) la
forma diagnostica es el ooquiste. En el caso particular de Cryptosporidium el ooquiste
eliminado en las heces ya es directamente infectante. La via de infección de estas
parasitosis es la oral y el mecanismo de transmisión es la ingestión de alimentos
contaminados con ooquistes maduro.
Toxoplasma gondii es un esporozoario intestinal del gato, siendo el hospedero definitivo,
mientras que el hombre y otro animales son hospederos intermediarios. El diagnóstico en
humanos es basicamente serológico.
+ Cryptosporidium spp
Coccidio intestinal con ciclo complejo que se completa en un u nico huésped

(monoxeno). Distintas especies y distintos genotipos: C. parvum.“ genotipo en 1 humanos,
genotipo 2 en rumiantes y genotipo 3 en caninos. Otros: C. felis, C. meleagridis, C
hominis.
Se localiza en el epitelio intestinal con localización de las etapas reproductivas
dentro de una vacuola parasitófora: intracelular pero extracitoplasmatica. La via de
transmision es por ooquistes de pared delgada (autoinfección) y los ooquistes de pared
gruesa (heteroinfección). Ooquistes: Pequeños de 4 — 6 um de diametro, ovoides o
esféricos, altamente refringentes, con cuatro paredes exteriores lisas. Pueden observarse
4 esporozoitos inermes dentro de los ooquistes maduros (no se presenta esporoquistes).
Puede infectar todo el tracto digestivo y también otros epitelios. Altera la
arquitectura del epitelio intestinal (vacuola parasitéfora). Ocasiona atrofia de las
vellosidades, aumento de las criptas e infiltracion de la lámina propia. Interfiere con la
absorcion de fluidos y nutrientes lo que conduce a provocar diarrea coleriforme que
puede comprometer la vida por desequilibrios hidroelectroliticos. Diarrea aguda
autolimitada en inmunocompetentes. Diarrea cronica severa en inmunodeprimidos
• La demostracion microscópica de los ooquistes es la base del diagnóstico. Se
recomienda realizar examenes seriados de heces y métodos de concentracion
(técnicas de Ritchie y Sheather). Los ooquistes se pueden observar en un
extendido telñdo con coloracion acido-resistente (método de Kinyoun o Zielh-
Neelsen modificado) y/o Auramina/rodamina
• Si la muestra fecal resulta negativa, se pueden buscar los parasitos por biopsia
intestinal o utilizarse el diagnóstico indirecto para detectar coproantigenos con la
ayuda de las técnicas de inmunoensayo enzimatico (ELISA) o
inmunofluorescencia indirecta con anticuerpos monoclonales (IFI).
+ Cyclospora cayetanensis
• Los ooquistes de Cyclospora se caracterizan por presentar una forma esférica y

