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urocultivo y antibiograma

urocultivo y antibiograma

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UROCULTIVO

Varios miembros de las enterobacterias pueden aislarse de la orina en el curso de infecciones del aparato urinario o urogenital, como también en otros tipos de afecciones. La orina vesical normalmente no contiene microorganismos. Sin embargo, los primeros 10 a 15 ml. de orina emitidos por personas normales de cualquier edad o sexo, siempre presentan bacterias, las que proceden de la flora corriente de la uretra anterior, prepucio, región vulvovaginal o de contaminación fecal. La flora de estas localizaciones es variada y está constituida por estafilococos coagulasa-positivo y negativos, estreptococos diversos, bacilos difteromorfos, enterobacterias, lactobacilos, micoplasmas, bacterias anaerobias, levaduras y muchos microorganismos. En la presencia de esta flora influyen localización anatómica, sexo, edad, hábitos de higiene y factores patológicos propios del huésped. En la etiología de las infecciones urinarias predominan los bacilos gramnegativos. Los procesos agudos y crónicos son provocados por E. coli y por especies de los géneros Enterobacter, Proteus, Citrobacter, Pseudomonas, Serratia, etc. De estos agentes, E. coli se aísla en 80% de los casos. Ps.aeruginosa y S.marcescens se identifican en pacientes hospitalizados, muy debilitados o sometidos a instrumentación repetida. Con bastante menor frecuencia desempeña un papel causal Streptococcus faecalis (enterococo) y excepcionalmente los estafilococos. El examen microbiológico de una muestra de orina se denomina Urocultivo. Éste se ha de hacer desde un punto cuantitativo y cualitativo.

A. Examen cuantitativo
Método de conteo en placa o recuento de colonias. Introducido por Kaas para evitar los riesgos del cateterismo vesical y diferenciar bacteriuria verdadera de contaminación, se realiza de la siguiente manera:
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Se homogeneiza la muestra mediante agitación. Se diluye la muestra al 1:100, colocando 0.1 ml. de orina en 9.9 ml. de caldo de tripticasa o de suero fisiológico, estériles. Se preparan diluciones al 1:1000 y 1:10 000, a partir de la dilución al 1:100. Se deposita 1 ml. de cada dilución en placas de Petri esterilizadas, sobre las cuales se vacía un tubo de agar-tripticasa o medio CLED, fundidos y enfriados a 45°. Mediante rotación suave, se favorece la distribución homogénea de la siembra. Se incuban todas las siembras a 37° durante 24 a 48 horas.

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Contadas éstas. La identificación final de los agentes se hace mediante el estudio de sus propiedades bioquímicas y características serológicas. y definir el estado de . el reconocimiento de colonias de bacterias y. la probabilidad de infección es de 80%. agar de Levine o MacConkey. sin centrifugar. Menos de 10 000 colonias por ml. Conviene advertir que pueden pasar inadvertidas infecciones urinarias verdaderas. Esta estimación cuantitativa consiste en sembrar una placa con medio de agar-sangre o agar con CLED en una muestra de orina. diuresis acentuada. que conduce a la identificación del agente. ya que la asada de platino contiene 0. basta multiplicar su número por la dilución respectiva para obtener la cuenta total. si no se toman en cuenta cuentas inferiores a 100 000 colonias por ml. Más de 100 000 colonias por ml. Examen cualitativo El estudio cualitativo. inhiben el carácter invasor de las colonias de Proteus. Es recomendable el medio CLED. infecciones crónicas e infecciones por cocos grampositivos. de orina. lactobacilos y otros agentes que pueden contaminar la orina. Por lo general. por otra. ya que existen diversos factores que pueden explicar recuentos bajos en infecciones urinarias verdaderas. Método del asa calibrada. Los resultados del estudio cuantitativo se informan de la siguiente manera: y y y y No hubo desarrollo microbiano. el examen debe repetirse. las muestras contaminadas tienden a mostrar cuentas inferiores a 10 000 colonias/ml. porque favorece el desarrollo de bacterias patógenas urinarias y permite la identificación de los microorganismos contaminados.. en placas con agar-sangre. Cuando el recuento revela valores intermedios. agar-CLED. Así se facilita la identificación de estafilococos.01 ml. se cuenta el número de colonias desarrolladas y el resultado se multiplica por 100. se realiza mediante la siembra de la muestra homogeneizada. bacilos difteromorfos. Su contenido en cisteína y lactosa y su deficiencia en electrolitos facilitan. obstrucción uretral. Entre 10 000 y 100 000 colonias por ml. b. empleando asa de platino calibrada (4 mm. de diámetro). Después de incubar las siembras a 37° durante 24 a 48 horas. por una parte. Esto permite establecer relaciones de identidad entre microorganismos aislados en cultivos sucesivos o de control.Para calcular el número de colonias se eligen placas que contengan entre 30 y 300 colonias. Cuando se obtienen dos recuentos sucesivos con más de 100 000 colonias por ml. entre 10 0000 y 100 000 colonias /ml. cifra que se eleva a 95% si el mismo resultado se logra en tres recuentos sucesivos.

