UROCULTIVO

Varios miembros de las enterobacterias pueden aislarse de la orina en el curso de infecciones del aparato urinario o urogenital, como también en otros tipos de afecciones. La orina vesical normalmente no contiene microorganismos. Sin embargo, los primeros 10 a 15 ml. de orina emitidos por personas normales de cualquier edad o sexo, siempre presentan bacterias, las que proceden de la flora corriente de la uretra anterior, prepucio, región vulvovaginal o de contaminación fecal. La flora de estas localizaciones es variada y está constituida por estafilococos coagulasa-positivo y negativos, estreptococos diversos, bacilos difteromorfos, enterobacterias, lactobacilos, micoplasmas, bacterias anaerobias, levaduras y muchos microorganismos. En la presencia de esta flora influyen localización anatómica, sexo, edad, hábitos de higiene y factores patológicos propios del huésped. En la etiología de las infecciones urinarias predominan los bacilos gramnegativos. Los procesos agudos y crónicos son provocados por E. coli y por especies de los géneros Enterobacter, Proteus, Citrobacter, Pseudomonas, Serratia, etc. De estos agentes, E. coli se aísla en 80% de los casos. Ps.aeruginosa y S.marcescens se identifican en pacientes hospitalizados, muy debilitados o sometidos a instrumentación repetida. Con bastante menor frecuencia desempeña un papel causal Streptococcus faecalis (enterococo) y excepcionalmente los estafilococos. El examen microbiológico de una muestra de orina se denomina Urocultivo. Éste se ha de hacer desde un punto cuantitativo y cualitativo.

A. Examen cuantitativo
Método de conteo en placa o recuento de colonias. Introducido por Kaas para evitar los riesgos del cateterismo vesical y diferenciar bacteriuria verdadera de contaminación, se realiza de la siguiente manera:
y y

Se homogeneiza la muestra mediante agitación. Se diluye la muestra al 1:100, colocando 0.1 ml. de orina en 9.9 ml. de caldo de tripticasa o de suero fisiológico, estériles. Se preparan diluciones al 1:1000 y 1:10 000, a partir de la dilución al 1:100. Se deposita 1 ml. de cada dilución en placas de Petri esterilizadas, sobre las cuales se vacía un tubo de agar-tripticasa o medio CLED, fundidos y enfriados a 45°. Mediante rotación suave, se favorece la distribución homogénea de la siembra. Se incuban todas las siembras a 37° durante 24 a 48 horas.

y y

y

Los resultados del estudio cuantitativo se informan de la siguiente manera: y y y y No hubo desarrollo microbiano.. La identificación final de los agentes se hace mediante el estudio de sus propiedades bioquímicas y características serológicas. la probabilidad de infección es de 80%. empleando asa de platino calibrada (4 mm. Menos de 10 000 colonias por ml. que conduce a la identificación del agente. se realiza mediante la siembra de la muestra homogeneizada.Para calcular el número de colonias se eligen placas que contengan entre 30 y 300 colonias.01 ml. en placas con agar-sangre. diuresis acentuada. lactobacilos y otros agentes que pueden contaminar la orina. Esta estimación cuantitativa consiste en sembrar una placa con medio de agar-sangre o agar con CLED en una muestra de orina. Así se facilita la identificación de estafilococos. Cuando se obtienen dos recuentos sucesivos con más de 100 000 colonias por ml. Por lo general. si no se toman en cuenta cuentas inferiores a 100 000 colonias por ml. se cuenta el número de colonias desarrolladas y el resultado se multiplica por 100. por una parte. las muestras contaminadas tienden a mostrar cuentas inferiores a 10 000 colonias/ml. ya que existen diversos factores que pueden explicar recuentos bajos en infecciones urinarias verdaderas. b. entre 10 0000 y 100 000 colonias /ml. Su contenido en cisteína y lactosa y su deficiencia en electrolitos facilitan. el reconocimiento de colonias de bacterias y. agar de Levine o MacConkey. Examen cualitativo El estudio cualitativo. bacilos difteromorfos. basta multiplicar su número por la dilución respectiva para obtener la cuenta total. agar-CLED. sin centrifugar. Entre 10 000 y 100 000 colonias por ml. Método del asa calibrada. Cuando el recuento revela valores intermedios. porque favorece el desarrollo de bacterias patógenas urinarias y permite la identificación de los microorganismos contaminados. Más de 100 000 colonias por ml. el examen debe repetirse. Conviene advertir que pueden pasar inadvertidas infecciones urinarias verdaderas. de orina. Es recomendable el medio CLED. infecciones crónicas e infecciones por cocos grampositivos. de diámetro). ya que la asada de platino contiene 0. inhiben el carácter invasor de las colonias de Proteus. Esto permite establecer relaciones de identidad entre microorganismos aislados en cultivos sucesivos o de control. Contadas éstas. cifra que se eleva a 95% si el mismo resultado se logra en tres recuentos sucesivos. y definir el estado de . obstrucción uretral. Después de incubar las siembras a 37° durante 24 a 48 horas. por otra.