miden entre 8-10 um de diametro. Cada ooquiste contiene dos esporoquistes que
desarrollan dos esporozoitos cada uno. Se eliminan en las heces de forma
inmadura
(técnicas de Ritchie y Sheather).
• Los ooquistes se pueden observar en un extendido teñido con coloracién acido-
resistente (método de Kinyoun o Zielh-Neelsen modificado). Con luz ultravioleta
presentan autofluorescencia.
inmunofluorescencia indirecta (IFI).
+ Cystoisospora belli
• Los ooquistes de Cystoisospora se caracterizan por presentar una forma ovalada
y mide entre 20- 30 u m de largo por 10-20 u m de ancho.
• Cada ooquiste contiene dos esporoquistes de membrana doble que desarrollan
cuatro esporozoitos cada uno. Se eliminan en las heces de forma inmadura
(técnicas de Faust y Sheather). Es caracteristica la presencia de los cristales de
Charcot Leyden, que se generan por la destruccion de los eosinofilos.
• Los ooquistes se pueden observar en un extendido teñido con coloracién acido-
resistente (método de Kinyoun o Zielh-Neelsen modificado). Con luz ultravioleta
presentan autofluorescencia.
inmunofluorescencia indirecta (IFI).
Toxoplasma gondii
• El ooquiste tiene una forma esférica y mide entre 10-12 um de diametro. Cada
ooquiste contiene dos esporoquistes que desarrollan cuatro esporozoitos cada
uno.
• Los taquizoitos tienen aspecto semilunar o en “arco” y miden entre 4-6 um de
largo por 2-4 u m de ancho.
• Los quistes tisulares son redondeados y poseen una membrana propia, miden
entre 20-200 um de diametro.
• El criterio clinico es la base del diagnóstico. La demostracién microscópica de los
taquizoitos es dificil y sólo se da en muestras de LCR y médula osea. También se
puede intentar su aislamiento mediante inoculacion experimental en ratones o en
cultivos celulares (células HeLa)
• Se pueden buscar los parasitos por biopsia intestinal o utilizarse el diagnóstico
indirecto para detectar anticuerpos con la ayuda de la reaccion de Sabin &
Feldman (RSF) o las técnicas de inmunoensayo enzimatico (ELISA),
inmunofluorescencia indirecta (IFI) o hemoaglutinacion indirecta (HAI).
• Actualmente se recomienda el uso de técnicas moleculares (como la reacción en
cadena de la polimerasa PCR) para muestras de sangre, LCR, médula ósea y
biopsias.
+ Sarcocystis sp.
Es un parasito unicelular que se encuentra en los musculos y otros tejidos de los
mamiferos, aves y reptiles. Un sarcoquiste mide en promedio 70 um, pero su tamaño
fluctua entre 30 y 130 um. Se Ie ha encontrado en todo el mundo infectando diversas
especies. Es una zoonosis, entre los animales que infecta se pueden incluir ovejas,
caballos, cerdos, perros, gatos, conejos, ratones, pollos, humanos, venados, patos, focas,
entre otros. Existen varias especies, nombradas de acuerdo al hospedero en donde se
encuentran, por ejemplo: S. rileyi (pato), S. cuniculi (conejo), S. tenella (oveja) y S.
miescheriana (cerdo). Produce la enfermedad conocida como sarcocystosis. Las
principales especies que infectan humanos son S. hominis y S. suishominis. Los
humanos pueden infectarse por ingestion de came infectada o bien por ooquistes
excretados en las heces.
Analisis de las heces de animales infectados donde se observan los ooquistes
esporulados. Observacion de los quistes en los hospederos intermediarios por medio de
biopsias de tejido (con gran cantidad de bradizoitos. La sarcocistosis extraintestinal
puede detectarse mediante anticuerpos anti-sarcocystis a través de las pruebas
serologicas, entre ellas la ELISA, HAI, dot-ELlSA e IFI.
Microsporidios
Caracteristicas morfológicas: El tamano promedio de sus esporas (forma infectante)
varia entre 1.2 a 2 u m de largo por 0,7-1.5 um de ancho
• Enterocytozoon bienusi, es el principal microsporidio patógeno del hombre. Infecta

los enterocitos del intestino delgado, principalmente en pacientes
inmunocomprometidos. Su desarrollo se produce directamente en el citoplasma
de la célula hospedadora sin formar vacuola parasitofora. Su tubulo polar presenta
de 5-7 vueltas.
• Encephalitozoon intestinales, infecta los enterocitos del intestino delgado,
principalmente en pacientes inmunocomprometidos. Su desarrollo se produce en
el interior de una vacuola parasitófora. Su tubulo polar presenta de 4-7 vueltas.
• Encephalitozoon hellem, produce en vacuolas parasitoforas en el interior de las
células de su hospedador y forma esporas redondeadas. Su tubulo polar presenta
de 6-8 vueltas.
• Encephalitozoon cuniculi, produce en vacuolas parasitéforas en el interior de las
células de su hospedador y forma esporas. Su tubulo polar presenta de 4-5
vueltas.
• Nosema connori, no produce vacuola parasitófora y forma esporas ovales. Su
tubulo polar presenta de 10-11 vueltas.
• Vittaforma corneae, no produce vacuola parasitófora y forma esporas cilindricas
Su tubulo polar presenta de 5-6 vueltas.
• Pleistophora sp. Forma vacuolas parasitóforas y sus esporas son de aspecto oval,
Su tubulo polar tiene 10-11 vueltas.
Diagnóstico
• La demostración microscópica de las esporas es la base del diagnóstico. Las

