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SOCPEMI Manual Urocultivo PDF
SOCPEMI Manual Urocultivo PDF
La exactitud y el valor clínico de las pruebas que el laboratorio realiza sobre la muestra
clínica y sobre el microorganismo aislado dependen de la calidad de la muestra, del tipo de
pruebas realizadas sobre la misma y de las técnicas utilizadas para la realización de las
pruebas. Para ello es necesario establecer normas que establezcan lo que es una prueba
inadecuada y definir las pruebas adecuadas para tipos específicos de muestras. Asimismo,
se deben especificar los criterios para realizar una prueba adecuada y proporcionar
información para evitar las deficiencias en la solicitud de pruebas.
JUNTA DIRECTIVA:
AUTORES
Tablas
Tabla 1 Frecuencia de agentes uropatógenos en el Hospital Nacional Docente San
Bartolomé. 2010, Lima – Perú.
Tabla 2 Microbiota urinaria
Tabla 3 Definiciones
Tabla 4 Flujo de trabajo para el procesamiento de urocultivos
Tabla 5 Reporte de aislamientos con pruebas mínimas
Anexos
Anexo 1
Determinación de sustancias antibacterianas residuales en orina
Anexo 2
Uso y calibración de asas microbiológicas
Figuras
Figura 1
Figura 2
Figura 3
Fotos
Foto 1. Siembra por estrías en biplaca de agar sangre y MacConkey de Escherichia coli.
Foto 2. Siembra por estrías en biplaca de agar sangre y MacConkey de Staphylococcus
saprophyticus
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I. INTRODUCCIÓN
Las infecciones del tracto urinario (ITU) representan una de las primeras causas de
consulta médica y hospitalizaciones. Estudios epidemiológicos por E. H. Kass (14)
mostraron que los recuentos bacterianos mayores de 105 UFC/ml, de un cultivo puro de
bacilos gram negativos en orina estaban asociados con infecciones agudas bacterianas
del tracto urinario. Otros investigadores reportaron que también podían ser significativos
los recuentos mayores de 102 UFC/ml en mujeres con disuria e ITU aguda (6, 7, 15). Para
niños y pacientes cateterizados, los recuentos menores también pueden ser significativos
(4, 16, 17); por lo que se debe realizar y reportar el recuento de colonias.
La orina es un fluido corporal normalmente estéril, sin embargo, es fácilmente
contaminada con la microbiota del perineo, próstata, uretra o vagina al momento de
obtener la muestra. El laboratorio de microbiología debe proporcionar instrucciones
detalladas para asegurar la apropiada toma de muestra, conservación, rotulación y
transporte de la orina para su cultivo.
Los agentes etiológicos de ITU generalmente provienen de la propia microbiota intestinal
del paciente, siendo Escherichia coli, Klebsiella pneumoniae, Proteus mirabilis,
Staphylococcus saprophyhticus y Enterococcus faecalis, los más frecuentes en pacientes
ambulatorios; y Enterobacter spp., Pseudomonas spp., Acinetobacter spp. y especies de
Candida en pacientes hospitalizados. En la tabla 1, presentamos los agentes más
frecuentes en urocultivos en un hospital nacional, sin embargo, esto puede variar de
establecimiento en establecimiento, según la población atendida. La tabla 2, es una lista
de la microbiota frecuente en orina infectada y contaminada.
Las definiciones utilizadas en urocultivos se encuentran en la tabla 3 y nos permitirá
interpretar mejor las solicitudes y hallazgos del urocultivo.
Una de las funciones del microbiólogo es determinar si el recuento de colonias es
significativo y que el paciente necesita tratamiento, esto dependerá de diferentes factores,
que están asociados al cuadro clínico, la forma de obtención de la muestra, tratamiento
previo, entre otros. Dado de que el laboratorio generalmente solo conoce detalles como la
edad, sexo y tipo de muestra del paciente, le es difícil determinar su significancia.