en cuyo caso se procede a hacer limpieza de los genitales y a fijar un recolector de orina estéril (especial . II. Sin embargo. REALIZACIÓN DE LA PRÁCTICA A. se concluye que se trata de una misma cepa. la observación de un bacilo gramnegativo por campo microscópico puede realizarse cuando la muestra contiene más de 100 000 bacterias por ml. y la muestra más representativa es la primera orina de la mañana. Son útiles para investigar grandes grupos de personas. reducción de trifeniltetrazolio e hipoglucosuria. y producir muchos falsos negativos. la dificultad de encontrar bacterias en frotis de orina por este método. aunque dicho número permita sospechar recuentos superiores a 100 000 microorganismos por ml. que se pueden poner de manifiesto en la orina. Éste último se obtiene al comparar el antibiograma de cepas aisladas de muestras obtenidas de diferentes oportunidades en un mismo paciente Si existe correspondencia. * Métodos rápidos de diagnóstico. y paciente gravemente enfermos. Existen varios procedimientos prácticos y económicos para el diagnóstico rápido de infecciones urinarias o de bacteriurias significativas. De esto deriva el valor que tiene el conocimiento del biotipo. coli). Esta técnica no es apropiada para niños que no controlan sus esfínteres. El paciente no debe haber recibido tratamiento antimicrobiano durante los tres días anteriores a la recolección. basarse en propiedades metabólicas de las bacterias y no en su desarrollo y observación. TOMA DE LA MUESTRA El método más recomendado para realizar la recogida de muestra para un urocultivo es la toma. ya que la muestra de orina requiere una cuidadosa limpieza de los genitales externos. En efecto. siempre que el paciente sea capaz de limpiarse y recogerla. Esta técnica impone los siguientes requisitos: El paciente debe tener como mínimo de tres a cuatro horas de retención de orina. químicos o de microcultivo. Menos confiable aun es el hallazgo de 20 o más bacterias gramnegativas por campo microscópico de sedimento urinario. Estos métodos. La coloración de un frotis de orina no centrifugada mediante el método de Gram constituye un índice práctico para diferenciar entre infección y contaminación urinarias. Entre las pruebas se pueden mencionar: catalasa. aunque rápidos y económicos. durante el periodo medio de la micción. reducción de nitratos. tienen el inconveniente de ser indirectos. Estos métodos pueden ser microscópicos. exceptuando los casos de control de tratamiento. Los procedimientos químicos están basados en propiedades enzimáticas de las bacterias.revivida o de reinfección. aeruginosa) y del antibiótico. del piocinotipo (en especial cuando es de Ps. del serotipo (particularmente en E. provoca resultados falsos negativos.

