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FACULTAD DE AGRONOMÍA
MANUAL DE
PRACTICA PARA
BIOQUÍMICA.
ÁREA DE CIENCIAS
SUB ÁREA DE CIENCIAS QUÍMICAS
ÍNDICE ..................................................................................................................................................................... 2
REUNIÓN DE INFORMACIÓN GENERAL DEL LABORATORIO DE BIOQUÍMICA ............................... 5
1. INTRODUCCIÓN ...................................................................................................................................................... 5
2. OBJETIVOS ................................................................................................................................................................ 5
3. MATERIALES ........................................................................................................................................................... 6
4. METODOLOGÍA ....................................................................................................................................................... 6
PRACTICA No. 1 SELECCIÓN DE LA MUESTRA VEGETAL A TRABAJAR EN EL LABORATORIO .. 7
1. INTRODUCCIÓN ...................................................................................................................................................... 7
2. OBJETIVOS ................................................................................................................................................................ 7
3. MATERIAL DE APOYO LAS BIOMOLÉCULA ................................................................................................. 8
4. CUESTIONARIO PRE LABORATORIO .......................................................................................................... 13
5. MATERIALES ........................................................................................................................................................ 15
6. METODOLOGÍA .................................................................................................................................................... 15
7. EVALUACIÓN DE LA PRÁCTICA .................................................................................................................... 16
PRÁCTICA 2. PREPARACIÓN DE MUESTRAS VEGETALES PARA ANÁLISIS QUÍMICO SECADO,
MOLIDO Y TAMIZADO DE MUESTRAS VEGETALES ............................................................................... 17
1. INTRODUCCIÓN .................................................................................................................................................. 17
2. OBJETIVOS ............................................................................................................................................................. 17
3. MARCO TEÓRICO ................................................................................................................................................ 18
4. CUESTIONARIO PRE LABORATORIO PRÁCTICA 2 .................................................................................. 21
5. MATERIALES ........................................................................................................................................................ 22
6. METODOLOGÍA .................................................................................................................................................... 23
7. EVALUACIÓN DE LA PRÁCTICA .................................................................................................................... 24
8. PARA INCLUIR EN EL REPORTE DE PRÁCTICA: ..................................................................................... 24
9. INVESTIGAR .......................................................................................................................................................... 24
PRÁCTICA No. 3 EXTRACCIÓN Y ESTUDIO CUALITATIVO DE PROTEÍNAS EN MUESTRAS
VEGETALES......................................................................................................................................................... 25
1. INTRODUCCIÓN ................................................................................................................................................... 25
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2. OBJETIVOS ............................................................................................................................................................. 25
3. MARCO TEÓRICO. ............................................................................................................................................... 26
4. CUESTIONARIO PRE LABORATORIO PRÁCTICA 3 ................................................................................ 31
5. MATERIALES ........................................................................................................................................................ 32
6. METODOLOGÍA ................................................................................................................................................... 33
7. EVALUACIÓN DE LA PRÁCTICA .................................................................................................................... 36
8. PARA INCLUIR EN EL INFORME EN LA DISCUSIÓN.............................................................................. 37
PRÁCTICA 4 ESTUDIO DE AMINOÁCIDOS DE MUESTRA VEGETALES............................................. 38
1. INTRODUCCIÓN ................................................................................................................................................... 38
2. OBJETIVOS: ............................................................................................................................................................ 38
3. MARCO TEÓRICO. ............................................................................................................................................... 39
4. CUESTIONARIO PRE LABORATORIO PRÁCTICA 4 ................................................................................ 45
5. MATERIALES ........................................................................................................................................................ 47
6. METODOLOGÍA. ................................................................................................................................................... 48
7. PARA INCLUIR EN EL INFORME DE PRÁCTICA: ..................................................................................... 53
8. EVALUACIÓN DE LA PRÁCTICA .................................................................................................................... 54
9. RESULTADOS Y ANÁLISIS DE RESULTADOS PARA EL REPORTE ................................................... 54
PRÁCTICA No. 5 ESTUDIO DE AMINOÁCIDOS, CROMATOGRAFÍA DE AMINOÁCIDOS Y
ESPECTROFOTOMETRÍA. .............................................................................................................................. 56
1. INTRODUCCIÓN ................................................................................................................................................... 56
2. OBJETIVOS ............................................................................................................................................................. 56
3. MATERIAL DE APOYO CROMATOGRAFÍA (11)....................................................................................... 57
4. CUESTIONARIO PRE LABORATORIO PRÁCTICA 5 ................................................................................ 64
5. MATERIALES DE LA PRÁCTICA V ................................................................................................................. 65
6. METODOLOGÍA .................................................................................................................................................... 66
7. PARA INCLUIR EN EL INFORME DE PRÁCTICA: ..................................................................................... 72
Práctica No. 6 EXTRACCIÓN DE GLÚCIDOS DE MUESTRAS VEGETALES ........................................ 75
1. INTRODUCCIÓN ................................................................................................................................................... 75
2. OBJETIVOS ............................................................................................................................................................. 75
3. MATERIALES ........................................................................................................................................................ 76
4. METODOLOGÍA .................................................................................................................................................... 77
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1. INTRODUCCIÓN
Para iniciar el Laboratorio de Bioquímica, se plantea esta primera reunión, de carácter obligatorio,
para enterar a los estudiantes de las disposiciones generales que aquí deberán cumplirse. Esta es
una parte del laboratorio que el estudiante suele obviar, pero que, por la trascendencia de la
misma, se plantea como parle de la asistencia.
Además de lo antes dicho, puede aprovecharse la reunión para que el estudiante conozca a su
instructor dé laboratorio y viceversa, con la finalidad de que se cimienten las bases de una buena
comunicación sobre la cual pueda edificarse el conocimiento.
2. OBJETIVOS
2.1. GENERAL
Informar a los estudiantes de las disposiciones generales del laboratorio de Bioquímica.
2.2. ESPECÍFICOS:
Revisar el contenido del programa de Laboratorio de Bioquímica.
Revisar el reglamento de Laboratorio de Bioquímica.
Revisar las normas de cuidado de materiales dentro del laboratorio.
Dar lectura a los "aspectos a considerar para el buen uso del Manual de prácticas de
bioquímica.
Ampliar la información antes revisada, o bien aclarar aquellas dudas que el estudiante
pudiese tener sobre algún tópico de la información general del Laboratorio.
Formar los grupos de trabajo para el desarrollo ordenado del Laboratorio de Bioquímica.
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3. MATERIALES
4. METODOLOGÍA
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1. INTRODUCCIÓN
Es por ello que ahora se inicia el Laboratorio de Bioquímica con los fundamentos que puedan
crear un espíritu de interés en el estudiante, esto es, algunas bases sobre las que pueda descansar
el proceso de aprendizaje en el laboratorio, con la pretensión de que el estudiante se sitúe en el
contenido del Laboratorio de Bioquímica y logre contextualizar él mismo en el campo de la
Agronomía.
Procurando no caer en la profundización teórica -lo cual corresponde a la teoría de curso- se hará
una breve descripción de lo que es una "Biomolécula", y junto a ello la identificación de las
moléculas que se estudiarán posteriormente en el Laboratorio.
Así mismo, se aprovechará la reunión de esta semana para adelantar un poco de la Práctica 2 a fin
de que no se sobrecargue de trabajo la semana asignada a dicha práctica.
2. OBJETIVOS
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C4 C3
Fig. 1 corte transe versal de hoja. Observe como se aprecia la organización y complejidad microscópica
"Cada uno de los componentes de un organismo vivo tiene una función específica. Esta afirmación
no es solamente cierta para estructuras macroscópicas como las hojas y los tallos, el corazón y los
pulmones, sino también para estructuras intracelulares microscópicas como el núcleo y los
cloroplastos".
La bioquímica trata de explicar la vida en términos químicos (5)
"Las moléculas que componen los organismos vivos cumplen todas las leyes familiares de
la química, pero también la interacción entre ellas, de acuerdo con otra serie de principios
a los que nos referiremos colectivamente como la lógica molecular de la vida. Estos
principios son un conjunto de relaciones que caracterizan la naturaleza, la función, así
como las interacciones de las Biomolécula.
"Si los organismos vivos se componen de moléculas intrínsecamente inanimadas, ¿cómo pueden
estas moléculas dar lugar a la remarcable combinación de características que llamamos vida?
¿Cuales la razón de que un organismo vivo parece ser más que la suma de sus partes inanimadas?
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Sin embargó, después de cien años de investigación bioquímica, resulta evidente que los
organismos vivos son notablemente similares en los niveles químico y microscópico.
3.3. Biomoléculas
Lehninger, Nelson y Cox (15) dicen que al comenzar el estudio de las biomoléculas y sus
interacciones, algunas cuestiones básicas requieren atención. ¿Qué elementos, químicos
pueden encontrarse en las células? ¿Qué tipos de moléculas conforman la materia viva?
¿En qué proporciones se hallan? ¿Cómo llegaron a formar parteado ella? ¿De qué manera
las moléculas presentes en las células vivas son especialmente adecuadas para cumplir su
cometido?
"Prácticamente todos los compuestos orgánicos a partir de los que se construyen los organismos
vivos son productos de la actividad biológica. Estas biomoléculas fueron seleccionadas a lo largo
del proceso de evolución biológica en razón de su idoneidad para llevar a cabo funciones
bioquímicas y celulares específicas".
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Recuerde un poco el contenido de curso de "Química Orgánica": "los átomos de carbono unidos
covalentemente pueden formar cadenas lineales, cadenas ramificadas y estructuras cíclicas y en forma
de celda. A estos esqueletos carbonados se les unen otros grupos de átomos, denominados grupos
funcionales, que confieren propiedades químicas específicas a la molécula.
"Muchas biomoléculas son poli funcionales y contienen dos o más tipos diferentes de grupos
funcionales, cada uno de ellos con sus propias características químicas y su reactividad propia: Los
aminoácidos, una importante familia de biomoléculas que actúan principalmente como
subunidades monoméricas de las proteínas, contienen como mínimo dos tipos diferentes de
grupos funcionales: un grupo amino y un grupo carboxílico. La capacidad de un aminoácido para
condensarse con otros aminoácidos para formar las proteínas depende de los propiedades
químicas de estos dos grupos funcionales''.
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NOTA: Si esto último le confunde un poco, no se preocupe, pues esto es lo que se irá estudiando en
el laboratorio de Bioquímica.
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pegan en forma globular y se asocian en una estructura tetramérica con un diámetro de 5,5 nm.