La determinación de la piuria, es un factor que ayuda a interpretar si el paciente tiene una
ITU, pero es necesario estandarizar este procedimiento que tiene una baja
reproducibilidad y es realizada e interpretada de manera diferente por los laboratorios
clínicos.
La finalidad de este manual es estandarizar el procedimiento para que sus resultados
sean reproducibles y los médicos tratantes interpreten adecuadamente sus hallazgos para
lograr un tratamiento adecuado del paciente y evitar las recurrencias.
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FASE PREANALITICA
II. TOMA DE MUESTRA, TRANSPORTE Y MANEJO
Es responsabilidad del Jefe del Laboratorio de Microbiología, en la instrucción del
personal de salud sobre la apropiada toma de muestra.
A. Toma de muestra
1. Muestra obtenida del chorro medio
a. Preparación en mujeres
(1) Separar los labios mayores, lavar la vulva
completamente desde adelante hacia atrás
utilizando dos torundas de algodón embebidas en
jabón, en forma sucesiva. Prestar especial
atención al meato uretral. No utilizar jabones con
desinfectantes (benzalconio, hexaclorofeno u otro
similar), porque una sola gota de residuo puede
esterilizar la orina antes de que la muestra llegue
al laboratorio.
(2) Luego con dos torundas de algodón adicionales y
agua o solución salina estéril lavar la vulva.
Comentario: La recolección de muestras de orina de
chorro medio debería ser evitada durante la menstruación
b. Preparación en varones
(1) no circuncidados. Retraer el prepucio y lavar el
glande y pene completamente, de manera sucesiva
con dos torundas embebidas con jabón, prestando
especial atención al meato uretral. Luego enjuague el
glande con agua o solución salina estéril,
sucesivamente con torundas de algodón adicionales.
(2) circuncidados, no requieren mayor preparación
c. Recolección de la muestra. Después de 1 o 2 segundos de
iniciada la micción, acercar el frasco estéril en la dirección
del chorro de orina para obtener la muestra, instruir al
paciente que no debe parar y recomenzar la micción del
“chorro medio” durante la recolección.
Comentario: Nunca obtener orina del bacín, del urinario o
papagayo.
No se observó diferencia en las tasas de contaminación
cuando un frasco nuevo no estéril, se utilizó para la
recolección de orina.
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FASE ANALITICA
III. MATERIALES
A. Medios de cultivo
1. Agar Sangre
2. Agar MacConkey
3. Agar CLED (Cisteína Lactosa Deficiente en Electrolitos)
Comentario. Su uso permite la detección de colonias E. coli enanas,
que pueden pasar desapercibida en agar MacConkey así también
impide el velamiento producido por colonias de Proteus spp.
4. Agar chocolate: empleado para muestras de orina de riñón o
muestras colectadas quirúrgicamente por cistoscopia.
5. Medios cromogénicos para urocultivo que permite la detección rápida
de los uropatógenos más comunes y a su vez infecciones mixtas.
B. Coloración de Gram
1. Cristal violeta
2. Lugol de Gram
3. Alcohol acetona
4. Safranina
C. Suministros
1. Método del asa
a. Use asas de nicrom o de plástico descartables estériles.
Tamaños
(1) Asa de 1 µl para detección de recuento de colonias
mayores de 1,000 UFC/ml.
(2) Asa de 10 µl para la detección de recuento de colonias
entre 100 y 1,000 UFC/ml.
2. Método de la micropipeta
a. Usar una micropipeta calibrada de 1 a 10 µL
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IV. PROCEDIMIENTO
A. Métodos microscópicos y otros métodos directos
El laboratorio debe determinar cuál es el mejor método para la detección de
piuria, de acuerdo a la población que atiende y para lo cual se tiene los
varios procedimientos. La presencia de muchas células epiteliales
escamosas y diferentes morfotipos microbianos sugieren contaminación.