esporas se pueden detectar en material de biopsia o mediante el examen de
heces, esputo, aspirado duodenal, LCR y orina.
• Se pueden observar utilizando extendidos teñidos con la coloracién de Gram (son
grampositivos), la coloracion acido-resistente (método de Zielh-Neelsen), la de
Giemsa o la de Schiff. La coloracion de Weber basada en cromotropos ha
demostrado ser dtil.
• Se puede utilizar pruebas serológicas como la inmunofluorescencia indirecta (IFI)
o moleculares como la reaccion en cadena de la polimerasa (PCR), pero aun no
han demostrado ser fiables para el diagnostico de rutina. También se han logrado
cultivar en lineas celulares como las de riñon de mono (MK) o de pulmón fetal
humano (FLH).
II. MATERIAL
• Heces frescas formoladas positivas a coccidios
• Laminas coloreadas método Kinyoun modificado: Cryptosporidium spp.,
Cyclospora cayetanensis, Cystoisospora belli.
• Lamina coloreada con Giemsa: Toxoplasma gondii
• Lamina coloreada con hematoxilina- eosina: Sarcocystis sp.
• Lamina coloreada con Gram cromotrope: Microsporidium
• Pipetas, baguetas, suero fisiologico y lugol.
• Microscopio de luz, papel lente
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33
PRACTICA 7
IDENTIFICACION DE FLAGELADOS HEMATICOS,
TISULARES Y DEL APARATO GENITOURINARIO
I. INTRODUCCION
Los flagelados parasitos sanguineos tienen como hospedador intermediario a un
vector. Se reproducen por fisión binaria longitudinal. Leishmania en su ciclo biológico
adopta la forma de amastigote (con un flagelo intracelular) y de promastigote (con flagelo
libre pero sin membrana ondulante). Trypanosoma cruzi en su ciclo biologico adopta la
forma de amastigote, epimastigote (con flagelo libre y una corta membrana ondulante) y
tripomastigote (con flagelo libre y membrana ondulante completa - forma infectante). La
forma infectante en el caso de Leishmania es el promastigote metaciclico y en el caso de
Trypanosoma es el tripomastigote metaciclico (deyecciones del vector) La via de
infección de estas parasitosis es la cutanea. El mecanismo de transmision es la picadura
del vector (Leishmania). Las formas habituales de transmisién de Trypanosoma cruzi son
aquellas conectadas directamente al vector, a la transfusión de sangre, o la via congénita
y, mas recientemente, las que ocurren via oral, por la ingestion de alimentos
contaminados. Mecanismos menos comunes envuelven accidentes de laboratorio,
manejo de animales infectados, transplante de organos.
Los flagelados urogenitales (Trichomonas) carecen de forma quistica. La via de
infección de esta parasitosis es la sexual y el mecanismo de transmision es el contacto
sexual y los fomites.
+ Leishmania spp.
• Los amastigotes de Leishmania son formas intracelulares. Se caracterizan por
presentar una forma ovoide y m iden entre 2-5 um de diametro (Figura 6).
• Cada amastigote se caracteriza por la presencia de un nucleo posterior (con
cariosoma central) ademas de un cinetoplasto anterior al nucleo y restos de
flagelo.
• El cinetoplasto tiene forma de “bastoncillo” y esta conformado por ADN. Es una
estructura que contiene al cuerpo parabasal y un blefaroplasto puntiforme de
donde se origina el flagelo.
• El caracter particular de los amastigotes es la ausencia de membrana ondulante y
la presencia de un flagelo intracelular que no se aprecia en las observaciones
microscópicas.
• En el vector, el parasito adopta una forma llamada promastigote, que se
caracteriza por su forma alargada y medir entre 14-20 um de longitud.
• Cada promastigote se caracteriza por la presencia de un nucleo central, un
cinetoplasto anterior al nucleo y un flagelo.
• La demostración microscópica de los amastigotes es la base del diagnóstico. Se
debe buscar el parasito en muestras de tejidos.
• Se recomienda realizar examenes directos de extendidos de las lesiones
mediante raspado con bisturi utilizando coloraciones de Giemsa o Leishman.
• Si la muestra resulta negativa, se pueden buscar los parasitos por biopsia de
tejidos o se les puede cultivar en medio de Novy, McNeal y Nicolle (NNN) e
inocularlos en animales de laboratorio.
• Las técnicas serológicas u tiles para el diagnóstico indirecto son la técnica de