Por su parte, las moléculas de proteína son pequeñas en comparación con los ribosomas (de
aproximadamente 20 nm de diámetro), que contienen aproximadamente 70 proteínas diferentes y
diversas moléculas de DNA. Los ribosomas, son a su vez, mucho más pequeños que orgánulos
cómo las mitocondrias, de diámetro aproximadamente igual a 1000 nm. Existe pues, un gran salto
desde las biomoléculas sencillas hasta las estructuras celulares que pueden observarse con el
microscopio óptico. (Ver Fig. 2)
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3. ¿Cuáles son los dos niveles en los cuales los organismos vivos (por ejemplo, un roble, un
insecto o un hongo) son notablemente similares?
4. ¿En razón de qué surgieron las biomoléculas a lo largo del proceso de evolución biológica?
7. Elabore una definición propia de Biomolécula, indique qué es una macromolécula. Además
explique si a su juicio hay alguna diferencia entre ambos términos.
9. Señales las funciones generales de los ácidos nucleicos, los polisacáridos y los lípidos.
10. Esquematice lo que para usted significa la frase siguiente: las macromoléculas se construyen a
partir de subunidades monoméricas.
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11. Para resolver este tópico piense, por ejemplo, en un conjunto formado por varios
subconjuntos. Luego piense cómo la unión de estos lo hace a aquél.
12. Esquematice gráficamente, de manera clara y sencilla, cada uno de los términos señalados en
la Fig. 2 del Material de apoyo de esta práctica, procurando que su esquema guarde una
secuencia lógica. Por ejemplo: se le pudiera ocurrir esquematizar una hoja de Frijol como
ejemplo de Órgano.
13. Ordene ascendentemente (en función de su tamaño), los términos siguientes: órgano,
subunidad monomérica, organismo vivo, complejos supra moleculares, orgánulos, tejido,
macromolécula, sistema, célula.
14. Conteste con sinceridad si usted cree que ha podido ubicar el tema central de estudio de este
laboratorio (biomolécula) como parte integradora de una Planta. ¿Cree usted que al lograr esta
ubicación es posible enmarcar el Laboratorio de Bioquímica en un Contexto Agronómico?
Explique. Recuerde que su Instructor de Laboratorio está para asesorarle y ayudarle a resolver
sus dudas.
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5. MATERIALES
A cargo de cada estudiante
6. METODOLOGÍA
Revisión del fundamento teórico y explicación del instructor de laboratorio:
Que lo seleccionado sea un órgano vegetal (semilla, tallo, hoja, fruto, etc.) que no posea
demasiados pigmentos (como podría ser el caso del café o el laurel).
Que sea factible preparar harina de ese órgano vegetal
Para la selección de un material vegetal específico seguir las recomendaciones siguientes:
Que se tenga un porcentaje no menor que 10%, de al menos dos biomoléculas y/o
macromoléculas (proteínas, carbohidratos, lípidos).
Conocer la planta seleccionada.
Tener la facilidad de conseguir la planta.
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Toda vez seleccionada la planta que se va a trabajar, cada sub-grupo de laboratorio, se dirigirá o.
su instructor para pedir por la aprobación de la planta a trabajar.
Para ello debe tener al menos dos opciones de plantas (que cumplan con lo señalado
anteriormente) y presentar al instructor una pequeña tabla con los datos siguientes:
7. EVALUACIÓN DE LA PRÁCTICA
Examen Corto con un nivel de dificultad similar al del CUESTIONARIO PRE
LABORATORIO.
Tarea No. 1:
Usted deberá entregar individualmente un trabajo corto, escrito. Para ello debe resolver y realizar
aquello que esté planteado, que aparecen en el Instructivo de Práctica 1. La parte práctica indicada
en esos mismos será evaluada al momento de que los estudiantes lleven su material debidamente
seco, para la preparación de la harina, en la Práctica 2.
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1. INTRODUCCIÓN
Luego cada grupo de trabajo ha conseguido una muestra suficiente de la planta escogida. Así se
llega a la presente reunión de laboratorio, en donde la atención se centrará en preparar dicho
material vegetal, con lo, cual se pretende proveer al estudiante de herramientas de trabajo del
campo agronómico.
2. OBJETIVOS
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3. MARCO TEÓRICO
Cuando se hace referencia a "preparar" muestras vegetales para análisis químico, en el contexto
del laboratorio de Bioquímica de la FAUSAC, se está hablando del proceso de colecta, secado,
molido y tamizado de dichas muestras. Este proceso incluye la "extracción" de los compuestos a
analizar, sin embargo, esto se deja como un apartado puesto que se estará trabajando más
adelante (16)
Debe cuidarse que el material vegetal bajo estudio se encuentre libre de contaminación con otra
planta. Asimismo, es esencial emplear plantas sanas, que no estén infectadas por virus, bacterias u
hongos. La razón de esto es que no solo podrían detectarse productos de síntesis microbiana, sino
que además estas infecciones podrían alterar seriamente el metabolismo de la planta y formarse
productos inesperados, quizás en grandes cantidades (lT).
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Es necesario reconocer de antemano al vegetal a recolectar entre grupos similares de plantas, así
como saber que parte o partes se van a colectar de acuerdo al interés del investigador. Es
imperativo llevar a cabo una recolección de acuerdo a las normas establecidas para ello. (6)
Esta técnica es la más utilizada, debido a que no hay descomposición de constituyentes, por lo cual
es la técnica más recomendable. Secando sobre papel periódico cambiable cada 24 horas hasta unas 4
a 5 veces hasta la eliminación total del agua
En el documento del Herbario de la FAUSAC (13), dice que en el proceso de colecta de muestras
vegetales, muchos buenos especímenes se pierden por pudrición. Por ello el secado de esas
muestras es imperativo. En ese documento se citan técnicas de colocación de muestras vegetales
en una "prensa", con el objeto de preservar de mejor forma la morfología de la planta, y proveer
una técnica fácil de secado -que es lo particularmente nos interesa -. Una vez hecho el paquete en la
"prensa", puede dejarse secando lejos de la intemperie y haciendo cambios constantes de papel
periódico, o bien utilizando una cámara desecadora, comúnmente utilizada en el herbario.
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"La molienda debe efectuarse con el material ya seco; con el objeto de reducir a lo mínimo posible el
tamaño de la partícula del material a utilizar. Con raíces o material leñoso debe usarse un molino,
teniendo cuidado de que la fricción producida no eleve la temperatura del sistema para evitar
descomposiciones de principios activos o compuestos químicos de interés. Cuando el material es
ligero (hojas, tallos, flores, etc.) puede utilizarse un mortero manual" (1).
Para el tamizado se utiliza un tamiz de 20 mallas, con el objeto de dejar pasar únicamente
aquellas partículas más pequeñas y separarla de grumos que no suelen ser de interés.
Para principiar, se recomienda eliminar la testa de las semillas a usar, para evitar que exista una
interferencia de pigmentos (13). Sin embargo, esto se hace en función de que con el análisis a
realizar en este laboratorio, se pretende acercar al estudiante al estudio cuali-cuantitativo de
biomoléculas, y no se pretende hacer un análisis detallado de todas las moléculas para cada parte de
la planta a utilizar.
Es bueno hacer referencia a la definición de testa. Testa es la capa exterior de la semilla, y suele
conocerse vulgarmente como la "cascara" de la semilla. Algunas veces es difícil de eliminar (por
ejemplo en el frijol negro, Phaseolus vulgaris) y por ello se recomienda hacer un remojo de no más de
25 minutos para esa eliminación. Lo que sucede es que la testa no es impermeable y permite el paso
de agua hacia su interior, provocando que los tejidos internos de la semilla (endospermo y
embrión) absorban agua y se hinchen, facilitando de tal manera la eliminación de la testa.
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1. ¿A qué se refiere la "preparación de muestras vegetales" para análisis químico, dentro del
contexto de laboratorio de Bioquímica de la FAUSAC?
3. ¿Por qué debe cuidarse que el material vegetal bajo estudio debe estar sano?
5. ¿Por qué razón la operación de secado debe hacerse bajo condiciones controladas?
7. Explique por qué cree que se hace la molienda del material vegetal.
NOTA» Cada grupo de trabajo debe traer, para la realización de esta práctica, lo siguiente: La
muestra vegetal que se puso a secar días antes de la presente práctica, según lo estipulado por
el Instructivo de\ Práctica I. Esta muestra debe estar debidamente seca para no: dañar el
equipo de laboratorio, por ello su instructor revisará esto al inicio de la práctica.
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5. MATERIALES
01 horno de convección
Papel encerado
Etiquetas auto adhesivo
Tijeras
Masking tape
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6. METODOLOGÍA
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Nota: Debido a que la mayoría de grupos de trabajo utilizarán "semillas" de la planta de interés, la
metodología que se describirán será para ese órgano vegetal. En caso de utilizar otra parte de la
planta, consultar con su instructor de laboratorio.
7. EVALUACIÓN DE LA PRÁCTICA
Examen Corto con un nivel de dificultad similar al del CUESTIONARIO PRE
LABORATORIO.
Tarea No. 2: Usted deberá entregar individualmente un trabajo corto, escrito. Para
ello debe resolver y realizar aquello que esté planteado para el reporte.
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1. INTRODUCCIÓN
Para el estudio de las macromoléculas, en este laboratorio, han de realizarse pruebas analíticas
(cuantitativas y cualitativas). Dichas pruebas están diseñadas para llevarse a cabo en medio
acuoso. Es por ello que en esta práctica de laboratorio se prepararán soluciones salinas y acuosas
de proteínas a través del proceso de "Extracción de Proteínas" indicado más adelante.
2. OBJETIVOS
Efectuar extracción salina y extracción acuosa de las proteínas de una muestra Vegetal.
Efectuar la prueba de Biuret para la detección de proteínas y/o péptidos (de al menos dos
enlaces peptídicos), en los extractos.
Efectuar la prueba de "Precipitación Proteica por Metales Pesados" para la detección de
proteínas en los extractos.
Utilizar adecuadamente el equipo y cristalería de laboratorio empleado en la presente
práctica.
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3. MARCO TEÓRICO.
3.1. Proteínas
“La importancia de las proteínas fue reconocida a comienzos del S. XIX por Mulder (1838): En las
plantas y animales hay presente una sustancia que, sin duda es la más importante entre las
sustancias conocidas de los seres vivos, y sin ella, la vida sería imposible en el planeta.
Bohinski (2) dice lo siguiente: "Cada proteína es única en términos de estructura y función. No
obstante, también existen numerosas semejanzas entre las proteínas. Su característica más
común es que todas son polímeros formados por aminoácidos, los cuales son sus monómeros,
éstos se unen en forma covalente unos a otros en secuencia mediante lo que se llama un enlace
peptídico. La estructura resultante, que tiene forma de cadena, recibe el nombre de polipéptido,
o simplemente péptido. Cuando un polipéptido consta de 50 o más residuos (unidades) de
aminoácidos (un mínimo arbitrario) ya se considera una proteína".
