BIOLOGIA CELULAR Y MOLECULAR

LABORATORIO No 1: BIOSEGURIDAD Y CONTROL DE CALIDAD

1. INTRODUCCION

El laboratorio de biología celular y molecular tiene una serie de condiciones

especiales relacionadas con el manejo de reactivos, elementos y equipos que
pueden influir en la salud del personal así como repercutir en el medio ambiente.
Por ende, es importante conocer las normas establecidas, familiarizarse con el uso
de cada uno de los materiales de trabajo para evitar cometer errores o sufrir
accidentes durante su manipulación.

El personal del laboratorio, por lo tanto, está expuesto a una serie de riesgos
ocupacionales por agentes físicos, químicos y biológicos, los cuales pueden
originar alteraciones en la salud, generalmente prevenibles si se aplican las
normas de bioseguridad, que incluyen el manejo correcto de material infeccioso,
así como el uso de elementos protectores, y el manejo adecuado de desechos
biológicos y reactivos químicos.

2. OBJETIVOS

• Identificar los riesgos químicos, físicos y biológicos relacionados con el uso de

los elementos, reactivos y equipos del laboratorio de biología celular y
molecular.
• Conocer el uso, manejo y desecho de sustancias irritantes, tóxicas,
cancerígenas, teratogénicas, entre otras.

3. MARCO TEORICO

3.1 Factor de Riesgo

Es una forma sistemática y organizada de identificar, localizar y valorar los
factores y / o agentes de riesgo en el contexto laboral.
El término “Seguridad biológica” implica un conjunto de medidas científico-
organizativas y técnicas para proteger al personal, la comunidad y el medio
ambiente.

3.1.1. Clasificación general de Factores y Agentes de Riesgo

FISICOS: Este tipo de riesgo está determinado por una variedad de agentes:

• Mecánico: objeto en movimiento.

• Térmico: altas o bajas temperaturas.
• Eléctrico: alto voltaje y conexiones eléctricas.
• Radiaciones: ionizantes y radioactivas.
• Incendios.
• Iluminación.
• Ruidos o vibraciones: por funcionamiento de equipos.
• Microclima: condiciones de temperatura de instalación.
• Presiones anormales.

QUÍMICOS:

Al manipular reactivos químicos, es necesario conocer y evaluar sus peligros y

determinar la forma apropiada para su manejo seguro. Esta información se obtiene
de las etiquetas, hojas de seguridad suministradas por el fabricante u otras
fuentes.
Las etiquetas del fabricante incluyen el nombre del producto, el pictograma de
seguridad, las frases de riesgo entre otras. El etiquetado del puesto de trabajo se
emplea cuando el producto es transferido a otro contenedor diferente al original.
Allí debe contener el nombre del producto, del fabricante, frases de riesgo y
consejos de prudencia.

Las hojas de seguridad informan sobre las propiedades físicas, químicas y

toxicológicas de una sustancia y los procedimientos recomendados para una
manipulación segura, uso de equipos para protección, primeros auxilios,
tratamiento de desechos, derrames y otros.

La clasificación de las sustancias químicas depende de su peligrosidad, de lo cual

se establece que existen:

• Tóxicas
• Muy tóxicas
• Corrosivas
• Irritantes
• Inflamables
• Extremadamente inflamables
• Comburentes (en contacto con otras producen reacción exotérmica)
• Explosivas
• Nocivas
• Peligrosas para el medio ambiente
• Gaseosos (gases, vapores, aerosoles), sólidos (polvos orgánicos o
inorgánicos, humos metálicos), líquidos (rocío, neblinas), compuestos
(hidrocarburos).

BIOLÓGICOS:

Los riegos biológicos se pueden identificar según: el tipo de material biológico que
se manipula, los procedimientos de rutina realizados en el laboratorio, el manejo
de desechos biológicos, el aseo y desinfección de las áreas de trabajo, la
disponibilidad de implementos de protección personal, los protocolos de
reconocimiento, las enfermedades relacionadas con el trabajo, los accidentes e
incidentes más comunes como pinchazos, cortaduras e inhalaciones, las
enfermedades ocupacionales adquiridas en el laboratorio.
Agentes potenciales de lesiones y accidentes:

Manipulación → Procedimiento → Transporte → Almacenamiento

• El trabajo en un laboratorio de Biología celular y molecular se lleva a cabo en

condiciones especiales que pueden influir en la salud del personal y tener
repercusiones negativas para el medio ambiente. La principal característica lo
constituye la labor intensiva del factor biológico, específicamente cuando se
trabaja con microorganismos, su metabolismo y los tipos reactivos, materiales
y equipos comúnmente empleados.
• El desarrollo de la ingeniería genética, el estudio de enfermedades infecciosas
y el manejo de preparados biológicos, necesita de instalaciones en diseño y
construcción.
• Durante la manipulación se puede generar la producción de aerosoles
infectivos que contaminen el ambiente laboral o los ensayos que se estén
desarrollando.

