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FACULTAD DE INGENIERÍA
DEPARTAMENTO DE INGENIERÍA QUÍMICA
INFORME N°2:
PRECIPITACION
1. INTRODUCCIÓN ........................................................................................................ 3
2. OBJETIVO ................................................................................................................. 5
3. APARATOS Y ACCESORIOS ................................................................................... 6
4. PROCEDIMIENTO EXPERIMENTAL ......................................................................... 8
5. DATOS ....................................................................................................................... 9
6. RESULTADOS Y DISCUSIÓN ................................................................................. 10
7. CONCLUSIONES ..................................................................................................... 14
8. BIBLIOGRAFÌA ........................................................................................................ 15
APÉNDICE
2
1. INTRODUCCIÓN
Lo que hace que una proteína se disuelva en un medio acuoso se debe a la capacidad que tiene de
formar puentes de hidrógeno con el agua, por lo que a mayor cantidad de puentes de hidrógeno,
mayor será la solubilidad1. Debido a que una proteína tiene varios grupos cargados, la solubilidad
depende de la concentración de sales disueltas, polaridad del solvente, pH y temperatura. La
manipulación de las variables anteriormente nombradas, hacen que se pueda precipitar de manera
selectiva ciertas proteínas mientras otras se mantienen disueltas.
La precipitación por adición de sales cosmotropicas, tales como el sulfato de amonio, se rigen por la
ecuación:
𝜇𝑝𝑝𝑡 = 𝜇𝑙𝑖𝑞
Con:
Esta forma de precipitación consiste en llevar el potencial químico del soluto disuelto al punto de
igual al que tiene en su forma de precipitado agregando las sales a la solución, y de manera de
ayudar a que esto ocurra se usa la temperatura para la solubilidad.
Pág.: 422.
3
La solubilidad de una proteína en una concentración baja de iones aumenta a medida que se agrega
sal, a este fenómeno se le llama salting in. Los iones adicionales ocultan las numerosas cargas
iónicas de la proteína, debilitando así las fuerzas de atracción entre moléculas individuales de
proteína, estas fuerzas pueden llevar a la agregación y precipitación. Si se agrega más sal, en
especial si se usan sales de sulfato, la solubilidad de la proteína disminuye. Este efecto de salting
out resulta de la competencia entre los iones de sal agregados y los otros solutos disueltos por las
moléculas del solvente. Cuando las concentraciones de sal son muy elevadas, los iones agregados
están solvatados, por lo que hay una cantidad mucho menor de solvente disponible para disolver
otras sustancias como las proteínas3.
El efecto salino sobre la precipitación en las proteínas esta descrito empíricamente por la ecuación
de Cohn, la cual se expresa como:
ln 𝑆 = ln 𝑆0 − 𝑚 [𝑠𝑎𝑙]
Con:
En este práctico se busca determinar el corte de sulfato de amonio al cual precipita la seroalbúmina
de bovino.
3Voet D., Voet J. (2006). "Fundamentos de bioquímica", 2ª Edición. Editorial Médica Panamericana.
Pág.: 101.
4
2. OBJETIVO
5
3. APARATOS Y ACCESORIOS
Aparatos
3.1.1.Balanza Analítica
Fabricante SPROUT
Modelo HS1000BC
Capacidad 220 g
Error 0,0001 g
3.1.2.Espectrofotómetro
Fabricante SPECTROQUANT
3.1.3.Micro Centrifuga
Fabricante SPROUT
Modelo HS1000BC
Fabricante LABTECH
Temperatura 25 - 350 ºC
Velocidad 60 – 1500 RP
6
3.2. Accesorios
7
4. PROCEDIMIENTO EXPERIMENTAL
8
5. DATOS
Tabla 5.1 Datos de absorbancia obtenidos por el espectrofotómetro, para la precipitación de BSA en
la solución utilizando sal de amonio.
9
6. RESULTADOS Y DISCUSIÓN
4Vejar R. Eva. (2005). “Prácticas de bioquímica descriptiva”. Editorial UniSon. Pág.: 178-180
5
Tejeda A., Montesinos R.M., Guzmán R., (2011). “Bioseparaciones”. Segunda Edición. Editorial
Pearson. Pág.: 175-182
10
del compuesto que se busca precipitar, de esta forma se evita que las moléculas de agua interactúen
con el compuesto en solución permitiendo la precipitación 6.