Como dicen Lehninger, Nelson y Cox (15), casi todo lo que sucede en la célula requiere la
intervención de una o más proteínas. Las proteínas proporcionan estructura, catalizan
reacciones celulares y llevan a cabo una multitud de tareas. Su papel central en la célula queda
reflejado en el hecho que la información genética se expresa en último término en forma de
proteínas. En una célula típica existen miles de proteínas diferentes, cada una codificada por
un gen y encargada de realizar una tarea específica. Las proteínas se encuentran entre las
macromoléculas biológicas más abundantes y son también extremadamente versátiles en sus
funciones. Las proteínas son las moléculas orgánicas más abundantes en el interior de las
células, pues constituyen el 50% o más de su peso seco.
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Proteína: del griego protos, primero. Mulder en 1838 introdujo esta palabra con el sentido de "de
primer orden, o sea, la sustancia más importante de la materia viva,
Según Lelninger (15), del aislamiento de muchas proteínas en forma pura y cristalina, se ha
aprendido que todas contienen carbono, hidrógeno, nitrógeno y oxígeno, y casi todas
también azufre. Asimismo, hay proteínas que contiene elementos adicionales, como
fósforo, hierro, zinc y cobre. Lehninger(15) y Bohin.ski(2) coinciden en que las proteínas se
dividen en dos clases principales basándose en su composición: Proteínas simples y
Proteínas conjugadas.
1. LAS PROTEÍNAS SIMPLES: son aquellas que por hidrólisis producen solamente
aminoácidos, sin ningún otro producto principal, orgánico o inorgánico. Comprenden los
siguientes grupos:
Albúminas: Solubles en agua, coagulan por el calor y precipitan con las soluciones
salinas saturadas.
Globulinas: Solubles en soluciones diluidas de sales de ácidos y bases fuertes (NaCl
por ejemplo); insolubles en agua pura o en soluciones salinas de mediana
concentración; coagulan por el calor.
Glutelinas: Solubles en ácidos y álcalis diluidos; insolubles en los solventes neutros;
coagulan por el calor. Ejemplo: glutelina del trigo.
Prolaminas: Solubles en alcohol de 70 a 80%; insoluble en alcohol absoluto, en agua
y en otros solventes neutros. Ejemplos: la zeína del maíz y la gliadina del trigo.
Albuminoides: Solubles en todo solvente neutro y en ácidos y álcalis diluidos. En este
grupo entran las proteínas de sostén. Ejemplo: queratina, colágeno.
Histidias: Solubles en agua y en ácidos muy diluidos; coagulables por el calor.
Predominan los aminoácidos básicos.
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2. Las PROTEÍNAS CONJUGADAS son aquellas que por hidrólisis producen no solamente
aminoácidos, sino también otros componentes orgánicos o inorgánicos (esta porción no
aminoácido, de una proteína conjugada se denomina grupo prostético). Las proteínas
conjugadas pueden subdividirse de acuerdo con la naturaleza química de sus grupos
prostéticos, y pueden identificarse así:
Nucleoproteínas: Compuestos formados por una o varias moléculas de proteína unidas al
ácido nucleico.
Glucoproteías: Compuestos que tienen carbohidratos como grupos prostéticos. Ejemplo:
la mucina.
Fofoproteínas: Compuestos con un radical que contiene fósforo que no sea ni un
fosfolípidos ni ácido nucleicos. Ejemplo: la caseína.
Cromoproteínas: Compuestos conjugados con un grupo cromóforo. Ejemplos:
hemoglobina, citocroruo y flavoproieínas.
Lipoproteínas: Poseen grasas neutras (triglicéridos) u otros lípidos tales como fosfolípidos
y colesterol.
Metaloproteínas: Resultan de la unión con un metal.
Flavoproteínas: Tienen una flavina como grupo prostético. De vez en cuando pueden estar
presentes dos o más grupos prostéticos idénticos o diferentes.
Las proteínas fibrosas tienen formas moleculares muy alargadas. Como dicen Sniith y
Woocl(19), son insolubles en medio acuoso. Dentro de ellas encontramos: Cartílagos, tendones,
cabello, seda, exoesqueleto de los insectos, etc...
Las proteínas globulares son más compactas que las fibrosas; en general son más solubles
que las proteínas fibrosas. Incluyen la mayoría de enzimas, muchas hormonas y otros como los
anticuerpos (2,19).
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Como usted recordará, del contenido teórico de la Química General II, la solubilidad de cualquier
sustancia depende de la afinidad relativa entre la correspondiente a las moléculas del soluto entre
sí y la existente con las moléculas del solvente. Como dicen White et.al. (20): "Cualquier factor que
disminuya las interacciones entre las moléculas del soluto tenderá a aumentar la solubilidad. En el
efecto salling-in, los pequeños iones de las sales neutras interaccionarán con los grupos iónicos de
las moléculas proteicas, disminuyendo la interacción proteica y, por tanto, favoreciendo la
solubilidad".
Las proteínas reflejan las propiedades químicas de los aminoácidos que estas contienen en su
estructura. Muchas de las reacciones de color de las proteínas dependen de la presencia de un
aminoácido en su molécula.
La prueba se basa en que no todas las proteínas son igualmente sensibles a los agentes
desnaturalizantes y esta propiedad puede usarse para remover ciertas proteínas de una mezcla.
A pH 7 o por encima de él, las proteínas están usualmente cargadas negativamente, así que la
adición de metales cargados positivamente neutraliza la carga y la proteína precipita. La
precipitación por metales pesados es, por lo tanto, más efectiva a valores de pH neutros o
ligeramente alcalinos, pero la solución no puede ser muy alcalina porque se corre el riesgo de que
se precipiten hidróxidos de los metales. El precipitado es frecuentemente soluble en exceso de
iones de metal pesado, ya que tal exceso confiere a las partículas, cargas positivas estables.
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3.8. Biuret
El ion cobre formará un complejo con las proteínas de una manera similar al que forma con el
amonio. El complejo en el caso de las proteínas es rojo o violeta, y azul en el caso del amonio. La
prueba es positiva cuando la muestra analizada posee, al menos, dos enlaces peptídicos
(tripéptidos, polipéptidos y proteínas); esto quiere decir que los aminoácidos y los dipéptidos dan
una prueba negativa de Biuret.
La sustancia más simple que tiene dos uniones peptídicos es el Biuret (NH2CONHCONH2) y esta es
la razón por la cual esta reacción lleve el nombre de Biuret.
O C C O
HN NH
R CH HC R
Cu2+
O C C O
HN NH
R CH HC R
Figura 5: Resultados de prueba de Biuret y figura que muestra la interacción entre cobre y aminoácidos
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2. ¿Cuáles son los cinco elementos que se encuentran más comúnmente en las
proteínas?
6. De una definición de grupo prostético. Mencione al menos tres compuestos que pueden, existir
corno grupos prostéticos, en las proteínas.
7. ¿Qué tipo de proteína -según su configuración- es más "soluble"? ¿Las fibrosas o las
globulares?
10. A pH 7 o por encima de él, las proteínas precipitan cuando se les adicionan metales pesados.
¿Por qué? Además, ¿por qué en esta reacción la solución no debe estar demasiado alcalina?
11. ¿Qué característica debe tener un compuesto para dar positiva la prueba de Biuret?
12. Indique el cambio que evidencia un resultado positivo para la prueba de "Metales Pesados" y
para la prueba de "Biuret".
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5. MATERIALES
A cada del grupo de trabajo:
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6. METODOLOGÍA
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El siguiente cuadro, es una guía para el estudiante para que sepa qué muestras se van a analizar
con cada prueba, en esta práctica.
PRUEBA
MUESTRA A ANALIZAR
Extracto Acuoso
Extracto Salino
Peptona
Albumina
Caseína
Gelatina
NOTA: Las soluciones patrón (peptona, albúmina, caseína y gelatina) son proteínas. Estas
soluciones se utilizan para que el estudiante tenga cuatro "testigos" de resultados positivos en
cada prueba. En otras palabras, estas soluciones sirven para poder observar como es el resultado
positivo para cada una de estas pruebas.
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7. EVALUACIÓN DE LA PRÁCTICA
Examen Corto con un nivel de dificultad similar al del CUESTIONARIO PRE LABORATORIO.
La metodología de evaluación también incluye un Informe de práctica. Este informe puede hacerse
en parejos o individualmente, y debe incluir:
Carátula
RESULTADOS Y ANÁLISIS DE RESULTADOS
Resultados de práctica.
Estos se presentan según las siguientes indicaciones:
Para los resultados de los numerales 6.1 y 6.2 de la metodología, solamente resuelva lo que se le
indica en los "cuadritos negros" que allí aparecen.
Para los numerales 6.3 y 6.4, primeramente debe presentar un cuadro de resultados pura cada
prueba: Siga el modelo indicado en el Cuadro 2.
CUADRO 2. Resultados de la prueba de BIURET con las cuatro soluciones patrón y los dos
extractos de proteínas.
Además del cuadro anterior, para los numerales 6.3 y 6.4, debe incluir el análisis y explicación
de los dos cuadros de resultados, a fin de establecer la presencia o ausencia de proteínas en cada
muestra problema. (Para el caso de la explicación que se le pide, haga énfasis sobre si hay
concordancia de los resultados prácticos con el fundamento teórico. Si no hubiese tal
concordancia, plantee una justificación valida).
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Resuelva los "cuadros" que aparezcan en su metodología (6.3 y 6.4); debe presentarlos
también, intercalados con los resultados, y análisis de resultados. Esto puede servirle también
como una guía para ou análisis de resultados.
¿Qué es una solución patrón? ¿Qué utilidad encontrada con el uso de este tipo de soluciones en la
presente práctica?
De la extracción de proteínas:
¿Cuál cree que es (son) la(s) razón(es) para realizar dos tipos de extracción de proteínas?
¿Cuántos tipos de "extracción de proteínas" existen y cuáles son? ¿En qué se diferencian estos
tipos de extracción?
¿Qué tipo de proteína -según su configuración- es más "soluble"? ¿Las fibrosas o los globulares? En
función de ello ¿qué tipo de proteína -según su configuración- habrá en mayor cantidad en sus
"Extractos de proteínas"?
Haga un listado de los tipos de proteínas que se pueden extraer con Agua. (Vea la parte
Composición de las Proteínas" de su material de Apoyo a la práctica)
Haga un listado de los tipos de proteínas que se pueden extraer con Solución salina. (Vea la parte
"Composición de las Proteínas" de su material de Apoyo a la práctica)
A qué se refiere la solubilidad por salado o "salting in"? ¿Qué tiene que ver con esta prueba de la
práctica?