Cuando se desean observar las características de las colonias de un microorganismo. Procesamiento de la muestra Una vez se ha obtenido la muestra de orina se homogeneiza en dos partes: Una parte de la muestra va destinada al Examen en Fresco y posterior Tinción. En los pacientes con sonda uretral permanente con drenaje cerrado. previa colocación del envase en un recipiente que contenga cubos de hielo. La poca profundidad de la placa y la extensa superficie de cultivo facilitan el examen macroscópico de las colonias así. En ciertas ocasiones se justifica el sondeo uretral o la aspiración suprapúbica. la muestra debe enviarse de inmediato al laboratorio. como si fuera necesario. No obstante. Se deja en esta posición hasta que el niño realice su micción. suele ser difícil definir si los microorganismos aislados a partir de orina tomada con sonda son de origen urinario o uretral. obliga a realizar el estudio en tres muestras sucesivas de micción espontánea. Se aspira la orina por medio de punción en la sonda con una aguja 21. hay que tener en cuenta que la orina constituye un excelente medio de cultivo para casi todas las bacterias. La alta probabilidad de contaminación en muestras de orina de lactantes. La otra parte va destinada al Urocultivo. En nuestra práctica vamos a realizar en primer lugar una siembra en placa con la muestra de orina. la orina para cultivo se recoge después de desinfectar la pared de la sonda en su punto de unión con el tubo de drenaje. Conservación y/o Transporte En lo que respecta al transporte y conservación de muestras de orina. Debido a la colonización por bacterias de la uretra. existe un pequeño riesgo de infección tras sondeo uretral. Este procedimiento permite que el número de bacterias permanezca relativamente constante por un tiempo considerable. En ningún momento deberá sacarse de la bolsa de drenaje material para cultivo. b. por lo que una vez recogida. A continuación se hace lo mismo en el segundo cuadrante pero en una dirección diferente a la anterior. Empleando un asa estéril se extiende la toma de la muestra a modo de estrías en el primer cuadrante. En el tercer y cuarto cuadrante hacemos lo mismo. las placas de Petri resultan muy adecuadas para tal fin. la observación microscópica de las mismas. . se despeja el recolector y se sella inmediatamente.para bebés). el cual varía según el tipo de paciente. No debe dejarse colocado el recolector por tiempo prolongado. C. Para aislar colonias de modo individualizado el medio en placas de Petri se inocula de la siguiente manera.

los nutrientes básicos son el agar y la peptona. Agar deshidratado 15 g. Peptona 20 g. que neutraliza la sal biliar y absorbe el colorante dando colonias rojizas. Agua destilada 1000 ml. mientras que la lactosa y el indicador (rojo neutro) diferencia los fermentadores de la lactosa de los que no tienen esta capacidad. uno de los medios de cultivo es agar MacConkey y el otro es Agar CLED. En cada cara de la lengüeta hay una medio de cultivo. no toman el rojo neutro y dan lugar a colonias incoloras. EL agar MacConkey es un medio selectivo-diferencial. Los microorganismos que fermentan la lactosa producen ácido láctico. Los microorganismos aislados de orina pueden ser fermentadores o no fermentadores de la lactosa. ClNa (opcional) 5 g.Una vez realizada la extensión de la muestra dejamos incubar la muestra a 37° C durante 24 o 48 horas. En el agar. Composición del agar MacConkey: Taurocolato sódico 5 g. Lactosa 10 g. Solución acuosa rojo neutro al 1% 5-7 ml. Los microorganismos que no fermentan la lactosa dan una reacción alcalina. El medio MacConkey se utiliza para diferenciar los microorganismos intestinales fermentadores de la lactosa de los que no presentan esta propiedad. En nuestro caso. . El taurocolato sódico (sal biliar) inhibe la flora Gram positiva. Se emplean medios diferenciales para distinguir unos de otros. A continuación vamos a hacer un urocultivo en el cuál emplearemos un tubo a cuyo tapón hay unido una lengüeta.

