Vibrio cholerae

Caracterización
fenotípica y molecular

Programa de Microbiología y
Micología
ICBM-Facultad de Medicina
Universidad de Chile

María Teresa Ulloa Flores

TM. MsCs, Ph.D (c).
Profesor Asistente
Vibrio cholerae

Taxonomía
Características
fenotípicas
Taxonomía Microbiana: clasificación filogenética

Dominios de seres vivos

Bacteria Eukarya
Archaea

Phylum
Proteobacteria

Woese et al, 1990

Taxonomía Microbiana: Phylum Proteobacteria

Vibrio cholerae
Escherichia coli

Clase
GammaProteobacteria

Pseudomonas aeruginosa
 Taxonomía Microbiana: familia Vibrionaceae

coral
Familia Vibrionaceae
Número especies peces
peces

1981: 20 spp
2002: 47 spp humanos
humanos
humanos

2004: 63 spp humanos/peces

humanos
humanos
camarones

simbionte
 Epidemiología de Vibrio cholerae

•Transmisión: Ingestión de comida o agua contaminada

•Reservorio: Agua. Se sabe que persiste en ambientes
acuáticos, especialmente en estuarios.
Vive asociado a animales, algas y plankton
 Epidemiología de Vibrio cholerae

1866

1912

2010
Haitì. Brote epidémico. Pacientes en el CTC de MSF en el
Hospital Choscal del barrio de Cité Soleil, Puerto Príncipe.
 Epidemiología de Vibrio cholerae

•Patrón estacional ( [Tº])

•Epidemias y pandemias (7) Trends in Microbiology, 2009. Vol.18 No.1
 Características de Vibrio cholerae

♦ Bacilo Gram negativo corto y curvo, 0.5 a 0.8 um

de diámetro , 1.4 a 2.6 um de largo.
♦ Mótil, flagelo polar cubierto por membrana
externa
♦ Oxidasa positivo
♦ Halofílicos (1-3%)
♦ Reduce nitrato
 V. cholerae

Crece en la mayoría de los Medios de Cultivo

 Agar T.C.B.S.
Medio selectivo para el aislamiento y cultivo de Vibrio spp

Inhibidor para la mayoría de las enterobacterias.

Esta inhibición se basa en las altas concentraciones de tiosulfato y citrato, la
presencia de las sales biliares y un pH fuertemente alcalino.

Colonias amarillas V.cholerae

V. alginolyticus
V. fluvialis
V. Furnisii
V. metchnikovii

Colonias verde-azules V. mimicus

V. hollisae
V. parahaemolyticus
V. damsela
V. vulnificus
V. cholerae

http://quimicosclinicosxalapa04.spaces.live.com/
Identificación bioquímica V. cholerae

http://quimicosclinicosxalapa04.spaces.live.com/
 Diagnóstico de Vibrio spp: Batería Bioquímica

Especie TSI LIA MIO VP Cit Arab Sac

V. cholerae A/A-,- K/K-,- +++ + + - +

K/A
V. parahaem K/A-,- K/K-,- ++(+/-) - - + -
V. cholerae, características antigénicas

Lipopolisacárido
 V. cholerae, características antigénicas

B C
A Antígeno O Ág. A (+) Serogrupos O1 y O139
Ag. A (-) No O1-No
Ag. O 0139

Cepas O1 Ag. B Serotipo Ogawa

Lipopolisacárido Ag. C Inaba
Ag. B+C Hikojima
Caracterización serológica de
V. cholerae
 V. cholerae: Biotipo
Biotipo CLÁSICO
V. cholerae O1
Biotipo EL TOR

CLÁSICO EL TOR
(mod – severo) (asintom – leve)
Hemólisis sangre de cordero - +
Hemaglutinación GR de pollo - +
Voges Proskauer - +
Sensibilidad Polimixina B S R
Sensibilidad a Fago IV S R

Sensibilidad a Fago V R S
 Características de Vibrio cholerae:
biotipos y serotipos

1. Serogrupos: O1, O139 y [no-O1, no-O139]

 Phylogenetic relationship of Vibrio cholerae strains

More than 200 serogroups (O1–O200) of Vibrio cholerae exist in aquatic environments.
Only a subset of O1 and O139 serogroup strains are toxigenic (Tox+) and therefore capable of causing cholera
Other strains are non-toxigenic (Tox–) and are selected against.
Different O antigen types are indicated by the colour of the outer membrane and sheathed flagellum
(the periplasmic space and the inner membrane are not shown).