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1. INTRODUCCIÓN
El desarrollo de esta práctica continúa con un estudio cualitativo de los hidrolizados obtenidos; es
este el momento en que el estudiante de laboratorio centrará su atención en los aminoácidos y
podrá detectar su presencia/ausencia.
Esta práctica es una de las más que necesita más tiempo para su realización. A sí que deben
emplearse al máximo las dos horas de laboratorio y en caso de no poder terminar con la
metodología de práctica, se tendrá que trabajar en otro momento, acordado por el instructor y los
estudiantes, dentro de la semana asignada para esta práctica.
2. OBJETIVOS:
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3. MARCO TEÓRICO.
La hidrólisis proteica es el proceso de rompimiento del enlace peptídico con lo que se producen
pépticos y/o aminoácidos libres. La hidrólisis proteica puede ser de tres tipos: ácida, alcalina o por
enzimas (10,15)
La hidrólisis con ácido o base no es específica y existen algunos aminoácidos que sufren
modificaciones o pueden ser destruidos. Mediante la hidrólisis enzimática es posible romper los
enlaces peptídico entre residuos de aminoácidos específicos. La hidrólisis es un proceso
fundamental para llegar a determinar la secuencia de aminoácidos que conforman la estructura
primaria de la proteína. (15).
Hidrólisis de las proteínas mediante ácido: (De Harper (10) y Lehninger (15)): la mayoría de las
proteínas son completamente hidrolizadas hasta sus aminoácidos constituyentes calentando a
110oC durante 20 a 70 horas en HCL 6N. La hidrólisis se realiza en un tubo cerrado. El hidrolizado
resultante contiene los aminoácidos en forma de clorhidratos.
Los grupos amida de la glutamina y la asparagina resultan hidrolizados, con producción de los
ácidos glutámico y aspàrtico y de iones amonio.
Hidrólisis de las proteínas por álcali: esta se usa para recuperar el triptófano y la tirosina, los
cuales no se destruyen por hidrólisis alcalina. Sin embargo, la hidrólisis alcalina provoca la
destrucción de la arginina, la cistina, la serina y la treonina; todos los aminoácidos son
racemizados. Por ello el método se emplea para la determinación por separado del triptófano, que
es estable a la calefacción con bases. (10,15)
3.1. Aminoácidos
Anteriormente se citó a Bohinski (2) para conocer que la característica más común de las
proteínas es que todas son polímeros formados por aminoácidos. Este autor dice que los
aminoácidos son monómeros que se unen en forma covalente unos a otros en secuencia
mediante lo que se llama un enlace peptídico, y dan por resultado una estructura que tiene forma
de cadena; esa estructura recibe el nombre de polipéptido, o simplemente péptido.
“El primer aminoácidos que se aisló de una proteína fue la glicina (del griego glykis, dulce, pues la
sustancia tiene cierto sabor dulce); la obtuvo Braconnot, en 1820, al hidrolizar la gelatina con
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“A partir de estos bloques unitarios, los aminoácidos, los diferentes organismos pueden fabricar
productos tan diversos como enzimas, hormonas, anticuerpos, la proteína del cristalino del ojo,
antibióticos, venenos de hongos y muchas sustancias con actividades biológicas distintas” (15)
Como señala Lehinger, Nelson y Cox (15), debido a que cada uno de esos aminoácidos tiene una
cadena lateral propia que determina sus propiedades químicas, se puede considerar a este
grupo de 20 moléculas precursoras como el alfabeto en el que está escrito el lenguaje de la
estructura proteica . Las células pueden producir proteínas con propiedades y actividades
claramente diferentes uniendo los mismos 20 aminoácidos en multitud de combinaciones y
secuencias distintas.
Como dice Bohinski (2) y White & Handler (18), casi todos los aminoácidos (salvo la Prolina y la
hidroxiprolina) son alfa-aminoácidos pues tienen un grupo amino (-NH2) y Un grupo carboxilo (-
COOH) unidos al mismo átomo de carbono, llamado alfa.
Cada aminoácido posee propiedades únicas debido a la variación en la estructura de los Grupos R
(el grupo R se refiere a la cadena lateral del aminoácido).
Lehninger, Nelson y Cox (15) dicen que algunos aminoácidos son mucho menos frecuentes q otros.
Por ejemplo, muchas proteínas poseen relativamente pocos restos de Histidina y de triptófano.
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Una de las reacciones del grupo ninhidrina, que puede utilizarse para valorar los aminoácidos
cuantitativamente en cantidades muy pequeñas (15)
Para disolver los aminoácidos hay que considerar si estos son ácidos, básicos o neutros. Así: los
aminoácidos se disuelven en agua y agregando unas gotas de HCl 1N; por otro lado los
aminoácidos básicos se disuelven agregando, al agua, unas gotas de NaOH6N. Los aminoácidos
neutros se disuelven simplemente en agua” (5, 16).
Esto de aminoácidos ácidos, neutros o básicos depende del grupo R de los aminoácidos. Para
profundizar en ello se recomienda referirse al capítulo 5 de Lehninger, Nelson y Cox (15)
“La mayor parte de las proteínas en la dieta humana provienen de semillas, en especial granos
de cereales como maíz, trigo y arroz. Una contribución menor, pero aún importante, la hacen
semillas de leguminosas como fríjol, chícharo y soya.
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Comparados con casi cualquier proteína animal, las proteínas de los granos de cereal tienen bajo
contenido de lisina, mientras que las semillas de las leguminosas tienen bajo contenido de
metionina. Los agricultores están logrando algunos avances con la introducción de especies
nuevas o hibridas con mayor contenido proteínico y mayores porcentajes de aminoácidos
esenciales”.
a) Prueba de la ninhidrina:
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b) Prueba de sanger:
c) Prueba xantoproteica:
Los aminoácidos que poseen un núcleo aromático forman nitro derivados de color amarillo
cuando se calientan con acido nítrico concentrado. Las sales de estos derivados son de color
naranja. Por lo tanto, el aparecimiento de color naranja, en esta prueba, denota la presencia de
aminoácidos aromáticos.
Las proteínas que contienen triptófano, tirosina, y fenilalanina, dan prueba positiva. Esta prueba la
realizan inadvertidamente los estudiantes cuando derraman ácido nítrico sobre su piel.
Figura No. 8 coloracion de los extractos tanto acido como basico despues de la aplicación de acido nitrico. Ademas de
la coloracion de los patrones
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d) Prueba de millon:
Los compuestos que contienen el radical hidroxibenceno reaccionan con el reactivo de Millon
formando compuestos rojos. Los únicos aminoácidos fenólicos son la tirosina y sus derivados y
solamente ellos dan una reacción positiva.
Los thioaminoácidos reaccionan en medio alcalino con el acetato de plomo, precipitando sulfuro de
plomo (de color negro) como uno de los productos.
El bromo actúa en medio alcalino con aminoácidos que poseen el grupo imidazol (como la
Histidina), provocando una reacción de adición al eliminar un doble enlace. El compuesto así
formado posee una cloración azul- violeta. Esto quiere decir, que cuando en esta prueba se
produce un color azul-violeta, se denota la presencia de Histidina.
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2. ¿Qué tipo de hidrólisis se utiliza para la determinación por separado del triptófano? Explique.
6. Mencione al menos 5 productos que se pueden formar a partir de las distintas combinaciones
de aminoácidos:
7. ¿Qué grupos funcionales son los que propician las reacciones químicas de los aminoácidos?
9. En la reacción de Nihidrina ¿Qué reacción provoca una coloración azulada o violeta? ¿Cuál
reacción provoca un color amarillo?
10. Explique en qué consiste la prueba de Sanger, la prueba Xantoprotéica, la prueba de Millon, la
prueba de Sulfuro y la prueba del Bromo.
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11. Investigue a que se refieren los términos: aminoácido fenolico, thioaminoacido, y aminoácido
con grupo imidazol. Consulte a su instructor de laboratorio, a su catedrático de curso o en
alguno de los libros que se le sugieren como bibliografía del curso.
12. ¿Cuáles son los 8 aminoácidos que los adultos debemos obtener del alimento?
13. Refiérase al cuadro 1 del material de apoyo de esta práctica. Observe los aminoácidos que allí
se le presentan. Diga cuáles de ellos se trabajarán en esta práctica (vea cuadro 2 que está en el
instructivo de practica).
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5. MATERIALES
Extracto acuoso
A cargo del auxiliar de laboratorio
Extracto salino
1 estufa eléctrica colocada en una
Muestra desconocida
campana de gases
4 beackers de 50 Ml
1 beacker de 500 mL
2 varillas de agitación
Recipiente de polietileno con solución
1 pizeta
NaOH (6N)
4 tubos grandes con tapón de rosca
Agua destilada
Etiquetas autoadhesivas
1 gradilla de metal grande
Gotero de pico de gallo con acido nítrico
4 frascos con gotero para cada una de las
(ubicado en campana de gases)
siguientes soluciones:
Gotero pico de gallo con acido sulfúrico
NaOH (1N), NaOH(GN), HCl(6N), Y
(ubicado en lavadero de laboratorio)
HCl(1N).
Gotero pico de gallo con solución de
30 tubos de ensayo
bromo (ubicado en campana de gases)
2 gradillas de metal
Gotero pico de gallo con carbonato de
2 pinzas p/tubo de ensayo
Amonio (ubicado en campana de gases)
1 estufa eléctrica
Solución de HCl (6N)
2 probetas de 10 mL
Solución HCl
1 beacker de 500 mL
Autoclave
1 beacker de 100 ml
Mechero de Meckler
Frasco gotero identificado para cada una
Manguera de hule
de las siguientes soluciones:
Trípode para autoclave
Nihidrina, FDNB, Millon, NaNO2 1 % y
Rollos de papel pH
acetato de plomo 2%
Potenciómetros (medir pH).
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6. METODOLOGÍA.
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El cuadro siguiente es una guía para el estudiante para que sepa que muestras se van a analizar en
las pruebas de esta práctica.
PRUEBAS
MUESTRAS A Ninhidrina Sanger Xantoproteica Millón Sulfuro Bromo
ANALIZAR
Hidrolizado
acuoso básico
Hidrolizado
acuoso acido
Hidrolizado
salino básico
Hidrolizado
salino básico
Muestra
desconocida
SOLUCIÓN
PATRÓN
Lisina
Triptófano
Tirosina
Leucina
Histidina
Cisteína
Fenilalamina
TOME EN CUENTA LA LIMPIEZA DE LA CRISTALERÍA PARA LA REALIZACIÓN DE ESTAS
PRUEBAS EN LA PRESENTE PRÁCTICA
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8. EVALUACIÓN DE LA PRÁCTICA
Carátula
Para los resultados de los numerales 6.1, 6.2, 6.3 y 6.4 solamente debe resolverse los
cuadritos negros que aparezcan allí.
