INSTITUTO POLITCNICO NACIONAL

Escuela Nacional de Ciencias Biolgicas Prctica N10. Microorganismos del Ciclo del Nitrgeno.

Alumnos: Nava Rodrguez Mario Eduardo Gutirrez Gutirrez Joab Yosafat Jimnez Rodrguez Daniela Noriega Galicia Betzab

Asignatura: Laboratorio de Ecologa Microbiana Profesora: Irma Gonzlez Moreno.

Grupo: 4QM2 Equipo: 1 y 6 Seccin: 2

OBJETIVOS Determinar experimentalmente los principales procesos metablicos involucrados en el ciclo del nitrgeno. Enumerar las formas fisiolgicas de las bacterias involucradas en estos procesos, en diferentes muestras de suelo. Comparar la diversidad microbiana de diferentes estaciones mediante las Unidades Formadoras de Colonias en un mililitro (UFC/mL.)

RESULTADOS Clculo de UFC/g. Microorganismos representantes de los procesos del ciclo del Nitrgeno (Protelisis), Medio de cultivo Agar Leche.

Equipo: 1 ( )( )( =( ) ( ) ( ) )

Equipo: 6 ( )( )( =( ) ( ) ( ) )

Amonificacin, Medio de cultivo Stuart.

Equipo: 1

=(

)
Base Hmeda NMP/g. >1100 Base Seca NMP/g. 1.39X103

Tubos positivos por dilucin -1 10 10-2 10-3 3 3 3

Equipo: 6

=(

)
Base Hmeda NMP/g. 1100 Base Seca NMP/g. 1.66X102

Tubos positivos por dilucin -1 10 10-2 10-3 3 3 2

Nitrificacin Fase I (Nitritacin), Medio de cultivo Para nitrificantes. Equipo: 1

=(

)
Base Hmeda NMP/g. 2.0x101 Base Seca NMP/g. 2.5X101

Tubos positivos por dilucin -1 10 10-2 10-3 1 2 2

Equipo: 6

=(

)
Base Hmeda NMP/g. <3 Base Seca NMP/g. <5.3

Tubos positivos por dilucin -1 10 10-2 10-3 0 0 0

Nitrificacin Fase II (Nitratacin), Medio de cultivo Para nitrificacin.

Equipo: 1

=(

)
Base Hmeda NMP/g. <3 Base Seca NMP/g. 3.79X100

Tubos positivos por dilucin -1 10 10-2 10-3 0 0 0

Equipo: 6

=(

Tubos positivos por dilucin -1 10 10-2 10-3 0 0 0

Base Hmeda NMP/g. <3

Base Seca NMP/g. <5.3

Desnitrificacin, Medio de cultivo Para desnitrificadores.

Equipo: 1

=(

) )

=(
Tubos positivos por dilucin -3 10 10-4 10-5 3 2 1

)
Base Hmeda NMP/g. 1.5x104 Base Seca NMP/g. 1.8x104

Equipo: 6

=(

) )

=(
Tubos positivos por dilucin -3 10 10-4 10-5 2 2 2

)
Base Hmeda NMP/g. 3.5x103 Base Seca NMP/g. 6.25x103

Tabla 10.1 Nmero de microorganismos representantes de Protelisis (Cuenta en Placa). Equipo 1 2 3 4 5 6 Estacin 1 3 5 6 7 2 N colonias Dilucin UFC/g. Base Hmeda UFC/g. Base Seca log -

Tabla 10.2 Nmero de microorganismos representantes de Amonificacin (Nmero Ms Probable). Tubos positivos por dilucin -1 10 10-2 10-3 3 3 3 3 2 0 3 2 1 3 2 0 3 3 2 3 3 2 Base Hmeda NMP/g. >1100 93 150 93 1100 1100 Base Seca NMP/g. 1.39X103 94.89 194.8 1,9X104 1.4X105 1.66X102