1. Examen directo
a. Colocar 10 µl de orina bien mezclada sin centrifugar sobre
una lámina portaobjetos, colocar un cubreobjetos y observar
a 400x
b. La presencia de más de 5 leucocitos por campo es
considerado como indicativo de piuria.
Nota: este resultado tiene una especificidad de 90% para
predecir una infección urinaria asociada a catéter con más
de 105 UFC/mL, pero una sensibilidad de solo 37%.
2. Sedimento urinario
a. Centrifugar 10 ml de orina x 5 min. a 400 G, este
procedimiento debe estar estandarizado para dar resultados
confiables.
b. La presencia de más de 10 leucocitos por campo es
indicativo de piuria
Comentario: una limitación del análisis del sedimento urinario
es ser operador dependiente.
Comentario: están disponibles sistemas comerciales
basados en citometría de flujo entre otros, para la detección
de piuria.
3. Coloración de Gram:
a. Colocar 10 µl de orina bien mezclada sin centrifugar sobre
una lámina portaobjetos, y deje que se seque al aire sin
extenderla. Fijar con metanol.
b. Determinar el número de organismos por campo de aceite de
inmersión. Un organismo observado a 1,000x correlaciona
con un recuento de colonias de 105/ml de orina.
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FASE POSTANALITICA
IX. REFERENCIAS
5. Coulthard MG. et al. 2010. Redefining urinary tract infections by bacterial colony counts.
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7. Burd EM, Kehl KS. A critical Appraisal of the rol of the clinical microbiology laboratory in
the diagnosis of urinary tract infections. 2011. J Clin Microbiol. 49(9 Supl):S34-S38.
8. European urinalysis group. European urinalysis guidelines. Scand J Clin Lab Invest
2000; 60: 1 – 96.
9. Franz, M. Horl WH. Common errors in diagnosis and management of urinary tract
infection.I: Pathophysiology and diagnostic techniques. Nephrol. 1999. Dial Transplant.
14: 2746-2753.
10. Garcia L, (Ed.). Clinical Microbiological procedures handbook. 3rd Ed. 2010. American
Society for Microbiology.
11. Graham, J. C. Galloway A. The laboratory diagnosis of urinary tract infection. 2001. J.
Clin. Pathol. 54: 911-919.
12. Heldrich, F. J., M. A. Barone. E. Spiegler. 2000. UTI: diagnosis and evaluation in
syntomatic pediatric patients. Clin. Pediatr. (Philadelphia) 39:461-472
13. Herrera, D., P. Lopez, J. L. Duque., L. Perez, R. Golding, y C. Hernandez. 2010. Asas
metalicas calibradas para microbiólogos: una alternativa de fabricación nacional. Rev.
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14. Hooton TM, Stamm WE. Diagnosis and treatment of uncomplicated urinary tract
infection. Infect. Dis. Clin. N. Am. 1997. 11:551-581
15. Johnson JR, Stamm WE. Urinary tract infection in women: diagnosis and treatment.
1989. Ann. Intern. Med. 111:906-917.
16. Kass EH. Asyntomatic infections of the urinary tract. 1956. Trans. Assoc. Am. Phys.
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17. Lifshitz E, Kramer L. Outpatient urine culture: does collection technique matter?. 2000.
Arch. Intern. Med. 160: 2537-2540.
18. Lipsky, B. A., R. C. Ireton, S. D. Fihn, R. Hackett, and R. E. Berger. 1987. Diagnosis of
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22. Tamtlyah, P. 4. and D. G. Maki. 2000. The relationship between pyuria and infection in
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Microorganismo n (%)
Klebsiella pneumoniae 77 7
Proteus mirabilis 44 4
Staphylococcus saprophyticus 41 4
Enterococcus faecalis 35 3
Candida albicans 23 2
Pseudomonas aeruginosa 21 2
Candida sp. 16 1
Enterobacter cloacae 12 1
Streptococcus agalactiae 7 1
Tabla 3. Definiciones
Término Definición
Bacteriuria Presencia de bacteria uropatógena en la orina
Cistitis Inflamación de la vejiga
Cistostomía Procedimiento quirúrgico de insertar un tubo directamente en
la vejiga a través de la región suprapúbica para drenar orina.
