UROCULTIVO

Varios miembros de las enterobacterias pueden aislarse de la orina en el curso de infecciones del aparato urinario o urogenital, como también en otros tipos de afecciones. La orina vesical normalmente no contiene microorganismos. Sin embargo, los primeros 10 a 15 ml. de orina emitidos por personas normales de cualquier edad o sexo, siempre presentan bacterias, las que proceden de la flora corriente de la uretra anterior, prepucio, región vulvovaginal o de contaminación fecal. La flora de estas localizaciones es variada y está constituida por estafilococos coagulasa-positivo y negativos, estreptococos diversos, bacilos difteromorfos, enterobacterias, lactobacilos, micoplasmas, bacterias anaerobias, levaduras y muchos microorganismos. En la presencia de esta flora influyen localización anatómica, sexo, edad, hábitos de higiene y factores patológicos propios del huésped. En la etiología de las infecciones urinarias predominan los bacilos gramnegativos. Los procesos agudos y crónicos son provocados por E. coli y por especies de los géneros Enterobacter, Proteus, Citrobacter, Pseudomonas, Serratia, etc. De estos agentes, E. coli se aísla en 80% de los casos. Ps.aeruginosa y S.marcescens se identifican en pacientes hospitalizados, muy debilitados o sometidos a instrumentación repetida. Con bastante menor frecuencia desempeña un papel causal Streptococcus faecalis (enterococo) y excepcionalmente los estafilococos. El examen microbiológico de una muestra de orina se denomina Urocultivo. Éste se ha de hacer desde un punto cuantitativo y cualitativo.

A. Examen cuantitativo
Método de conteo en placa o recuento de colonias. Introducido por Kaas para evitar los riesgos del cateterismo vesical y diferenciar bacteriuria verdadera de contaminación, se realiza de la siguiente manera:
y y

Se homogeneiza la muestra mediante agitación. Se diluye la muestra al 1:100, colocando 0.1 ml. de orina en 9.9 ml. de caldo de tripticasa o de suero fisiológico, estériles. Se preparan diluciones al 1:1000 y 1:10 000, a partir de la dilución al 1:100. Se deposita 1 ml. de cada dilución en placas de Petri esterilizadas, sobre las cuales se vacía un tubo de agar-tripticasa o medio CLED, fundidos y enfriados a 45°. Mediante rotación suave, se favorece la distribución homogénea de la siembra. Se incuban todas las siembras a 37° durante 24 a 48 horas.

y y

y

obstrucción uretral. agar-CLED. inhiben el carácter invasor de las colonias de Proteus. Los resultados del estudio cuantitativo se informan de la siguiente manera: y y y y No hubo desarrollo microbiano. de diámetro). lactobacilos y otros agentes que pueden contaminar la orina. las muestras contaminadas tienden a mostrar cuentas inferiores a 10 000 colonias/ml. empleando asa de platino calibrada (4 mm. sin centrifugar.01 ml. el examen debe repetirse. el reconocimiento de colonias de bacterias y. la probabilidad de infección es de 80%. La identificación final de los agentes se hace mediante el estudio de sus propiedades bioquímicas y características serológicas. basta multiplicar su número por la dilución respectiva para obtener la cuenta total. entre 10 0000 y 100 000 colonias /ml. por una parte. Por lo general. se cuenta el número de colonias desarrolladas y el resultado se multiplica por 100. Después de incubar las siembras a 37° durante 24 a 48 horas. Examen cualitativo El estudio cualitativo. en placas con agar-sangre. Menos de 10 000 colonias por ml. que conduce a la identificación del agente. Esto permite establecer relaciones de identidad entre microorganismos aislados en cultivos sucesivos o de control.. Su contenido en cisteína y lactosa y su deficiencia en electrolitos facilitan. por otra. cifra que se eleva a 95% si el mismo resultado se logra en tres recuentos sucesivos. de orina. Método del asa calibrada. se realiza mediante la siembra de la muestra homogeneizada. porque favorece el desarrollo de bacterias patógenas urinarias y permite la identificación de los microorganismos contaminados. b. diuresis acentuada. ya que existen diversos factores que pueden explicar recuentos bajos en infecciones urinarias verdaderas. ya que la asada de platino contiene 0. bacilos difteromorfos. Entre 10 000 y 100 000 colonias por ml. Cuando se obtienen dos recuentos sucesivos con más de 100 000 colonias por ml. agar de Levine o MacConkey. Conviene advertir que pueden pasar inadvertidas infecciones urinarias verdaderas. Es recomendable el medio CLED. infecciones crónicas e infecciones por cocos grampositivos. Así se facilita la identificación de estafilococos. y definir el estado de . si no se toman en cuenta cuentas inferiores a 100 000 colonias por ml. Contadas éstas. Esta estimación cuantitativa consiste en sembrar una placa con medio de agar-sangre o agar con CLED en una muestra de orina. Más de 100 000 colonias por ml.Para calcular el número de colonias se eligen placas que contengan entre 30 y 300 colonias. Cuando el recuento revela valores intermedios.

