UROCULTIVO

Varios miembros de las enterobacterias pueden aislarse de la orina en el curso de infecciones del aparato urinario o urogenital, como también en otros tipos de afecciones. La orina vesical normalmente no contiene microorganismos. Sin embargo, los primeros 10 a 15 ml. de orina emitidos por personas normales de cualquier edad o sexo, siempre presentan bacterias, las que proceden de la flora corriente de la uretra anterior, prepucio, región vulvovaginal o de contaminación fecal. La flora de estas localizaciones es variada y está constituida por estafilococos coagulasa-positivo y negativos, estreptococos diversos, bacilos difteromorfos, enterobacterias, lactobacilos, micoplasmas, bacterias anaerobias, levaduras y muchos microorganismos. En la presencia de esta flora influyen localización anatómica, sexo, edad, hábitos de higiene y factores patológicos propios del huésped. En la etiología de las infecciones urinarias predominan los bacilos gramnegativos. Los procesos agudos y crónicos son provocados por E. coli y por especies de los géneros Enterobacter, Proteus, Citrobacter, Pseudomonas, Serratia, etc. De estos agentes, E. coli se aísla en 80% de los casos. Ps.aeruginosa y S.marcescens se identifican en pacientes hospitalizados, muy debilitados o sometidos a instrumentación repetida. Con bastante menor frecuencia desempeña un papel causal Streptococcus faecalis (enterococo) y excepcionalmente los estafilococos. El examen microbiológico de una muestra de orina se denomina Urocultivo. Éste se ha de hacer desde un punto cuantitativo y cualitativo.

A. Examen cuantitativo
Método de conteo en placa o recuento de colonias. Introducido por Kaas para evitar los riesgos del cateterismo vesical y diferenciar bacteriuria verdadera de contaminación, se realiza de la siguiente manera:
y y

Se homogeneiza la muestra mediante agitación. Se diluye la muestra al 1:100, colocando 0.1 ml. de orina en 9.9 ml. de caldo de tripticasa o de suero fisiológico, estériles. Se preparan diluciones al 1:1000 y 1:10 000, a partir de la dilución al 1:100. Se deposita 1 ml. de cada dilución en placas de Petri esterilizadas, sobre las cuales se vacía un tubo de agar-tripticasa o medio CLED, fundidos y enfriados a 45°. Mediante rotación suave, se favorece la distribución homogénea de la siembra. Se incuban todas las siembras a 37° durante 24 a 48 horas.

y y

y

Cuando se obtienen dos recuentos sucesivos con más de 100 000 colonias por ml. agar-CLED. Examen cualitativo El estudio cualitativo. b. La identificación final de los agentes se hace mediante el estudio de sus propiedades bioquímicas y características serológicas. de diámetro). Más de 100 000 colonias por ml. Los resultados del estudio cuantitativo se informan de la siguiente manera: y y y y No hubo desarrollo microbiano. Esta estimación cuantitativa consiste en sembrar una placa con medio de agar-sangre o agar con CLED en una muestra de orina. entre 10 0000 y 100 000 colonias /ml. se cuenta el número de colonias desarrolladas y el resultado se multiplica por 100. Después de incubar las siembras a 37° durante 24 a 48 horas. porque favorece el desarrollo de bacterias patógenas urinarias y permite la identificación de los microorganismos contaminados. el examen debe repetirse. sin centrifugar. basta multiplicar su número por la dilución respectiva para obtener la cuenta total. el reconocimiento de colonias de bacterias y. Su contenido en cisteína y lactosa y su deficiencia en electrolitos facilitan. Es recomendable el medio CLED. Cuando el recuento revela valores intermedios.Para calcular el número de colonias se eligen placas que contengan entre 30 y 300 colonias. empleando asa de platino calibrada (4 mm. de orina.. Esto permite establecer relaciones de identidad entre microorganismos aislados en cultivos sucesivos o de control. en placas con agar-sangre. lactobacilos y otros agentes que pueden contaminar la orina. Menos de 10 000 colonias por ml. bacilos difteromorfos. diuresis acentuada. Método del asa calibrada. cifra que se eleva a 95% si el mismo resultado se logra en tres recuentos sucesivos. se realiza mediante la siembra de la muestra homogeneizada. inhiben el carácter invasor de las colonias de Proteus. infecciones crónicas e infecciones por cocos grampositivos. agar de Levine o MacConkey. las muestras contaminadas tienden a mostrar cuentas inferiores a 10 000 colonias/ml. Contadas éstas. si no se toman en cuenta cuentas inferiores a 100 000 colonias por ml. Conviene advertir que pueden pasar inadvertidas infecciones urinarias verdaderas. obstrucción uretral. y definir el estado de . por una parte. Así se facilita la identificación de estafilococos. Por lo general. ya que existen diversos factores que pueden explicar recuentos bajos en infecciones urinarias verdaderas. por otra. Entre 10 000 y 100 000 colonias por ml. ya que la asada de platino contiene 0. que conduce a la identificación del agente.01 ml. la probabilidad de infección es de 80%.