Disuria Dolor o ardor al orinar, una común queja en la presentación
de ITU
Nefrostomía Procedimiento quirúrgico con colocación directa de un tubo en
el riñón.
Prostatitis Infección de la glándula prostática; el paciente puede
presentar
fiebre o ser asintomático.
Pielonefritis Infección aguda del riñón y pelvis renal usualmente con fiebre,
escalofríos y dolor lumbar; crónico; puede ser sin síntomas.
Piuria Recuento de leucocitos en orina de 8-10/µl (o >5/campo de
alto poder en un urianálisis convencional), lo cual correlaciona
con un índice de excreción de Leucocitos >400,000 GB/h)
Uretritis Inflamación de la uretra; puede ser causada por enfermedad
sexualmente transmitida o uropatógenos.
Urosepsis Pielonefritis acompañado de bacteriemia y shock séptico.
Urostomía Procedimiento quirúrgico que conduce a una abertura externa
en la
pared abdominal, usualmente hecha con una asa intestinal,
para la salida de la orina.
Aspiración Espécimen de orina colectado con una jeringa y aguja
suprapúbica insertada
directamente a través de la piel en la vejiga.
Orina de catéter Espécimen colectado por la inserción de un catéter en la
uretra.
ITU No complicada Infección principalmente en mujeres sanas, quienes no tienen
anormalidades estructurales o funcionales del tracto urinario.
ITU Complicada Infección en un paciente con anormalidad estructural y/o
funcional del tracto urinario (por ej. lesión en médula espinal,
vejiga neurogénica, obstrucción del tracto urinario, etc.) que
reduce la eficacia de la terapia antimicrobiana.
ITU Asintomática Infección con > 105 bacterias/ml sin síntomas de infección
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Tabla 4. Flujo de trabajo para el procesamiento de urocultivos
Tiempo para
Tipo de orina Inoculación No. de aislamientos reporte final
1 uropatógeno 2 uropatógenosª ≥3 uropatógenos
Chorro medio; obtenidos de Estriar 1 µl en AS y MAC <10,000 UFC/ml, ID mínimab, Bacterias con < 100,000 CFU/ ml, Reportar como cultivo negativo, 1 o 2 días
pacientes ambulatorios <65 años reportar como cultivo negativo ID minima indicar el recuento y en (incubación mínima,
de edad. observaciones "Presencia de flora 18 h)°
mixta". Sugerir remitir una nueva
muestra si fuera pertinente.
≥10,000 UFC/ml (o ≥1,000 UFC Bacterias con ≥100,000 UFC/ml,
de uropatógeno/ml en mujeres de ID definitiva y ATB
14-30 años de edad), ID°
definitivac y ATB
Sonda Foley, paciente Estriar 1 µl en AS y MAC <10,000 UFC/ml, ID° mínima, Bacterias con < 100,000 CFU/ ml, Si no hay presencia de leucocituria 2 o 3 días
hospitalizado o geriátrico (≥ 65 reportar como cultivo negativo ID minima Reportar como cultivo negativo, (incubación mínima,
años de edad) indicar el recuento y en 36 h)
observaciones "Presencia de flora
mixta". Sugerir remitir una nueva
muestra si fuera pertinente.
≥10,000 UFC/ml, identificación Bacterias con ≥100,000 CFU/ml, Si el paciente tiene leucocituria, o es
definitiva y ATB ID definitiva y ATB sintomático o febril, seguir con el
protocolo de 2 uropatógenos.