Posteriormente presente resueltos los cuadros negros que aparezcan en la metodología
(numerales 6.5 al 6.10). Procure colocar el titulo de cada pareja de respuestas (es decir
el titulo del numeral).
Para los resultados de los numerales 6.5, 6.6, 6.8, 6.9 y 6.10, también debe presentarse
un cuadro de resultados para cada Muestra Problema, (hidrolizado acuoso acido,
hidrolizado salino acido, hidrolizado acuoso básico, hidrolizado salino básico y Muestra
desconocida). Loa cuadros deben seguir el siguiente modelo…
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OJO: Utilice como criterio de dictamen, los resultados obtenidos con las
soluciones patrón.
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1. INTRODUCCIÓN
La cromatografía es una técnica que sirve para separa, identificar y a veces purificar una
mezcla compleja de solutos solubles en un solvente común. Esta semana se utilizara esta
técnica para que el estudiante tenga un contacto con esta alternativa de análisis cualitativo de
sustancias en este caso con aminoácidos. Por ende tratara de enlazarse lo obtenido con la
cromatografía.
La continuación al estudio de proteínas se hace desde un punto de vista cuantitativo y para ello
se utiliza una técnica denominada Espectrofotometría.
2. OBJETIVOS
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La cromatografía es una técnica que sirve para separar identificar y a veces purificar una
mezcla compleja de solutos solubles en un solvente común.
Como dice Gaxiola (11), una mezcla de sustancias que van a ser separadas se aplica en solución
a un medio de sostén. Este puede ser papal, una capa de sílice, o una columna rellena de resina
absorbente o de intercambio iónico. La prueba consiste en que se deja correr por el medio de
sostén un solvente revelador y dicho solvente lava junto con el la mezcla de las sustancias
aplicadas previamente. En el proceso, las diferentes moléculas de la mezcla son arrastradas por
el lavado a distintas velocidades, resultando en su separación.
El flujo del solvente es el mismo para todas las sustancias presentes en la mezcla. Si todas las
sustancias fueran completamente solubles, no habría separación. No obstante, por fortuna es
muy raro que las sustancias tengan la misma solubilidad en cualquier solvente.
Consecuentemente, si la sustancia es muy soluble, tendera a movilizarse a través del medio de
sostén y aparecerá en el frente del solvente en movimiento. Por otra parte, si es relativamente
insoluble, tendera a permanecer en su punto de origen. Por lo tanto, uno de los factores
primordiales que determinan la separación cromatográfica es la combinación de la solubilidad
y del flujo del solvente. Los otros factores, los factores retardantés, son igualmente importantes
y merecen alguna discusión.
Hay cuatro tipos principales de procedimientos cromatográficos, cada uno de los cuales está
basado en ciertos principios físicos. Ellos son: (1) cromatografía por fragmentación; (2)
cromatografía por absorción; (3) cromatografía por intercambio iónico, y (4) cromatografía
con filtración en gel.
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La cromatografía en capa fina es una técnica muy utilizada en la actualidad, por su gran rapidez
y versatilidad. También se conoce como cromatografía en columna abierta o cromatografía en
película delgada. Es una técnica donde la separación ocurre sobre una capa delgada de
adsorbente que está adherida a un soporte inerte, generalmente vidrio. Se pueden usar
variedad de adsorbentes, desde la gel de sílice o la alúmina hasta la celulosa la cual la
separación es similar a la cromatografía de papel. Se diferencia de la hecha en papel porque la
separación ocurre más rápido, las manchas son más discretas y compactas, y se pueden usar
reactivos detectores corrosivos sin dañar el substrato o el adsorbente.
El disolvente utilizado para la separación se mueve sobre esta capa fina, ya sea hacia arriba,
por capilaridad (cromatografía ascendente) o hacia abajo, por gravedad (cromatografía
descendente). La separación de sustancias se basa en sus características de polaridad. Por
consiguiente, una sustancia polar se moverá muy lentamente con relación al frente del
disolvente, mientras que una sustancia no polar se moverá más rápido.
Antes de que se puedan usar las placas, generalmente deben ser calentadas para retirar el agua
que actúa como una impureza y evita una buena separación. Con frecuencia el agua está
firmemente ligada al adsorbente, por lo cual se debe calentar la placa fuertemente. La
magnitud del calor depende del tipo de separación que se requiere.
Para compuestos hidrofílicos o polares, el secado al aire o con un secador de pelo son
generalmente adecuados; pero para los compuestos hidrofóbicos o no polares es necesario un
calentamiento más intenso. Las placas de alúmina o silicagel con adhesivo requieren ser
secadas al aire durante aproximadamente 30 minutos y después ser activadas en un horno a
10°C (nunca arriba de 105°C) alrededor de 30 minutos.
Las placas de óxido de aluminio y de silicagel sin adhesivo requieren secado al aire durante 1.5
a 2 horas y ser activadas en el horno a 120°C durante aproximadamente 60 minutos.
La muestra se aplica en solución con una micro pipeta o con tubo capilar en cantidades de
aproximadamente 5 micro litros. Esto asegura que la mancha no se extienda. Una mancha ideal
tendrá más o menos 5 mm de diámetro.
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La mancha debe ser secada tan pronto como sea posible, usando un secador de pelo (esto
además evita que la mancha se extienda). Si la solución está diluida, se pueden repetir muchas
aplicaciones en el mismo sitio una vez que la anterior se ha secado. Debe tenerse cuidado de no
sobre cargar la mancha, de lo contrario se presentará el rayado (escurrimiento). Otro factor
importante es que debe tenerse cuidado de no maltratar la capa delgada del adsorbente
durante el manchado.
Con paciencia y con práctica resulta posible no tocar la capa con el extremo de la micro pipeta
(o tubo capilar) durante el manchado o el trazado de una placa para CCD. Aún más, dado que la
capa está adherida a su soporte inerte de vidrio o de aluminio, no es necesario usar placas de
vidrio para sostener el cromatograma durante el manchado.
Existen numerosos métodos para detectar sustancias en los cromatogramas. Algunos de ellos
usan sistemas físicos, pero la mayoría utiliza métodos químicos.
Las técnicas para localizar en el cromatograma sustancias, que no son visibles, se clasifican en
tres categorías:
c. Exposición a gas o vapor: Está requiere equipo especial y por ello no se trata aquí.
Con la mayoría de las placas rociadas con ácido, o con reactivos que producen colores que se
desvanecen con rapidez (como la ninhidrina), no sólo es difícil almacenarlos como referencia,
sino que también resulta caro, ya que las placas de vidrio se pueden volver a usar. Tan pronto
como se seque un cromatograma rociado, las manchas deberán ser delineadas con un lápiz
afilado o con un alfiler y se deben rastrear. Debido a que los colores tienden a desteñirse
después de algún tiempo, es recomendable hacer una copia del original tan pronto como sea
posible.
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El espectro de la energía radiante, contado a partir de la de menor longitud de onda (o, lo que
es lo mismo, e la de más alta frecuencia), incluye los rayos cósmicos, las radiaciones gamma, los
rayos X, la región del ultravioleta, la región de la luz visible, la zona del infrarrojo y l región de
las ondas de radio. Tanto los átomos como las moléculas pueden adoptar varios estados
electrónicos o diversos niveles de energía. La absorción de energía involucra la transición de
los electrones a niveles energéticos más elevados; cuanto más larga es la longitud de onda de la
radiación absorbida, menor es la transformación energética por esa absorción. Ahora bien,
estas son normas generales, válidas para todos los casos, pero cuando se pretende interpretar
con más detalle los fenómenos de absorción, las cosas se hacen bastante más complicadas,
especialmente en el caso de las moléculas orgánicas.
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Estas Leyes hacen referencia a las relaciones existentes entre la magnitud de la absorción de
energía radiante y la cantidad de la sustancia absorbente. Para un sistema absorbente
(solución) dado, a una longitud de onda concreta y con una determinada intensidad de la
energía incidente, hay dos variables que influencian la intensidad de la absorción: la
concentración del absorbente y el espacio recorrido por la radiación energética a través de la
solución.
a) Se supone que la energía radiante es monocromica (es decir, con una longitud de onda
única).
Donde:
A1: Absorción de una solución problema (de la que se quiere averiguar la concentración)
Esta es una fórmula que se aplicara en esta práctica de laboratorio, a pesar de que “las lecturas
de un instrumento determinado –espectrofotómetro- pueden variar significativamente en el
curso de unas pocas semanas a consecuencia del desgaste de sus componentes”, puesto que
“todo esto no representan un problema cuando se calculan los resultados deduciéndolos de la
comparación de la absorción del problema con la de un patrón” (9).
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“La dificultad es grave, en cambio, cuando hay que deducir los resultados a partir de valores
establecidos de absorción, sea por no disponer de patrones, sea por no resultar practico
analizar un patrón simultáneamente con cada problema o grupo de problemas” (9).
Generalmente cuando se hace una determinación con un problema, se hace una lectura similar
sustituyendo la solución problema por agua o por el o los reactivos que sirvan para detectar la
sustancia problema. Esta última lectura es la del blanco de reactivos y sirve para determinar la
absorción de la solución problema no derivada de la sustancia cuya concentración se trata de
medir si no de los reactivos en sí. En esta práctica la absorción en blanco se debe a la razón que
se explica seguidamente:
En esta práctica se utilizara la prueba de Biuret para detectar la sustancia problema de nuestro
interés: Proteínas. Piense en el reactivo de Biuret. Es de color azul ¿recuerda? Cuando se utiliza
este reactivo para detectar proteínas, y medir su concentración, sucede que la lectura en
espectrofotómetro es la suma del color del reactivo de Biuret mas el color de la sustancia
problema. Por ello se hace necesario hacer una corrección.
La conservación de las cubetas exige que se les trate correctamente. Hay que evitar hacerles
ralladuras o ponerlas en contacto con sustancias químicas capaces de alterar sus
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características ópticas. Por lo tanto no se deben usar, para limpiarlas, ni acido sulfúrico
concentrado, ni tampoco soluciones fuertemente alcalinas. Lo más conveniente es un
detergente de actividad moderada (no excesivamente alcalino) o, también, algún solvente
orgánico.
Las superficies ópticas deben limpiarse con un trozo de tejido blando con papel para limpiar
los cristales de la guías, y no deben tocarse con los dedos mientras se hacen las lecturas.