en cuyo caso se procede a hacer limpieza de los genitales y a fijar un recolector de orina estéril (especial . y la muestra más representativa es la primera orina de la mañana. y paciente gravemente enfermos. La coloración de un frotis de orina no centrifugada mediante el método de Gram constituye un índice práctico para diferenciar entre infección y contaminación urinarias. TOMA DE LA MUESTRA El método más recomendado para realizar la recogida de muestra para un urocultivo es la toma.revivida o de reinfección. basarse en propiedades metabólicas de las bacterias y no en su desarrollo y observación. REALIZACIÓN DE LA PRÁCTICA A. que se pueden poner de manifiesto en la orina. Los procedimientos químicos están basados en propiedades enzimáticas de las bacterias. II. del piocinotipo (en especial cuando es de Ps. En efecto. se concluye que se trata de una misma cepa. aunque dicho número permita sospechar recuentos superiores a 100 000 microorganismos por ml. ya que la muestra de orina requiere una cuidadosa limpieza de los genitales externos. exceptuando los casos de control de tratamiento. reducción de trifeniltetrazolio e hipoglucosuria. Son útiles para investigar grandes grupos de personas. coli). provoca resultados falsos negativos. la observación de un bacilo gramnegativo por campo microscópico puede realizarse cuando la muestra contiene más de 100 000 bacterias por ml. Menos confiable aun es el hallazgo de 20 o más bacterias gramnegativas por campo microscópico de sedimento urinario. aunque rápidos y económicos. tienen el inconveniente de ser indirectos. y producir muchos falsos negativos. del serotipo (particularmente en E. la dificultad de encontrar bacterias en frotis de orina por este método. Existen varios procedimientos prácticos y económicos para el diagnóstico rápido de infecciones urinarias o de bacteriurias significativas. Esta técnica no es apropiada para niños que no controlan sus esfínteres. aeruginosa) y del antibiótico. reducción de nitratos. Esta técnica impone los siguientes requisitos: El paciente debe tener como mínimo de tres a cuatro horas de retención de orina. Estos métodos. Sin embargo. De esto deriva el valor que tiene el conocimiento del biotipo. Estos métodos pueden ser microscópicos. Entre las pruebas se pueden mencionar: catalasa. * Métodos rápidos de diagnóstico. siempre que el paciente sea capaz de limpiarse y recogerla. durante el periodo medio de la micción. El paciente no debe haber recibido tratamiento antimicrobiano durante los tres días anteriores a la recolección. químicos o de microcultivo. Éste último se obtiene al comparar el antibiograma de cepas aisladas de muestras obtenidas de diferentes oportunidades en un mismo paciente Si existe correspondencia.