Catéter vesical; paciente Estriar 10 µl en AS y MAC 100 A 1,000 UFC/ml con Bacterias con < 1,000 CFU/ ml, ID Bacterias con < 10,000 CFU/ ml, ID 2 o 3 días
pediátrico cateterizado, punción ACH para situaciones microbiota normal de urogenital o minima minima (incubación mínima
suprapúbic, cultivo de levaduras especiales piel, ID mínimab, reportar como 48 h)
cultivo negativo
≥1,000 UFC/ml o cualquier Bacterias con ≥1,000 UFC/ml, ID Bacterias con ≥10,000 UFC/ml, ID
cultivo puro de bajo recuento de definitiva y ATB definitiva y ATB
uropatógeno, ID definitiva y ATB Contactar con el médico para determinar
si se sigue con el proceso
a) La presencia de microbiota de la piel o urogenital en una cantidad 10 veces menor a los uropatogenos, es considerada como contaminación y no debe ser considerada para el flujo de trabajo
c) En este grupo etareo, cualquier recuento de Streptococcus grupo B se debe reportar. Descartar la
presencia de S. saprophyticus, que es importante a esta edad
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ANEXO I
DETERMINACIÓN DE SUSTANCIAS ANTIBACTERIANAS RESIDUALES EN
ORINA
I. Principio
Determinar la presencia de sustancias antibacterianas residuales en orina. Este
procedimiento se aplica en todos los casos en los que se solicite urocultivo.
II. Materiales
Pinzas
Discos de papel de filtro estériles de Papel filtro Whatman N° 3 o similar
Placa de Agar Mueller Hinton 100 x 15 mm
Tubo con solución salina estéril x 2 mL
Alicate sacabocados para 6 mm de diámetro o perforador
Cepa de Bacillus subtilis ATCC 6633.
III. Procedimiento
Hacer una suspensión de Bacillus subtilis en un tubo con solución salina
estéril que sea similar al tubo 0,5 de la escala de Mc Farland
Sembrar la placa de agar Mueller Hinton con la suspensión de bacterias de
manera similar a un antibiograma.
Dejar secar a temperatura ambiente aproximadamente 15 min.
Tomar con la pinza un disco de papel filtro y colocarlo en la placa sembrada
según una plantilla numerada o colocando el número en la parte posterior
de la placa.
Colocar 10 µL de orina con una asa calibrada o una micropipeta
Se debe colocar el número correspondiente a la muestra.
La placa será incubada a 35°C por 18 horas en aerobiosis.
IV. Interpretación
Se buscará la presencia de un halo de inhibición alrededor del disco con la orina.
Cualquier diámetro de halo se considerará como prueba positiva. La ausencia de
halo se considera como prueba negativa.
V. Reporte de resultados
El resultado se informa como “Actividad antimicrobiana: Positiva o Negativa”
VI. Comentario
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ANEXO 2
USO Y CALIBRACION DE ASAS MICROBIOLOGICAS
I. PRINCIPIO
El volumen de fluido transferido por una asa calibrada depende del volumen y la forma del
recipiente que contiene el líquido y la dirección y profundidad del asa cuando es
introducido en el líquido. La variabilidad de los resultados es por la tensión superficial y la
superficie humedecida del asa. Líquidos en recipientes con diámetros pequeños (<1 cm)
tienen alta tensión superficial, el cual resulta en una menor transferencia, dado que la
fuerza vidrio-liquido y plástico-liquido (fuerza adhesiva) son mayores que las fuerzas
liquido-liquido (fuerza cohesiva). Cuando el alambre por encima del aro del asa es
humedecido por la inmersión profunda en el líquido, exceso de líquido drena por el
alambre y aumenta el volumen transferido.
Las asas cuantitativas son usadas comúnmente para realizar cultivos cuantitativos y
verificar el inoculo de las pruebas de susceptibilidad. Las asas cuantitativas son menos
exactas que las pipetas, estas todavía son una excelente manera para realizar cultivos
semicuantitativos o diluciones. Las asas cuantitativas son usadas cuando el error ≤ 20%
es aceptable. Las asas son calibradas por método colorimétrico o por método de la broca.