coli). se concluye que se trata de una misma cepa. Estos métodos pueden ser microscópicos. reducción de nitratos. y producir muchos falsos negativos. Estos métodos. Esta técnica impone los siguientes requisitos: El paciente debe tener como mínimo de tres a cuatro horas de retención de orina. Existen varios procedimientos prácticos y económicos para el diagnóstico rápido de infecciones urinarias o de bacteriurias significativas. Los procedimientos químicos están basados en propiedades enzimáticas de las bacterias. El paciente no debe haber recibido tratamiento antimicrobiano durante los tres días anteriores a la recolección. II. químicos o de microcultivo. De esto deriva el valor que tiene el conocimiento del biotipo. Entre las pruebas se pueden mencionar: catalasa. Menos confiable aun es el hallazgo de 20 o más bacterias gramnegativas por campo microscópico de sedimento urinario. en cuyo caso se procede a hacer limpieza de los genitales y a fijar un recolector de orina estéril (especial .revivida o de reinfección. basarse en propiedades metabólicas de las bacterias y no en su desarrollo y observación. REALIZACIÓN DE LA PRÁCTICA A. provoca resultados falsos negativos. aunque rápidos y económicos. la observación de un bacilo gramnegativo por campo microscópico puede realizarse cuando la muestra contiene más de 100 000 bacterias por ml. del piocinotipo (en especial cuando es de Ps. Son útiles para investigar grandes grupos de personas. aunque dicho número permita sospechar recuentos superiores a 100 000 microorganismos por ml. y paciente gravemente enfermos. * Métodos rápidos de diagnóstico. ya que la muestra de orina requiere una cuidadosa limpieza de los genitales externos. Éste último se obtiene al comparar el antibiograma de cepas aisladas de muestras obtenidas de diferentes oportunidades en un mismo paciente Si existe correspondencia. Sin embargo. durante el periodo medio de la micción. la dificultad de encontrar bacterias en frotis de orina por este método. En efecto. TOMA DE LA MUESTRA El método más recomendado para realizar la recogida de muestra para un urocultivo es la toma. tienen el inconveniente de ser indirectos. y la muestra más representativa es la primera orina de la mañana. siempre que el paciente sea capaz de limpiarse y recogerla. del serotipo (particularmente en E. Esta técnica no es apropiada para niños que no controlan sus esfínteres. reducción de trifeniltetrazolio e hipoglucosuria. exceptuando los casos de control de tratamiento. aeruginosa) y del antibiótico. que se pueden poner de manifiesto en la orina. La coloración de un frotis de orina no centrifugada mediante el método de Gram constituye un índice práctico para diferenciar entre infección y contaminación urinarias.

