DESARROLLO DE UN PROCESO AMBIENTALMENTE BENIGNO PARA EFICIENTE.

PRETRATAMIENTO Y SACARIFICACIÓN DE BIOMASAS DE SACCHARUM PARA

PRODUCCIÓN DE BIOETANOL

RESUMEN
Las biomasas de Saccharum (Saccharum munja y bagas de caña de azúcar) fueron
sometidas a diferentes Métodos de pretratamiento químico y biológico. El tratamiento
previo de biomasas lignocelulósicas fue Realizado mediante tratamiento con vapor y
microondas. Químicos pretratamiento de biomasas lignocelulósicas.
Fueron optimizados utilizando diferentes químicos como álcalis y ácidos. Entre todos los
químicos, el tratamiento con amoníaco eliminó significativamente la lignina
(aproximadamente 77%) y eliminó una gran cantidad de fenol
compuestos y potenciación de la sacarificación de Saccharum munja y bagazo de caña de
azúcar. Tratamiento previo de Laccase

Eliminó significativamente la lignina y mejoró la producción de azúcar reductora en 2

veces correspondiente a aprox. 60% de sacarificación de biomasa pretratada en
comparación con otros métodos. Transformada de Fourier La espectroscopia infrarroja
(FTIR) y la difracción de rayos X (DRX) mostraron la eliminación de la lignina debido a
Pretratamientos. Producción de bioetanol realizada con hidrolizado de ambos sustratos
por Saccharomyces.
Estipitis cerevisial y Pichia a 30ºC y 150 rpm después de 72 h produjo una gran cantidad de
etanol (25.06 g / L y 24.56 g / L para bagazo de caña de azúcar y S. munja,
respectivamente). Hidrolizado enzimático fermentado por el el co-cultivo de S. cerevisiae
y P. stipitis produjo 30.78 g / L y 31.56 g / L de bioetanol de S. munja y Hidrolizado de
bagazo de caña de azúcar, respectivamente. Los resultados indicaron una mayor
producción de bioetanol por cocultivo. De las levaduras de fermentación pentosa y
hexosa.

INTRODUCCIÓN
La lignocelulosa se considera una renovable en gran parte abundante polímero y es una de
las fuentes importantes de carbono para el Crecimiento y desarrollo de microorganismos
[1,2]. En vista de levantarse precios del crudo debido a la creciente demanda de
combustible, la necesidad de

Se espera que las fuentes alternativas de bioenergía aumenten considerablemente en los

próximos años. En consecuencia, los esfuerzos de investigación industrial han Enfocarse
más en procesos a gran escala de bajo costo para lignocelulósicos. Materias primas
procedentes principalmente de productos agrícolas y forestales. Residuos junto con
materiales herbáceos y residuos municipales. Considerando su relación de energía de
salida / entrada, su gran disponibilidad.
Tanto en países tropicales como templados, su bajo costo y su Rendimientos de etanol
[3,4]. Una de las ventajas del uso de lignocelulósicos. La biomasa es que esta materia
prima no está directamente relacionada con los alimentos. producción. Esto implica la
producción de bioetanol sin el necesidad de emplear vastas extensiones de tierra
cultivable fértil para
Cultivo de caña o maíz dedicado exclusivamente a la bioenergía. producción [1]. Hay
varios informes sobre la producción de Reducción de azúcar de residuos agrícolas,
residuos de alimentos, lignocelulósicos. biomasa y así sucesivamente [2]. Principal
desventaja de los lignocelulósicos. la biomasa es la presencia de lignina recalcitrante, lo
que dificulta la
Hidrólisis química y enzimática de celulosa y hemicelulosa. polímeros Con el fin de
hacerlos más accesibles para la hidrólisis,

El tratamiento previo, es decir, la desintegración de la lignina es un paso esencial.

El tratamiento previo tiene la habilidad de reducir el costo de conversión de
Biomasa celulósica en azúcares reductores fermentables. Por lo tanto, diferentes
estrategias de tratamiento previo, como con la explosión de vapor, alcalino, ácido diluido,
amoníaco, agua organosolv / etanol, oxidación Mcon reactivo de Fenton y granulación,
etc. se requieren antes de Hidrólisis enzimática para la elaboración de celulosa y
hemicelulosas.
Más accesible al ataque por enzimas [2]. El tratamiento previo es
Una parte importante de los gastos operativos generales y la eficiencia energética de
cualquier proceso de biocombustibles, y si bien es esencial, generalmente representa Más
del 30% de los costos de operación de biorrefinería. En los últimos dos décadas, se han
realizado diversos tipos de pretratamientos. resultando en la generación de subproductos
tales como hidroximetilfurfural (HMF), furfural y ácido acético, que actúan como
Inhibidores eficaces de la hidrólisis enzimática y su posterior

Procesos de fermentación. La hidrólisis enzimática de los lignocelulósicos es Ventajoso

sobre otros procesos fisicoquímicos debido a que las enzimas catalizar sólo reacciones
específicas. Como resultado no hay otro lado Se producen reacciones o se forman
subproductos y la hidrólisis tiene El potencial para lograr un mayor rendimiento de
azúcares reductores y el uso De condiciones más moderadas y no corrosivas. El sustrato
por lo general requiere un proceso de tratamiento previo antes de ser sometido a
descomposición enzimática, que tiene como objetivo aumentar el área de superficie,
Disminuye la estructura cristalina de la celulosa y aumenta la susceptibilidad de la celulosa
a la enzima [1]. El rendimiento global de La mezcla de celulasa es altamente dependiente
de la lignina residual presente junto con la celulosa. La hidrólisis eficiente requiere un
consorcio de Diferentes enzimas capaces de hidrolizar celulosa y hemicelulosa. En
azúcares fermentables [5]. Sprorotrichum thermophile es un Potente cepa para la
producción de enzimas celulasa y xilanasa. [6]. Se ha realizado el efecto combinado de
celulasa y xilanasa. en sustratos pretratados en muchos estudios previos, que Mejora
significativamente la liberación de azúcares reductores [5,7]. Utilización Se ha
recomendado el coctel de hemicelulasas y celulasa.
Como mejores agentes de pretratamiento en comparación con la celulasa.
A lo largo debido a una mejor degradación de los sustratos componentes de la pared
celula Para la producción de xilosa y glucosa [5,7]. Actualmente, la investigación sobre bioetanol
sigue en continua expansión. No solo sirven como energía renovable, el bioetanol que se
cree que es La bioenergía más prospectiva, también puede ser una solución para la
contaminación del aire. problemas. Mientras que la producción de etanol de primera
generación de almidón.