tienen el inconveniente de ser indirectos. Entre las pruebas se pueden mencionar: catalasa. Estos métodos. Esta técnica impone los siguientes requisitos: El paciente debe tener como mínimo de tres a cuatro horas de retención de orina. El paciente no debe haber recibido tratamiento antimicrobiano durante los tres días anteriores a la recolección. Esta técnica no es apropiada para niños que no controlan sus esfínteres. La coloración de un frotis de orina no centrifugada mediante el método de Gram constituye un índice práctico para diferenciar entre infección y contaminación urinarias. coli). y la muestra más representativa es la primera orina de la mañana. siempre que el paciente sea capaz de limpiarse y recogerla. TOMA DE LA MUESTRA El método más recomendado para realizar la recogida de muestra para un urocultivo es la toma. y producir muchos falsos negativos. la observación de un bacilo gramnegativo por campo microscópico puede realizarse cuando la muestra contiene más de 100 000 bacterias por ml. Son útiles para investigar grandes grupos de personas. Éste último se obtiene al comparar el antibiograma de cepas aisladas de muestras obtenidas de diferentes oportunidades en un mismo paciente Si existe correspondencia. durante el periodo medio de la micción. Existen varios procedimientos prácticos y económicos para el diagnóstico rápido de infecciones urinarias o de bacteriurias significativas. * Métodos rápidos de diagnóstico. del serotipo (particularmente en E. REALIZACIÓN DE LA PRÁCTICA A. exceptuando los casos de control de tratamiento. Estos métodos pueden ser microscópicos. II. Sin embargo. ya que la muestra de orina requiere una cuidadosa limpieza de los genitales externos. reducción de nitratos. en cuyo caso se procede a hacer limpieza de los genitales y a fijar un recolector de orina estéril (especial . la dificultad de encontrar bacterias en frotis de orina por este método. En efecto.revivida o de reinfección. Menos confiable aun es el hallazgo de 20 o más bacterias gramnegativas por campo microscópico de sedimento urinario. químicos o de microcultivo. y paciente gravemente enfermos. aunque rápidos y económicos. del piocinotipo (en especial cuando es de Ps. aunque dicho número permita sospechar recuentos superiores a 100 000 microorganismos por ml. se concluye que se trata de una misma cepa. basarse en propiedades metabólicas de las bacterias y no en su desarrollo y observación. De esto deriva el valor que tiene el conocimiento del biotipo. que se pueden poner de manifiesto en la orina. provoca resultados falsos negativos. aeruginosa) y del antibiótico. Los procedimientos químicos están basados en propiedades enzimáticas de las bacterias. reducción de trifeniltetrazolio e hipoglucosuria.

