ANALISIS FITOQUIMICO PRELIMINAR

I. INTRODUCCION.
El hombre utiliza las plantas con propósitos medicinales desde tiempos
prehistóricos y aún hoy tienen un papel clave en el mantenimiento de la salud de
la mayor parte de la población mundial, pese a los avances de la medicina
moderna. Esto si se tienen en cuenta las diversas formas en que se utilizan, que
van desde la preparación de decocciones e infusiones en zonas rurales y países
pobres, pasando por los productos fitoterapéuticos, hasta la obtención de
principios activos en países desarrollados para la elaboración de medicamentos.
Se estima que en el mundo se utilizan cerca de 10000 especies vegetales con
fines medicinales, la mayor parte en sistemas de medicina tradicional.

El estudio de los productos naturales de los vegetales comprende: los estudios

etnobotánico, fitoquímico y de bioactividad.

La etnobotánica es el estudio de las relaciones entre plantas y hombres. En la

etnobotánica se trata el cultivo, la cosecha y el uso posible y efectivo de las
plantas, los cultos que refieren a esos y el papel de las plantas en la visión del
mundo y en la lengua.

La fitoquímica estudia las propiedades y estructuras químicas de los productos

naturales (de las plantas). A través de lo que se conoce como marcha fitoquímica
(serie de pasos donde se observan reacciones como cambio de color,
fluorescencia, etc.) se determina la existencia de un tipo de compuesto químico.

La bioactividad trata de descubrir qué parte de la planta es responsable de la

actividad biológica importante y propiedades útiles para ser estudiada.

Hay tres razones por las cuales el análisis fitoquímico preliminar de los productos
naturales vegetales es necesario para establecer:

La identidad y fuente correcta de la droga (variación bioquímica).

La pureza, ausencia y límites de materias extrañas (adulteración).

La calidad y cantidad de componentes activos (deterioro).

El Análisis Fitoquímico de una planta puede comprender los siguientes aspectos:

estudio etnobotánico de la planta; identificación botánica; recolección y colección
de la especie vegetal; extracción, separación y aislamiento de los componentes
de interés; caracterización de los compuestos aislados; investigación de las rutas
biosintéticas referidas a compuestos determinados; valoraciones cuantitativas.

Toda la materia prima utilizada procedente de una planta ha de ser

adecuadamente identificada, ya que puede desperdiciarse mucho tiempo y
dinero en el examen del material de origen dudoso. La elección de la marcha
fitoquímica preliminar depende de la naturaleza de la materia prima vegetal y de
los componentes que han de ser aislados de ella. Uno de los métodos es
fraccionar o separar los distintos compuestos de la planta según una regla de
afinidad; por ejemplo a ciertos disolventes.

II. OBJETIVO.

2.1. Conocer las técnicas básicas para realizar un análisis fitoquímico preliminar
de una especie vegetal.

2.2. Identificar los diferentes grupos de metabolitos secundarios presentes en su

muestra.

III. FUNDAMENTO TEORICO.

Los organismos vivos pueden considerarse como un laboratorio biosintético, no

solamente de compuestos utilizables en la alimentación (carbohidratos,
proteínas, grasas), sino también de una gran variedad de compuestos
(glicósidos, alcaloides, aceites volátiles, etc. que ejercen determinados efectos
fisiológicos. Estos compuestos químicos dan a las drogas sus propiedades
terapéuticas y se les llama constituyentes activos, para diferenciarlos de los
constituyentes "inertes" que también están en las drogas.

Una clasificación de los constituyentes de los organismos vivos es en primarios

o esenciales y secundarios:

▪ Primarios: sustancias que son necesarias para el funcionamiento

químico normal de la célula (metabolitos, aminoácidos, ácidos grasos,
glicéridos, monosacáridos, vitaminas, hormonas, etc.)
 ▪ Secundarios: sustancias que aparentemente no tienen funciones y que
solamente aparecen en especies particulares (alcaloides, aceites
esenciales, antraquinonas, etc.)

3.1. Identificación de los grupos de metabolitos secundarios.

Debido a la diversidad de grupos funcionales que pueden estar presentes en los

componentes de una planta no existe una prueba específica para su
reconocimiento. Sin embargo existen unos pocos procedimientos
experimentales que permiten reconocer algunos de ellos por una serie de
reacciones de precipitación, coloración con diferentes reactivos, su absorción de
luz UV de 254 nm y su Rf en cromatografía en capa fina.