Los materiales se han desarrollado bien, proceso de producción de segunda. El etanol de

generación a partir de materiales lignocelulósicos todavía está buscando su viabilidad
económica [3]. Residuos de la transformación de la madera y La agricultura son fuentes
prospectivas de bioetanol. Entre ellos Saccharum munja y bagazo de caña de azúcar están
abundantemente disponibles y actúa como una buena fuente de azúcares fermentables
[8]. Saccharum munja comúnmente conocida como munja y es una hierba que se
encuentra a lo largo del río bancos. El nombre común de la planta es kana, sarkanda,
moonja. y se distribuye desde el norte y noroeste de la India hasta Pakistán. los

La planta pertenece a la familia Gramineae. La planta es un gran tufted. hierba y es poco

importante como planta forrajera ya que el ganado no la come [8]. El bagazo de la caña de
azúcar es un residuo agroindustrial, que solía Producir bioetanol utilizando el proceso de
fermentación [9]. Puede ser un beneficio tanto para el programa nacional de seguridad
energética como para los agricultores así como beneficio adicional de la fábrica de azúcar.
En el año 2016, hubo 2.9. millones de toneladas de potencia de bagazo de caña de azúcar
en la India y podría producir 614.8 KL de bioetanol tanto de glucano como de xilano. Por lo
tanto, este investigación tiene como objetivo elaborar la producción de etanol
lignocelulósico a partir de Biomasas de Saccharum (bagazo de caña de azúcar y Saccharum
munja) Después del tratamiento previo con un medio ambiente benigno y rentable.
proceso.

2. Materiales y métodos
2.1. Preparacion de biomasa
Ambas biomasas, Saccharum munja y bagazo de caña de azúcar (Saccharum
officinarum) de una sola cosecha se obtuvieron localmente. Ambas biomasas se cortaron
en trozos pequeños de aproximadamente 2e3 mm. Ambos sustratos se lavaron a fondo
con agua del grifo, se secaron a 45 C durante la noche, poner en bolsas plásticas y
almacenar a temperatura ambiente. Para su posterior uso y análisis.
2.2. Cultivos de hongos y levaduras.
Sporotrichum thermophile BJAMDU5 se hizo crecer y se mantuvo como se describió
anteriormente [10,11]. El moho era crecido rutinariamente en Emerson's YpSs [12] medio
de agar [g L? 1 Almidón 15.0, Extracto de levadura 4, K2HPO4 1.0, MgSO4 $ 7H2O 0.5,
Agar 15.0, pH 7.0 ± 0.2)] a 45 ° C y conservado a 4ºC y también a 20ºC en glicerol. La
fermentación rápida. cepa de Saccharomyces cerevisiae NCIM 3288 y Pichia stipitis
NCIM3497 se obtuvieron de la colección de cultivos del Departamento de Microbiología,
campus de la Universidad de Delhi South, Nueva Delhi, y mantenido en extracto de
levadura peptona dextrosa (YEPD) agujas de agar y también a? 20? C en glicerol.

2.3. Producción de enzimas celulolíticas y xilanolíticas.

Producción de enzimas celulolíticas y xilanolíticas por

S. thermophile BJMDU5 se llevó a cabo en condiciones óptimas como descrito
anteriormente [11]. Brevemente, 5 g de torta de aceite de algodón y paja de trigo
(Relación 1: 1) tomada en matraces Erlenmeyer de 250 ml humedecidos con sal solución
(% p / v) [K2HPO4 0.5, (NH4) 2SO4 0.4, CaCl2 0.03, MgSO4 7H2O 0.3, FeSO4 7H2O 0.03] en
la relación de sustrato a humedad de 1: 2.5 se incubaron a 45ºC en condiciones estáticas
durante 4 días después de la inoculación como se describió anteriormente [11]. Las
enzimas fueron extraídas y ensayado como se describe anteriormente [11]. Laccase de
Ganoderma lucidium MDU-7 fue un amable regalo del Dr. Krishna Kant Sharma,
Departamento de Microbiología, M. D. U., Rohtak [13].

2.4. Análisis químico de muestras de biomasa lignocelulósica.

La ADF estimó la celulosa, la hemicelulosa y la lignina. Determinación (fibra detergente
ácida) y NDF (fibra detergente netural) Métodos en la forma en polvo de la muestra como
se describe por Van Soest [14]. El detergente neutro de fibra (NDF) y el detergente ácido.
Los análisis de fibra (ADF) se basan en el producto químico selectivo. Extracción de todo el
material de la pared celular con detergente neutro. Solución y luego solución de
detergente ácido bajo reflujo, seguida de Filtración y registro de la masa del residuo
restante [14]. Los Se usaron% NDF y% ADF para la estimación de hemicelulosa. Después
determinando el contenido de ADF y el contenido de NDF, se utilizó% de fibra KMNO4
determinado por el protocolo estándar según AOAC (1970) como por Se mantuvo el crisol
en solución combinada de permangado durante 90 minutos y Se filtró el contenido a
través de crisol de vidrio sinterizado y se lavó. Con etanol y acetona respectivamente. El
material lavado fue Se filtra y se seca al horno a 80ºC durante 24 h. El crisol se mantuvo en
horno de mufla a 600 ° C durante 1 hy el contenido de ceniza se determinó para % de
estimación de lignina y celulosa (AOAC, 1970).

2.5. Determinación de las actividades enzimáticas celulolíticas y xilanolíticas.

y reduciendo azucares Las actividades celulolíticas y xilanolíticas se determinaron como
descrito anteriormente [10,11]. Se estimó la cantidad de azúcar reductor. utilizando el
método de ácido salicílico dinitro descrito por Miller [15]. Una unidad de enzima (UI) se
define como la cantidad de enzima requerido para liberar 1 mmol de producto respectivo
por minuto bajo Las condiciones de ensayo.

2.6. Ensayo fenolico

La estimación del compuesto fenólico se llevó a cabo de acuerdo con Singleton et al. [16]
utilizando ácido gálico como estándar. Brevemente 0,1 ml de El filtrado de las muestras
pretratadas se mezcló con 6 ml destilados. Agua y 0,5 ml de reactivo FolineCiocalteu (FCR).
Luego se mantuvo en Oscuro durante 5 minutos, seguido de la adición de 1.5 ml de
carbonato de sodio [20% (w / v)] y se mantuvo durante 2 h en oscuridad. La absorbancia
se tomó a 760 nm [dieciséis].