Referencia:
Bausch & Lomb, Modelo 1. Escala de lectura
Spectronic 20 2. Luz piloto
3. Escala de longitud de onda
4. Control para seleccionar la longitud de onda
5. Control de intensidad de luz
6. Interruptor de corriente y control de cero
7. Compartimiento de la muestra
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13. ¿Qué condiciones debe cumplir la absorción de un rayo de energía radiante según la Ley
de Beer?
14. ¿Qué dice la Ley de Beer? Para responder a esta pregunta puede también referirse a
Lehninger, Nelson y Cox.
15. Trate de explicar con sus palabras lo que es un blanco de reactivos. Si se le dificulta
mucho, por favor preguntarle a su instructor de Laboratorio o Catedrático de curso.
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5. MATERIALES DE LA PRÁCTICA V
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6. METODOLOGÍA
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Resuelva lo siguiente:
Enumere las cuatro fuerzas, de acción independiente, que definen el grado de separación de
sustancias en la cromatografía. ¿Cuáles de esos factores son responsables de la
movilización de la mezcla de sustancias a través del medio de sostén?
Elabore un flujo grama de la metodología para realizar “cromatografía en capa fina”. (No es
necesario que sea muy específico, puede hacer simplemente un bosquejo de dicha
metodología).
Con base a los valores Rf obtenidos, identifique de ser posible, la muestra desconocida.
Compare los Rfs de cada una de las manchas obtenidas de sus muestras de “hidrolizado”,
con los obtenidos para los aminoácidos patrón.
Analice la correspondencia existente entre estos resultados y los de las pruebas de color,
desarrolladas en la práctica 2 parte II.
Resuelva lo siguiente:
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¿Qué indicaría para usted el aparecimiento de una mancha de un color muy diferente al
azul o violeta que denota aminoácidos según la prueba de la Ninhidrina?.
Investigue si una cromatoplaca se recorta o si se utiliza completa. ¿Por qué se uso una
cromatoplaca “recortada”?
¿Todas las cromatocamaras son iguales a las que se utilizaron aquí? Justifique su
respuesta; si hubiese cromatocámaras de “fabrica” ¿Cuál es su tamaño? Además trate de
justificar por qué aquí se usaron cromatocamaras pequeñas.
¿Por qué hay que limpiar tan minuciosamente la “cubeta” antes de agregar la solución que
se medirá en el espectrofotómetro?
¿Por qué se utilizó una longitud de onda de 540 nm, en el espectrofotómetro, para realizar
esta práctica de laboratorio?
Elabore una tabla para indicar el contenido de los 9 tubos de ensayo identificados con
letras mayúsculas.
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Investigue lo siguiente:
Cantidad (en gramos) de Proteínas (solubles en agua) en 100 gramos de harina vegetal
seca.
Cantidad (en gramos) de Proteínas (solubles en agua) en 100 gramos de muestra vegetal
húmeda.
Cantidad (en gramos de Proteínas (solubles en agua) en 100 gramos de muestra vegetal
seca.
La cantidad de Muestra Vegetal (semilla, hoja, etc.) utilizada para preparar la harina vegetal
y la Cantidad de Harina Vegetal preparada.
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1. INTRODUCCIÓN
Los glúcidos han sido conocidos durante mucho tiempo como carbohidratos, pero en la actualidad
suele usarse más el nombre “glúcido”.
Según Lehniger, Nelson y Cox (15), los glúcidos son las biomoléculas más abundantes en la
naturaleza. Cada año, el proceso de la fotosíntesis llevado a cabo por plantas y algas convierte más
de 1000.000 millones de toneladas métricas de CO2 y H2O en celulosa y otros productos
vegetales.
Ciertos glúcidos (como el azúcar y el almidón) son fundamentales en la dieta humana de la mayor
parte de países, y la oxidación de glúcidos es la principal ruta de obtención de energía en la
mayoría de células no fotosintéticas. Los polímeros insolubles de glúcidos actúan como elementos
estructurales y de protección en las paredes celulares de bacterias y plantas y en los tejidos
conjuntivos y envolturas celulares anímales. Otros polímeros de glúcidos funcionan como
lubricantes de articulaciones óseas o como adhesivos celulares.
2. OBJETIVOS
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3. MATERIALES
A carga de cada grupo de trabajo:
NOTA: Del destilador Soxhlet cabe señalar que es un sistema de cristal que requiere de mucho
cuidado en su manejo, pues es muy frágil. En función de esto es posible que alguno(s) o todos
los grupos utilicen un sistema aleatorio que venga a sustituir a este destilador, pero esto será
decisión de la Subárea de Ciencias químicas y la explicación pertinente de su uso estará a cargo
del Instructor de Laboratorio.
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4. METODOLOGÍA
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5. EVALUACIÓN DE LA PRÁCTICA
Esta práctica será evaluada junto con la practica 7. así que esta vez no habrá entrega de
cuestionario pre laboratorio, ni examen cortó ni entrega de informe.
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1. INTRODUCCIÓN
Los carbohidratos también llamados hidratos de carbono o glúcidos, son compuestos de amplia
distribución en la naturaleza, la mayoría son de origen vegetal formados durante el proceso de la
fotosíntesis. Los carbohidratos son los principales componentes de casi todas las plantas y
comprenden del 60 al 90 % de su masa seca. Los hidratos de carbono son sustancias orgánicas que
contienen grupos aldehídos o cetónicos potenciales (que en su estado libre poseen un intenso
poder reductor) y numerosos grupos alcohólicos secundarios y primarios. A causa de la similitud
de sus estructuras y reacciones, resulta difícil identificarlos y determinarlos.
2. OBJETIVOS
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Según Lehninger, Nelson y Cox (15), loe glúcidos son las biomoléculas más abundantes en la
naturaleza. Cada año, el proceso de la fotosíntesis llevado a cabo por plantas y algas convierte más
de 100.000 millones de toneladas métricas de CO2 y H2O en celulosa y otros productos vegetales.
Ciertos glúcidos (como el azúcar y el almidón) son fundamentales en la dieta humana de la mayor
parte de países, y la oxidación de glúcidos es la principal ruta de obtención de energía en la
mayoría de células no fotosintéticas. Los polímeros insolubles de glúcidos actúan como elementos
estructurales y de protección en las paredes celulares de bacterias y plantas y en los tejidos
conjuntivos y envolturas celulares animales. Otros polímeros de glúcidos funcionan como
lubricantes de articulaciones óseas o como adhesivos celulares.
Los glúcidos han sido conocidos durante mucho tiempo como carbohidratos, pero en la actualidad
suele usarse más el nombre "glúcido". Literalmente, carbohidrato significa hidrato de carbono.
Este nombre derivó de investigaciones de los primeros químicos, cuyos análisis demostraron que
contenían únicamente carbono, hidrógeno y oxígeno. Ahora se sabe que algunos carbohidratos
contienen nitrógeno y azufre, además de los 3 elementos ya mencionados. Muchos glúcidos
comunes cumplen la fórmula empírica (CH2O)n, mientras que otros no. En definitiva no son
compuestos hidratados, como lo son muchas sales inorgánicas (CuSO4.5H20). La mayor parte de
sustancias de este tipo tienen fórmulas empíricas que sugieren que son `hidratos' de carbono, en
los que la relación C:I3:0 es de 1:2:1. (3, 20)
Como señalan I-P-hninger, Nelson y Cox (15), los glúcidos o carbohidratos son
polihidroxialdehídos o polihidroxicetonas, o bien, sustancias que dan lugar a estos compuestos
después de su hidrólisis. En otras palabras los, carbohidratos son aldehídos o cetonas
polihidroxiladas o productos derivados de ellos por oxidación, reducción, sustitución o
polimerización. (20)
Los carbohidratos son los principales componentes de casi todas las plantas, comprenden del 60 al
90% de su masa seca. Los vegetales usan los carbohidratos tanto como fuente de energía así como
tejido de sostén, de la misma manera que los animales emplean las proteínas. Los vegetales
sintetizan sus propios carbohidratos a partir del dióxido de carbono del aire y del agua del suelo
(3, 7)
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Los carbohidratos se pueden clasificar según sus productos de hidrólisis ácida. Se aceptan tres
categorías: Monosacáridos, Oligosacáridos y Polisacáridos (la palabra "sacárido" viene del griego
sakkharon, que significa azúcar).
3.1.1. Monosacáridos:
Son azúcares simples y no pueden fragmentarse en moléculas más pequeñas por hidrólisis.
Consisten de una sola unidad de un polihidroxialdehído o cetona. Los monosacáridos son sólidos
incoloros y cristalinos solubles en agua e insolubles en disolventes no polares. La mayoría tienen
sabor dulce. Los monosacáridos, por el grupo carbonílico, pueden ser aldosas (contienen un grupo
aldehído; ejemplo glucosa) o cetosos (contienen un grupo cetónico; ejemplo fructosa). A su vez, los
monosacáridos, pueden clasificarse por el número de átomos de oxígeno: hexosas (glucosa,
galactosa, manosa, fructosa), pentosas (arabinosa, xilosa, ribosa), tetrosas, treosas (treosa,
eritrosa).
3.1.2. Oligosacáridos:
3.1.3. Polisacáridos:
Aquí puede hacerse una subdivisión más: se tienen por un lado los homoopolisacáridos
(moléculas muy grandes compuestas únicamente por un tipo de monosacárido) y por otro lado los
heteropolisacaridos (se forman a partir de dos o más unidades básicas y están frecuentemente
asociadas con proteínas; cuando predomina el carbohidrato el compuesto se conoce como
proteoglicano o mucoproteína, pero sin el carbohidrato es el componente menor, se le conoce
como glicoproteína).
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Casi todos los monos y disacáridos son sólidos cristalinos, de sabor dulce y fácilmente solubles en
agua. Los polisacáridos frecuentemente son compuestos amorfos, insolubles e insípidos, con
masas molares sumamente grandes.
Un carbohidrato reductor es todo carbohidrato que se reduce sin necesidad de hidrólisis previa.
Se caracterizan por poseer sus grupos aldehídicos o cetónicos libres, es decir, que no forman parte
de uniones glucosídicas. En los carbohidratos, los grupos aldehídicos y cetónicos se encuentran en
forma de hemiacetales, por lo que su poder reductor es menor que el de un aldehído o cetona
libres.
El poder reductor también varía entre loa diferentes tipos de carbohidratos (aldosas y cetosas,
monosacáridos y disacáridos), por lo que el tiempo en que se realiza la reducción del cobre, a una
temperatura controlada, permite identificar en una muestra el tipo de carbohidrato reductor que
se encuentra presente.
Todos los monosacáridos y algunos disacáridos son reductores; los polisacáridos contienen sólo
un grupo reductor por varios cientos o más de residuos, así que, en la práctica no son reductores.
