UROCULTIVO

Varios miembros de las enterobacterias pueden aislarse de la orina en el curso de infecciones del aparato urinario o urogenital, como también en otros tipos de afecciones. La orina vesical normalmente no contiene microorganismos. Sin embargo, los primeros 10 a 15 ml. de orina emitidos por personas normales de cualquier edad o sexo, siempre presentan bacterias, las que proceden de la flora corriente de la uretra anterior, prepucio, región vulvovaginal o de contaminación fecal. La flora de estas localizaciones es variada y está constituida por estafilococos coagulasa-positivo y negativos, estreptococos diversos, bacilos difteromorfos, enterobacterias, lactobacilos, micoplasmas, bacterias anaerobias, levaduras y muchos microorganismos. En la presencia de esta flora influyen localización anatómica, sexo, edad, hábitos de higiene y factores patológicos propios del huésped. En la etiología de las infecciones urinarias predominan los bacilos gramnegativos. Los procesos agudos y crónicos son provocados por E. coli y por especies de los géneros Enterobacter, Proteus, Citrobacter, Pseudomonas, Serratia, etc. De estos agentes, E. coli se aísla en 80% de los casos. Ps.aeruginosa y S.marcescens se identifican en pacientes hospitalizados, muy debilitados o sometidos a instrumentación repetida. Con bastante menor frecuencia desempeña un papel causal Streptococcus faecalis (enterococo) y excepcionalmente los estafilococos. El examen microbiológico de una muestra de orina se denomina Urocultivo. Éste se ha de hacer desde un punto cuantitativo y cualitativo.

A. Examen cuantitativo
Método de conteo en placa o recuento de colonias. Introducido por Kaas para evitar los riesgos del cateterismo vesical y diferenciar bacteriuria verdadera de contaminación, se realiza de la siguiente manera:
y y

Se homogeneiza la muestra mediante agitación. Se diluye la muestra al 1:100, colocando 0.1 ml. de orina en 9.9 ml. de caldo de tripticasa o de suero fisiológico, estériles. Se preparan diluciones al 1:1000 y 1:10 000, a partir de la dilución al 1:100. Se deposita 1 ml. de cada dilución en placas de Petri esterilizadas, sobre las cuales se vacía un tubo de agar-tripticasa o medio CLED, fundidos y enfriados a 45°. Mediante rotación suave, se favorece la distribución homogénea de la siembra. Se incuban todas las siembras a 37° durante 24 a 48 horas.

y y

y

cifra que se eleva a 95% si el mismo resultado se logra en tres recuentos sucesivos. Es recomendable el medio CLED. que conduce a la identificación del agente. agar de Levine o MacConkey. de orina. porque favorece el desarrollo de bacterias patógenas urinarias y permite la identificación de los microorganismos contaminados. agar-CLED. si no se toman en cuenta cuentas inferiores a 100 000 colonias por ml. Más de 100 000 colonias por ml. Esto permite establecer relaciones de identidad entre microorganismos aislados en cultivos sucesivos o de control. entre 10 0000 y 100 000 colonias /ml. Cuando se obtienen dos recuentos sucesivos con más de 100 000 colonias por ml. Después de incubar las siembras a 37° durante 24 a 48 horas. Contadas éstas. basta multiplicar su número por la dilución respectiva para obtener la cuenta total. se cuenta el número de colonias desarrolladas y el resultado se multiplica por 100. Su contenido en cisteína y lactosa y su deficiencia en electrolitos facilitan. de diámetro). Por lo general. por otra. las muestras contaminadas tienden a mostrar cuentas inferiores a 10 000 colonias/ml. Examen cualitativo El estudio cualitativo. empleando asa de platino calibrada (4 mm. Cuando el recuento revela valores intermedios. bacilos difteromorfos. obstrucción uretral. Entre 10 000 y 100 000 colonias por ml. Esta estimación cuantitativa consiste en sembrar una placa con medio de agar-sangre o agar con CLED en una muestra de orina. Los resultados del estudio cuantitativo se informan de la siguiente manera: y y y y No hubo desarrollo microbiano. lactobacilos y otros agentes que pueden contaminar la orina. el reconocimiento de colonias de bacterias y.. la probabilidad de infección es de 80%. y definir el estado de . por una parte.01 ml. Conviene advertir que pueden pasar inadvertidas infecciones urinarias verdaderas. se realiza mediante la siembra de la muestra homogeneizada. Método del asa calibrada. en placas con agar-sangre. inhiben el carácter invasor de las colonias de Proteus.Para calcular el número de colonias se eligen placas que contengan entre 30 y 300 colonias. b. infecciones crónicas e infecciones por cocos grampositivos. ya que la asada de platino contiene 0. Así se facilita la identificación de estafilococos. Menos de 10 000 colonias por ml. ya que existen diversos factores que pueden explicar recuentos bajos en infecciones urinarias verdaderas. el examen debe repetirse. diuresis acentuada. sin centrifugar. La identificación final de los agentes se hace mediante el estudio de sus propiedades bioquímicas y características serológicas.

