INSTITUTO POLITÉCNICO NACIONAL

ESCUELA NACIONAL DE CIENCIAS BIOLÓGICAS

DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGÍA
LABORATORIO DE ECOLOGÍA MICROBIANA

PRÁCTICA No. 12
Determinación de la toxicidad de muestras de
agua por un método bacteriológico.

4QV2
SECCIÓN I

INTEGRANTES EQUIPO 3:
BARRADAS OLVERA FRIDA VERENICE
CORTES RIVAS AHTZIRI SHUNASHI

INTEGRANTES EQUIPO :
MANRIQUE ABAD ZURI JAHDAI
CUELLAR AGUILAR EMANUELLE

FECHA DE ENTREGA: 21 DE MAYO DEL 2019

● OBJETIVO
Determinar la toxicidad de un cuerpo de agua midiendo el efecto sobre la actividad deshidrogenasa
de una cepa tipo.
.

● RESULTADOS

SERIE ABSORBANCIA (480nm)/ EQUIPO

1 2 3 4 5 6 7 8

A TUBO 1 1.998 0.198 0.126 0.053 0.072 0.058 0.010 0

TUBO 2 1.994 0.138 0.107 0.036 0.014 0.246 0.068 0.035
TUBO 3 1.803 0.236 0.142 0.059 0.076 0.026 0.064 0.042
PROMEDIO 1.5983 0.1906 0.375 0.0493 0.054 0.11 0.0473 0.0256
B TUBO 1 0.236 0.249 0.240 0.249 0.159 0.197 0.137 0.025
TUBO 2 0.171 0.258 0.223 0.217 0.160 0.418 0.181 0.113
TUBO 3 0.105 0.351 0.264 0.170 0.240 0.147 0.107 0.144
PROMEDIO 0.170 0.286 0.2423 0.212 0.1863 0.254 0.1416 0.094
C TUBO 1 0.308 0.288 0.169 0.117 0.340 0.307 0.133 0.158
TUBO 2 0.285 0.225 0.173 0.216 0.371 0.189 0.149 0.065
TUBO 3 0.140 0.321 0.180 0.248 0.390 0.365 0.163 0.120
PROMEDIO 0.2443 0.278 0.174 0.1936 0.367 0.2676 0.1483 0.1143
% INHIBICIÓN 5.201 -420.83 -51.469 11.309 -136.5 -9.44 -7.104 -29.67

● DISCUSIÓN

De las enzimas determinadas en suelos y aguas, son las oxidorreductasas las más estudiadas,
dentro de las cuales se encuentran la enzima deshidrogenasa. Todas las reacciones de
oxidorreducción implican transferencia de electrones: el reactivo en reducción los adquiere y el
reactivo en oxidación los cede. Cuando la transferencia de electrones está asociada con la
transferencia de átomos de hidrógeno, se acostumbra utilizar los términos hidrogenación y
deshidrogenación. Las enzimas deshidrogenasas dependen de la participación de una
coenzima que les sirve de co-sustrato en la reacción de transferencia de electrones. La mayoría
usan NAD o NADP para tal fin.
En el desarrollo de la práctica se hicieron tres series de tubos cada una, la serie A correspondió
a testigo de reactivos, la serie B a testigo de células y la serie C corresponde al problema. A la
serie A se le agregó medio de cultivo, dimetil sulfóxido y cloruro de trifenil tetrazolio. Después
del tratamiento que marca el procedimiento de la práctica se esperaba que la serie A no
presentará una coloración rojiza.

A la serie B se le agregó medio de cultivo, dimetil sulfóxido, cloruro de trifenil tetrazolio y la

bacteria Bacillus cereus, la cual produce a la enzima deshidrogenasa la cual es capaz de
catalizar la oxidación o reducción de un sustrato por sustracción o adición de dos átomos de
hidrógeno, empleando el par de coenzimas NAD+/NADH que actúan como aceptores o como
donadores de electrones y protones.
En la serie B si de esperaba observar una coloración rojiza. El cloruro de trifenil tetrazolio (TTC)
compite con la coenzima NAD+ por el sitio activo de la enzima deshidrogenasa. El TTC funciona
como un aceptor artificial de electrones y se reduce produciéndose cloruro de trifenilformazan
como producto, el cual es un compuesto de color rojo. La reacción con TTC ocurre dentro de
las células.
Se realizó una serie C, a la cual se le agregó medio de cultivo, dimetil sulfóxido, TTC, la bacteria
Bacillus cereus y 0.05mL de una muestra de agua tomada de las cascadas de Atlihuetzia. En
esta serie se podía o no esperar una coloración roja, esto debido a que la muestra de agua
puede contener sustancias que afectan la viabilidad de las células de prueba.
Dicho lo anterior los equipos 1 y 5 presentaron suelos con mayor toxicidad estando ambas en
regiones negativas de la escala presentada. Los equipos 1 y 5 presentaron una toxicidad
moderada mientras que los equipos 4, 6 y 7 presentaron una toxicidad prácticamente
inexistente.
Al medir el efecto sobre la enzima deshidrogenasa se pueden tomar en cuenta factores como
la temperatura y pH que sabemos afectan el funcionamiento de las enzimas cuando estas
desempeñan su trabajo en condiciones inapropiadas.
● CONCLUSIÓN

Las muestras de agua procedentes de la cascada de Atlihuetzia, Tlaxcala por cada estación,
poseen diferentes grados de toxicidad, oscilando entre no tóxica hasta ligeramente tóxica,
exceptuando una que fue tóxico estimulante, esto medido en base la actividad de la enzima
deshidrogenasa de Bacillus cereus.

Los factores físicos (temperatura y pH) no influyen en la determinación de la toxicidad.

La diferencia en el porcentaje de toxicidad se deba quizá a factores químicos moleculares en

los que debemos indagar más a fondo.

● CUESTIONARIO
1. En las normas mexicanas, ¿qué organismos se utilizan para determinar
toxicidad? En la norma mexicana NMX-AA-087-1995-SCFI se establece el método
 para el análisis biológico de la calidad del agua mediante pruebas de toxicidad aguda
utilizando el organismo dulceacuícola Daphnia magna Strauss (Crustacea-
Cladocera). debido a que es un representante importante de las comunidades
dulceacuícolas con gran sensibilidad a una amplia gama de compuestos tóxicos
siendo esta una de las características principales para que se ha usado
internacionalmente en pruebas de toxicidad asimismo su ciclo de vida corto y fácil
cultivo en laboratorio.
2. ¿Qué indica un porcentaje de inhibición negativo? Un porcentaje de inhibición
mayor al 50% se considera tóxico.

● BIBLIOGRAFÍA CONSULTADA

Gutiérrez, Eduardo C. Medios de cultivo, tinciones y pruebas de toxicidad. 2da edición. Grupo
Revelación, editorial.

Schnek, A. y Flores, G. (2006). Invitación a la Biología. Montevideo: Editorial Médica

Panamericana.

Starr, C. y Taggart, R. (2005). Biología: La unidad y diversidad de la vida. México: Thomson

editores.