No obstante. En ciertas ocasiones se justifica el sondeo uretral o la aspiración suprapúbica. En los pacientes con sonda uretral permanente con drenaje cerrado. se despeja el recolector y se sella inmediatamente. la observación microscópica de las mismas. A continuación se hace lo mismo en el segundo cuadrante pero en una dirección diferente a la anterior. b. En ningún momento deberá sacarse de la bolsa de drenaje material para cultivo. Cuando se desean observar las características de las colonias de un microorganismo. suele ser difícil definir si los microorganismos aislados a partir de orina tomada con sonda son de origen urinario o uretral. las placas de Petri resultan muy adecuadas para tal fin. En nuestra práctica vamos a realizar en primer lugar una siembra en placa con la muestra de orina. obliga a realizar el estudio en tres muestras sucesivas de micción espontánea. No debe dejarse colocado el recolector por tiempo prolongado. hay que tener en cuenta que la orina constituye un excelente medio de cultivo para casi todas las bacterias. La otra parte va destinada al Urocultivo. por lo que una vez recogida. Conservación y/o Transporte En lo que respecta al transporte y conservación de muestras de orina. Procesamiento de la muestra Una vez se ha obtenido la muestra de orina se homogeneiza en dos partes: Una parte de la muestra va destinada al Examen en Fresco y posterior Tinción. Para aislar colonias de modo individualizado el medio en placas de Petri se inocula de la siguiente manera. el cual varía según el tipo de paciente. La poca profundidad de la placa y la extensa superficie de cultivo facilitan el examen macroscópico de las colonias así. En el tercer y cuarto cuadrante hacemos lo mismo. la muestra debe enviarse de inmediato al laboratorio. Debido a la colonización por bacterias de la uretra. La alta probabilidad de contaminación en muestras de orina de lactantes. . Se deja en esta posición hasta que el niño realice su micción. Se aspira la orina por medio de punción en la sonda con una aguja 21. previa colocación del envase en un recipiente que contenga cubos de hielo. C. como si fuera necesario. Este procedimiento permite que el número de bacterias permanezca relativamente constante por un tiempo considerable.para bebés). la orina para cultivo se recoge después de desinfectar la pared de la sonda en su punto de unión con el tubo de drenaje. Empleando un asa estéril se extiende la toma de la muestra a modo de estrías en el primer cuadrante. existe un pequeño riesgo de infección tras sondeo uretral.

El taurocolato sódico (sal biliar) inhibe la flora Gram positiva. Peptona 20 g. En nuestro caso. Los microorganismos que no fermentan la lactosa dan una reacción alcalina. Los microorganismos aislados de orina pueden ser fermentadores o no fermentadores de la lactosa. uno de los medios de cultivo es agar MacConkey y el otro es Agar CLED. A continuación vamos a hacer un urocultivo en el cuál emplearemos un tubo a cuyo tapón hay unido una lengüeta. ClNa (opcional) 5 g. En cada cara de la lengüeta hay una medio de cultivo. Lactosa 10 g. Composición del agar MacConkey: Taurocolato sódico 5 g. Se emplean medios diferenciales para distinguir unos de otros. que neutraliza la sal biliar y absorbe el colorante dando colonias rojizas. los nutrientes básicos son el agar y la peptona. no toman el rojo neutro y dan lugar a colonias incoloras. . En el agar. Agar deshidratado 15 g. Los microorganismos que fermentan la lactosa producen ácido láctico. Agua destilada 1000 ml. Solución acuosa rojo neutro al 1% 5-7 ml. mientras que la lactosa y el indicador (rojo neutro) diferencia los fermentadores de la lactosa de los que no tienen esta capacidad.Una vez realizada la extensión de la muestra dejamos incubar la muestra a 37° C durante 24 o 48 horas. EL agar MacConkey es un medio selectivo-diferencial. El medio MacConkey se utiliza para diferenciar los microorganismos intestinales fermentadores de la lactosa de los que no presentan esta propiedad.