A continuación se hace lo mismo en el segundo cuadrante pero en una dirección diferente a la anterior. Cuando se desean observar las características de las colonias de un microorganismo. las placas de Petri resultan muy adecuadas para tal fin. En los pacientes con sonda uretral permanente con drenaje cerrado. la observación microscópica de las mismas. como si fuera necesario. Se deja en esta posición hasta que el niño realice su micción. C. Para aislar colonias de modo individualizado el medio en placas de Petri se inocula de la siguiente manera. La otra parte va destinada al Urocultivo. Este procedimiento permite que el número de bacterias permanezca relativamente constante por un tiempo considerable. la orina para cultivo se recoge después de desinfectar la pared de la sonda en su punto de unión con el tubo de drenaje. se despeja el recolector y se sella inmediatamente. En ningún momento deberá sacarse de la bolsa de drenaje material para cultivo. Empleando un asa estéril se extiende la toma de la muestra a modo de estrías en el primer cuadrante. En nuestra práctica vamos a realizar en primer lugar una siembra en placa con la muestra de orina. Conservación y/o Transporte En lo que respecta al transporte y conservación de muestras de orina. En ciertas ocasiones se justifica el sondeo uretral o la aspiración suprapúbica. suele ser difícil definir si los microorganismos aislados a partir de orina tomada con sonda son de origen urinario o uretral. No debe dejarse colocado el recolector por tiempo prolongado. No obstante. b. La alta probabilidad de contaminación en muestras de orina de lactantes. obliga a realizar el estudio en tres muestras sucesivas de micción espontánea. Procesamiento de la muestra Una vez se ha obtenido la muestra de orina se homogeneiza en dos partes: Una parte de la muestra va destinada al Examen en Fresco y posterior Tinción. hay que tener en cuenta que la orina constituye un excelente medio de cultivo para casi todas las bacterias.para bebés). La poca profundidad de la placa y la extensa superficie de cultivo facilitan el examen macroscópico de las colonias así. la muestra debe enviarse de inmediato al laboratorio. existe un pequeño riesgo de infección tras sondeo uretral. Debido a la colonización por bacterias de la uretra. En el tercer y cuarto cuadrante hacemos lo mismo. el cual varía según el tipo de paciente. por lo que una vez recogida. Se aspira la orina por medio de punción en la sonda con una aguja 21. . previa colocación del envase en un recipiente que contenga cubos de hielo.

Se emplean medios diferenciales para distinguir unos de otros. Solución acuosa rojo neutro al 1% 5-7 ml.Una vez realizada la extensión de la muestra dejamos incubar la muestra a 37° C durante 24 o 48 horas. uno de los medios de cultivo es agar MacConkey y el otro es Agar CLED. ClNa (opcional) 5 g. Los microorganismos aislados de orina pueden ser fermentadores o no fermentadores de la lactosa. . El medio MacConkey se utiliza para diferenciar los microorganismos intestinales fermentadores de la lactosa de los que no presentan esta propiedad. Lactosa 10 g. Peptona 20 g. que neutraliza la sal biliar y absorbe el colorante dando colonias rojizas. EL agar MacConkey es un medio selectivo-diferencial. Agua destilada 1000 ml. Los microorganismos que fermentan la lactosa producen ácido láctico. no toman el rojo neutro y dan lugar a colonias incoloras. Los microorganismos que no fermentan la lactosa dan una reacción alcalina. Agar deshidratado 15 g. Composición del agar MacConkey: Taurocolato sódico 5 g. A continuación vamos a hacer un urocultivo en el cuál emplearemos un tubo a cuyo tapón hay unido una lengüeta. En cada cara de la lengüeta hay una medio de cultivo. En el agar. El taurocolato sódico (sal biliar) inhibe la flora Gram positiva. En nuestro caso. los nutrientes básicos son el agar y la peptona. mientras que la lactosa y el indicador (rojo neutro) diferencia los fermentadores de la lactosa de los que no tienen esta capacidad.