intradermoreaccién (prueba de Montenegro), el inmunoensayo enzimatico (ELISA)
e la inmunofluorescencia indirecta (IFI).
Trypanosoma cruzi
• Los tripomastigotes de Trypanosoma se caracterizan por presentar una forma
fusiforme alargada y ser aplanados lateralmente. Miden entre 10-25 um de
longitud (Figura 7).
• Cada tripomastigote se caracteriza por la presencia de un nucleo central (con
cariosoma central) ademas de un cinetoplasto subterminal posterior al nucleo y un
flagelo (1/3 de la longitud total del parasito).
• El caracter particular de los tripomastigotes es la presencia de una membrana
ondulante bordeada por el flagelo que se inicia en el cinetoplasto y sale por el
extremo anterior. No se reproducen.
• Los amastigotes se caracterizan por presentar una forma redondeada y miden
entre 2-4 um de diametro.
• Cada amastigote se caracteriza por la presencia de un nucleo central, un
cinetoplasto anterior al nucleo y un flagelo intracitoplasmatico.
• En el vector, el parasito adopta una forma llamada epimastigote que se
caracteriza por su forma alargada y por medir entre 18-20 um de longitud.
• Cada epimastigote se caracteriza por la presencia de un nucleo central ademas
de una membrana ondulante corta (1/2 de la longitud total del parasito), un
cinetoplasto anterior al nucleo y un flagelo libre.
• La demostracion microscópica de los tripomastigotes es la base del diagnóstico.
Se debe buscar el parasito en muestras de sangre o tejidos.
• Se recomienda realizar examenes directos de extendidos sanguineos y técnicas
de “gota gruesa” con coloraciones de Giemsa o Wright.
• También se pueden utilizar métodos de concentración (técnica de Strout) y se les
puede cultivar en medio de Novy, McNeal y Nicolle (NNN) e inocularlos en
animales de laboratorio.
• Las técnicas como el xenodiagnóstico y el hemocultivo, se utilizan con fines
epidemiologicos.
• Las técnicas serológicas utiles para el diagnóstico indirecto son la técnica de
fijacion de complemento (prueba de Guerreiro-Machado), el inmunoensayo
enzimatico (ELISA), la hemoaglutinacion indirecta (HAI) y la inmunofluorescencia
indirecta (IFI).
• La determinación de zimodemas (perfiles isoenzimaticos) es util en la identificación
especifica de los parasitos.
CLASE INSECTA: ORDEN DIPTERA

• Identificación de insectos vectores de leishmaniosis: Lutzomyia sp.
CLASE INSECTA: ORDEN HEMIPTERA.