2.7. Estimación del bioetanol

La concentración de etanol se midió mediante un método espectrofotométrico utilizando etanol

purificado como estándar [17]. Para la estimación de etanol, se mezcló un ml de muestra
fermentada con 10 ml de agua destilada y se recogió destilado de vapor en un matraz volumétrico
de 50 ml que contenía 25 ml de reactivo de ácido crómico. Después de recoger aproximadamente
15e20 ml de destilado, los matraces se incubaron a 60ºC durante 20 min, se enfrió y el volumen se
completó hasta 50 ml. La absorbancia se leyó a 600 nm contra un blanco adecuado utilizando un
espectrofotómetro.

2.8. OPTIMIZACIÓN DE LA SACARIFICACIÓN ENZIMÁTICA DE BIOMASAS.

La muestra de enzima en bruto utilizada en este estudio de hidrólisis se preparó a partir de S.

thermophile BJAMDU5 de acuerdo con Bala y Singh [11]. La purificación parcial de las enzimas se
llevó a cabo mediante precipitación con sulfato de amonio seguido de diálisis y liofilización.

La hidrólisis enzimática del material pretratado lavado se realizó utilizando una concentración de
sustrato de 5.0% (p / v) en 0.1M de tampón de acetato de sodio (pH de 5.0) a 100 rpm y 60 C con
celulolítico (90 U / g de sustrato) y xilanolítico ( 350 U / g de sustrato) enzimas. Los diferentes
paprameros utilizados para la hidrólisis enzimática fueron la carga de sustrato [(% p / v) 4, 5, 10,
20), tiempo de incubación (1e24 h) y diferentes surfactantes. Diferentes surfactantes (0.5% v / v)
incluyendo Se utilizaron Tween 20, Tween 60, Tween 80, bromuro de cetil trimetil amonio (CTAB),
Triton X-100 y polietilenglicoles (PEG 4000, PEG 8000 y PEG 20000) para estudiar sus efectos sobre
la sacarificación enzimática. Se tomaron muestras y los azúcares reductores después de la
hidrólisis se estimaron como se describió anteriormente. El porcentaje de sacarificación se calculó
utilizando la ecuación de Mandels y Sternberg [18] de la siguiente manera:
El factor 0.9 se utilizó para convertir el polisacárido en monosacárido, lo que explica la
absorción de agua durante la hidrólisis.
2.9. PREPARACIÓN FÍSICA Y SACARIFICACIÓN
El pretratamiento físico de las biomasas lignocelulósicas se llevó a cabo mediante el
tratamiento con vapor y microondas. Para el tratamiento previo con vapor, se colocaron
biomasas lignocelulósicas (carga sólida del 5%) en un matraz Erlenmeyer de 250 ml,
humedecido con agua destilada, los matraces se autoclavaron a 121 C y 15 psi para
diferentes intervalos. La filtración se llevó a cabo utilizando papel de filtro Whatman para
las muestras pretratadas para separar el licor de las partes sólidas. Los sólidos después de
lavarlos con agua destilada doble se usaron para la hidrólisis enzimática.
El tratamiento previo asistido por microondas se llevó a cabo sumergiendo las biomasas
en agua destilada (5% p / v) y exponiendo la suspensión a radiación de microondas
(1200W, 220 V, 50 Hz) para tiempos de residencia de 5 a 30 min [19]. Los sólidos se
lavaron con agua destilada doble y se usaron para hidrólisis enzimática.
2.10. Pretratamiento químico y sacarificación
Para el tratamiento químico de Saccharum Munja y bagazo de caña de azúcar se utilizaron
álcali y ácidos. Para el pretratamiento alcalino, se utilizaron NaOH, KOH y CaOH2 (1% p / v)
en el experimento inicial.
Entre ellos se seleccionó NaOH para otros experimentos. El pretratamiento de la carga de
sólidos del 5% se llevó a cabo con diferentes concentraciones de NaOH (0,5, 1,0, 1,5 y 2%
p / v) en el tiempo de residencia 90 min. Después del tratamiento previo, la biomasa
sólida se separó, se lavó con agua destilada y se secó a 60ºC durante la noche y se analizó
para determinar el contenido de lignina, hemicelulosa y celulosa. En el experimento inicial
de los efectos de tratamiento previo de diferentes concentraciones de amoníaco se
examinó el proceso de tratamiento previo de biomasas. Después de eso, las biomasas
lignocelulósicas se trataron previamente en una solución acuosa de amoníaco en un
matraz Erlenmeyer de 250 ml durante varios intervalos de tiempo (10, 30, 60, 90, 120
min) con (a 121 ° C, 15 psi) o sin autoclave. Después de empaparse en la solución acuosa
de amoníaco, los sólidos de la suspensión se separaron utilizando un paño de filtración y
luego se lavaron con agua destilada hasta que el pH del líquido de lavado llegó a
aproximadamente 6.5e7.0. El sustrato lavado se secó luego en un horno de secado a 45ºC
y se analizó la lignina, hemicelulosas y el contenido de celulosa. El hidrolizado se analizó
para reducir azúcares y compuestos fenólicos como se describió anteriormente.
Para el tratamiento previo ácido de biomasa lignocelulósica se utilizaron diferentes ácidos
iniciales (HCl, H2SO4, H3PO4, HNO3) para el tratamiento previo. Entre ellos, se seleccionó
H2SO4 para experimentos adicionales. Ambos sustratos se empaparon en diferentes
concentraciones de H2SO4 (0.5% e3.5%) y se sometieron a autoclave a 121 C y 15 psi con
un tiempo de residencia de 90 min. El filtrado se analizó para reducir los azúcares
siguiendo el método de Miller [15] y los fenólicos siguiendo el método de Singleton [16].
Los sólidos se lavaron con agua destilada doble y se usaron para hidrólisis enzimática.
2.11. Pretratamiento biológico y sacarificación Molde termofílico S. thermophile
BJAMDU5 se usó para el tratamiento biológico de biomasa lignoceluolosica en matraces
Erlenmeyer, se mantuvo estáticamente a 45 ° C durante 96 h después de humedecer con
agua destilada a una relación de sustrato a humedad de 1: 2.5. Se utilizó un conjunto de
biomasas lignoceluolosicas no procesadas como control. El tratamiento con lacasa se
realizó con una consistencia del 5% (p / v) con un tampón de acetato de sodio (pH 5.0). El
efecto de la lacasa sobre el tratamiento previo de biomasas lignocelulósicas se llevó a
cabo a 30ºC y 150 rpm durante 6 h. Las muestras se sometieron a dos dosis diferentes
(250 U, 500 U) de lacasa. Los sólidos se lavaron con agua destilada doble y se usaron para
hidrólisis enzimática.
2.12. Caracterización biofísicas de biomasas lignocelulósicas pretratadas y no tratadas.
2.12.1. Análisis FTIR de biomasas pretratadas.
El análisis espectroscópico FTIR se empleó para investigar la alteración estructural de las
biomasas lignocelulósicas pretratadas (hidrolizado) utilizando la célula de medición de
reflectancia total atenuada (ATR) que es adecuada para la medición de la superficie.
Inicialmente, los espectros FTIR de las muestras de pulpa se registraron con una
resolución de 4 cm 1 en el rango del número de onda de 4000-375 cm 1, utilizando 24
exploraciones por muestra (Bruker Alpha ATR, País). Los espectros se analizaron utilizando
la base de datos FTIR [20].
2.12.2. Análisis de DRX
La cristalinidad de la celulosa se comparó entre varias muestras mediante el método de
difracción de rayos X (DRX). Las muestras se secaron en horno a 60ºC y se analizaron
mediante difractometría de rayos X en polvo (DRX, Rigaku MiniFlex 600). Las intensidades
se registraron entre 10 y 70 de 2q (ángulo de dispersión) ya una velocidad de escaneo de
0.002 / escaneo. Se calculó el índice cristalino de celulosa (Xc).
a partir de los patrones de difracción de rayos X mediante la siguiente ecuación [21].

