FACULTAD DE CIENCIAS

QUÍMICAS
PROCESO DE DISEÑO
CURRICULAR
INFORME DE LABORATORIO
Código: FCQ-P05-F06; Versión: 01; 15
de enero de 2017
INFORME DE
LABORATORIO

Asignatura: Productos Naturales 2 Nota:

Número de práctica: 2
Fecha de realización: Fecha de entrega:
Integrantes / Grupo Nicolas Aviles; Geovanny Benavides; Leonardo Figueroa; Paul
N°: 2 Lucena

1. TEMA: MARCHA FITOQUIMICA

1. OBJETIVOS:
1.1. General:
Reconocer algunos tipos de metabolitos presentes en el extracto de eucalipto

1.2. Específicos:
Realizar las reacciones respectivas para verificar los componentes del extracto en relación a la
bibliografía consultada.

Realizar una cromatografía en capa fina y calcular los valores Rf de las sustancias obtenidas

2. FUNDAMENTO TEORICO:

Una de las primeras etapas iniciales dentro de la investigación fitoquímica se trata del tamizaje o
screening fitoquímico, esta etapa permite obtener la información cualitativa, sobre los principales grupos
de constituyentes químicos que presenta una planta; para más tarde conocer el método más adecuado de
extracción y/o fraccionamiento de los extractos, con el fin de obtener los grupos de mayor interés. El
tamizaje fitoquímico consiste en la obtención del extracto de la planta estudiada, utilizando solventes
adecuados y ayudándose a través de reacciones de coloración; este tipo de reacciones debe permitir que el
proceso se realice de manera rápida y sensible; debe permitir que el método sea reproducible y de bajo
costo también. Los resultados obtenidos a partir de esta etapa pueden ser tomados únicamente como una
guía y deben complementarse con los resultados del screening farmacológico.

Existen diversos métodos de tamizaje fitoquímico, los cuales están descritos en diferentes fuentes
bibliográficas; presentan diferentes funciones algunos evalúan unos pocos grupos de sustancias, mientras
otros complementan, evaluando compuestos de poco interés como: ácidos grasos, azúcares reductores,
polisacáridos y mucílagos. La cantidad de muestra vegetal necesaria para realizar las pruebas varía entre 5
a 200 g. Este método permite determinar la presencia de los principales grupos de compuestos químicos,
tanto libres, como en la forma de glicósidos. [ CITATION Sha00 \l 12298 ]

El estudio basado en una marcha fitoquímica consiste en efectuar una extracción (del material
previamente colectado, secado y molido) que permita obtener la mayor parte de los constituyentes
químicos (extracto total crudo o bruto); por ello se debe utilizar un solvente universal que solubilice y
cosolubilice la mayoría de los compuestos, siendo los más utilizados el metanol y el etanol.
Posteriormente el extracto total se fracciona mediante un cambio de pH y partición con solvente de menor
polaridad (generalmente cloroformo), obteniéndose una serie de fracciones sobre las que se realizan
ensayos que permitirán obtener datos sobre los grupos fitoquímicos presentes.[ CITATION Sha00 \l
12298 ].
 3. MATERIALES Y MÉTODOS
a. Materiales y Reactivos:

MATERIALES REACTIVOS
Vasos de precipitación Etanol 96%
Pipetas graduadas Agua destilada
Embudos de separación HCl
Goteros NaOH
Placas de toque Diclorometano
Tubos de ensayo R. de Mayer
Papel filtro R. de Dragendorff
Matraces Erlenmeyer R. de Wagner
Capilares R. de Elrich
Placas cromatográficas R. de Bertrand
Balanza analítica A±0.001g R. de Baljet
Molino R. de Zack
Tijeras R. de Kedde
Marcador de vidrio Butanal
Ácido acético
Acetato de plomo

b. Procedimiento:

 Marcha Fitoquímica.-
Se pesó 50 g de muestra (hojas de eucalipto) previamente secada y molida y se llevó a
maceración por 48 horas con Etanol al 95%. Luego se filtró al vacío y se concentró el extracto
etanólico en el rotavapor.

Para la primera parte de la marcha fitoquímica, se tomó un equivalente a 15 g de muestra del

extracto concentrado y se añadió HCl concentrado hasta bajar el pH a un rango entre 2-3 y
posteriormente se alcaliniza la mezcla con NaOH hasta llegar a un pH entre 10-12.
Luego, se llevó a un embudo de separación y se añadió 25 ml de Diclorometano y se separó la
fase acuosa de la fase orgánica. Con la fase acuosa se realizó la identificación de alcaloides
colocando 2 gotas de la misma en una placa de toque y añadiendo gotas de reactivo de
Dragendorff. Por otra parte, se guardó una alícuota de aproximadamente 3 ml de la fase orgánica
para una posterior cromatografía en capa fina y al restante se añadió 5 ml de HCl y se realizó
pruebas de identificación con los reactivos de Mayer, Dragendorff, Wagner, Elrich y Bertrand.