En ciertas ocasiones se justifica el sondeo uretral o la aspiración suprapúbica. Procesamiento de la muestra Una vez se ha obtenido la muestra de orina se homogeneiza en dos partes: Una parte de la muestra va destinada al Examen en Fresco y posterior Tinción. suele ser difícil definir si los microorganismos aislados a partir de orina tomada con sonda son de origen urinario o uretral. Este procedimiento permite que el número de bacterias permanezca relativamente constante por un tiempo considerable. C. En ningún momento deberá sacarse de la bolsa de drenaje material para cultivo. se despeja el recolector y se sella inmediatamente. hay que tener en cuenta que la orina constituye un excelente medio de cultivo para casi todas las bacterias. Para aislar colonias de modo individualizado el medio en placas de Petri se inocula de la siguiente manera. Empleando un asa estéril se extiende la toma de la muestra a modo de estrías en el primer cuadrante. Debido a la colonización por bacterias de la uretra. previa colocación del envase en un recipiente que contenga cubos de hielo. por lo que una vez recogida. Se aspira la orina por medio de punción en la sonda con una aguja 21. la observación microscópica de las mismas. la muestra debe enviarse de inmediato al laboratorio. Conservación y/o Transporte En lo que respecta al transporte y conservación de muestras de orina. La alta probabilidad de contaminación en muestras de orina de lactantes. La poca profundidad de la placa y la extensa superficie de cultivo facilitan el examen macroscópico de las colonias así. En nuestra práctica vamos a realizar en primer lugar una siembra en placa con la muestra de orina. La otra parte va destinada al Urocultivo. Cuando se desean observar las características de las colonias de un microorganismo. obliga a realizar el estudio en tres muestras sucesivas de micción espontánea. No debe dejarse colocado el recolector por tiempo prolongado.para bebés). En los pacientes con sonda uretral permanente con drenaje cerrado. No obstante. existe un pequeño riesgo de infección tras sondeo uretral. En el tercer y cuarto cuadrante hacemos lo mismo. Se deja en esta posición hasta que el niño realice su micción. A continuación se hace lo mismo en el segundo cuadrante pero en una dirección diferente a la anterior. como si fuera necesario. . las placas de Petri resultan muy adecuadas para tal fin. el cual varía según el tipo de paciente. la orina para cultivo se recoge después de desinfectar la pared de la sonda en su punto de unión con el tubo de drenaje. b.

uno de los medios de cultivo es agar MacConkey y el otro es Agar CLED. En cada cara de la lengüeta hay una medio de cultivo. Los microorganismos aislados de orina pueden ser fermentadores o no fermentadores de la lactosa.Una vez realizada la extensión de la muestra dejamos incubar la muestra a 37° C durante 24 o 48 horas. Agar deshidratado 15 g. Los microorganismos que fermentan la lactosa producen ácido láctico. los nutrientes básicos son el agar y la peptona. EL agar MacConkey es un medio selectivo-diferencial. A continuación vamos a hacer un urocultivo en el cuál emplearemos un tubo a cuyo tapón hay unido una lengüeta. El taurocolato sódico (sal biliar) inhibe la flora Gram positiva. no toman el rojo neutro y dan lugar a colonias incoloras. . Se emplean medios diferenciales para distinguir unos de otros. Lactosa 10 g. mientras que la lactosa y el indicador (rojo neutro) diferencia los fermentadores de la lactosa de los que no tienen esta capacidad. ClNa (opcional) 5 g. En el agar. Composición del agar MacConkey: Taurocolato sódico 5 g. En nuestro caso. Los microorganismos que no fermentan la lactosa dan una reacción alcalina. Solución acuosa rojo neutro al 1% 5-7 ml. El medio MacConkey se utiliza para diferenciar los microorganismos intestinales fermentadores de la lactosa de los que no presentan esta propiedad. Agua destilada 1000 ml. que neutraliza la sal biliar y absorbe el colorante dando colonias rojizas. Peptona 20 g.

