IDENTIFICACIÓN DECARBOHIDRATOS

POR MÉTODOS CROMATOGRÁFICOS

ALUMNO: HOYOS PEREZ MALENI

AULA: FB4M1

CURSO: QUÍMICA ORGANICA

PROFESOR: ÑAÑEZ DEL PINO

DANIEL
 INTRODUCCION

Entre los métodos cualitativos y cuantitativos para determinación de

carbohidratos, se encuentra la cromatografía.
Esta técnica es de considerable importancia ya que su efectividad radica en
hacer separaciones de sustancias muy semejantes entre sí estructuralmente,
como son los isómeros y los estereoisómeros; así como separar sustancias
diferentes.
La cromatografía se define como un método de análisis adecuado para la
separación de los componentes de una muestra por percolación de un líquido
sobre un material poroso (papel) o finamente dividido (sílica gel),
produciéndose así un intercambio entre las fases.
De esta forma, los constituyentes de la mezcla se separarán debido a la
diferencia en sus velocidades de migración.
Para identificar las sustancias en el papel, se ha introducido una relación
conocida como “Rf” ( Relación de Frentes), que es una relación entre la
distancia recorrida por una sustancia y la distancia migrada por el solvente.
El Rf es un valor característico de capa compuesto, y depende tanto del
solvente utilizado como de las condiciones empleadas para la cromatografía.
Cuando se agita un compuesto con dos disolventes que no se mezclan, este se
distribuye en las dos fases en equilibrio, la razón de la concentración del
compuesto en los dos solventes es constante y se conoce como el coeficiente
de partición.
 MARCO TEORICO

Azúcares

Los carbohidratos o hidratos de carbono están formados por carbono (C), hidrógeno
(H) y oxígeno (O) con la fórmula general (CH2O)n. Los carbohidratos incluyen
azúcares, almidones, celulosa, y muchos otros compuestos que se encuentran en
los organismos vivientes. Los carbohidratos básicos o azúcares simples se
denominan monosacáridos. Azúcares simples pueden combinarse para formar
carbohidratos más complejos. Los carbohidratos con dos azúcares simples se
llaman disacáridos. Carbohidratos que consisten de dos a diez azúcares simples se
llaman oligosacáridos, y los que tienen un número mayor se llaman polisacáridos.
Los azúcares son hidratos de carbonos generalmente blancos y cristalinos, solubles
en agua y con un sabor dulce.

La cromatografía

La cromatografía es uno de los principales métodos para la separación de especies

químicas estrechamente relacionadas en mezclas complejas. La cromatografía es
un método físico de separación basado en la distribución de los componentes de
una mezcla entre dos fases inmiscibles, una fija o estacionaria y otra móvil.

La cromatografía es una técnica que permite la separación de los componentes de

una mezcla debido a la influencia de dos efectos contrapuestos.

a) Retención. Efecto producido sobre los componentes de la mezcla por una fase
estacionaria, que puede ser un sólido o un líquido anclado a un soporte sólido.

b) Desplazamiento. Efecto ejercido sobre los componentes de la mezcla por una

fase móvil, que puede ser un líquido o un gas.

El fenómeno de migración de los componentes de una mezcla a lo largo de la fase

estacionaria, impulsados por la fase móvil, recibe el nombre de elución. Las dos
fases se eligen de forma que los componentes de la muestra se distribuyen de modo
distinto entre la fase móvil y la fase estacionaria. Aquellos componentes que son
fuertemente retenidos por la fase estacionaria se mueven lentamente con el flujo de
la fase móvil; por el contrario los componentes que se unen débilmente a la fase
estacionaria, se mueven con rapidez. Como consecuencia de la distinta movilidad,
los componentes de la muestra se separan en bandas o zonas discretas que pueden
analizarse cualitativa y/o cuantitativamente.
 PARTE EXPERIMENTAL

Competencias:
Describe y realiza la hidrólisis de un disacárido y polisacárido
Explica y conoce las técnicas cromatográficas para identificar carbohidratos

Objetivo:
- Aprender el procedimiento para trabajar la técnica de cromatografía.
- Identificar los azúcares presentes en una muestra.