En la segunda parte de la marcha fitoquímica, se tomó un equivalente a 9 g de muestra del

extracto etanólico y se añadió 20 ml de éter de petróleo en otro embudo de separación,
obteniéndose nuevamente una fase acuosa y una fase orgánica. Se tomó una alícuota de la fase
orgánica para una posterior cromatografía de capa fina y otra alícuota se llevó a concentrar en un
baño maría para realizar con ella las pruebas de identificación con reactivo de Liebermann-
Burchards y reactivo de Zack. A la fase acuosa, en cambio, se añadió una mezcla de Etanol-
Agua en relación 1:7 y se realizaron pruebas de identificación específicas en una placa de toque,
las cuales fueron las siguientes: identificación de Flavonas con reacción de Shinoda,
identificación de Antraquinonas con reacción de Brontrager, identificación de Taninos mediante
la prueba de gelatina y, por último, identificación de Saponinas mediante la prueba de la espuma.

Para la tercera parte de la marcha fitoquímica, se tomó un equivalente a 10 g de muestra a partir

del extracto etanólico y se añadió acetato de plomo en un vaso de precipitación. Se filtró la
mezcla y se desechó el precipitado. Luego, al filtrado se añadió Diclorometano, se filtró con
sulfato de sodio anhidro y se guardó una alícuota para una posterior cromatografía en capa fina.
Con el filtrado restante se realizó pruebas de identificación de heterósidos cardiotónicos en una
placa de toque mediante los siguientes reactivos: Baljet, Raymond, Kedde y Liebermann-
Burchards.

 Cromatografía en capa fina. -

Para identificación y separación de alcaloides se sembró la muestra con un capilar en una placa
de sílice y se eluyó con una fase móvil de Butanal-Ácido acético-Agua en relación 10:1:3. Luego
se observó el recorrido de los componentes de la muestra en luz ultravioleta y se reveló con
reactivo de Dragendorff para observar nuevamente, medir la distancia recorrida y calcular el Rf
correspondiente.

Para identificación y separación de taninos se sembró la muestra con un capilar en una placa de
sílice y se eluyó con la fase móvil preparada previamente. Luego se reveló la placa con reactivo
de Liebermann-Burchards, se midió la distancia recorrida y se calculó su Rf.

Para identificación y separación de flavonoides se sembró la muestra con un capilar en una placa
de sílice y se eluyó con la fase móvil preparada previamente. Luego se reveló la placa con
Acetato de Plomo, se midió la distancia recorrida y se calculó su Rf.

4. RESULTADOS:

4.1. Extracto concentrado:

Con 50 gramos de hojas de Eucalipto maceradas, se obtuvo una cantidad de 163ml de
extracto concentrado.

4.2. Reacciones de reconocimiento:

Tabla 1. Reacciones de reconocimiento de Alcaloides

N° Muestra Presencia

1 Mayer Positiva
2 Dragendorf Positiva
3 Wagner Positiva
Elaborado por Lucena P. y otros

Tabla 2. Reacciones de reconocimiento de Flavonoides

N° Muestra Presencia

1 Lieberman Buchard Positiva

2 Zak Positiva
Elaborado por Lucena P. y otros

Tabla 3. Reacciones de reconocimiento de Cardiotonicos

N° Muestra Presencia

1 Baliet Positiva
2 Kedde Negativa
3 Raymound Harthoud Negativa
4 Lieberman Negativa
Elaborado por Lucena P. y otros

Tabla 4. Reacciones de reconocimiento de Taninos

N° Muestra Presencia
 1 FeCl3 Positiva
Elaborado por Lucena P. y otros

4.3. Cromatografia de capa fina

Cálculo del Rf (factor de retención)

X
Rf=
Y
Donde:
X= distancia recorrida por el compuesto
Y= distancia recorrida por el eluyente

Tabla 5. Resultados del cálculo de los Rf para el extracto (alcaloides)

N° Muestra Factor de retención
A simple vista Luz UV Revelado químico
1 Extracto concentr. - 0,56 0,56
2 Extracto cloroformico - 0,67 0,67
Elaborado por Lucena P. y otros

Tabla 6. Resultados del cálculo de los Rf para el extracto (flavonoides)

N° Muestra Factor de retención
A simple vista Luz UV Revelado químico
1 Extracto concentr. - 0,33 0,33
2 Fraccion acuosa - 0,71 0,71
Elaborado por Lucena P. y otros

Tabla 7. Resultados del cálculo de los Rf para el extracto (taninos)

N° Muestra Factor de retención
A simple vista Luz UV Revelado químico
1 Extracto concentr. - 0,36 0,36
2 Fraccion acuosa - 0,84 0,84
Elaborado por Lucena P. y otros

5. DISCUSIONES

- La extracción de los compuestos de interés de las hojas de eucalipto secas se lo realizó mediante
maceración y una vez finalizado el tiempo de extracción y concentración. Se obtuvo que se
50gramos de hojas de eucalipto se disponía de 163ml de extracto. Indicando un rendimiento
bastante bueno en lo que se refiere al resultado final, aproximadamente 3 veces de la cantidad
del material original.