en el hecho de que en numerosas especies existen grandes diferencias de sensibilidad a un determinado antibiótico entre unas y otras cepas. . Utilidad: La razón por la cual es conveniente el estudio del antibiograma de una bacteria determinada radica en el hecho de la diferente sensibilidad a los antibióticos de las distintas especies bacterianas y. más aún. El antibiograma es un método de diagnóstico rápido y preciso Con ayuda del antibiograma se puede escoger el antibiótico más adecuado para el tratamiento de una enfermedad. Preparación de los discos impregnados de antibiótico para realizar un antibiograma. en torno al disco se observará un halo.ANTIBIOGRAMA Se entiende por antibiograma el estudio de la sensibilidad "in vitro" de las bacterias a los antibióticos. como aprendizaje. es fácil prepararlos a partir de las cápsulas. se suele incluir el estudio de la sensibilidad a las sulfamidas y otros quimioterápicos. En las casas de productos de laboratorio pueden adquirir se los discos que se emplean para hacer un antibiograma. Sobre la superficie del medio se colocan discos de papel impregnados con el antibiótico o quimioterápico a ensayar. con el gérmen a estudiar. una placa de un medio de cultivo adecuado. crecerá uniformemente y no habrá ningún halo de inhibición en torno al disco de papel. en el cual no hay proliferación de bacterias. Si el germen estudiado es sensible. y con bastante fiabilidad. Si el germen es resistente al antibiótico. Sin embargo. comprimidos grageados o viales de 250 mg ó 500 mg de los antibióticos que expenden en las farmacias. Por extensión. Método de la difusión en medio sólido Se siembra.

dividiendo por 100 tendremos el volumen que corresponde a una gota. La concentración de 0. y sea posible distinguir los halos de inhibición. se puede proceder del siguiente modo. que se acostumbran a tomar de 6. Para evaluar.1 mg/cl ya es adecuada para trabajar.Para que la concentración de antibiótico que impregna los discos no sea ni excesiva ni insuficiente. la expresión 0.5 m m de diámetro. el volumen de una gota se pueden colocar en una probeta gra duada 100 gotas calculando el volumen que ocupan. .003 nos dará la concentración de antibiótico en mg/ gota. Suponiendo que el volumen hallado para una gota sea de 0. realizando un banco de diluciones.1 x 0.003 ml. aproximadamente. Repitiendo la operación con cápsulas de distintos antibióticos podremos preparar diferentes discos. De este modo sabremos la concentración de antibiótico con que impregnamos los discos de papel secante.

Medios de cultivo. Casi todos los microorganismos pueden cultivarse en medios nutritivos inertes. de hecho los sólidos son medios de cultivo líquidos a los que se adicionan diferentes sustancias. la vía de administración. . la historia clínica del paciente. El agar ordinario y el agar nutritivo a un pH = 7.2. durante 15-30 minutos. etc. las posibles sensibilizaciones del paciente. Según la amplitud de este halo los gérmenes se clasifican en: -RESISTENTES -SENSIBLES -MUY SENSIBLES Debe tenerse presente que el diámetro del halo de inhibición depende también de la difusibilidad del antibiótico y. que puede hacerse a intervalos periódicos. Agar ordinario peptona 15 gr/l NaCl 5gr/l agar 12gr/l Agar nutritivo Agar nutritivo Agar ordinario más 10 gr/1 de glucosa Los medios de cultivo deben estar ajustados a un pH adecuado. a veces. Lectura del antibiograma. La esterilización de los medios de cultivo se hace generalmente calentándolos en un autoclave a 121° C ya una atmósfera de presión de vapor. Para la prescripción correcta de los antibióticos hay que tener en cuenta siempre la naturaleza del proceso infeccioso. se procede a la lectura de los resultados. debe hacerse después. Alternativamente puede utilizarse una olla a presión adecuada. El ajuste se realiza con NaOH y/o HCl en soluciones 1 N y 1/10N. por tanto. basada en la medi ción del halo de inhibición. Se acostumbra a hacer antes de la esterilización. Hay medios de cultivo líquidos y sólidos. la toxicidad. Los datos que proporciona el antibiograma son muy valiosos pero su aplicación no es tan sencilla. el mecanismo de acción del antibiótico. Los distintos microorganismos tienen distintas exigencias tanto en los que se refiere al medio nutritivo en sí como a la temperatura de incubación ya las condiciones atmosféricas. Una vez sembrada una placa de un medio de cultivo adecuado y colocados los distintos discos im pregnados de antibiótico y una vez colocada a incubación en la estufa durante unas horas. no es una medida absoluta de la eficacia. las más utilizadas son el agar y la gelatina. aunque.

Sign up to vote on this title
UsefulNot useful