• Identificación de insectos vectores de tripanosomiasis americana: Triatominos:
Rhodnius robustus, Triatoma infestans, Pastrongylus herreri (Figura 8).
Trichomonas vaginalis
• Los trofozoitos se caracterizan por presentar una forma piriforme y miden entre
10-30 um de largo por 5-12 um de ancho.
• Cada trofozoito se caracteriza por la presencia de un nucleo (con cariosoma
subcentral y cromatina uniformemente distribuida) ademas de un citostoma (abertura
oral), blefaroplastos, axostilo y cuerpos parabasales.
• El caracter particular de los trofozoitos es la presencia de dos pares de flagelos
anteriores libres y un quinto a to largo de la membrana ondulante que ocupa 2/3
anteriores del cuerpo.
• No presenta formas quistica.
• La demostracion microscópica de los trofozoitos es la base del diagnóstico. Se
recomienda realizar examenes directos de muestras frescas de secrecién vaginal,
secrecién uretral u orina.
• Son caracteristicos los movimientos de rotación de los parasitos.
• También se pueden observar los trofozoitos en un extendido teñido con coloración
Giemsa o Papanicolau y se pueden cultivar en medio de Diamond (crecen
después de 5-7 dias).
• Si la muestra resulta negativa, se pueden buscar los parasitos en secreción
prostatica o utilizarse el diagnóstico indirecto con la ayuda de las técnicas de
inmunoensayo enzimatico (ELISA) o inmunofluorescencia indirecta (IFI).
II. MATERIAL
• Laminas coloreadas con Giemsa: Leishmania spp. ( amastigotes y promastigotes)
Trypanosoma cruzi (amastigotes, epimastigotes y trypomastigotes metaciclicos)
• Lamina coloreada con Giemsa: Trichomonas vaginalis
• Corte histológico (H-E) con nidos de amastigotes de Trypanosoma cruzy
• Impronta con amastigotes de Leishmania spp.(Giemsa)
• Papel lente
PRACTICA 8
IDENTIFICACION DE ESPOROZOARIOS HEMATICOS
I. INTRODUCCION
Son parasitos sanguineos. Tienen como hospedador definitivo a un vector. Los
parasitos de la malaria son miembros del género Plasmodium (phylum Apicomplexa). En
los humanos la malaria es causada por P. falciparum, P. malariae, P. ovale, P. vivax y P.
knowlesi. Su ciclo biológico incluye estadios asexuales (trofozoitos, esquizontes y merozoitos)
y sexuales (macrogametocitos, microgametocitos, ooquistes y esporozoitos). Plasmodium
vivax es selectivo y solo invade eritrocitos jovenes, observandose agrandados. Plasmodium
falciparum no es selectivo e invade eritrocitos en cualquier fase de desarrollo, pudiendo
multiples esporozoitos infectar un solo eritrocito, no aumentando su tamaf\o. La forma
infectante es el esporozoito y las formas diagnésticas se observan en la sangre periférica,
las cuales van a depender de la especie de Plasmodium Ejm trofozoitos y gametocitos en el
caso de P. falciparum. La via de infección de esta parasitosis es la cutanea y el mecanismo
de transmisión es la picadura del vector (inyecta esporozoitos).
El eritrocito parasitado por P. vivax presenta granulaciones de Schdffner, P.
falciparum presenta granulaciones de Maurer y P. malariae presenta granulaciones de
Ziemann.
Plasmodium spp.
Caracteristicas morfológicas generales
• En el hombre se pueden observar estadios de trofozoito, esquizonte y gametocito,
que tienen valor diagnostico.
• El trofozoito es el primer estadio eritrocitario, tiene un aspecto de “anillo” y mide
entre 20-30 pm de diametro.
• El esquizonte tiene un aspecto globular y da origen a los merozoitos. Estos son
esféricos y miden entre 2-4 pm de diametro y dan lugar a nuevos trofozoitos.
• Los gametocitos varian en forma y tamaño. En Plasmodium vivax y P.malariae son
redondeados y miden 8-10 pm ocupando todo el eritrocito mientras que en
Plasmodium falciparum tiene forma de “media luna” y miden 12-14 pm.
• La demostración microscópica de los estadios esquizogénicos (trofozoitos,
esquizontes y gametocitos) es la base del diagnóstico. Se recomienda realizar
extendidos sanguineos y métodos de concentracion (técnica de “gota gruesa”).
• Los estadios esquizogonicos se pueden observar en un extendido teñido con
coloracion de Giemsa, Wright o Leishman.
• También se puede utilizar pruebas serologicas como el inmunoensayo enzimatico
(ELISA), la inmunofluorescencia directa (IFD) o la hemoaglutinación indirecta (HAI),
aunque no son de gran ayuda en el diagnóstico. En la actualidad se usan las
pruebas moleculares como la reacción en cadena de la polimerasa (PCR), la cual
es de gran ayuda en la deteccion de infecciones mixtas.
CLASE INSECTA: ORDEN DIPTERA