Por ejemplo, la escama es un disacárido de molécula demasiado grande por lo que no puede pasar
a través de las membranas celulares por lo que el cuerpo humano es incapaz de utilizarla como tal,
por lo que debe fragmentarse en sus componentes (glucosa y fructosa) por hidrólisis. Esta
reacción es catalizada por enzimas en el cuerpo humano, y en el laboratorio puede llevarse a cabo
utilizando ácido clorhídrico. El almidón, un polímero de glucosa, se hidroliza también por enzimas
y ácidos obteniéndose glucosa al final.
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El ácido sulfúrico concentrado hidroliza enlaces glicosídicos para dar monosacáridos que
pueden ser luego deshidratados dando furfural y sus derivados. Estos productos pueden
condensarse con compuestos fenólicos como el -naftol para dar sustancias coloreadas
(mayormente púrpuras).
Los aldehídos, al igual que muchos otros compuestos, dan prueba positiva con el reactivo de
Benedict. La formación de un precipitado de óxido cuproso es el criterio para una prueba
positiva. El color del precipitado puede ser rojo, pardo naranja, amarillo o amarillo verdoso,
dependiendo de la naturaleza y cantidad del agente reductor presente.
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Se utiliza para la detección de polisacáridos y para seguir el curso de la hidrólisis, a través del
cambio gradual de color que se produce entre el "hidrolizado" y el yodo. Esto se debe a que
el yodo forma complejos coloreados de adsorción con los polisacáridos. El almidón da un
color azul o negro azulado con el yodo, mientras que el glicógeno y el almidón parcialmente
hidrolizado dan una coloración pardo rojiza o violeta rojizo.
Figura No. 15 Coloración de los extractos con la prueba de yodo dando una coloración azul.
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La prueba o reacción de Barfoed se emplea para diferenciar entre mono y disacáridos. La base de
esta prueba la constituye la diferente velocidad de la reacción con el acetato cúprico. La velocidad
de la reacción se determina por la velocidad de formación de Cu2O. Concentraciones equimolares
de monosacáridos y disacáridos poseyendo un grupo reductor por molécula reaccionan con el
reactivo de Barfoed a velocidades distintas. Una clara diferencia entre mono y disacárido, es su
tamaño molecular, lo que parece constituir un factor limitante en la velocidad de la reacción.
También pueden estar implicados otros factores, tales como una interacción más compleja con los
dos anillos monosacáridos. Ello parece suficiente para suponer que las moléculas más pequeñas
tienen una mayor reactividad.
La prueba es positiva por el aparecimiento de un color rojo ladrillo, que se debe al aparecimiento
de precipitado 0120 (a pesar de ser el mismo precipitado formado con Benedict, el color obtenido
en estas pruebas es diferente).
Figura No. 16 coloración que se obtiene con la prueba de barfoed en glucosa y fructuosa.
Esta prueba permite diferenciar las aldohexosas de las cetohexosas en base a sus velocidades de
reacción. El HCl caliente deshidrata a las cetohexosas para formar hidroximetilfurfural mucho más
rápido que a las aldohexosas correspondientes.
Las cetosas se deshidratan más rápido que las aldosas, dando derivados de furfural, que—,
condensados con resorcinol, dan un complejo rojo.
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Esta reacción está basada en la transformación de la fructosa en un derivado del furfural por la
acción del calor y el ácido clorhídrico. Como ya se mencionó, este derivado se condensa con el
resorcinol para formar un compuesto rojo. La reacción la dan todas las cotosas.
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3. ¿Cómo se pueden clasificar a los carbohidratos según sus productos de hidrólisis ácida?
4. Elabore una definición para "monosacáridos". Señale las características generales de este
grupo y además indique cuál(es) monosacáridos se usará(n) en esta práctica.
6. ¿Qué es un oligosacárido?
7. Elabore una definición para "disacárido”. Señale las características generales de este
grupo y además indique cuál(es) disacárido(s) se usarán en esta práctica.
12. ¿Para qué se utiliza la prueba de Molisch? ¿Qué cambio indica una prueba de Molisch
positiva?
14. ¿Qué se puede detectar con la prueba del yodo? ¿Qué cambio indica que la prueba es positiva?
15. ¿Cuál es la utilidad de la prueba de Barfoed? ¿en qué se fundamenta esta prueba?
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5. MATERIALES
30 tubos de ensayo
2 gradillas de metal
1 pinza p/tubo de ensayo
1 estufa eléctrica
2 probetas de 10 ml
1 beacker de 600 ml
1 pizeta
1 beacker de 100 ml
tubos de ensayo grandes
frascos con gotero identificados en función de su contenido, así:
-naftol; Benedict; Solución de Yodo; Barfoed; Seliwanoff.
Muestras de extracto, de extracto hidroliza.do, de almidón hidrolizado y de sac-fruosa
hidrolizada.
Agua destilada
2 goteros pico de gallo con ácido sulfúrico (en lavaderos)
1 gotero pico de gallo con ácido clorhídrico (en la campana de gases). - Frascos con
gotero con las soluciones siguientes:
Celulosa, AL-pidón, Sacarosa, Lactosa, Maltosa, Glucosa, Fructosa.
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6. METODOLOGÍA
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El cuadro siguiente es una guía para el estudiante para que sepa que muestras se van a analizar en
las pruebas de esta práctica.
PRUEBAS
MUESTRAS A Molisch Benedict Yodo Barfoed Seliwanoff
ANALIZAR
1. Extracto
2. Extracto
Hidrolizado
3. Celulosa
(Papel Bond)
4. Almidón
5. Almidón
Hidrolizado
6. Sacarosa
7. Sacarosa
Hidrolizada
8. Lactosa
9. Maltosa
10. Glucosa
11. Fructosa
12. Muestra
desconocida
7. PREPARACIÓN DE REACTIVOS
a) Prueba de Benedict:
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c) Prueba de Barfoed:
El reactivo de Barfoed se prepara utilizando 13.3 g de acetato de cobre en 200 mL de agita destilada,
más 1.8 mL de ácido acético glacial.
d) Prueba Seliwanoff.
El reactivo de Seliwanoff se prepara utilizando 0.5g de resorcinol por cada litro de HCl 3M.
9. EVALUACIÓN DE LA PRÁCTICA
Examen Corto con un nivel de dificultad similar al del CUESTIONARIO PRE LABORATORIO
Carátula
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Molisch
Benedict
Yodo
Barfoed
Seliwanoff
Como una guía de su análisis se le recomienda utilizar la “solución” a los cuadritos que
aparecen para cada parte de la metodología.
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1. INTRODUCCIÓN
Los lípidos constituyen el grupo de compuestos de reserva de energía más importante en el reino
animal. En contraste, los vegetales almacenas casi toda su energía en forma de carbohidratos,
fundamentalmente como almidón. Los lípidos sirven de aislamiento a los órganos vitales,
protegiéndolos de los golpes y manteniendo la temperatura optima del cuerpo. Los lípidos forman
parte integral de la estructura de la membrana celular y, como tales, están asociados con el
transporte a través de las membranas celulares.
Los aceites vegetales tienen un sin número de aplicaciones industriales, medicinales, etc. Y existe
gran cantidad de especies que son cultivadas para extraer y procesar los aceites presentes en sus
semillas, hojas u otros órganos.
En esta práctica de laboratorio se trabajara una metodología sencilla para la extracción de lípidos.
Aquel fundamento teórico que se ha seleccionado para el trabajo con esta biomolecula, se presenta
en la practica 9 de este manual. Por ello no encontrara usted aquí cuestionario pre laboratorio.
2. OBJETIVOS
3. MATERIALES
A cargo de cada grupo de trabajo:
NOTA: es posible que su instructor de laboratorio decida asignar una muestra vegetal a cada
grupo. Esto se hará con la finalidad de que todos los grupos trabajen con un vegetal con un
contenido relativamente alto de LÍPIDOS (por ejemplo maní, ajonjolí, etc.).
1 mechero
1 anillo de hierro
1 erlenmeyer de 250 ml.
1 manguera de hule
1 rejilla de asbesto
1 soporte universal
2 pinzas fisher
NOTA: del destilador soxhlet cabe señalar que es un sistema de cristal que requiere de mucho cuidado
en su manejo, pues es muy frágil. En función de esto es posible que algunos o todos los grupos utilicen
un sistema aleatorio que venga a sustituir a este destilador, pero esto será decisión de la Subarea de
Ciencias Químicas y la explicación debida estará a cargo del Instructor de Laboratorio.
4. METODOLOGÍA
5. EVALUACIÓN DE LA PRÁCTICA:
Esta práctica será evaluada junto con la practica 9. Así que esta vez no habrá entrega de
cuestionario pre laboratorio, examen corto ni entrega de informe.
1. INTRODUCCIÓN
En la práctica anterior se han extraído lípidos de una muestra vegetal. Ahora se procederá a
realizar una metodología sencilla para estudiar cuantitativa y cualitativamente esta Biomolécula.
Respecto a ella aquí se presenta el fundamento teórico para hacer más accesible el conocimiento
dentro del laboratorio.
Si usted compara los contenidos de las biomoléculas en los vegetales, podrá notar que
“regularmente” son los lípidos los de menor proporción. Esto no se debe a que carezcan de
importancia, sino que las plantas han creado un medio de almacenamiento de energía a través de
almidón y utilizan los lípidos sobre todo en el transporte a través de las membranas celulares
(Según White et.al. (20)).
Los lípidos son moléculas biológicas fundamentales en las plantas, como se citó anteriormente, y
por ello, en esta práctica, se buscara, a través de experiencias sencillas, que el estudiante obtenga
bases para realizar pruebas de caracterización de lípidos en muestras vegetales, utilizando
adecuadamente la cristalería, equipo y reactivos necesarios.
2. OBJETIVOS
Los lípidos constituyen el grupo de compuestos de reserva de energía más importante en el reino
animal. En contraste, los vegetales almacenan casi toda su energía en forma de carbohidratos,
fundamentalmente como almidón. Los lípidos sirven de aislamiento a los órganos vitales,
protegiéndolos de golpes y manteniendo la temperatura óptima del cuerpo. Los lípidos forman
parte integral de la estructura de la membrana celular y, como tales, están asociados con el
transporte a través de las membranas celulares.
Los aceites vegetales tienen un sin número de aplicaciones industriales, medicinales, etc, y existe
gran cantidad de especies que son cultivadas para extraer y procesar los aceites presentes en sus
semillas, hojas u otros órganos.