II. TIPOS DE ASAS
A. El volumen es 1 o 10 µl
B. Las asas reusables son hechos de alambre, usualmente platino o nicrom
C. Las asas descartables son hechos de plásticos
III.MATERIALES
Método colorimétrico
A. Agua destilada
B. Colorante solución de azul de Evans al 0.75% (CAE)
i. Solución Stock
1. Adicionar 0.75 g de CAE a 100 ml de agua.
2. Filtrar la solución con papel filtro Whatman Nº 40
3. Guardar a temperatura ambiente en frasco oscuro por 6 meses
C. Colorante Violeta de Genciana solución comercial al 1 – 2 %, solución stock
(opcional)
i. Soluciones de trabajo
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iii. Las asas pueden ser retornados a su diámetro calibrado usando brocas
de 1.5 mm de diámetro para asas de 1µl y brocas de 4 mm de diámetro
para asas de 10µl. Las asas arregladas deben ser calibradas antes de
ser puesto en servicio nuevamente.
iv. Para las asas descartables inexactas, contactar con el proveedor para
reemplazarlos.
V. PROCEDIMIENTO PARA EL USO DEL ASA
A. Para asas reusables, flamear e y enfriar antes de la primera y después de cada
transferencia. Use una nueva asa descartable no humedecida para cada
transferencia.
B. El líquido debería estar en un recipiente de boca ancha (diámetro >1 cm).
C. Rotar la muestra en el recipiente para mezclar la suspensión bacteriana de
manera uniforme.
D. Mantener el asa verticalmente, e introducirlo el aro del asa justo por debajo de
la superficie del líquido. Evitar alguna burbuja en el menisco del líquido.
E. Verificar para asegurar que ninguna burbuja están dentro del asa.
F. Mover el asa hacia arriba y hacia abajo solamente.
G. Transferir el contenido del asa a la placa contactando el líquido sobre la
superficie del agar en la placa, hasta que el líquido ya no sea visible en el asa.
Diseminar con el asa o, para una mayor exactitud, diseminar con una varilla
doblada (asa de “Drigalski”).
VI. LIMITACIONES
Asas cuantitativa, tanto descartables y reusables, serian groseramente inexactas si
burbujas están presentes en la película del líquido transferido. Evitar la formación de
burbujas cuando se agita el líquido. Inspeccionar cuidadosamente que el asa cargada
no presente burbujas. Remover las burbujas por flameo (asas reusables),
reemplazando (asas descartables) o por reinmersión (para cualquiera de las asas).
VII. REFERENCIAS
1. Albers AC, Fletcher RD. 1983. Accuracy of calibrated-loop transfer. J Clin
Microbiol. 18:40-42.
2. Clarridge JE, Pezzlo MT, Vosti KL. Cumitech 2A, Laboratory diagnosis of urinary
tract infections. 1978. Weissfeld AS (Coordinating ed.). American Society for
Microbiology, Washington, D. C.
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HOJA DE TRABAJO 1
Calibración colorimétrica de asas cuantitativa
Acción Correctiva:
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Revisado por: ___________________________________
Fecha: ___________________
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Figuras
Figura 2. Llevar una asada de la orina bien mezclada sobre la placa de agar sangre
haciendo una línea recta a lo largo y por el centro del agar y estriar la orina mediante una
serie de pases en ángulos de 90° a través del inóculo (método solo para 1 µl).
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Figura 3. Cuando se utilizan 10 µl de muestra tomar una asada de orina bien mezclada
para inocular y estriar en cuadrantes las placas de agar, como se indica en la figura.
Foto 1. Siembra por estrías en biplaca de agar sangre y MacConkey de Escherichia coli.
EMPRESAS AUSPICIADORAS