- Realizadas las reacciones de reconocimiento para alcaloides por tres reacciones,a) la reacción

de Mayer nos muestra un precipitado blanco, lo que confirma la presencia de alcaloides, b) la
reacción de Draguendorf nos muestra un precipio de color rojo ladrillo lo que confirma la
presencia de alcaloides, c) la reacción de Wagner nos muestra un precipitado marrón lo que
confirma la presencia de alcaloides finalmente en las hojas de eucalipto. 

- Realizadas las reacciones de reconocimiento de flavonoides por dos reacciones: a) la reacción

de Lieberman nos muestra un anillo azulado lo que confirma la presencia de flavonoides, b) la
reacción de Zak nos muestra un cambio de coloración verde lo que confirma finalmente la
presencia de flavonoides en las hojas de eucalipto. 
 - Realizadas las reacciones de reconocimiento de cardiotonicos por 4 reacciones: a) la reacción de
Ballet nos muestra un cambio de coloración a naranja estable lo que indica presencia
de cardiotonicos, b) la reacción de Keppe nos muestra coloración naranja estable lo que indica
ausencia de cardiotonicos, c) la reacción de Raymond nos muestra una coloración anaranjada
estable lo que indica ausencia de cardiotonicos, d) la reacción de Lieberman no muestra cambio
al color naranja lo que confirma finalmente la ausencia de cardiotonicos en las hojas de
eucalipto. 

- Realizada la reacción de reconocimiento de Taninos en una sola reacción: a) la reacción con
cloruro ferroso muestra una coloración verdosa lo cual confirma la presencia de Taninos
hidrosolublesen las hojas de eucalipto. 

- La cromatografía de capa fina en las muestras de alcaloides sembradas nos muestra un RF de

0,56 del extracto crudo y un RF de 0,67 de la muestra sembrada, estos valores confirman la
presencia de alcaloides que, en la bibliografía nos indica un RF con valores de 0,61 y una
variación de +-0,03. 

- La cromatografía de capa fina en las muestras de flavonoides sembradas nos muestra un RF de

0,33 del extracto crudo y un RF de 0,71 de la muestra sembrada, estos valores confirman la
presencia de flavonoides que, en la bibliografía nos indica un RF de 0,58. El valor obtenido
experimentalmente sobrepasa el valor de la teoría, esto pudiéndose deber a fallas en los
procedimientos para la extracción pura de la fracción acuosa en los embudos de separación. 

- La cromatografía de capa fina en las muestras de Taninos sembradas nos muestra un RF de 0,36

del extracto crudo y un RF de 0,84 de la muestra sembrada, estos valores confirman la
presencia de alcaloides que, en la bibliografía nos indica un RF de 0,76. El valor obtenido
experimentalmente sobrepasa el teorico debido a que el eucalipto puede contener altas
concentraciones de taninos o a los procedimientos de concentración de la muestra o extracto.

6. CONCLUSIONES

 Se reconoció algunos tipos de metabolitos presentes en el extracto de eucalipto mediante

reacciones específicas como Dragendorff, Lieberman y en la reacción con tricloruro de hierro
que determinaron la presencia de alcaloides, flavonoides y taninos en el extracto de
eucalipto.
 Se realizó una serie de reacciones al extracto para lograr verificar los componentes presentes
en el extracto y ver si concuerdan con los descritos en la monografía.
 Se realizó una cromatografía en capa fina en una placa de sílica-gel y se calculó los valores
correspondientes al factor de retención (RF) de las sustancias obtenidas que fueron: Para
Alcaloides (Extracto total=0.56; Muestra 1: 0.67), para Flavonoides (Extracto total=0.33;
Muestra 1: 0.71) y Taninos (Extracto total=0.36; Muestra 1: 0.84).
 Al calcular los valores de factor de retención se comprobó que el extracto de eucalipto
efectivamente tiene Alcaloides, Flavonoides y Taninos ya que en la muestra 2
(correspondiente a la fase acuosa previamente preparada) presenta valores de RF mayores a
0.7.

10. BIBLIOGRAFÍA

Cordova , V. (03 de Marzo de 2016). scribd. Obtenido de Marcha Fitoquimica:

https://es.scribd.com/document/301869194/Practica-N%C2%BA-5-fitoquimica-Marcha-
Fitoquimica-docx
Sharapin , N. (2000). Tamizaje farmacológico y tamizaje fitoquímico. En N. Sharapin, Fundamentos de
tecnología de productos fitoterapéuticos (págs. 194-210). Santafé de Bogota: CYTED.
x