Documentos de Académico
Documentos de Profesional
Documentos de Cultura
Microbiology. General Guidance For Enume PDF
Microbiology. General Guidance For Enume PDF
COLOMBIANA 4132
1997-05-28
MICROBIOLOGÍA.
GUÍA GENERAL PARA EL RECUENTO DE MOHOS
Y LEVADURAS. TÉCNICA DE RECUENTO DE
COLONIAS A 25 °C
I.C.S.: 07.100.30
Prohibida su reproducción
PRÓLOGO
ICONTEC es una entidad de carácter privado, sin ánimo de lucro, cuya Misión es fundamental
para brindar soporte y desarrollo al productor y protección al consumidor. Colabora con el sector
gubernamental y apoya al sector privado del país, para lograr ventajas competitivas en los
mercados interno y externo.
Esta norma está sujeta a ser actualizada permanentemente con el objeto de que responda en
todo momento a las necesidades y exigencias actuales.
A continuación se relacionan las empresas que colaboraron en el estudio de esta norma a través
de su participación en el Comité Técnico 000031 Microbiología.
ICONTEC cuenta con un Centro de Información que pone a disposición de los interesados
normas internacionales, regionales y nacionales.
DIRECCIÓN DE NORMALIZACIÓN
NORMA TÉCNICA COLOMBIANA NTC 4132
MICROBIOLOGÍA.
GUÍA GENERAL PARA EL RECUENTO DE MOHOS Y LEVADURAS.
TÉCNICA DEL RECUENTO DE COLONIAS A 25 °C
0. INTRODUCCIÓN
Esta norma proporciona una guía general para el análisis microbiológico de productos
alimenticios no incluidos en otras normas y para ser tomada en cuenta en la preparación de
métodos de ensayo microbiológicos aplicados en alimentos y en alimentos para animales.
Debido a la gran variedad de productos dentro de este campo de aplicación, esta guía puede
no ser apropiada para algunos productos en algunos detalles y para otros productos puede ser
necesario usar métodos diferentes.
Sin embargo, se espera que en todos los casos se intentará aplicar la presente guía hasta
donde sea posible y aquellas desviaciones que se presenten serán únicamente hechas, si es
absolutamente necesario, por razones técnicas.
Esta norma establece una guía general para el recuento de mohos y levaduras viables en
productos elaborados para consumo humano o animal por medio de la técnica de recuento de
colonias a 25 °C.
Nota. Debido a la naturaleza de los mohos y levaduras , el recuento está sujeto a ciertas imprecisiones.
2. REFERENCIAS NORMATIVAS
Las siguientes normas contienen disposiciones que, mediante su referencia en este texto
constituyen disposiciones del mismo. En el momento de la publicación eran válidas las
indicadas. Todas las normas están sujetas a actualización. Se recomienda a las partes que
realizan acuerdos con base en esta norma, a que investiguen la posibilidad de aplicar las
ediciones más recientes de las siguientes normas:
1
NORMA TÉCNICA COLOMBIANA NTC 4132
NTC 4092:1997, Microbiología de alimentos para animales. Reglas generales para los análisis
microbiológicos.
ISO 6887, Microbiology. General Guidance for the Preparation of Dilutions for Microbiological
Examination.
3. DEFINICIÓN
4. PRINCIPIO
4.3 Cálculo del número de mohos y de levaduras por gramo o por mililitro de muestra a
partir del número de colonias obtenidas en las placas escogidas, a los niveles de dilución que
den resultados significativos.
El agua utilizada debe ser agua destilada o agua desionizada libre de sustancias que puedan
inhibir el crecimiento de mohos y levaduras bajo las condiciones de ensayo.
5.2 DILUYENTE
Véase la norma ISO 6887 y cualquier otra Norma Internacional que trate del producto que se
va a examinar.
2
NORMA TÉCNICA COLOMBIANA NTC 4132
Nota. Puede utilizarse cualquier otro medio similar siguiendo las instrucciones del fabricante.
Componente Cantidad
Extracto de levadura 5g
Dextrosa (C6 H12 O6) 20 g
Cloranfenicol (C11 H12 Cl2 N2 O5 ) 0,1 g 1
Agar 12 g a 15 g 2
Agua 1 000 ml
Nota 1. Para obtener una concentración final de 100 μg/ml del medio.
Se esteriliza el medio de acuerdo con las instrucciones del fabricante ó a 121 °C ± 1 °C (245 kPa)
por 15 min.
Nota. El cloranfenicol se puede reeemplazar por oxitetraciclina ( C22 H30 N2 O11 ). En este caso, se prepara el medio
básico como se describió anteriormente omitiendo el cloranfenicol, se distribuye en cantidades de 100 ml y se
esteriliza. Se prepara también una solución de hidrocloruro de oxitetraciclina al 0,1 %, en agua y se esteriliza por
filtración. Sólo antes del uso, se adicionan asépticamente 10 ml de esta solución a 100 ml del medio básico, el cual
se ha fundido previamente y se mantiene a 45 °C.