siempre que el paciente sea capaz de limpiarse y recogerla. Menos confiable aun es el hallazgo de 20 o más bacterias gramnegativas por campo microscópico de sedimento urinario. del piocinotipo (en especial cuando es de Ps. la dificultad de encontrar bacterias en frotis de orina por este método. Estos métodos. y la muestra más representativa es la primera orina de la mañana. coli). II. que se pueden poner de manifiesto en la orina. del serotipo (particularmente en E. aeruginosa) y del antibiótico. reducción de trifeniltetrazolio e hipoglucosuria. El paciente no debe haber recibido tratamiento antimicrobiano durante los tres días anteriores a la recolección. exceptuando los casos de control de tratamiento. En efecto. aunque dicho número permita sospechar recuentos superiores a 100 000 microorganismos por ml. aunque rápidos y económicos. en cuyo caso se procede a hacer limpieza de los genitales y a fijar un recolector de orina estéril (especial . durante el periodo medio de la micción. Entre las pruebas se pueden mencionar: catalasa. basarse en propiedades metabólicas de las bacterias y no en su desarrollo y observación. se concluye que se trata de una misma cepa. y producir muchos falsos negativos. Éste último se obtiene al comparar el antibiograma de cepas aisladas de muestras obtenidas de diferentes oportunidades en un mismo paciente Si existe correspondencia. Son útiles para investigar grandes grupos de personas. Esta técnica no es apropiada para niños que no controlan sus esfínteres. ya que la muestra de orina requiere una cuidadosa limpieza de los genitales externos. TOMA DE LA MUESTRA El método más recomendado para realizar la recogida de muestra para un urocultivo es la toma. REALIZACIÓN DE LA PRÁCTICA A. reducción de nitratos. De esto deriva el valor que tiene el conocimiento del biotipo. Estos métodos pueden ser microscópicos. tienen el inconveniente de ser indirectos. provoca resultados falsos negativos. Existen varios procedimientos prácticos y económicos para el diagnóstico rápido de infecciones urinarias o de bacteriurias significativas. y paciente gravemente enfermos. Esta técnica impone los siguientes requisitos: El paciente debe tener como mínimo de tres a cuatro horas de retención de orina. la observación de un bacilo gramnegativo por campo microscópico puede realizarse cuando la muestra contiene más de 100 000 bacterias por ml. Los procedimientos químicos están basados en propiedades enzimáticas de las bacterias. * Métodos rápidos de diagnóstico.revivida o de reinfección. químicos o de microcultivo. Sin embargo. La coloración de un frotis de orina no centrifugada mediante el método de Gram constituye un índice práctico para diferenciar entre infección y contaminación urinarias.