3.2. Manejo de residuos sólidos

Cada laboratorio cuenta con canecas para la eliminación de residuos sólidos:

CANECA CON BOLSAS GRISES: material reciclable.

• Disposición final: reciclaje – comercialización

• Empaque de plástico, bolsas de polietileno, vidrio no contaminado, cajas de
cartón, hojas de papel, periódico, botellas.

CANECA CON BOLSA VERDE: material común, residuos biodegradables.

• Disposición final: relleno sanitario
• Residuos de alimentos, servilletas, barrido, colillas, icopor, papel carbón,
jeringa sin agujas.

CANECA CON BOLSA ROJA: material infeccioso, residuos sólidos altamente

contaminantes en contacto con residuos tóxicos.

• Disposición final: cremación

• Gasas, algodón, guantes de látex y de caucho, material de curación, medios de
cultivo y escobillones previa esterilización, frascos plásticos para recolección
de muestras, geles como matriz para electroforesis.

GUARDIANES: empleados para la eliminación de agujas, cuchilla, lancetas,

ampollas u otros elementos cortos punzantes, nunca se eliminan allí las jeringas.

• Disposición final: incineración.

NOTA:

• Reactivos como acrilamida son compuestos neurotóxicos que exigen el uso

de máscaras y guantes cuando se están preparando los geles. Después de
polimerizados no tienen tanto riesgo. Los geles en general se descartan en
bolsas rojas.
• Bromuro de etidio es tóxico, cancerígeno y mutágeno; se debe inactivar
antes de su eliminación. ( ver tabla 1)

3.3. Manejo de residuos líquidos

Las sustancias líquidas utilizadas en el laboratorio deben ser eliminadas de

acuerdo al tipo de sustancia. Algunas requieren ser almacenadas en contenedores
para su posterior inactivación, otras deben ser tratadas para ser eliminadas (nitrato
de plata) y otras pueden ser eliminadas a través del caño sin consecuencias
ambientales. Las soluciones para tinción deben ser cuidadosamente descartadas.

Los medios de cultivo sólidos que fueron utilizados para crecimiento de

microorganismos deben ser esterilizados antes de ser descartados. Así mismo
aquellos que se utilizaron para crecimiento de material vegetal aún cuando no
contengan hongos, levaduras o bacterias no patógenos.

3.4 Bioseguridad

En el laboratorio se refiere al conjunto de medidas preventivas destinadas a

mantener la vigilancia para proteger la salud.
Los accidentes que ocurren durante el trabajo en el laboratorio generalmente se
deben a descuido, desconocimiento o por no atender las instrucciones
establecidas, generando riesgos que pueden afectar la integridad no solo de los
trabajadores del laboratorio, sino también de la comunidad y en ocasiones hasta
de la familia.