Las reacciones de precipitación y coloración se utilizan para comprobar la

presencia de los metabolitos secundarios en la muestra. Se han desarrollado un
gran número de reactivos de coloración y de precipitación, algunos de ellos son
considerados de aplicación general, mientras otros son más específicos y
pueden servir para clasificaciones parciales de sustancias. Generalmente se
considera que hay presencia de específica de ese grupo de metabolitos
secundarios si dan reacción positiva a por lo menos dos de estos reactivos; en
el caso de los alcaloides, por lo menos cuatro de estos reactivos. Los análisis
pueden realizarse de variadas formas.

Tanto en los extractos obtenidos en frio y en caliente se realizan las pruebas

descritas a continuación: Extracción, destilación a contracorriente, precipitación
de derivados poco solubles, destilación, absorción e intercambio iónico. En el
análisis de las drogas crudas son muy útiles la microdestilación, sublimación,
precipitación, ensayos a la gota, cromatografía de absorción en papel. En el caso
de drogas no particulares (grasas, aceites esenciales, resinas, es útil para la
identificación la determinación de una serie de valores tales como índice de iodo,
punto de fusión, índice de saponificación, índice de acetilo, índice de ésteres,
solubilidad, viscosidad, materia insaponificable, índice de refracción, densidad,
poder rotatorio.

Los métodos químicos empleados en el análisis de drogas puras son del mismo
tipo que los usados para compuestos químicamente puros (gravimetría,
hidrovolumetría, colorimetría, espectrofotometría, cromatografía, etc.), pero en
muchos casos debe primero alcanzarse una determinada concentración del
compuesto ensayado para eliminar interferencias de otros constituyentes. En los
últimos años el desarrollo de métodos de separación y aislamiento por medio de
adsorción, intercambio iónico y cromatografía de gases han facilitado muchos
análisis.

El uso del IR hace necesario el aislamiento previo.

3.2. Resultados de los grupos de metabolitos secundarios.

La Práctica de Laboratorio permitirá establecer la presencia de las siguientes

familias demetabolitos:

Aceites Esenciales,

Carotenoides,

Ácidos Grasos,

Cumarinas,

Taninos Catéquicos,

Taninos Gálicos,

Quinonas,

Alcaloides,

Flavonoides,

Compuestos Reductores,

Antocianinas,

Esteroles,

Triterpenos,

Lactonas Insaturadas,

Y Otros.
IV. PROCEDIMIENTO.
V. MATERIALES Y REACTIVOS.

5.1. Materiales.

▪ Balanza
▪ Vasos de precipitación
▪ Estufa
▪ Matraces
▪ Baño maría
▪ Embudos
▪ Cocina eléctrica
▪ Papel de filtro
▪ Equipo de evaporación al vacío.

5.2. Reactivos.

✓ Solventes: Etanol, metanol, cloroformo y éter.

✓ Tricloruro de hierro: FeCl3 al 1%.

✓ Reactivo de Borntranger: NaOH al 10%.

✓ Reactivo de Liebermann-Bouchard: Mezclar 5 ml de anhídrido acético

con 5 ml de ácido sulfúrico concentrado. Agregar esta mezcla, con mucho
cuidado y enfriando, a 50 ml de etanol (preparar poco antes de su uso).
Aspersar y calentar 10 min. A 110 C. Observar la aparición de una mancha
fluorescente a la luz UV, a 365 nm, para la detección Δ5-3-esteroles, otros
esteroides y glicósidos triterpénicos.

✓ Reactivo de Dragendorf, según Munier:

• Solución a: Se disuelven 1,7 g de nitrato básico de bismuto, en 20 g

de ácido tartárico y luego en 80 ml de H2O.

• Solución b: Se disuelven 16 g de ioduro de potasio en 40 ml de H2O.

• Solución de reserva: Mezclar volúmenes iguales de las soluciones a

y b, conservar en refrigeración.
 • Para utilizar, disolver 10 g de ácido tartárico en 50 ml de H2O y
agregar 5 ml de la solución de reserva, para la detección de alcaloides
indólicos y derivados.

✓ Reactivo de Mayer:

• Solución a: Se disuelven 13,5 g de HgCl2 en 20 ml de H2O. Se

disuelven 49,8 g de KI en 20 ml de H2O. Se mezclan y se completa a
100 ml. Se agrega 15 ml HCl en solución acuosa al 17%.

• Solución b: Se disuelven 5 g de ZnCl2 en 80 ml de HCl (37%).

• Solución c: Solución amoniacal al 15%.

• Aspersar con a, se lava el cromatograma con agua durante 10 min,,

se deja escurrir, se aspersa con b y después con c. Observar la
aparición de manchas marrones, para la detección de alcaloides.

✓ Reactivo de Wagner: Se disuelven 1 g de iodo y 10 g de ioduro de potasio

en 50 ml de H2O. Acidificar con 2 ml de ácido acético glacial y completar
con H2O hasta 100 ml. Aspersar y observar formación de manchas
marrones, para la detección de alcaloides.