crecerá uniformemente y no habrá ningún halo de inhibición en torno al disco de papel.ANTIBIOGRAMA Se entiende por antibiograma el estudio de la sensibilidad "in vitro" de las bacterias a los antibióticos. Si el germen es resistente al antibiótico. Método de la difusión en medio sólido Se siembra. . El antibiograma es un método de diagnóstico rápido y preciso Con ayuda del antibiograma se puede escoger el antibiótico más adecuado para el tratamiento de una enfermedad. Sobre la superficie del medio se colocan discos de papel impregnados con el antibiótico o quimioterápico a ensayar. En las casas de productos de laboratorio pueden adquirir se los discos que se emplean para hacer un antibiograma. se suele incluir el estudio de la sensibilidad a las sulfamidas y otros quimioterápicos. Sin embargo. comprimidos grageados o viales de 250 mg ó 500 mg de los antibióticos que expenden en las farmacias. con el gérmen a estudiar. en el hecho de que en numerosas especies existen grandes diferencias de sensibilidad a un determinado antibiótico entre unas y otras cepas. es fácil prepararlos a partir de las cápsulas. en torno al disco se observará un halo. una placa de un medio de cultivo adecuado. Preparación de los discos impregnados de antibiótico para realizar un antibiograma. y con bastante fiabilidad. más aún. en el cual no hay proliferación de bacterias. como aprendizaje. Utilidad: La razón por la cual es conveniente el estudio del antibiograma de una bacteria determinada radica en el hecho de la diferente sensibilidad a los antibióticos de las distintas especies bacterianas y. Si el germen estudiado es sensible. Por extensión.

Repitiendo la operación con cápsulas de distintos antibióticos podremos preparar diferentes discos. De este modo sabremos la concentración de antibiótico con que impregnamos los discos de papel secante.Para que la concentración de antibiótico que impregna los discos no sea ni excesiva ni insuficiente. y sea posible distinguir los halos de inhibición.1 x 0. Suponiendo que el volumen hallado para una gota sea de 0. dividiendo por 100 tendremos el volumen que corresponde a una gota. que se acostumbran a tomar de 6.003 nos dará la concentración de antibiótico en mg/ gota.003 ml.5 m m de diámetro. La concentración de 0. Para evaluar. aproximadamente. se puede proceder del siguiente modo.1 mg/cl ya es adecuada para trabajar. realizando un banco de diluciones. el volumen de una gota se pueden colocar en una probeta gra duada 100 gotas calculando el volumen que ocupan. la expresión 0. .

Agar ordinario peptona 15 gr/l NaCl 5gr/l agar 12gr/l Agar nutritivo Agar nutritivo Agar ordinario más 10 gr/1 de glucosa Los medios de cultivo deben estar ajustados a un pH adecuado. la historia clínica del paciente. Para la prescripción correcta de los antibióticos hay que tener en cuenta siempre la naturaleza del proceso infeccioso. Una vez sembrada una placa de un medio de cultivo adecuado y colocados los distintos discos im pregnados de antibiótico y una vez colocada a incubación en la estufa durante unas horas. Hay medios de cultivo líquidos y sólidos. por tanto.2. no es una medida absoluta de la eficacia. etc. se procede a la lectura de los resultados. las posibles sensibilizaciones del paciente. La esterilización de los medios de cultivo se hace generalmente calentándolos en un autoclave a 121° C ya una atmósfera de presión de vapor. basada en la medi ción del halo de inhibición. Según la amplitud de este halo los gérmenes se clasifican en: -RESISTENTES -SENSIBLES -MUY SENSIBLES Debe tenerse presente que el diámetro del halo de inhibición depende también de la difusibilidad del antibiótico y. Se acostumbra a hacer antes de la esterilización. Casi todos los microorganismos pueden cultivarse en medios nutritivos inertes. durante 15-30 minutos. debe hacerse después. la vía de administración. . Los datos que proporciona el antibiograma son muy valiosos pero su aplicación no es tan sencilla. de hecho los sólidos son medios de cultivo líquidos a los que se adicionan diferentes sustancias. aunque. El ajuste se realiza con NaOH y/o HCl en soluciones 1 N y 1/10N. Lectura del antibiograma. que puede hacerse a intervalos periódicos. las más utilizadas son el agar y la gelatina. Los distintos microorganismos tienen distintas exigencias tanto en los que se refiere al medio nutritivo en sí como a la temperatura de incubación ya las condiciones atmosféricas. a veces.Medios de cultivo. el mecanismo de acción del antibiótico. El agar ordinario y el agar nutritivo a un pH = 7. la toxicidad. Alternativamente puede utilizarse una olla a presión adecuada.