0
0 20 40 60 80 100
Concentración promedio BSA [mg/mL]
-0,5
-1
-1,5
-2
-2,5
Sulfato de amonio[% corte]
mg
Figura 6.2 Concentración promedio BSA( ) respecto al porcentaje de corte.
ml
En el corte 80% se observa una disminución de la proteína en solución, por lo que el resto de la
proteína fue precipitada debido al aumento continuo de la concentración de sal. Hasta antes del corte
80% la sal está ejerciendo efecto salting in, lo que implica que los contraiones están recubriendo las
zonas de carga iónica de la proteína BSA aportando mayor solubilidad. Por sobre el corte 80% se
produce el efecto salting out por lo que la proteína comienza a precipitar.
-1
[mg/mL] -1,5
-2
-2,5
-3
mg
Figura 6.3 Logaritmo natural de la concentración promedio BSA( ) respecto al % corte
ml
cuando se produce la precipitación.
Tabla 6.1 Regresión lineal obtenida de figura 5.3
12
solución salina
En la figura 6.3, se observa una línea recta representando el logaritmo de la concentración de BSA
respecto al porcentaje de corte, mediante una regresión, se obtienen los parámetros de la ecuación
de Cohn (Tabla 6.2), donde se aprecia que la concentración de proteína ideal es un valor alto, esto
se debe a una alta interacción entre la proteína y el agua, requiriéndose altas concentraciones de
sales, para lograr una separación de la capa de solvatación que recubre a la proteína y conseguir su
precipitación.
Esta alta interacción entre la proteína y el agua se debe a una alta presencia de aminoácidos
cargados, como el ácido aspártico, la cisteína, lisina y acido glutámico que interactúan fuertemente
con los polos del agua.
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7. CONCLUSIONES
7.1 El corte de sulfato de amonio al cual comienza a precipitar la BSA es al 80%, en dónde a través
de la evidencia gráfica se observa una caída brusca en la concentración de BSA disuelta.
14
8. BIBLIOGRAFIA
15
APÉNDICE
Apéndice A: Datos
1,60
1,40
1,20
Absorbancia 595nm
1,00
0,80
0,60
0,40
0,20
0,00
0,00 0,10 0,20 0,30 0,40 0,50 0,60
BSA [mg/mL]
16
Tabla A.2 Valores de absorbancia a 595 [nm] para cada % de corte con su réplica respectiva.
% Corte 𝑨𝒃𝒔𝒐𝒓𝒃𝒂𝒏𝒄𝒊𝒂𝟏 𝑨𝒃𝒔𝒐𝒓𝒃𝒂𝒏𝒄𝒊𝒂𝟐
0 1,182 1,218
10 1,085 1,076
20 1,398 1,383
30 1,084 1,085
40 1,398 1,469
50 1,215 1,232
60 1,431 1,500
70 1,244 1,199
80 1,493 1,494
90 0,782 0,697
0 1,200 ± 0,025
10 1,081 ± 0,006
20 1,391 ± 0,011
30 1,085± 0,001
40 1,434± 0,050
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Continuación Tabla B.1
50 1,224 ± 0,012
60 1,466 ± 0,049
70 1,222 ± 0,032
80 1,494 ± 0,001
90 0,740 ± 0,060
Tabla B.2 Porcentaje de corte para las concentraciones de BSA [𝑚𝑔/𝑚𝑙] con su
respectivo promedio y desviación estándar.
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Tabla B.3 Porcentaje de corte con la función logaritmo para cada concentración de
𝐵𝑆𝐴 [𝑚𝑔/𝑚𝑙].
% 𝑪𝒐𝒓𝒕𝒆 𝑳𝒏[𝑩𝑺𝑨]
0 -0,973
10 -1,103
20 -0,799
30 -1,097
40 -0,761
50 -0,949
60 -0,736
70 -0,952
80 -0,713
90 -1,599
100 -2,375
Tabla B.4 3 Porcentaje de corte con la función logaritmo para cada concentración de
𝐵𝑆𝐴 [𝑚𝑔/𝑚𝑙] ocurrida la precipitación.
% 𝑪𝒐𝒓𝒕𝒆 𝑳𝒏[𝑩𝑺𝑨]
80 -0,713
90 -1,599
100 -2,375
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