✓ Reactivo de Shinoda. Se adiciona a la solución problema limaduras de

Mg y 1 ml de HCl al ¡0%. Observar la aparición de coloración rojiza, hasta
los 10 min., para la detección de flavonoides.

✓ Ensayo de la Espuma: Se adiciona 5 ml de solución etanólica en un tubo

de ensayo, se agita vigorosamente. Observar la aparición de espuma con
una permanencia de 10 segundos, para la detección de saponinas.
 VI. RESULTADOS.

METABOLITO
ENSAYO COLORACIÓN RESULTADOS
SECUNDARIO
Taninos gálicos FeCl3 Azul +
Taninos catéquicos FeCl3 Verde oscuro -
Quinonas Borntranger Rojo en fase acuosa -
Liebermann- Verde o azul-
Esteroides -
bouchard verdoso
Dragendorf Naranja -
Alcaloides Mayer Blanco o crema -
Wagner Marrón +
Flavonoides shinoda Rojo -
antoncianinas Verde castaño o azul -
Leyenda:

(+) Presenta.

(-) no presenta.

Además nuestra muestra presento saponinas, las cuales identificamos al agitar

un poco de la muestra por 2 minutos y dejar reposar por 10, manteniendo una
leve espuma, lo que indico la presencia de saponinas.

VII. CONCLUSIONES

Los resultados del análisis fitoquímico preliminar efectuado sobre la muestra

de hojas de Origanum vulgare evidencian la presencia de alcaloides, taninos,
saponinas. No presento flavonoides, ya que al momento de hacer el análisis
no presento un color rojizo, sino un marrón y no tiene antisoninas porque al
agregar hidróxido de sodio no cambio de color.
VIII. DISCUSION DE LOS RESULTADOS.

8.1. ¿Cuáles son los resultados más resaltantes obtenidos de la marcha

fitoquímica preliminar realizada por su Grupo de Trabajo?

Principalmente, al empezar nuestro análisis nos dimos cuenta que la muestra

de orégano nos dio por resultado de que presentaba taninos gálicos, los
cuales son polímeros heterogéneos formados por ácidos fenólicos, en
particular ácido gálico, y azúcares simples. Son más pequeños que los
taninos condensados y son hidrolizados con más facilidad, sólo basta ácido
diluido para lograrlo. La mayoría tiene una masa molecular entre 600 y
3000.los cuales son los que dan un ligero olor característico, sabor amargo
y astringente, y su color va desde el amarillo hasta el castaño oscuro

8.2. ¿Son los resultados obtenidos en el análisis fitoquímico preliminar de su

especie vegetal concordantes con los reportados en la bibliografía?

De acuerdo Nelson Genovés (1980) la hoja de orégano en un análisis

preliminar presenta, taninos gálicos, alcaloides triterpenos, saponinas.
Según los resultados obtenidos y con el análisis preliminar que realizamos
al orégano, podemos decir que obtuvimos la gran parte de estos resultados
concordando con Nelson en los resultados del análisis preliminar,
obteniendo así taninos gálicos, saponinas y alcaloides. Claro los cuales
también pudieron de alguna manera haber sido afectados por el solvente
(alcohol) que se usó en este análisis, ya que si bien sabemos el alcohol
podría hacer que varíen los resultados, arrojándonos datos erróneos.

8.3. ¿Las propiedades medicinales/colorantes/cosméticas/industriales de la

especie vegetal analizada por su Grupo, podrían explicarse por la presencia
de los metabolitos secundarios encontrados?

Si, debido a que está formado por taninos gálicos lo cuales se encuentran
en dicotiledóneas las cuales están presentes en la familia Lamiaceae, en las
que se encuentra el orégano y sirve para tratar enfermedades como cólicos,
reumatismo, artritis, etc.
 8.4. ¿Cuál sería la utilidad, como profesional agroindustrial, que le
proporcionará el análisis fitoquímico preliminar de su especie vegetal?

Conocer qué principios activos posee, en nuestro caso el orégano, y así

poder producir productos capaces de mejorar la calidad de vida de las
personas de una manera sana y natural.

El orégano se podría utilizar en el campo farmacéutico como comprimido,

estomacal, digestivo.

VIII. REFERENCIAS BIBLIOGRAFICAS UTILIZADAS.

✓ Nelson Genovés Leonor (tesis de graduación) 1980. “Obtención y

aprovechamiento de extractos vegetales”.

✓ Cumpa J, Uribe A. "Plantas medicinales- propiedades y usos”. Primera

edición 2003 – Tomo 2. BIBLIOTECA DE LA UNIVERSIDAD CESAR
VALLEJO