es fácil prepararlos a partir de las cápsulas. Si el germen es resistente al antibiótico. más aún. con el gérmen a estudiar. Preparación de los discos impregnados de antibiótico para realizar un antibiograma. Sin embargo. una placa de un medio de cultivo adecuado. comprimidos grageados o viales de 250 mg ó 500 mg de los antibióticos que expenden en las farmacias. Sobre la superficie del medio se colocan discos de papel impregnados con el antibiótico o quimioterápico a ensayar. . Si el germen estudiado es sensible. y con bastante fiabilidad. Por extensión. en el cual no hay proliferación de bacterias. Método de la difusión en medio sólido Se siembra. se suele incluir el estudio de la sensibilidad a las sulfamidas y otros quimioterápicos. En las casas de productos de laboratorio pueden adquirir se los discos que se emplean para hacer un antibiograma. en torno al disco se observará un halo. en el hecho de que en numerosas especies existen grandes diferencias de sensibilidad a un determinado antibiótico entre unas y otras cepas.ANTIBIOGRAMA Se entiende por antibiograma el estudio de la sensibilidad "in vitro" de las bacterias a los antibióticos. crecerá uniformemente y no habrá ningún halo de inhibición en torno al disco de papel. Utilidad: La razón por la cual es conveniente el estudio del antibiograma de una bacteria determinada radica en el hecho de la diferente sensibilidad a los antibióticos de las distintas especies bacterianas y. El antibiograma es un método de diagnóstico rápido y preciso Con ayuda del antibiograma se puede escoger el antibiótico más adecuado para el tratamiento de una enfermedad. como aprendizaje.

. y sea posible distinguir los halos de inhibición.1 x 0. Repitiendo la operación con cápsulas de distintos antibióticos podremos preparar diferentes discos. el volumen de una gota se pueden colocar en una probeta gra duada 100 gotas calculando el volumen que ocupan. que se acostumbran a tomar de 6. Suponiendo que el volumen hallado para una gota sea de 0.003 ml. aproximadamente.003 nos dará la concentración de antibiótico en mg/ gota. realizando un banco de diluciones. la expresión 0.1 mg/cl ya es adecuada para trabajar. La concentración de 0. Para evaluar.Para que la concentración de antibiótico que impregna los discos no sea ni excesiva ni insuficiente.5 m m de diámetro. De este modo sabremos la concentración de antibiótico con que impregnamos los discos de papel secante. dividiendo por 100 tendremos el volumen que corresponde a una gota. se puede proceder del siguiente modo.

Agar ordinario peptona 15 gr/l NaCl 5gr/l agar 12gr/l Agar nutritivo Agar nutritivo Agar ordinario más 10 gr/1 de glucosa Los medios de cultivo deben estar ajustados a un pH adecuado.2. Alternativamente puede utilizarse una olla a presión adecuada. El agar ordinario y el agar nutritivo a un pH = 7. que puede hacerse a intervalos periódicos. El ajuste se realiza con NaOH y/o HCl en soluciones 1 N y 1/10N. la historia clínica del paciente. Los distintos microorganismos tienen distintas exigencias tanto en los que se refiere al medio nutritivo en sí como a la temperatura de incubación ya las condiciones atmosféricas. de hecho los sólidos son medios de cultivo líquidos a los que se adicionan diferentes sustancias. Los datos que proporciona el antibiograma son muy valiosos pero su aplicación no es tan sencilla. La esterilización de los medios de cultivo se hace generalmente calentándolos en un autoclave a 121° C ya una atmósfera de presión de vapor. . Se acostumbra a hacer antes de la esterilización. no es una medida absoluta de la eficacia. basada en la medi ción del halo de inhibición. el mecanismo de acción del antibiótico. Una vez sembrada una placa de un medio de cultivo adecuado y colocados los distintos discos im pregnados de antibiótico y una vez colocada a incubación en la estufa durante unas horas.Medios de cultivo. a veces. etc. la toxicidad. aunque. se procede a la lectura de los resultados. por tanto. Según la amplitud de este halo los gérmenes se clasifican en: -RESISTENTES -SENSIBLES -MUY SENSIBLES Debe tenerse presente que el diámetro del halo de inhibición depende también de la difusibilidad del antibiótico y. Casi todos los microorganismos pueden cultivarse en medios nutritivos inertes. durante 15-30 minutos. las posibles sensibilizaciones del paciente. Para la prescripción correcta de los antibióticos hay que tener en cuenta siempre la naturaleza del proceso infeccioso. debe hacerse después. Hay medios de cultivo líquidos y sólidos. Lectura del antibiograma. la vía de administración. las más utilizadas son el agar y la gelatina.

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