Equipo 1 2 3 4 5 6

Estacin 1 3 5 6 7 2

log 3.14 1.97 2.28 4.27 5.14 2.22

Tabla 10.3 Nmero de microorganismos representantes de la Nitritacin (Nmero Ms Probable). Tubos positivos por dilucin -1 10 10-2 10-3 1 2 2 3 2 0 3 2 1 0 0 0 3 2 3 0 0 0 Base Hmeda NMP/g. 20 93 150 <3 240 <3 Base Seca NMP/g. 2.5X101 94.89 194.8 6.2X102 3.8X102 <5.3

Equipo 1 2 3 4 5 6

Estacin 1 3 5 6 7 2

log 1.39 1.97 2.28 2.79 2.57 0.72

Tabla 10.5. Nmero de microorganismos representantes de la Desnitrificacin (Nmero Ms Probable). Tubos positivos por dilucin -1 10 10-2 10-3 3 2 1 3 3 3 3 3 1 3 3 0 3 3 3 2 2 2 Base Hmeda NMP/g. 1.5X104 1.1X105 4.6X104 2.9X104 7.1X105 3.5X103 Base seca NMP/g. 1.8X104 1.12x105 5.9x104 5X104 4.4X105 6.25X103

Equipo 1 2 3 4 5 6

Estacin 1 3 5 6 7 2

log 4.25 5.04 4.77 4.69 5.64 3.79

GRFICAS
6 5 NMP/g. 4 3 2 1 0 1 3

Amonificacin

5 Estacin

Fig. 1. Grafica de Nmero de microorganismos representantes de la Amonificacin (Nmero Ms Probable), en medio Stuart.

Nitrificacin
3 2.5 2 NMP/g. 1.5 1 0.5 0 1 3 5 Estacin 6 7 2

Fig. 2. Grafica de Nmero de microorganismos representantes de la Nitrificacin (Nmero Ms Probable), Medio de cultivo Para nitrificantes.

Desnitrificacin
6 5 4 NMP/g. 3 2 1 0 1 3 5 Estacin 6 7 2

Fig. 3. Grafica de Nmero de microorganismos representantes de la Desnitrificacin (Nmero Ms Probable). Medio de cultivo Para desnitrificadores.

DISCUSIN En base a los resultados obtenidos en la prctica no se pudieron obtener los datos de protelisis por problemas humanos y cuando se quiso leer no se logro identificar los microorganismos que por la degradacin de protenas forman amonio, que en este caso fue de protenas de la leche como la lectura no se llevo a cabo en el tiempo que debi haber sido, lo que se observo fue que los microorganismos llevaron a cabo la hidrlisis de estas protenas por completo pero no se cuantificaron cuntas de ellas haban sido las que llevan a cabo este proceso de protelisis. Los resultados obtenidos en la prueba para ver amonificacin se inocularon tubos con medio de Stuart el cual contiene Urea en el cual se va a llevar el metabolismo de compuestos orgnicos son transformados a amonio, la cuantificacin de este proceso se llevo a cabo por numero ms probable en el cual la estacin nmero 3 es la que obtuvo el menor nmero de microorganismo que llevan a cabo la mineralizacin con un 94 NMP/g en base seca y la que mas concentracin de microorganismos que llevan a cabo este proceso fue la estacin 7 con un 1.4x10 NMP/g en base seca este proceso se puede llevar a cabo en condiciones oxicas y anoxicas por lo tanto el lugar de las estaciones en cuanto a si es cada de agua o no, no afectara demasiado; lo que si se pudiera considerar en esta prueba y por la cual se podra ver afectaba entre estaciones es por la concentracin de desechos orgnicos en el lugar de la estacin como por ejemplo la urea de la orina que es uno de los principales compuestos que pudieran ser metabolizados por los microorganismos y eso aumentar su concentracin considerablemente. Con los resultados de nitrificacin se observa la nitritacin la cual es una oxidacin del NH+ a NO- este proceso se lleva a cabo en condiciones oxicas que se lleva a cabo por bacterias quimiolitotroficas en el cual la estacin 7 obtuvo un numero de 3.8x10 NMP/g en base seca este proceso lo lleva acabo bacterias como Nitrosomonas, Nitrosococcus, etc. Para la prueba de desnitrificacin se cuantificaron los microorganismos que llevaban a cabo este tipo de metabolismo en base al nmero ms probable en la cual con los resultados obtenidos se observo que al igual la estacin numero 7 tuvo el mayor numero de microorganismos que realizan este metabolismo con un 4.4x10 NMP/g en base seca; como se observa en todas las pruebas el equipo que analizo la estacin numero 7 obtuvo mayor numero de microorganismos que llevan a cabo este tipo de metabolismos en el ciclo del nitrgeno esto puede deberse a la cantidad y a qu tipo de desechos se estn desechando a este lugar de las cascadas.