REACTIVO USOS EFECTOS MEDIDAS DE DISPOSICIÓN

NOCIVOS PREVENCIÓN DEL DESECHO
Bromuro de Etidio Colorante Mutagénico y Se deben utilizar Inactivación con
para tinción carcinogénico guantes carbón activado o
de ácidos moderadamente destinados solo amberita XAD-
nucleicos Tóxico para su uso, 16, eliminación
tapabocas y de desechos
mascarilla sólidos en bolsa
roja.
Solventes orgánicos Extracción Tóxicos Usar guantes, Se almacena en
de ácidos máscara frascos oscuros e
nucleicos; adecuada para incinerar.
disolventes el manejo de
de tinciones estos, y cámara
de proteínas extractora de
gases
Isopropanol Extracción de Inflamable y no No ingerir y Eliminarlo diluido
ácidos potable. evitar. la en agua
nucleicos Excesiva inhalación de
inhalación grandes
puede causar cantidades del
tos, cefalea, vapor.
mareos, 100 ml pueden
depresión ser fatales.
mental,
nauseas,
vómitos,
narcosis,
anestesia,
coma.
EDTA Inhibidor de Irritante Evitar el Eliminarlo diluido
DNAsas contacto con piel en agua
y mucosas
Dietil Manejo de Cancerígeno Evitar el Se almacena en
piro carbonato ARN contacto con piel frascos oscuros e
y mucosas incinerar.
Formaldehído Tinción de Tóxico Usar en cámara Se almacena en
ADN con extractora frascos oscuros e
nitrato de incinerar.
plata
Electroforesis Es un potente Se debe usar Polimerizar y
Acrilamida y bis de proteínas neurotóxico, guantes, eliminar en la
acrilamida absorbido mascara, bolsa roja
totalmente por tapabocas. Una
la piel y sus vez polimeriza,
efectos son se considera no
acumulativos. tóxica
la poliacrilamida
 una vez
formada se
considera no
tóxica
Solventes orgánicos Extracción Tóxicos Usar guantes, Se almacena en
de ácidos máscara frascos oscuros e
nucleicos; adecuada para incinerar.
disolventes el manejo de
de tinciones estos, y cámara
de proteínas extractora de
gases
TRIZOL: Extracción de Tóxico Si es inhalado o Se almacena en
ARN si entra en frascos oscuros e
contacto con la incinerar.
piel, causa
quemaduras
Persulfato de amonio Electroforesis Oxidante Mantener lejos Se almacena en
(Catalizador de otros frascos oscuros e
en la reactivos incinerar.
polimerizació inflamables.
n de la Evitar el
acrilamida) contacto con la
piel
Acido cacodílico Cuantificació tóxico Usar guantes y Almacenar en
n de ADN tapabocas botella hasta su
incineración
Ferrocianuro de Cuantificació Tóxico Usar guantes y Almacenar en
potasio en solución n de ADN tapabocas botella hasta su
incineración
TABLA No. 1 ESPECIFICACIONES DE LOS REACTIVOS MÁS USADOS EN
EL LABORATORIO MOLECULAR

Existen algunas normas de precaución universal que son necesarias tenerlas

presentes en el manejo del laboratorio.

• Utilizar siempre elementos de barrera adecuados según las necesidades:

blusa, guantes, mecheros, tapabocas, mascarillas, cámaras de seguridad,
gafas, etc. para evitar contacto de mucosas y piel con aerosoles, gotas y
salpicaduras.
• El lavado de manos es una de las estrategias más sencillas pero de suma
importancia; este se debe hacer minuciosa y vigorosamente antes y después
de tener contacto con sustancias o algún tipo de muestras.
• En caso de contacto directo con la piel o los ojos deben enjuagarse
inmediatamente con abundante agua
• Mujeres en estado de embarazo deben conocer y aplicar estrictamente las
normas de bioseguridad, para minimizar el riesgo morbimortalidad y/o
malformación del feto.

En un laboratorio de Biología celular y molecular o de investigación las

precauciones que se deben adoptar:
 Conocer las características de toxicidad de los reactivos y manejarlos de
acuerdo a recomendaciones de los insertos y/o la ficha técnica respectiva.
(ver tabla 1)
• Es importante conocer la distribución de las diferentes secciones del
laboratorio, para evitar posibles riesgos de contaminación de las muestras que
produzcan alteraciones en los resultados finales.
• Utilizar siempre implementos de protección limpios (guantes, careta,
tapabocas, blusa de laboratorio)
• Lavarse las manos antes y después de trabajar en el laboratorio
• No tocar con las manos enguantadas ojos, nariz u otras mucosas expuestas.
• Desinfectar el área de trabajo antes y después de cada trabajo utilizando
hipoclorito al 1% por 15 minutos, también se puede utilizar alcohol antiséptico.
• No pipetear ningún reactivo o solución acuosa con la boca.
• Los reactivos después de su uso, deben quedar perfectamente cerrados.
• Los materiales de desecho deben descartarse de acuerdo a su naturaleza:
inactivados o tratados (ver tabla 1: reactivos y especificaciones en el
laboratorio molecular) en las bolsas de basura del color adecuado y canecas
dispuestas para tal fin.

3.5 Términos a considerar

Carcinógeno: agente que se sabe o sospecha causa cáncer.

Mutágeno: Agente que induce mutaciones en el material genético
Teratógeno: agente que se sabe o sospecha que ocasiona daño al feto
Tóxico: Sustancia que ocasiona daño a la salud, por exposición corta o
prolongada, cuando es ingerida, inhalada o absorbida por la piel o mucosas.
Corrosivo: agente químico que destruye el tejido o los materiales por contacto
directo.

4. Control y Garantía de Calidad

Todos los laboratorios deben diseñar un programa de control de calidad de

reactivos, equipamiento, metodologías y manuales de procedimiento.