donde I002 y Iam son la intensidad máxima de la fase cristalina y amorfa del plano de la
red (002).
Se utilizaron Tween 20, Tween 60, Tween 80, bromuro de cetil trimetil amonio (CTAB),
Triton X-100 y polietilenglicoles (PEG 4000, PEG 8000 y PEG 20000) para estudiar sus
efectos sobre la sacarificación enzimática. Se tomaron muestras y 2.12.3. Microscopía
electrónica de barrido (SEM)
Las imágenes de superficie de las biomasas crudas y pretratadas se obtuvieron mediante
Microscopía Electrónica de Barrido (Carl Zeiss Evo 18) en el Instituto de Ciencias Médicas
de Toda India, Nueva Delhi, India. Las muestras se prepararon montándolas en trozos de
aluminio de muestra usando cinta de doble recubrimiento antes de recubrir con
goldepalladium sobre AGB7234 Recubridor Sputter de alta resolución automático (Agar
scientific, Inglaterra). Se tomaron imágenes a una tensión de 20,00 kV y aumentos de 1 k
X.
2.13. Producción de bioetanol.

2.13.1. Producción de bioetanol utilizando hidrolizados enzimáticos.

Después de la hidrólisis enzimática, el hidrolizado de cada sustrato rico en glucosa, xilosa y

otros azúcares se usó para la producción de etanol mediante la fermentación del licor por
S. cerevisiae y P. stipites junto con el control. El control contiene la glucosa (20% p / v)
para S. cerevisiae y xilosa (20% p / v) para P. stipitis. El proceso de fermentación se llevó a
cabo durante 72 horas a 30ºC y 150 rpm. El filtrado de cultivo libre de células se analizó
para determinar la producción de bioetanol.
2.13.2. Producción de bioetanol utilizando hidrolizado mezclando cultivos de levadura.

Se incubaron matraces Erlenmeyer que contenían medio de producción inoculado con

cultivo mixto de levaduras a 30ºC y 150 rpm durante 72 h. El filtrado de cultivo libre de
células se analizó para determinar la producción de bioetanol.
2.14. Análisis de azúcares reductores mediante cromatografía líquida de alta presión.

Los hidrolizados de las biomasas de Saccharam (S. munja y bagazo de caña de azúcar) de
diferentes intervalos (0e12 h) se analizaron mediante cromatografía líquida de alto
rendimiento (HPLC) (Shimadzu Corporation, Kyoto, Japón) para estimar la presencia de
carbohidratos.
Una columna Aminex HPX87H (300 7,8 mm) (BioRad, EE. UU.) Con agua Mill Q como
eluyente a un caudal de 0,5 ml / min, manteniendo la temperatura del horno a
temperatura ambiente con el detector RID.
2.15. ANÁLISIS ESTADÍSTICO
Todos los experimentos se realizaron por triplicado y sus valores medios se presentan
junto con la desviación estándar (media ± DE). Se realizaron tres experimentos
independientes (n ¼ 3) para monitorear la reproducibilidad de los resultados. El nivel de
significación estadística se estimó como valor de p (p ¼ <0.05) mediante la prueba t de
Student.
3. RESULTADOS Y DISCUSIÓN
3.1. PRETRATAMIENTO Y SACARIFICACIÓN DE BIOMASAS DE SACCHARUM.
3.1.1. PRETRATAMIENTO FÍSICO Y SACARIFICACIÓN
La conversión de materiales lignocelulósicos en etanol implica la hidrólisis de celulosa y
hemicelulosas en azúcares fermentables y la posterior fermentación de estos azúcares en
etanol. La hidrólisis se realiza típicamente por celulasas y xilanasas.
Los materiales lignocelulósicos contienen celulosa, hemicelulosa y lignina en una
estructura cristalina compleja [22]. Como resultado, la eficiencia de la hidrólisis se reduce
debido a la accesibilidad limitada de estas enzimas a estos polímeros [22]. Diferentes
pretratamientos, hidrólisis enzimática, fermentación con diferentes microbios, separación
de productos y postratamiento del líquido son los pasos principales del proceso de
producción de etanol empleado actualmente a partir de biomasa lignocelulósica [23]. Por
lo tanto, los procesos de pretratamiento son esenciales para mejorar la eficiencia de la
hidrólisis enzimática. El propósito del tratamiento previo es eliminar la lignina, reducir la
cristalinidad de la celulosa y aumentar la porosidad de la biomasa. En el presente estudio
se emplearon varios métodos de pretratamiento para la deslignificación de las biomasas
lignocelulósicas. El tratamiento previo físico se llevó a cabo utilizando vapor y microondas.
El tratamiento de vapor de biomasas lignocelulósicas en el presente estudio se realizó en
121 C y 15 psi para diferentes intervalos de tiempo durante 1e3 h. La cantidad de azúcares
reductores y compuestos fenólicos liberados significativamente hasta 90 minutos de
tratamiento previo seguido por una disminución posterior (Tabla 1). Esto puede deberse a
la degradación de los azúcares con el aumento del tiempo a altas temperaturas. También
se encontró que los contenidos de lignina de S. munja y bagazo de caña de azúcar se
redujeron de 20.1% a 18.0% e18.4% y 16.3%, respectivamente, después de 90 min.
La explosión de vapor es una opción de pretratamiento exitosa que implica calentar
lignocelulosa con vapor sobrecalentado seguido de una descompresión repentina. El
vapor a alta presión modifica la estructura de la pared celular, produciendo una
suspensión que, al filtrar, produce un filtrado con azúcares hemicelulósicos y una torta de
filtro rica en celulosa que contiene también lignina y hemicelulosas residuales [24]. De
manera similar, la paja de arroz y la cáscara de arroz se trataron previamente con vapor
(180ºC a 230ºC durante 10 minutos) por Wood et al. [24]. La pérdida máxima de la
hemicelulosa y la lignina se observó a 200 C durante 10 min para la paja de arroz, y a 210
C durante 10 min para la cáscara de arroz, lo que resultó en un aumento de los azúcares
reductores. El tratamiento previo con vapor tiene un alto potencial para eliminar la lignina
de manera efectiva [23,24]. Hu et al. [25]
hidrólisis y descubrió que entre todas las condiciones de pretratamiento con vapor,

Explosión de vapor a 220ºC durante 5 min. máximo producido. Azúcar reductor (36,14%) y glucosa
(15,35%) después de 60 h enzimáticas. hidrólisis [25]. Pretratamiento en microondas de biomasa.