Conservación y/o Transporte En lo que respecta al transporte y conservación de muestras de orina. se despeja el recolector y se sella inmediatamente. suele ser difícil definir si los microorganismos aislados a partir de orina tomada con sonda son de origen urinario o uretral. como si fuera necesario. la muestra debe enviarse de inmediato al laboratorio. por lo que una vez recogida. En ciertas ocasiones se justifica el sondeo uretral o la aspiración suprapúbica. la orina para cultivo se recoge después de desinfectar la pared de la sonda en su punto de unión con el tubo de drenaje. En ningún momento deberá sacarse de la bolsa de drenaje material para cultivo. La otra parte va destinada al Urocultivo. La poca profundidad de la placa y la extensa superficie de cultivo facilitan el examen macroscópico de las colonias así. . Empleando un asa estéril se extiende la toma de la muestra a modo de estrías en el primer cuadrante. No debe dejarse colocado el recolector por tiempo prolongado. Procesamiento de la muestra Una vez se ha obtenido la muestra de orina se homogeneiza en dos partes: Una parte de la muestra va destinada al Examen en Fresco y posterior Tinción. Para aislar colonias de modo individualizado el medio en placas de Petri se inocula de la siguiente manera. Se deja en esta posición hasta que el niño realice su micción. previa colocación del envase en un recipiente que contenga cubos de hielo. b. obliga a realizar el estudio en tres muestras sucesivas de micción espontánea. La alta probabilidad de contaminación en muestras de orina de lactantes. hay que tener en cuenta que la orina constituye un excelente medio de cultivo para casi todas las bacterias. Este procedimiento permite que el número de bacterias permanezca relativamente constante por un tiempo considerable.para bebés). En nuestra práctica vamos a realizar en primer lugar una siembra en placa con la muestra de orina. A continuación se hace lo mismo en el segundo cuadrante pero en una dirección diferente a la anterior. la observación microscópica de las mismas. No obstante. En los pacientes con sonda uretral permanente con drenaje cerrado. En el tercer y cuarto cuadrante hacemos lo mismo. C. Cuando se desean observar las características de las colonias de un microorganismo. existe un pequeño riesgo de infección tras sondeo uretral. Se aspira la orina por medio de punción en la sonda con una aguja 21. las placas de Petri resultan muy adecuadas para tal fin. Debido a la colonización por bacterias de la uretra. el cual varía según el tipo de paciente.

Los microorganismos que fermentan la lactosa producen ácido láctico. uno de los medios de cultivo es agar MacConkey y el otro es Agar CLED. En el agar. A continuación vamos a hacer un urocultivo en el cuál emplearemos un tubo a cuyo tapón hay unido una lengüeta. mientras que la lactosa y el indicador (rojo neutro) diferencia los fermentadores de la lactosa de los que no tienen esta capacidad. El medio MacConkey se utiliza para diferenciar los microorganismos intestinales fermentadores de la lactosa de los que no presentan esta propiedad. Agar deshidratado 15 g. El taurocolato sódico (sal biliar) inhibe la flora Gram positiva. que neutraliza la sal biliar y absorbe el colorante dando colonias rojizas. En cada cara de la lengüeta hay una medio de cultivo. En nuestro caso. ClNa (opcional) 5 g. Los microorganismos que no fermentan la lactosa dan una reacción alcalina. . no toman el rojo neutro y dan lugar a colonias incoloras. Lactosa 10 g. Solución acuosa rojo neutro al 1% 5-7 ml. los nutrientes básicos son el agar y la peptona. Se emplean medios diferenciales para distinguir unos de otros. EL agar MacConkey es un medio selectivo-diferencial. Composición del agar MacConkey: Taurocolato sódico 5 g. Los microorganismos aislados de orina pueden ser fermentadores o no fermentadores de la lactosa. Agua destilada 1000 ml.Una vez realizada la extensión de la muestra dejamos incubar la muestra a 37° C durante 24 o 48 horas. Peptona 20 g.