• Identificación de insectos vectores de malaria: Anopheles pseudopunctipenis, A.
albimanus.
II. MATERIAL
• Laminas coloreadas con Giemsa para observar los diferentes estadios de:
Plasmodium vivax.” Trofozoito joven, Trofozoito mediano y adultos. Esquizonte
joven, Esquizonte maduro, Macrogametocito, Microgametocito. Plasmodium
falciparum.” Trofozoito joven, Gametocitos.
• Papel lente
Diferencias morfológicas de Plasmodium humanos en sangre periférica (Figura 9)
ESPECIES P. vivax P .falciparum P. malariae

Trofozoito joven Anular ocupa 1/3 Anular ocupa 1/6 del Anular o en banda
del hematie rara hematie a menudo ocupa 1/3 del hematie
vez hay 2 varios en un hematie muy raro mas de una.
Trofozoito Adulto Forma irregular Forma ameboidea Forma en banda se
ameboidea, se ve pequeña. No se ve ve en sangre
en sangre en sangre periférica. periférica, pigmentos
periférica, pigmento en granulos grandes
Citoplasma
marron amarillento
compacto, pigmento
Esquizonte joven Grande amenoide Tamaño medio, Pequeño cromatina

cromatina cromatina fragmentada,
fragmentada, fragmentada, no se pigmento grueso.
pigmento lino ve en sangre
periférica
Esquizonte maduro Grande doble hilera Pequeños, sé ve en Forma de roceta o
de merozoitos de sangre visceral 18 a margarita con 6 a 12
18 a 24. 32 merozoitos merozoitos.
Microgametocito Grandes, esféricos, Media luna, Similar a P. vivax,
cromatina difusa, cromatina unica taxa, pero mas pequeños.
Abundante Pigmento malarico
pigmento malarico y oscuro.
granulaciones
(amarillo)
Macrogametocito Esférico, cromatina Media luna, Similar a P. vivax pero
compacta, cromatina compacta, pequeño, pigmento
Abundante Pigmento malarico grueso diseminado.
pigmento malarico y oscuro.
granulaciones
(amarillo)
Presencia de formas Todas las formas Gametocitos y Todas las formas
en sangre circulante dependiendo del Trofozoitos Jóvenes como suceden en
momento en que P.vivax.
tome la sangre en
relacién en relacion
con el ciclo febril.
APENDICE
Figura 3. Amebas intestinales

truphozoi!c
1tj
Figura 4. Amebas de vida libre

Figura 5. Flagelados intestinales

Figura 6. Leishmania (amastigote)
Flagelo anterior
Cinetoplasto granda
Membrana ondulante
Cinetoplasto
Membrana Flagelo
ondulante
Trypanosoma cruzi Trypansoma brucei
Figura 7. Trypanosoma
Figura 8. Cabezas de Panstrongylus, Triatoma y Rhodnius

Ie
roph ite
hi
seq estered
Figura 9. Diferencias morfológicas de Plasmodium en sangre periférica

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R

PROFESOR:................................................ GRUPO: ………...