. en el hecho de que en numerosas especies existen grandes diferencias de sensibilidad a un determinado antibiótico entre unas y otras cepas. con el gérmen a estudiar. Método de la difusión en medio sólido Se siembra. Sin embargo. En las casas de productos de laboratorio pueden adquirir se los discos que se emplean para hacer un antibiograma. es fácil prepararlos a partir de las cápsulas. comprimidos grageados o viales de 250 mg ó 500 mg de los antibióticos que expenden en las farmacias. crecerá uniformemente y no habrá ningún halo de inhibición en torno al disco de papel. El antibiograma es un método de diagnóstico rápido y preciso Con ayuda del antibiograma se puede escoger el antibiótico más adecuado para el tratamiento de una enfermedad. en torno al disco se observará un halo. Si el germen estudiado es sensible.ANTIBIOGRAMA Se entiende por antibiograma el estudio de la sensibilidad "in vitro" de las bacterias a los antibióticos. y con bastante fiabilidad. más aún. Preparación de los discos impregnados de antibiótico para realizar un antibiograma. en el cual no hay proliferación de bacterias. Si el germen es resistente al antibiótico. una placa de un medio de cultivo adecuado. como aprendizaje. se suele incluir el estudio de la sensibilidad a las sulfamidas y otros quimioterápicos. Utilidad: La razón por la cual es conveniente el estudio del antibiograma de una bacteria determinada radica en el hecho de la diferente sensibilidad a los antibióticos de las distintas especies bacterianas y. Sobre la superficie del medio se colocan discos de papel impregnados con el antibiótico o quimioterápico a ensayar. Por extensión.

La concentración de 0.003 nos dará la concentración de antibiótico en mg/ gota.1 mg/cl ya es adecuada para trabajar. y sea posible distinguir los halos de inhibición. De este modo sabremos la concentración de antibiótico con que impregnamos los discos de papel secante. la expresión 0.003 ml.Para que la concentración de antibiótico que impregna los discos no sea ni excesiva ni insuficiente. Para evaluar. aproximadamente. se puede proceder del siguiente modo. Suponiendo que el volumen hallado para una gota sea de 0. que se acostumbran a tomar de 6.5 m m de diámetro. dividiendo por 100 tendremos el volumen que corresponde a una gota.1 x 0. Repitiendo la operación con cápsulas de distintos antibióticos podremos preparar diferentes discos. . el volumen de una gota se pueden colocar en una probeta gra duada 100 gotas calculando el volumen que ocupan. realizando un banco de diluciones.

basada en la medi ción del halo de inhibición.Medios de cultivo. Hay medios de cultivo líquidos y sólidos. Alternativamente puede utilizarse una olla a presión adecuada. no es una medida absoluta de la eficacia. El agar ordinario y el agar nutritivo a un pH = 7. El ajuste se realiza con NaOH y/o HCl en soluciones 1 N y 1/10N. Una vez sembrada una placa de un medio de cultivo adecuado y colocados los distintos discos im pregnados de antibiótico y una vez colocada a incubación en la estufa durante unas horas. La esterilización de los medios de cultivo se hace generalmente calentándolos en un autoclave a 121° C ya una atmósfera de presión de vapor. se procede a la lectura de los resultados. Los datos que proporciona el antibiograma son muy valiosos pero su aplicación no es tan sencilla. Se acostumbra a hacer antes de la esterilización. las posibles sensibilizaciones del paciente. el mecanismo de acción del antibiótico. a veces. Casi todos los microorganismos pueden cultivarse en medios nutritivos inertes. Según la amplitud de este halo los gérmenes se clasifican en: -RESISTENTES -SENSIBLES -MUY SENSIBLES Debe tenerse presente que el diámetro del halo de inhibición depende también de la difusibilidad del antibiótico y. Los distintos microorganismos tienen distintas exigencias tanto en los que se refiere al medio nutritivo en sí como a la temperatura de incubación ya las condiciones atmosféricas. la toxicidad. durante 15-30 minutos. la historia clínica del paciente. que puede hacerse a intervalos periódicos. etc. Para la prescripción correcta de los antibióticos hay que tener en cuenta siempre la naturaleza del proceso infeccioso. Agar ordinario peptona 15 gr/l NaCl 5gr/l agar 12gr/l Agar nutritivo Agar nutritivo Agar ordinario más 10 gr/1 de glucosa Los medios de cultivo deben estar ajustados a un pH adecuado. las más utilizadas son el agar y la gelatina. debe hacerse después. aunque. por tanto. la vía de administración. de hecho los sólidos son medios de cultivo líquidos a los que se adicionan diferentes sustancias. Lectura del antibiograma.2. .

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