Para mejorar la posterior sacarificación enzimática. Microondas Tienen la ventaja de combinar

tiempos de calentamiento muy rápidos. Con una menor aportación de energía que las estrategias
de calefacción convencionales. [19,26]. Las radiaciones de microondas indicaron que el tiempo de
pretratamiento de 10 min produjo una mayor cantidad de azúcares reductores en comparación
con otros (tabla 1). Sin embargo, en comparación con los rendimientos de hidrólisis de
En la muestra no tratada, la mejoría fue mínima. Inspección visual de los sólidos recolectados para
esta condición de pretratamiento indicada Algunos carbonización de la biomasa. Esto implica que
la degradación. de algunos azúcares puede haber ocurrido, y posteriormente, una reducción en

Se observó rendimiento de azúcar a partir de la hidrólisis. Keshwani y Cheng

[19] informaron que el tratamiento previo de la hierba de cambio por microondas durante 1e2
min produjo mayores cantidades de azúcares reductores después de 72 h de hidrólisis en
comparación con 5 min [19]. En contraste con nuestro resultado, Zhu et al. [26] han estudiado
ampliamente los efectos del microondas en Miscanthus tratado químicamente y reportado 12
veces mayor

El azúcar produce en la mitad del tiempo en comparación con el calentamiento convencional.

Después del tratamiento químico. Los tratamientos previos físicos son buenos para Eliminación de
la lignina, pero destruye un fragmento del xilano en la hemicelulosa. y genera inhibidores de la
fermentación a temperaturas más altas, haciendo así que la biomasa sea menos digerible
[19,25,26].

3.1.2. Pretratamiento químico y sacarificación

Dado que existe una correlación negativa significativa entre el porcentaje De lignina en material
vegetal y su digestibilidad enzimática. [22]. Con el fin de mejorar la hidrólisis enzimática de los
sustratos, la La eliminación de la lignina y la degradación de la hemicelulosa y la celulosa es
esencial. Se realizaron varios experimentos preliminares para Investigar diferentes opciones para
el uso de diversos álcali y ácidos para selección final Para el tratamiento previo alcalino, se
seleccionó NaOH en el Base de liberación de alta cantidad de azúcares reductores de
lignocelulósicos. biomasa Entre las diferentes concentraciones de NaOH, 3% (p / v) Se eliminó la
cantidad máxima de fenólicos (0,679 U / mL) y lignina. Durante con un buen rendimiento de
azúcares a partir de sacarificación enzimática. de S. munja (143.56 mg / g de sustrato) y bagazo de
caña de azúcar (152,45 mg / g de sustrato) [Tabla 1]. La deslignificación química. Los tratamientos
previos no solo eliminan la lignina, sino que también actúan como una inflamación. Agente, que a
su vez mejora el área de superficie del sustrato Accesible para la acción enzimática [2,22]. Kataria
et al. [27] informó eliminación significativa de lignina (79.3%) después de alcalina (NaOH 2% p / v)
tratamiento previo de kans grass w / v) a 120 ° C durante 90 min. Kuhad et al. [22] utilizaron clorito
de sodio para la deslignificación de Lantana camara (rojo sabio). La cáscara de arroz se trató
previamente con hidróxido de sodio al 3% que resultó en un rendimiento máximo de etanol de
5.89% [28].

Los ácidos sulfúrico (H2SO4) y fosfórico (H3PO4) son ampliamente utilizados Ya que son
relativamente económicos y eficientes en hidrolización. lignocelulosa, aunque la última da un
efecto más suave y es más benigno para el medio ambiente. Así, para el tratamiento previo ácido
final de biomasas lignocelulósicas, H2SO4 se seleccionó sobre la base de Máxima eliminación de
lignina, y alto rendimiento de reducción. Azúcares tras la hidrólisis enzimática. Entre varias
concentraciones de H2SO4 utilizado, 3% (v / v) fue suficiente para la eliminación de lignina y
Compuestos fenólicos (tabla 1). Bagazo de caña de azúcar hidrolizado con El 2,5% (v / v) de HCl
produjo 30,29 g / l de azúcares reductores [29]. El arroz cáscara pretratada con 2% de H2SO4
produjo una cantidad máxima de azúcares reductores que resultaron en un alto rendimiento de
etanol de 6.34% [28].

Entre las diferentes concentraciones de amoniaco, el 20% (v / v) fue Óptimo para el

pretratamiento de ambas biomasas y máximo rendimiento. cantidad de azúcares reductores
(256.67 y 234.56 mg / g subsatrate para

Bagazo de caña de azúcar y S. munja, respectivamente) después de hidrólisis enzimática (Tabla 1).
Hubo un aumento significativo en el rendimiento de azúcares reductores cuando las biomasas
lignocelulósicas se autoclavaron como En comparación con la incubación a temperatura ambiente.
Las ventajas con este proceso su capacidad de eliminar la mayoría de la lignina (75e85%). Esto se
debe a la selectividad del amoníaco y su capacidad para romper Abajo la lignina por amonolisis
mientras que también solubiliza hemicelulosa. sobre los tiempos de retención más largos [30].
Este proceso también limitará la Producción de inhibidores hasta un punto donde no se necesita
un lavado. para el proceso aguas abajo. Principalmente, las biomasas herbáceas tienen ha sido
más tratado con este proceso ya que el 60e80% de deslignificación ha Se ha logrado la eliminación
de maíz y la deslignificación de 65e85% para césped [31]. Shao et al. [30] demostró que el
amoníaco grano de maíz pretratado produjo 1.5e3.0 veces más azúcares reductores en
comparación con sustratos no tratados. Adición secuencial de celulasas resultó en un 15e20% más
de hidrólisis y los resultados confirman que la aplicabilidad de la lacasa como un buen agente para
biomasas lignoceluolosicas pretratamiento debido a significativamente reducción en el contenido
de lignina del sustrato y haciéndolo más Accesible a las enzimas celulolíticas y xilanolíticas [35]. Del
mismo modo, en Caso de R. communis lignificado después de deslignificación reduciendo
azúcares. el rendimiento se incrementó a aproximadamente 2,68 veces [36]. Moreno et al. [37]
mostró que debido al tratamiento con laccase no solo la cantidad de la reducción de azúcares se
incrementó pero también redujo la producción de Productos inhibidores. En el estudio
mencionado anteriormente, cuando Laccase fue Mutilizado junto con el tratamiento previo con
álcali, 21% y 30% de rendimiento de La glucosa y la xilosa se obtuvieron en comparación con el
tratamiento previo con álcali solo donde solo se obtuvo un rendimiento del 5% de glucosa y xilosa.