A diferencia de los polisacáridos y proteínas, los lípidos no son polímeros –no poseen unidad
monómerica repetitiva-. Sin embargo, al igual que los carbohidratos, pueden clasificarse en base a
sus productos de hidrólisis y según su semejanza en cuanto a estructura molecular. Se clasifican
así:
1. Lípidos simples
2. Lípidos compuestos
3. Esteroides.
Se subdividen en:
Producen ácidos grasos y glicerol (un alcohol trihidroxilado) por hidrólisis. Se les llama
“triacilgliceroles”, debido a que son esteres que se componen de tres ácidos grasos unidos al
glicerol.
Se dice que un lípido es una grasa si se encuentra en estado sólido a 25’C y un aceite, si ésta es
líquido o la misma temperatura.
Estos compuestos constituyen la mayor parte de los lípidos ingeribles. Son degradados
parcialmente por las lipasas en el intestino y luego son re-esterificados en la mucosa intestinal.
Los ésteres de glicerol y ácidos grasos se conocen como acilgliceroles. Los triacilgliceroles son la
forma predominante en la naturaleza. Los acilgliceroles on moléculas no cargados y por ello se
conocen también como “lípidos neutros”
Los lípidos pueden ser oxidados en el hígado para suministrar energía o pueden ser depositados
como grasa en regiones características donde actúan como depósitos de reserva a largos plazo y
como aislamiento térmico. En algunas semillas los triacilgliceroles se almacenan en fomra de
aceites. Los lípidos que se obtienen de fuentes animales, por lo general son sólidos, en tanto que
los aceites normalmente son de origen vegetal. Por ende es común hablar de grasas animales y de
aceites vegetales.
Ceras:
una cera es un éster de un alcohol alifático superior y un ácido graso de cadena muy larga.
Producen ácidos grasos y alcoholes de cadena larga por hidrólisis. Las ceras no se hidrolizan con
facilidad, por lo tanto, resulta útil como recubrimientos protectores. En las células, las ceras son
cubiertas a prueba de agua para proteger contra infecciones, daño mecánico o ganancia excesiva
de agua.
Se subdividen en:
Fosfolipidos:
Producen por hidrólisis ácidos grasos, glicero, ácido fosforito y un alcohol nitrogenado. Los
fosfolípidos, tambien llamados fosfáticos, son lípidos compuestos qué se derivan del fosfato de
glicerol. Químicamente son similares a los triacilgliceroles ya que son ésteres de ácidos grasos y
glicerol, pero además contienen ácido fosfórico eterificado con un alcohol.
Son los lípidos de mayor polaridad. Se supone que su función fundamental es la de actuar como
un agente emulsionante en las superficies de las membranas celulares, donde los lípidos
insolubles en agua y los materiales solubles en ella deben ser capaces de asociarse
inmediatamente.
Glicolípidos:
Producen por hidrólisis ácidos grasos, esfingosina o glicerol y un carbohidrato. Existen algunos
grupos de compuestos que contienen estructuras tanto de lípidos como de carbohidratos.
Aquellos que son solubles en agua reciben el nombre de liposacáridos y se consideran como
derivados de carbohidratos. Aquella que sigue siendo solubles en disolventes orgánicos no
polares se clasifican como glicolípidos. Un grupo de glicolípidos contiene ácidos grasos, glicerol y
diversos carbohidratos.
Esfingolípidos:
Producen por hidrólisis ácidos grasos, esfingosina, ácido fosfórico y un componente alcohólico. Se
encuentran en las membranas de plantas y animales, pero sólo muy poco cantidad en los
depósitos de grasa. Aquí, el esqueleto de la molécula es el alcohol aminado esfingosina en lugar de
glicero. También están presentes en ellos, ácidos grasos, fosfato y un compuesto alcohólico.
Lipoproteínas:
3.2.3. Esteroides:
Los esteroides son compuestos que poseen una estructura fenantrénica muy diferente de los
lípidos formados por ácidos grasos. Se hallan en tejidos vegetales y animales, levaduras y hongos
y pueden existir libre o combinación con ácidos grasos o carbohidratos. Puesto que los esteroides
esenciales son hidrocarburos de masa molar grande, son solubles solo en los disolventes de
grasas. Difieren de los demás lípidos en cuanto a que no experimentan saponificación.
3.3.1. SOLUBILIDAD:
Las propiedades de solubilidad de los lípidos son una función de su estructura tipo alcano. Los
grupos principales de los lípidos tienen características de solubilidad diferentes y esta propiedad
se usa su extracción y purificación a partir de materiales biológicos.
La mayoría de los lípidos son solubles en etanol, pero forman una emulsión de gotas pequeñas
cuando se les agrega agua. Esto da a la suspensión una apariencia lechosa característica y
constituyente una prueba muy sensible para grasas.
3.3.2. INSTAURACIÓN:
Los ácidos grasos presentes en las grasas animales están generalmente saturados, mientras que
aquellos presentes en los aceites vegetales contienen uno o más enlaces dobles. La hidrogenación
de estos enlaces convierte los aceites vegetales líquidos en grasas sólidas, siendo esto lo se hace
comercialmente para la producción comercial de margarina.
Los halógenos17 pueden unirse fácilmente a los enlaces dobles. La decoloración de una solución de
bromo o yodo por un lípido indica la presencia de los enlaces doble.
“Por ACIDEZ de un lípido se entiende el contenido de ácidos grasos libres de un aceite o una grasa
y se expresa en porcentaje en masa de ácido oleico, palmítico o láurico, según la naturaleza del
producto que se trate”
Las grasas almacenadas pueden enranciarse debido a la oxidación de los dobles enlaces para
formar peróxido y su hidrólisis por microorganismos con liberación de ácidos grasos. La cantidad
de ácidos grasos libres, da por lo tanto, un índice de la frescura y calidad de la grasa.
Como dice el documento de ICAITI (14) el “índice de acidez es la cantidad de hidróxido de potasio
necesario para neutralizar la acidez y se expresa en miligramos de KOH requeridos
Es una medida de los ácidos grasos libres de un lípido. La reacción es simplemente la titulación de
un ácido (el graso) y una base fuerte. Para neutralizar los ácidos grasos libres de la cantidad de
lípidos analizados se efectúa la conversión a un gramo de grasa y se expresa el resultado como IA.
En el documento de ICAITI (14) está indicado que la acidez y el índice de acidez se calcula
aplicando las siguientes ecuaciones y promediando los resultados obtenidos en las
determinaciones en duplicado. Es decir que para obtener valores confiables es necesario repetir,
al menos una vez, la prueba de IA.
Donde:
Nota: Tenga cuidado de no confundir la masa “m” con la masa del “extracto”
El IA también puede calcularse utilizando un procedimiento estequiométrico. Para ello el
estudiante deberá consultar su memoria y algún texto utilizando en la Química General 1 y 2.
La hidrólisis de los triacilgliceroles puede efectuarse por varios procedimientos, los más comunes
utilizan álcalis o enzimas llamadas lipasas. La hidrólisis alcalina recibe el nombre de
saponificación, debido a que uno de los productores de la hidrólisis es un jabón, de ordinario, de
sales de sodio o potasio de los ácidos grasos.
Esta reacción de hidrólisis también proporciona un método analítico, útil para la determinación de
una constante, el índice de saponificación, el cual es característico de los lípidos simples.
El índice de saponificación da una idea del tipo de ácidos grasos presentes en el lípido ya que entre
más larga sea la cadena hidrocarbonada, menor será la cantidad de ácido liberado por gramo de
lípido. En otras palabras, un índice de saponificación pequeño de un ácido o aceite indica una
masa molar elevada.
Experimentalmente, una muestra pesada de grasa se saponifica con una Cantidad X de una
solución alcohólica valorada de hidróxido de potasio. Después de la saponificación, el exceso de
álcali (cantidad y) se titula con ácido valorado.
Utilizando esta ecuación puede averiguarse la Cantidad de Z, es decir, los ml de KOH que se
emplearon en la saponificación. Ya con esto puede averiguarse el IS.
porcentaje se hace necesario para realizar el cálculo del índice de acidez y el índice de
saponificación.
grasos?
11. ¿Cómo se detectaría la presencia de lípidos en una solución de etanol con agua?
12. ¿Cuál es la diferencia entre ácido graso de grasas animales y ácido graso de aceite vegetal?
14. ¿Qué es el índice de acidez de un lípido? Según su material de apoyo ¿de cuántas maneras
5. MATERIALES
A cargo de cada grupo de trabajo:
5 tubos de ensayo.
1 gradilla de metal.
1 pinza p/tubo de ensayo.
1 estufa eléctrica.
2 probetas de 10 mL.
1 baño de maría metálico.
2 soportes universales.
2 pinza para bureta.
1 balanza mono plato.
2 Erlenmeyers de 100 mL.
1 varilla de Vidrio.
1 probeta de 25 mL.
1 frasco gotero con etanol. -
1 frasco gotero c/fenoftaleina.
50 ml de extracto de lípidos.
Agua destilada.
Solución de KOH [0.5 M]
Solución de HCl [0.5 M].
Alcohol etílico.
Solución de KOH [0.1 N]
Un frasco gotero con solución de I2 en CHCl3 (cloroformo), al 1%p/v.
Un frasco gotero con solución de Br2 en agua, al 1%p/v.
Dos balanzas semianalíticas.
6. METODOLOGÍA
7. EVALUACIÓN DE LA PRÁCTICA
Carátula.
Aquí ha de hacerse la presentación que se considere más conveniente. Pueden utilizar esquemas,
cuadros y/o frases para expresar lo observado durante la práctica. Aquí se incluyen también los
resultados de la solución a los cuadros negros.
BIBLIOGRAFÍA
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10. FIESER, L.; FIESER, M.. 1948. Química orgánica. Trad. Por Francisco Giral. México D.F.,
Editorial Atlante. 112p.
11. Gaxiola, V. 1975. Cromatografía; principios y técnicas. México D.F. El Manual Moderno. 93p.
12. HARPER, H. 1976. Manual de química fisiológica. Trad. Por Guillermo Anguiano. 5ed.
México D.F., El Manual Moderno. 653p.
13. HERBARIO FAUSAC. 1983. Algunas indicaciones para la preservación de plantas. FAUSAC,
Guatemala, 14p.
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M. Cuchillo y Josep Vendrelli Roca. Barcelona, Ediciones Omega. 1013p
18. SALISBURY, F,;ROSS,C.. 1994. Fisiología Vegetal. Trad, por Virgilio González Velázquez.
México D.F., Grupo Editorial Iberoamérica. 759 p.
19. SMITH, C.; WOOD, E.. 1997. Moléculas biológicas. Trad. Por Héctor Escalona y García.
Estados Unidos, Addison – Wesley Iberoamericana. 739 p.
20. WHITE, A,; HANDLER, P.; SMITH, E,. ¡983. Principios de bioquímica. Trad. Por Manuel López
Pérez. 2 ed. España, Mac.Graw-Hill. 1582p.