Nota. Los materiales desechables son una alternativa al material de vidrio reutilizable si tienen las especificaciones
adecuadas.
6.1 Aparatos para la esterilización por calor seco (horno) o la esterilización por calor
húmedo (autoclave) (el autoclave puede ser un equipo que se opera separadamente o como
parte de un equipo general para la preparación y distribución de medios de cultivo).
3
NORMA TÉCNICA COLOMBIANA NTC 4132
Nota. Se pueden usar frascos o Erlenmeyer con tapa rosca metálica no tóxica.
7. MUESTREO
El muestreo se debe llevar a cabo con la norma específica para el producto que se va a
analizar.
Si no existe una norma específica se recomienda llegar a un acuerdo sobre esta materia, entre
las partes.
Para la preparación de la muestra de ensayo debe verse la norma específica del producto que
se va a analizar.
Si no hay una norma específica se recomienda llegar a un acuerdo sobre esta materia, entre
las partes.
9. PROCEDIMIENTO
Se deben seguir la norma ISO 6887 y la norma específica de producto que se va a analizar.
Si no hay una norma específica se recomienda llegar a un acuerdo sobre esta materia, entre
las partes.
4
NORMA TÉCNICA COLOMBIANA NTC 4132
9.2.1 Se toman dos cajas de Petri estériles (véase el numeral 6.7). Se transfiere a cada caja
de Petri, con una pipeta estéril (véase el numeral 6.6) 1 ml de la muestra si es líquida o 1 ml de
la suspensión inicial en el caso de otros productos.
9.2.2 Se toman otras dos cajas de Petri. Se transfiere por medio de otra pipeta estéril, 1 ml de
la dilución 10-1 (producto líquido), o 1 ml de la dilución 10-2 (otro producto).
9.2.3 Se transfieren desde uno de los frascos de cultivo (véase el numeral 6.5), a cada caja
de Petri, aproximadamente 20 ml del medio agar-extracto de levadura-dextrosa-cloranfenicol
(véase el numeral 5.3), previamente fundido y mantenido a una temperatura de 45 °C ± 1 °C,
en baño de María (véase el numeral 6.3). El tiempo transcurrido entre el final de la preparación
de la suspensión inicial (o de la dilución 10-1 si el producto es líquido) y el momento en que el
medio se transfiere a las cajas de Petri no debe exceder los 20 min.
Se debe preparar una caja de Petri de control, con 15 ml del medio para verificar su esterilidad.
9.2.4 Se invierten las cajas de Petri y se llevan a la incubadora (véase el numeral 6.2) a una
temperatura de 25 °C ± 1 °C.
9.3 INTERPRETACIÓN
10.1 CÁLCULO
10.1.1 Se usan para el recuento, los platos que contengan menos de 150 colonias.
∑C
------------------
(n1 + 0,1 n2 ) d
Donde:
d es el factor de dilución con que se obtuvo el primer recuento (por ejemplo, 102).
10.1.3 Se debe redondear el resultado obtenido en el numeral 10.1.2 a dos cifras significativas.
Cuando el número que se redondea es 5 y no hay otras cifras significativas, se redondea el número
para dar una cifra par inmediatamente a la izquierda, por ejemplo 28 500 se redondea a 28 000; 11
500 se redondea a 12 000.
10.1.4 El resultado se expresará como un número entre 1,0 y 9,9 multiplicado por 10x , donde x
es la potencia apropiada de 10.
Si no hay colonias en las cajas de la suspensión inicial (véase el numeral 9.1), y si el producto
inicial era sólido, el número de levaduras y mohos por gramo del producto se debe reportar
como “< 10” (menor de 10).
Un recuento de mohos y levaduras dio el siguiente resultado (se incubaron dos cajas de Petri
por dilución):
∑C 83 + 97 + 33 + 28 241
-------------------- = -------------------------------------- = --------------- = 10 954
(n1 + 0,1 n2 ) d [ 2 + (0,1 x 2) ] x 10-2 0,022
10.3 PRECISIÓN
Por razones estadísticas, en el 95 % de los casos los niveles de confianza por este método
varían de ± 16 % a ± 52 %. En la práctica, se han observado variaciones mucho mayores, en
particular entre los resultados obtenidos por diferentes microbiólogos.
En el reporte del ensayo se debe registrar el método usado, el tiempo de incubación y los
resultados obtenidos, indicando claramente el método de expresión usado. También debe
mencionarse cualquier detalle de operación no especificado en la presente norma, o
considerado como opcional, junto con los detalles de cualquier incidente que haya influenciado
los resultados.
6
NORMA TÉCNICA COLOMBIANA NTC 4132
El reporte del ensayo incluirá toda la información necesaria para la identificación completa de la
muestra.