CONCLUSIONES El Nitrgeno (N2) es el producto final de la reduccin desasimilatoria. La nitratacin se lleva a cabo en condiciones oxicas por bacterias quimiolitotroficas. La degradacin de las protenas es una forma de reciclar el nitrgeno.

CUESTIONARIO 1. Qu factores pueden alterar el nmero de microorganismos involucrados en el ciclo del nitrgeno. Los lixiviados de las grandes industrias pueden alterar el pH del suelo lo que hace que ciertos microorganismos incluidos los involucrados en el ciclo del carbono, as como tambin los fertilizantes que alteran de cierta manera la composicin del suelo alterando el medio de los microorganismos que se encuentran en el suelo. 2. La adicin de fertilizantes nitrogenados puede tener consecuencias en los procesos globales de contaminacin. Indique cules considerara usted son estas consecuencias. Las emisiones atmosfricas que emanan de la utilizacin de estos compuestos. Contaminacin del agua causada por el efluente de los lixiviados que se pueden llegar a producir con la utilizacin de ellos. 3. Cules son las ecuaciones qumicas que se llevan a cabo en cada uno de los procesos biolgicos analizados. Amonificacin

Nitrificacin

Fase I. Nitritacin.

NO

Fase II. Nitratacin.

NO
Desnitrificacin

NO NO

inc

NO

NO

NO

N O

4. Qu funciones tienen los bacteroides y la leghemoglobina en la fijacin biolgica simbitica del nitrgeno? Las clulas de los ndulos donde residen los bacteroides contienen un pigmento llamado leghemoglobina, que se une reversiblemente al oxgeno. La leghemoglobina oxigenada transporta el oxgeno en condiciones de baja tensin de oxgeno libre a los sitios de fosforilacin oxidativa en el bacteroide, donde se utiliza durante la produccin de ATP, los bacteroides son capaces de llevar a cabo la fijacion de nitrgeno. Las bacterias que intervienen en el ciclo del nitrgeno Bacterias fijadoras de nitrgeno: Son aquellas que fijan el nitrgeno atmosfrico y lo transforman en amoniaco, en el suelo pueden ser aerobias, Azotobacter y Rhizobium. Azotobacter Rhizobium Bacterias de la amonificacin: Son aquellas bacterias que transforman las protenas en catin amonio, estas son las bacterias que descomponen los cadveres Pyrococcus furiosus

Bacterias de la nitrificacin: Bacterias nitrosantes y nitrificante, oxidan el amoniaco a nitrito como por ejemplo las Nitrosomonas y las nitrificantes oxidan los nitritos a nitratos, como por ejemplo Nitrobacter.

Nitrosomona Nitrobacter Bacterias desnitrificantes: Son aquellas que reducen la cantidad de nitrgeno asimilable en el suelo, que es devuelto a la atmosfera en forma gaseosa, como ejemplos tenemos a Agrobacterium y Rhodobacterium.

BIBLIOGRAFA

Atlas, R. M., Corzo, A., & Bartha, R. (2002). Ecologa microbiana y microbiologa ambiental. Madrid: Pearson Educacin. Campbell, R. E. (2005). Ecologa microbiana. Mxico: Limusa: Noriega Editores.