La garantía de calidad en el Laboratorio de Biología Celular y Molecular debe

tener como objetivo “obtener resultados fiables en un tiempo adecuado, a partir
del espécimen correcto y a un precio razonable”, para que esta sea integral se
debe basar en un control de calidad tanto interno como externo garantizando la
exactitud y precisión de todo procedimiento, además de la aplicación de la
normativa sobre Buenas Practicas de Laboratorio .que permitirán que los
resultados suministrados al paciente sean confiables.
5. MATERIALES, REACTIVOS Y EQUIPOS

• Guantes
• Tapabocas
• Pipetas automáticas
• Tubos para centrífuga
• Centrífuga, micro centrífuga
• Termociclador
• Potenciómetro
• Balanza analítica
• Transiluminador de U.V., Analizador de imágenes
• Cámaras de flujo laminar, cámaras de extracción
• Congeladores
• Desionizador

6. PROCEDIMIENTO

6.1 . Normas de bioseguridad:

• Realizar lectura previa a la práctica de las guías y las páginas web

relacionadas en el marco teórico.
• Comparar lo propuesto a nivel virtual con la guía de tal manera que se
establezcan similitudes y complementación para el laboratorio de Biologia
celular y molecular
• Hacer uso adecuado de los guantes de látex y tapabocas, seguir lo indicado
para su eliminación
• Reconocer el área física del laboratorio, su distribución, los implementos,
equipos y símbolos relacionados con bioseguridad.

6.2 Garantía de Calidad:

• Se realizará el reconocimiento de los equipos de mayor uso en el laboratorio

molecular.
• Se especificará sobre sus requerimientos y uso de controles

7. POST-LABORATORIO:

1. Consultar acerca de las sustancias más utilizadas como descontaminantes a

nivel de un laboratorio de Biología Molecular.
2. Investigar el tipo de Agua que se utiliza en el laboratorio de Biología Molecular y
como es su tratamiento (obtención).
3. Consultar sobre el tipo o clasificación de laboratorios y cabinas de flujo laminar
de acuerdo a la normas de bioseguridad.
4. Consulte y construya un cuadro con la simbología utilizada en Bioseguridad.
Utilice colores.
8. BIBLIOGRAFÍA

• Current protocols 2013 on line.

• Rodríguez, J. Argote E, Rodríguez O. 2001. Temas de seguridad biológica.
Editorial Félix Varela, Ciudad de la Habana, Cuba.
• Sambrook, J. et al. 1989 Molecular Cloning: A Laboratory Manual, 2nd edition,
Cold Spring. Laboratory, Cold Spring Harbor, New York,
• Álvarez A. Campuzano S. 2003. Manual de tratamiento, manejo, envió,
transporte y desecho de muestras biológicas. Universidad Colegio Mayor de
Cundinamarca, Bogotá, Colombia.
• ISS, Cámara de la Industria farmacéutica. El ABC de la seguridad en el
laboratorio. Edición Merck Colombia S.A.

9. AUTOEVALUACION.

NUMERO DE LOGRO FORTALEZAS DEBILIDADES SUGERENCIAS

LA PRACTICA (Objetivos A CADA
cumplidos) DEBILIDAD
SI NO
 ANEXO PRACTICA No. 1: LA CÁMARA DE FLUJO LAMINAR

Buena parte de las

manipulaciones propias del
cultivo in Vitro deben realizarse
en condiciones de esterilidad
total para evitar la
contaminación de los cultivos.
Para disponer de una superficie
de trabajo estéril que no ponga
en peligro la esterilidad de los
cultivos se usan las cámaras de
flujo laminar. Una cámara de
flujo laminar es un receptáculo
en forma generalmente
prismática con una única cara
libre (la frontal) que da acceso al
interior, donde se localiza la
Figura 1. Esquema de una cámara de flujo
superficie de trabajo. La
laminar horizontal
esterilidad de la zona de trabajo
se consigue porque se hace circular a través del interior de la cámara una
corriente de aire que previamente ha sido microfiltrada para eliminar toda partícula
extraña. Para evitar que el aire del exterior pueda entrar en la cámara de flujo sin
pasar previamente por los filtros se procura que la presión interior sea ligeramente
superior a la presión exterior, con lo cual el aire siempre circula de dentro hacia
fuera y nunca al revés.

Según el grado de sofisticación de la cámara, puede disponer de elementos

accesorios como son: fuente de luz, lámpara de esterilización por U.V., pilotos
indicadores de funcionamiento diversos, contador de horas de funcionamiento,
indicador de presión interior, etc.

Existen dos tipos de cámaras de flujo laminar según sea la forma en la que se
hace circular el aire: cámaras de flujo horizontal y cámaras de flujo vertical. En las
primeras el flujo se produce desde el fondo de la cámara hasta el frente, de forma
que las partículas se mueven horizontalmente a la superficie de trabajo. En las
segundas, el flujo se produce desde el techo hacia la superficie de trabajo de
forma que las partículas se mueven perpendicularmente a ella.