PROPIEDAD INTELECTUAL: Departamento Académico de Ciencias Bésicas-USMP

II. AGENTES DE RIESGO

III. PRINCIPIOS BASICOS DE BIOSEGURIDAD

El elemento más importante de la contención es el cumplimiento estricto de las

TIPOS DE LABORATORIO CON RELACION AL NIVEL DE BIOSEGURIDAD (NBS)

CLASIFICACION DE LOS MICROORGANISMOS POR GRUPO DE RIESGO

Elementos normales: En un examen microscópico suelen encontrarse como

B. Método de centrifugación y flotación

C. Método de concentración: Ritchie

3. METODOS DIAGNOSTICOS DE HEMO E HISTOPARASITOS

METODOS DE EXAMENES PARA INVESTIGACION DE PARASITOS HEMATICOS

Coloracién de frotis con colorante Wright

Coloracién de gota gruesa

Los protozoos intestinales se presentan generalmente bajo tres formas de vida:

1. El trofozoito o forma vegetativa, que generalmente es el que produce la patologia.

2. El quiste o forma de resistencia que desarrolla el parasito para poder sobrevivir en

3. El prequiste que es una forma intermedia.

En el intestino humano se pueden encontrar protozoos patógenos y protozoos

• Heces frescas/fijadas en formol 10%

III. CARACTERISTICAS DE ALGUNOS PARASITOS INTESTINALES

Conocer microscópicamente las caracteristicas morfológicas de los principales

1. Quiste de Entamoeba coli

Observacién a 100X y 400X de aumento (Figura 1 y 2).

1. Entamoeba coli. t i e n en los quistes, de mayor tamaño de 10 a 35 micras

2. Endolimax nana.“ El quiste oval o redondeado de 8-10 um de tamaño,

3. lodamoeba butschlii.“ El trofozoito m ide de 8 a 20 micras y el quiste de 5 a 14 pm.

4. Giardia intestinalis”. El quiste es ovalado y m ide de 10 a 12 pm en su diametro

7. Ascaris lumbricoides.” Huevo: forma ovalada con cubierta mamelonada. Identificar

Trichuris trichiura.” Huevo: de forma eliptica, de color parduzco cuya dimensión

9 Enterobius vermicularis.“ Huevos: distinga la forma plana-convexa a cada lado y el

10. UNCINARIOSIS: lnfeccién intestinal producida por los nematodos Ancylostoma

12. Diphyllobotrium sp.” Huevo: de forma ovalada y distinga en ellos la cubierta

13. Hymenolepis nana Huevo: de 30 a 40 um de diametro, que se caracteriza por

15. Strongyloides stercolaris.“ Larva rabditoide: OBSERVE en preparados de heces

(quiste y trofozoito), Endolimax nana, (quiste y trofozoito), Blastocystis hominis

AMEBAS DE VIDA LIBRE

Acanthamoeba castellani y Balamuthia mandrilaris

• Los quistes son esféricos y m iden 7-14 um de diametro. Se caracterizan por

A. IDENTIFICACION DE FLAGELADOS INTESTINALES

Coccidio intestinal con ciclo complejo que se completa en un u nico huésped

• Los ooquistes de Cyclospora se caracterizan por presentar una forma esférica y

• Enterocytozoon bienusi, es el principal microsporidio patógeno del hombre. Infecta

• La demostración microscópica de las esporas es la base del diagnóstico. Las

• Las técnicas serológicas u tiles para el diagnóstico indirecto son la técnica de

CLASE INSECTA: ORDEN DIPTERA

CLASE INSECTA: ORDEN HEMIPTERA.

CLASE INSECTA: ORDEN DIPTERA

Diferencias morfológicas de Plasmodium humanos en sangre periférica (Figura 9)

ESPECIES P. vivax P .falciparum P. malariae

Esquizonte joven Grande amenoide Tamaño medio, Pequeño cromatina

Figura 3. Amebas intestinales

Figura 4. Amebas de vida libre

Figura 5. Flagelados intestinales

Figura 6. Leishmania (amastigote)

Trypanosoma cruzi Trypansoma brucei

Figura 8. Cabezas de Panstrongylus, Triatoma y Rhodnius

Figura 9. Diferencias morfológicas de Plasmodium en sangre periférica

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