es fácil prepararlos a partir de las cápsulas. crecerá uniformemente y no habrá ningún halo de inhibición en torno al disco de papel. comprimidos grageados o viales de 250 mg ó 500 mg de los antibióticos que expenden en las farmacias. El antibiograma es un método de diagnóstico rápido y preciso Con ayuda del antibiograma se puede escoger el antibiótico más adecuado para el tratamiento de una enfermedad. Por extensión.ANTIBIOGRAMA Se entiende por antibiograma el estudio de la sensibilidad "in vitro" de las bacterias a los antibióticos. Preparación de los discos impregnados de antibiótico para realizar un antibiograma. en el hecho de que en numerosas especies existen grandes diferencias de sensibilidad a un determinado antibiótico entre unas y otras cepas. y con bastante fiabilidad. con el gérmen a estudiar. en el cual no hay proliferación de bacterias. . En las casas de productos de laboratorio pueden adquirir se los discos que se emplean para hacer un antibiograma. Utilidad: La razón por la cual es conveniente el estudio del antibiograma de una bacteria determinada radica en el hecho de la diferente sensibilidad a los antibióticos de las distintas especies bacterianas y. en torno al disco se observará un halo. una placa de un medio de cultivo adecuado. Sobre la superficie del medio se colocan discos de papel impregnados con el antibiótico o quimioterápico a ensayar. más aún. Método de la difusión en medio sólido Se siembra. Si el germen es resistente al antibiótico. se suele incluir el estudio de la sensibilidad a las sulfamidas y otros quimioterápicos. Si el germen estudiado es sensible. Sin embargo. como aprendizaje.

1 mg/cl ya es adecuada para trabajar. De este modo sabremos la concentración de antibiótico con que impregnamos los discos de papel secante. realizando un banco de diluciones. y sea posible distinguir los halos de inhibición. se puede proceder del siguiente modo. La concentración de 0.003 ml. Para evaluar. .5 m m de diámetro. Repitiendo la operación con cápsulas de distintos antibióticos podremos preparar diferentes discos. que se acostumbran a tomar de 6. la expresión 0.003 nos dará la concentración de antibiótico en mg/ gota. Suponiendo que el volumen hallado para una gota sea de 0.1 x 0. aproximadamente.Para que la concentración de antibiótico que impregna los discos no sea ni excesiva ni insuficiente. dividiendo por 100 tendremos el volumen que corresponde a una gota. el volumen de una gota se pueden colocar en una probeta gra duada 100 gotas calculando el volumen que ocupan.

La esterilización de los medios de cultivo se hace generalmente calentándolos en un autoclave a 121° C ya una atmósfera de presión de vapor. por tanto. Agar ordinario peptona 15 gr/l NaCl 5gr/l agar 12gr/l Agar nutritivo Agar nutritivo Agar ordinario más 10 gr/1 de glucosa Los medios de cultivo deben estar ajustados a un pH adecuado. Según la amplitud de este halo los gérmenes se clasifican en: -RESISTENTES -SENSIBLES -MUY SENSIBLES Debe tenerse presente que el diámetro del halo de inhibición depende también de la difusibilidad del antibiótico y. Se acostumbra a hacer antes de la esterilización.Medios de cultivo. que puede hacerse a intervalos periódicos. El agar ordinario y el agar nutritivo a un pH = 7. basada en la medi ción del halo de inhibición. . Para la prescripción correcta de los antibióticos hay que tener en cuenta siempre la naturaleza del proceso infeccioso. no es una medida absoluta de la eficacia. el mecanismo de acción del antibiótico. Lectura del antibiograma.2. se procede a la lectura de los resultados. las más utilizadas son el agar y la gelatina. debe hacerse después. Una vez sembrada una placa de un medio de cultivo adecuado y colocados los distintos discos im pregnados de antibiótico y una vez colocada a incubación en la estufa durante unas horas. de hecho los sólidos son medios de cultivo líquidos a los que se adicionan diferentes sustancias. Los datos que proporciona el antibiograma son muy valiosos pero su aplicación no es tan sencilla. Casi todos los microorganismos pueden cultivarse en medios nutritivos inertes. etc. El ajuste se realiza con NaOH y/o HCl en soluciones 1 N y 1/10N. Alternativamente puede utilizarse una olla a presión adecuada. Los distintos microorganismos tienen distintas exigencias tanto en los que se refiere al medio nutritivo en sí como a la temperatura de incubación ya las condiciones atmosféricas. aunque. a veces. Hay medios de cultivo líquidos y sólidos. la toxicidad. durante 15-30 minutos. la vía de administración. las posibles sensibilizaciones del paciente. la historia clínica del paciente.

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