La cantidad de contenido de fenólicos también disminuyó hasta un 21% después de tratamiento

de lacasa [37]. El grado máximo de sacarificación para sustratos no tratados fue 2.01% y 2.96%
para el bagazo de S. munja y caña de azúcar, respectivamente. Los bajos porcentajes de
sacarificación pueden atribuirse a altos Cantidad de lignina, lo que dificulta las moléculas de
proteínas grandes. de enzimas para penetrar en la estrecha red que constituye La pared celular de
la planta [38]. Por lo tanto, el tratamiento previo de la lignocelulósica Los sustratos son esenciales
para una hidrólisis enzimática eficiente. Como Diferentes métodos de pretratamiento mejoraron
el porcentaje de sacarificación. de ambos sustratos (tabla 2).

La sacarificación de S. munja y bagazo de caña de azúcar, fue significativamente Mejorado después

del tratamiento previo con sustancias físicas, químicas y Métodos biológicos (tabla 2).
Pretratamiento de amoniaco también significativamente mejoró el% de sacarificación a 23.10,
21.11% para S. munja y bagazo de caña de azúcar respectivamente. Entre todos los trucos
Métodos, el tratamiento con lacasa mejoró el% máximo de sacarificación. de 56.75 y 54.93% para
el bagazo de S. munja y caña de azúcar, respectivamente (tabla 2). Se demostró que la
sacarificación enzimática por utilizando cóctel de enzimas (lacasa, celulasa y xilanasa) tiene Mejoró
significativamente el rendimiento de hidrólisis y produjo más Azúcares y por lo tanto buena
manera para la producción de bioetanol [39]. Mediante análisis comparativo de diferentes
factores físicos, químicos y métodos biológicos, se encontró que el método biológico ha dio lugar a
la liberación de una gran cantidad de azúcares reductores Sin ningún impacto negativo en el medio
ambiente. Como fisico y Se han reportado métodos químicos para la liberación de sustancias
volátiles y

Productos químicos tóxicos durante el tratamiento previo que conduce al medio ambiente.
contaminación [1e4]. El tratamiento previo biológico parece ser prometedor Al ser un proceso
suave y respetuoso con el medio ambiente, no hay generación de inhibidores. durante el proceso
[1e4]. Estimación de compuestos fenólicos.

Después de cada paso del tratamiento previo se demostró que la generación de fenólicos. Los
compuestos después del pretratamiento de hongos fueron casi insignificantes (0,03 y 0,02 mg / g
de sustrato) en comparación con el amoníaco (2,34 y 2.56 mg / g de sustrato para S. munja y
bagazo de caña de azúcar) y vapor (1.89 y 1.68 mg / g de sustrato para S. munja y bagazo de caña
de azúcar)

Métodos de pretratamiento (tabla complementaria 1). Pretratamiento biológico resultó en 56.75 y

54.93% de sacarificación de Bagazo de munja y caña de azúcar respectivamente. Después del
tratamiento biológico Deslignificación de 76.4% y 75.4% de bagasses de caña de azúcar y
Saccharum munja se logró, respectivamente. por lo tanto, nosotros

Se ha utilizado el término proceso ambiental-benigno. El costo de cada pretratamiento y

producción de enzimas ha sido Ha sido investigado en este estudio. El costo estimado para los
físicos. tratamiento previo utilizando microondas y autoclave para cada uno de los dos los
sustratos fueron aprox. 22 V y 13 V por Kg de Saccharum biomasa El costo del tratamiento previo
químico mediante el uso de amoníaco fue aprox. 27 V por Kg de biomasa de Saccharum. El costo
de la enzima.

Producción de (celulasas y xilanasas) por Sporotrichum thermophile para 1 ? 106 unidades de

xilanasa y celulasas fueron encontradas aprox. 6.40 V y 10.70 V, respectivamente [11]. El costo de
la lacasa enzimas de Ganoderma lucidum MDU-7 utilizadas en este estudio para 1? 106 unidades
de enzima eran aprox. 15 V [13]. Lo anterior Menciona los costos sugeridos de bajo costo y
económicamente viables.Técnicas utilizadas para el tratamiento previo de las biomasas de
Saccharum.

3.2. Caracterización biofísica de pretratados y no tratados. biomasa lignocelulósica

3.2.1. Análisis FTIR de biomasas lignocelulósicas pretratadas.

FTIR se ha aplicado ampliamente en el análisis de la pared celular de la planta para Comparando

diferencias entre muestras debido al desarrollo de la pared celular. y cambios compositivos [40]. El
espectro FTIR resultante.

Es una huella dactilar compleja que representa bandas de adsorción que Corresponden a las
frecuencias de vibraciones entre los enlaces de Los grupos funcionales químicos que componen la
pared celular. FTIR El análisis espectroscópico fue empleado para investigar la estructura
Alteración de biomasas lignocelulósicas no tratadas y pretratadas. Los espectros FTIR de no
tratados, pretratados con amoníaco y luego Las muestras enzimáticas saccharificadas bajo
condiciones seleccionadas fueron se muestra en la Fig. 1a y b para cada sustrato. T

3.2.2. Análisis de DRX de biomasas lignocelulósicas pretratadas. Según Zhao et al. [41] La celulosa
cristalina es más recalcitrante.
Al ataque microbiano y enzimático, en comparación con el amorfo. uno. El índice de cristalinidad
(CrI,%) se usa a menudo como una medida de Cantidad relativa de material cristalino presente en
una sustancia lignocelulósica. muestra, y se puede determinar utilizando varias técnicas,
incluyendo DRX, FTIR y RMN [41]. Por esta razón, hay considerable

Variabilidad en los valores encontrados en la literatura, dependiendo de la Metodología utilizada.