Materiales y reactivos:
Materiales:
 Matraz de 250mL
 Pipetas de 5mL y 10mL
 Cocinilla eléctrica
 Centrífuga
 Espátula
 Backer 250mL
 Pro pipeta
 Bagueta
 Balanza analítica
 Cuba cromatografica pequeña

Reactivos:

o Acido Sulfúrico al 5%
o Carbonato de Calcio
o Cromatofolio 20 x20 cm
o Butanol
o Acido acético
o Piridina
o Acetato de Etilo
o Sacarosa Q.P
o Almidón Q.P
o Antrona
o Lugol
o Etanol
o Revelador de difenilamina
o Revelador acido 3.5-dinitrosalisilico
 Procedimiento experimental

1.- En
un matraz colocar 1 g de sacarosa y en otro 1 g de almidón.
A ambos matraces añadirles 10 mL de ácido sulfúrico al 5 % y Colocarlos en un
baño maría hirviendo por 20 minutos

2.- Probar con el matraz que contiene almidón si da coloración con el yodo.

3
.- Enfriar los hidrolizados con agua corriente y neutralizarlos con suficiente
cantidad de carbonato de calcio. Centrifugar y filtrar, y utilizarlo para
identificación de los azúcares por cromatografía en capa fina.
 Resultados:

RF (sacarosa) = 4.9 / 5.9 = 0.8

RF (almidon) = 3.5 / 5.9 = 0.5

 El RF de la sacarosa y del almidón es menor a 1 lo cual indica que

nuestros resultados son positivos.
 Conclusión

 Se realizó la separación de carbohidratos como el almidón y la sacarosa

por cromatografía en capa fina.
 Los solventes que utilizamos son buenos separadores de azúcares, en
este caso se utilizó butanol, agua y ácido acético.
 El Rf obtenido de la primera muestra que es sacarosa fue de 0.8.
 El Rf obtenido de la segunda muestra que es almidón fue de 0.5.
 El cálculo del Rf nos indica que la muestra que se movió más desde el
punto de aplicación con respecto al solvente es la que corresponde a la
sacarosa.
 No es recomendable ubicar las muestras muy cerca una de otra, ya que
se puede mezclar las muestras y nos dificultaría su identificación, es por
eso que debe tener un espacio mínimo de separación.

Cuestionario

1.-Indique otros reveladores para identificar azúcares por

cromatografía en capa fina.

 Luz UV
 La introducción de la placa en vapores de yodo
 El rocío con una solución de agua/H2SO4 1:1 (dentro de un
compartimiento especialmente protegido y bajo una campana de
extracción de gases)
2.- Qué otros métodos cromatográficos de aplican para identificar
carbohidratos. De ejemplos (Adjunte cromatogramas, gráficos o
figuras)

 Cromatografía en papel
 Cromatografía en capa fina
 Cromatografía de permeación en gel
 Cromatografía de exclusión de iones
 Cromatografía de intercambio iónico
 cromatografía de fluidos supercríticos
 Cromatografía de afinidad
 Cromatografía de líquidos de alta resolución

Bibliografía

 Mathews, C; Van Holde,K y Ahern, K . Bioquimica, 3° edición, Pearson

Educacion, Madrid, España (2003).
 T. A. Geissmnan. THE CHEMISTRY OF FLAVONOID COMPOUNDS,
The Macmillan Compancv, 1962
 Muñoz Mena. QUÍMICA ORGANICA, Publicaciones Cultura SA., 1965
 Xorge A. Dominguez, EXPERIMENTOS DE QUIMICA ORGANICA,
Editorial Limnusa. 1963
 Nelson, D y Cox, M. lehninger principios de bioquímica, 5° edicio,
Ediciones Omega; Barcelona, España; pp 71-117.(2009)
 Braithwaite, A. Métodos cromatográficos, 4ª ed., ED. Chapman & Hall,
Londres, 1985. Páginas 216217, 271-272.
 Burriel Marti, Felipe Lucena Conde, Siro Arribas Jimeno, Jesús
Hernández Méndez, Química Analítica Cualitativa, Ed. Thompson,
España, 2003 pp 321-322.
 Garrido, A., Fundamentos de química biológica. Interamericana Mc
Graw-Hill. España. 1991.
 Kenneth A. Rubinson, Judith F. Rubinson, Análisis Instrumental, Ed.
Prentice Hall, España 2004, pp 730-739.