ANÁLISIS POR HPLC-MASAS

Se preparó una solución madre de índigo carmín (IC) de 50 ppm disolviendo 25 mg de índigo
carmín en 500 mL de agua decarbonatada.
La evaluación de la adsorción de índigo carmín se realizó con hidróxido de calcio con
una solución de 50 ppm de IC y una dosis de adsorbente de 0.01 g de cal hidratada comercial
en 10 mL de solución (MUESTRA IC-1). La solución se mantuvo en agitación constante y
una temperatura de 20°C en un reactor cubierto para evitar la foto-degradación del
colorante.
Posteriormente, para estudiar el efecto del pH alcalino se realizaron pruebas de
ajuste de pH. Se ajustó la solución de índigo carmín de 50 ppm al pH al que se llevó a cabo
la adsorción (pH=12) con 1.9 mL NaOH 0.1 M en 10 mL de solución IC, esta solución se
mantuvo en un reactor cubierto a temperatura de 20°C y agitación constante para la
evaluación de la decoloración por efecto del pH (MUESTRA IC-2)..

En ambos casos, con el uso de hidróxido de calcio como adsorbente y ajustando la

solución a un pH de 12 con hidróxido de sodio se puede observar una decoloración mayor
al 90%. Para estudiar los posibles cambios que puede sufrir la molécula original del índigo
carmín se realizó un barrido desde una longitud de onda de 200 a 700 nm de los
sobrenadantes obtenidos después de las pruebas de adsorción con hidróxido de calcio y de
las pruebas de ajuste de pH=12 con hidróxido de sodio a los 5, 30, 60, 120, 180 y 240
minutos, se usó como referencia a los 0 minutos la solución de índigo carmín a 50 ppm para
realizar una comparación entre los espectros.
Los barridos completos de las pruebas de adsorción utilizando Ca(OH)2 y de las
pruebas de pH se muestran en las Figuras 1 y 2 respectivamente. Se puede observar que la
banda de 611 nm correspondiente al doble enlace C=C del grupo cromóforo del índigo
carmín decreció considerablemente, por otra parte, nuevas bandas comienzan a emerger
en la región ultravioleta del espectro a 260, 230 y 210 nm aproximadamente lo que indica
la modificación de la molécula original del índigo carmín hacia compuesto químicos
diferentes.
 7

6 0 min
5 min
5 30 min
60 min
Absorbancia 4 120 min
180 min
3 240 min

300 400 500 600 700

Longitud de onda (nm)

Figura 1 Espectros de absorción UV-Visible de los sobrenadantes obtenidos a los 5, 30, 60,
120, 180 y 240 minutos de la prueba de adsorción con hidróxido de calcio.

6 0 min
5 min
5 30 min
60 min
4
120 min
Absorbancia

180 min
3
240 min
2

300 400 500 600 700

Longitud de onda (nm)

Figura 2 Espectros de absorción UV-Visible de los sobrenadantes obtenidos a los 5, 30, 60,
120, 180 y 240 minutos de la prueba de pH.
Estos cambios pueden indicar la generación de una serie de intermediarios y, por
lo tanto, la generación de compuestos distintos al índigo carmín que se puede atribuir al
pH alcalino del medio. Esta reportado que el índigo carmín puede sufrir una reducción
que provoca una decoloración al romper el doble enlace carbono-carbono
correspondiente la banda de 611 nm y responsable del color azul, formando Leuco Índigo
Carmín y/o ácido indolín sulfónico [1,2].
Estudios anteriores han utilizado la técnica UPLC-MS para determinar el mecanismo
de reacción de diversos compuestos. Li Hui-Xing determinó los metabolitos generados en la
reducción del IC utilizando UPLC con una columna C18 Ethylene Bridge Hybrid (2.1mm x 50
mm), 1.7 μm) utilizando una mezcla de acetonitrilo y 20 mM de acetato de amonio (2:98,
V/V) como fase móvil. La tasa de flujo de la fase móvil fue de 0.3 mL min-1. La temperatura
de la columna fue de 45°C y el volumen de inyección de 5 μL. Posteriormente el flujo de
salido fue introducido en el MS monitoreando en modo ion positivo (ESI+). Los parámetros
del MS se fijaron como sigue: voltaje capilar 3500 V; detector de voltaje 1600 V; voltaje de
cono 20-40 V; energía de coalición 6 V; temperatura desolvatación 400°C; temperatura de
bloque de la fuente 100°C; flujo de gas de cono 500 L h-1 y flujo de gas de desolvatación 500
L h-1 [2].
[1] A. Hernandez Gordillo, V. Rodriguez Gonzalez, S. Oros Ruiz y R. Gomez,
«Photodegradation of indigo carmine dye by CdS nanostructures under blue light irradiation
emitted by LEDs,» Catalysis Today, vol. 216, pp. 27-35, 2016.
[2] H.-X. Li , B. Xu , L. Tang, J.-H. Zhang y Z.-G. Mao, «Reductive decolorization of indigo
carmine dye with Bacillus sp. MZS10,» International Biodeterioration & Biodegradation,
vol. 103, pp. 30-37, 2015.

RESULTADOS MUESTRA: IC-1_Ca(OH)2

Condiciones cromatográficas: Sistema LC Acquity Arc, columna Acquity UPLC BEH
C18 201x50 mm, 1.7 µ, temperatura de la columna 45 °C, flujo 0.5 mL/min, 20 mM
de acetate de amonio como fase A, acetonitrilo como fase movil B, methanol como
fase móvil C. Tiempo total de corrida 15 min y emperatura del inyector de 15 °C.

Condiciones del MS: Detector QDa, mdo de ionización ESI Positivo, voltaje del
capilar 1.5 kV, temperature de desolvatación 550 °C, voltaje del cono 5V, modo de
adquisición SCAN 100 a 500 m/z Scouting, velocidad de adquisición de 20
puntos/segundo.
Minutes AU

1.392 12.2

6.657 7.75
 7.433 6

7.630 5.75

8.150 4.25

8.542 38

9.557 a) 2.25

9.557 b) 8

9.692 0.75

9.993 0.25
m/z Nombre Estructura química
160.0 Piperidine-4-sulfonic acid

182.0 Product obtained through CO

elimination from 216 fragment
(possibly 4-amino-3-
hydroxybenzenesulfonic acid

225.0 Isatin-5-sulfonic acid

244.3 (2-amino-5-sulfophenyl) -oxo-
ethanoic acid

286.3
288.3 2-hydroxy-2,2´-biindoline-
3,3´-dione

289.4
320.3 (E)-3,3'-dioxo-5,5'-disulfido-
[2,2'-biindolinylidene]-6,6',7,7'-
tetraide

380.0 disodium mono((E)-3,3'-dioxo-

5'-sulfonato-[2,2'-
biindolinylidene]-4,4',5,6',7,7'-
hexaide)

460.0 disodium mono((E)-3,3'-dioxo-

5,5'-disulfonato-[2,2'-
biindolinylidene]-4,4',6,6',7,7'-
hexaide)