En el presente estudio, el método basado en DRX. fue elegido, debido a la gran cantidad de datos
disponibles para esta técnica. La cristalinidad de la celulosa se comparó entre varias pulpas.

Muestras por el método de difracción de rayos X (DRX). Como se puede ver, todos los Las
muestras (sin tratar y pretratadas) mostraron los picos de DRX típicos. de celulosa. El análisis de
difracción de rayos X reveló que el químico El tratamiento disminuyó significativamente el índice
de cristalinidad de celulosa. (CCI) [10e30? 2q] de las biomasas lignocelulósicas seguidas de

Tratados con enzimas. Hubo aproximadamente un 50% de reducción. observado para S. munja.
Hubo bajo índice de cristalinidad de celulosa. Disminución del bagazo de caña de azúcar (fig. 2 a,
b). XRD similar Perfiles para biomasa de caña de azúcar tratada con ácido diluido y sin tratar.
fueron reportados por Chandel et al. [29], con la diferencia de que el presente estudio evaluó el
efecto del tratamiento con amoníaco, mientras que estudio anterior investigó los cambios
moleculares provocados por El tratamiento previo ácido-base de bagazo y estudiado significativa
Disminución del índice de cristalinidad de celulosa. En el presente estudio La hidrólisis enzimática
conduce a la disminución de la cristalinidad de la celulosa índice. Como el efecto de la cristalinidad
(en términos de valores de CrI) en La sacarificación enzimática de la biomasa lignocelulósica ha
sido investigado durante décadas [29], aunque no hay consenso sobre

El efecto de la cristalinidad durante la etapa de hidrólisis enzimática, con Otros factores son
igualmente o más importantes. Por ejemplo, Pu et al. [40] y Zhao et al. [41] estudiaron la hidrólisis
enzimática de
El análisis mostró que los hidrolizados obtenidos en este estudio fueron Rico en glucosa, xilosa,
celobiosa, arabinosa y otros azúcares.

3.4. OPTIMIZACIÓN DE LA SACARIFICACIÓN ENZIMÁTICA.

En el presente experimento varios parámetros de límites fueron optimizado secuencialmente para

lograr un alto rendimiento de reducción azúcares Una carga de sustrato de 5.0% (w / v) resultó en
la liberación de Gran cantidad de azúcares reductores (18,45 mg / g de sustrato y 21.23 mg / g de
sustrato para bagazo de caña de azúcar y S. munja, respectivamente)en comparación con otras
concentraciones. Sin embargo, un aumento adicional en la consistencia del sustrato llevó a la
reducida extensión de hidrólisis (datos no mostrados). Esta disminución en la eficiencia de
hidrólisis Puede ser debido a problemas de mezcla y transferencia de calor debido a la
Propiedades reológicas de una suspensión fibrosa densa, que en última instancia Causa
insuficiente adsorción de las enzimas a los sustratos. [46]. Como la sacarificación enzimática de la
celulosa implica el transporte.

De moléculas de enzimas y azúcares solubles entre el sólido. sustrato Así en el presente estudio,
durante el transcurso del tiempo de enzimática. sacarificación de sustratos lignocelulósicos,
después de 6 h una buena Cantidad de azúcar reductor (34.12 mg / g de sustrato y 34.56 mg / g).
El sustrato para S. munja y bagazo de caña de azúcar respectivamente) fue alcanzado Hubo un
aumento gradual en la cantidad de azúcares reductores.
Con aumento en el tiempo de incubación. Después de 24 h aprox. 48.23 mg / g Sustrato y 46,70
mg / g de sustrato que reduce el azúcar para S. munja y El bagazo de caña de azúcar,
respectivamente, se logró (Fig. 5a). Kuhad et al.[22] también observó el aumento en la reducción
de la producción de azúcar durante

Sacarificación enzimática hasta 28 h con sacarificación óptima. rendimiento (777.13 mg / g) y

después de eso hubo una tasa constante de producción de azúcares. Esto se debe a la
desnaturalización de las enzimas, Transformación de la estructura de celulosa en una forma
menos digestible. Inhibición de la actividad enzimática por productos de hidrólisis acumulados.
[47]. Optimización de las condiciones para la sacarificación enzimática. aumento de la tasa de
sacarificación varias veces en comparación con Los no optimizados [22].

Se evaluaron diferentes tensioactivos iónicos y no iónicos para Su capacidad para mejorar la

hidrólisis enzimática. La cantidad de El azúcar liberado en presencia de Tween 80 aumentó
significativamente. (104,0 mg / g de sustrato y 102,34 mg / g de sustrato para S. munja y bagazo
de caña de azúcar respectivamente) en comparación con el control (70,8 mg / g

Sustrato y 77,6 mg / g de sustrato para S. munja y caña de azúcar. bagazo respectivamente)

seguido de PEG 8000 (101.2 mg / g de sustrato y 102.34 mg / g de sustrato para S. munja y bagazo
de caña de azúcar) [Higo. 5b]. Sin embargo, la cantidad de azúcar liberada en presencia de
tensioactivos iónicos, p. CTAB mostró efecto negativo. El enzimático La hidrólisis de la P. juliflora
deslignificada también mostró un aumento del 47,51% en La liberación de azúcares reductores en
presencia de Tween 80 as. en comparación con el control [39]. Se ha demostrado que Tween tenía
una Efecto positivo sobre la hidrólisis enzimática ya que protege las enzimas. De la desactivación
térmica durante el proceso de hidrólisis [39,48]. Esto puede ser el resultado de un contacto
reducido de la enzima con el airliquid Interfaz debido a la actividad superficial del surfactante. Los
La reducción de la tensión superficial de la solución también permite la sacarificación. Enzimas de
mayor acceso a la celulosa y hemicelulosa. que dio lugar a una mayor liberación de azúcares
reductores [39]. Estas condiciones optimizadas para la sacarificación enzimática fueron utilizado
en otros experimentos de tratamiento previo. Parámetros optimizados en el estudio mejoró
significativamente la liberación de reducción azúcares de las biomasas de Saccharum y por lo tanto
muestran un corte claro mejora del rendimiento de los azúcares que se utilizaron paraProducción
de etanol.

3.5. PRODUCCIÓN DE BIOETANOL.

3.5.1. PRODUCCIÓN DE BIOETANOL MEDIANTE EL USO DE HIDROLIZADO DE VARIOS SUSTRATOS

Después de la hidrólisis enzimática, el hidrolizado de S. munja y Se utilizó bagazo de caña de

azúcar para la producción de bioetanol usando S. cerevisiae que produjo una alta cantidad de
bioetanol como 25.06 g / L para S. munja y 24.56 g / L para bagazo de caña de azúcar (Tabla 3).
Similar, Usando P. stipitis de levadura fermentadora de xilosa, produjo rendimiento de bioetanol
de 23.03 g / L y 23.56 g / L para bagazo de munja y caña de azúcar, respectivamente a una
concentración de hidrolizado del 20% (Tabla 3). Había aprox. 1.37% menos de bioetanol para S.
munja y 1.40% menos de bioetanol para bagazo de caña de azúcar en comparación con el control
mediante el uso de S. cerevisiae y P. stipitis por separado. Esta reducción en la cantidad de
bioetanol.
Producción por levaduras debido a la presencia de otros disacáridos y Los azúcares oligosacáridos
presentes en el hidrolizado [22]. Nuestros resultados estaban de acuerdo con informes anteriores
sobre la fermentación con P. stipitis [39]. Pichia farinose produjo etanol de 30.69 g / L por
Fermentación de hidrolizado de bagazo en el segundo día, mientras que Stephanoascus ciferrii
produjo 28,7 g / L de bioetanol a partir de bagazo, 15,40 g / L de residuos de pulpa de naranja y
10.2 g / L de residuos vegetales [49]. El rendimiento de etanol obtenido a partir de hidrolizado
celulósico usando S. cerevisiae en nuestro caso (1.25 g / gy 1.22 para S. munja y caña de azúcar).
bagazo respectivamente a una concentración de hidrolizado del 20% después de 72 h) [Tabla 4]
fue superior a algunos de los informes anteriores de etanol rendimiento de Lantana camara (0,48
g / g) [22] y de P. juliflora (0,49 g / g) [39]. P. stipitis tuvo un rendimiento de etanol de 1.15 y 1.17
para Bagazo de S. munja y caña de azúcar resepectivamente al 20% de hidrolizado Concentración
después de 72 h (Tabla 4). La fermentación de P. juliflora. El hidrolizado enzimático con Pichia
stipitis produjo 18.24 g / L de bioetanol con un rendimiento de 0,39 g / g [39]. Hubo una mejora
menor en la producción de etanol con Incremento en la concentración de azúcares hidrolizados
pero mejora. En la producción de etanol no fue significativo en comparación con el 20%. nivel de
azucar Como a 20% de concentración de hidrolizado 25.06 g / L y Se produjeron 24,56 g / L de
etanol para S. munja y caña de azúcar. bagazo, respectivamente. Esto puede deberse al hecho de
que a mayor Concentración de azúcares en la capacidad de absorción de la célula microbiana. Fue
superior a lo que conduce a una tasa constante de fermentación. [22,39,49].

3.5.2. Producción de bioetanol a partir de hidrolizado utilizando cultivo mixto de Levaduras de

fermentación hexosa y pentosa.

Se utilizaron hidrolizados enzimáticos para la producción de etanol por cocultivo. de hexosa (S.
cerevisiae) y pentosa (P. stipitis) fermentando levaduras que resultaron en una alta cantidad de
bioetanol de 30.78 y 31.56 g / L para bagazo de caña de azúcar y S. munja, respectivamente (Tabla
3). El co-cultivo de ambas levaduras produjo 1.22 y 1.28 etanol superior. en comparación con S.
cerevisiae individual para S. munja y caña de azúcar bagazo, respectivamente, a una concentración
del 20% después de 72 h (Tabla 3). De manera similar, P. stipitis cuando se cultivó conjuntamente
con S. munja produjo un alto etanol (1,33 veces para bagazo de cuna de azúcar y S. munja) como
en comparación con P. stipitis sola a una concentración del 20% después de 72 h. y Bishnoi [4]
utilizaron el co-cultivo de S. cerevisiae y P. stipitis para Producción de bioetanol utilizando
hidrolizado de paja de arroz resultante.

En la producción de etanol de 21.7 g / L. Co-cultivo de P. stipitis NCIM 3498 y termotolerante S.

cerevisiae VS3 en hidrolizado de sorgo la paja mostró una producción mejorada de 10.5 g / L de
etanol [50]. Yah et al. [51] también utilizaron ambas levaduras para bioetanol mejorado
producción [51]. La mejora en la producción de etanol se debió a Utilización de azúcares de
glucosa y xilosa liberados por sinérgicos. Acción de la mezcla de celulasas y xilanasas utilizadas en
el estudio como en comparación con las celulasas o las xilanasas solas [5,7]. Estos resultados a lo
largo con datos de la literatura sugirió la idoneidad del co-cultivo de levaduras que utilizan
hidrolizado enzimático para mejorar la producción de etanol y podría ser utilizado como una
buena herramienta para mejorar el rendimiento de etanol.

4. RESUMEN Y CONCLUSIONES.
El tratamiento previo de las biomasas de Saccharum mejoró significativamente la sacarificación
utilizando enzimas celulolíticas y xilanolíticas de S. thermophile BJAMDU5. Entre todos los
métodos de tratamiento previo, biológicos. el tratamiento previo ha dado lugar a una significativa
(28,23 y 18,55 veces para S. munja y bagazo de caña de azúcar) mejora en la sacarificación de
ambas biomasas. Se demostró que la sacarificación enzimática utilizando cócteles de enzima
(lacasa, celulasa y xilanasa) Fue una buena manera de tratar las biomasas lignocelulósicas para 2G.
Producción de bioetanol. Análisis FTIR y DRX de biomasas. Se confirmó la renovación de la lignina y
la mayor degradación de la hemicelulosa. y celulosa. El hidrolizado enzimático se fermentó a

Etanol por pentosa y levaduras de fermentación hexosa. Produccion de etanol Se mejoró cuando
ambas levaduras se utilizaron en cocultivo. En hidrolizado enzimático. Los resultados indicaron el
desarrollo. De una novela, ideal, económica y ambientalmente benigna. Proceso para el
pretratamiento y sacarificación de saccharum. biomasas para la producción de bioetanol
utilizando maquinaria enzimática de S. thermophile BJAMDU5.

Expresiones de gratitud Los autores reconocen al Consejo de Asuntos Científicos e Industriales.

Research (No. 38 (1370) / 13 / EMR-II), Nueva Delhi, India, por proporcionar Apoyo financiero
durante el curso de investigación. Estamos Agradecido al Dr. Rajvinder Singh, Departamento de
Genética (Forensic Science), M.D.U., Rohtak, para obtener ayuda técnica en las instalaciones de
FTIR y el Dr. Anil Ohlan, Departamento de Física, M.D.U., Rohtak, para técnicos Ayuda en las
instalaciones de XRD. También estamos agradecidos a All India Institute of ciencias médicas,
Nueva Delhi, para el microscopio electrónico de barrido. instalaciones.