Capsules are present in a subset of strains. Different strain genotypes are indicated by the colour of the cytoplasm; note that
Tox+ O1 and O139 have essentially the same genotype, with the exception of the O antigen genes.

OCTOBER 2009 | vol7 www.nature.

Vibrio cholerae

Características
Moleculares y
patogenicidad
Características de Vibrio cholerae: genoma

TC
Chromosoma I:

•DNA replicación
•División celular
•Transcripción genes
•Tradución de
proteínas
•Biosíntesis de pared
celular

Chromosoma II

Proteínas ribosomales
•Transporte de azucares,
iones metalicos y aniones.
•Metabolismo de azúcares
•DNA reparación
n engl j med 364;1 nejm.org january 6, 2011
 Two Vibrio cholerae chromosomes
EPS, a protein-secretion
system that is required for VPI encodes toxin-
the export of CTX, coregulated pilus and a
hlyU, which encodes a
cholera toxin and several
proteases
transcriptional regulator virulence
that controls the expression regulator, ToxT7,8
of the haemolysinen coding
gene hlyA

VP2
VPI-2

bacteriophage CTXf4

The integron island is a

gene-capture system yet
to be associated with
virulence.
Principales factores de virulencia
de V.cholerae

•Enterotoxina (CT)

•Factor de colonización
(TCP)
Características de Vibrio cholerae: Fago
lisogénico CTX
Bacteriofagos
• Partículas virales que infectan bacterias
• Genoma DNA o RNA, encapsulado por
proteínas
• Absorción: unión a receptores específicos
de la pared celular

• Pueden establecer un ciclo lítico o

lisogénico
• Para integrarse reconocen secuencias
específicas en el genoma bacteriano
• Pueden transferir plásmidos,
transposones y genes bacterianos
 Patogenicidad de Vibrio cholerae:
mecanismo de toxigenicidad

Si el fago integrado
cambia el fenotipo
de la bacteria, dicho
fenómeno se
denomina: conversión

lisogénica
 Patogenicidad de Vibrio cholerae:
mecanismo de toxigenicidad

Vibrio cholerae posee

un fago lisogénico en su genoma que
codifiaca para la toxina colérica
 Patogenicidad de Vibrio cholerae:
adherencia y colonización: pilus TcpA

•Confiere la habilidad de colonizar el intestino delgado.

•Receptor para el fago ctxφ, que contiene los genes para la síntesis de CT.

•La proteína estructural de la fimbria TCP está codificada en el gen tcpA, que
presenta alta variabilidad

•Esta hipervariabilidad en la superficie de la bacteria le permite escapar del

reconocimiento por el sistema inmune del huésped.
 V. Cholerae CT y TCP

In response to undefined stimuli during colonization, two membrane-associated transcriptional activator

complexes, ToxRS and TcpPH, initiate transcription of the toxT gene. The ToxT protein is a transcriptional
activator of the AraC family that directly activates the transcription of the genes responsible for the
production of cholera toxin (CT) and the toxin-coregulated pilus (TCP). The TCP is a type IV bundle-
forming pilus that is essential for colonization of the intestinal tract. CT is an A-B type enterotoxin that is
responsible for the profuse diarrhea that is characteristic of cholera. Collectively, this regulatory system
has been called the ToxR regulon.
Acción de la Toxina de V. cholerae
 Manifestaciones clínicas de
Vibrio cholerae

Dosis infectante
Barrera 105-106
pH ácido

Intestino
delgado
Ciclo de vida de V. cholerae
 Vibrio cholerae gene expression patterns at different stages of the life cycle

Establishment in the decay into an

aquatic environment
‘active but
by finding suitable
nutrient sources such
non-
as chitin culturable

On ingestion, Vibrio cholerae uses motility and

V. cholerae alters its gene expression again in order to
mucinases to penetrate the mucus gel and N-
detach from the epithelium — the ‘escape response’ and
acetylglucosamine-binding protein A
to prepare for transmission to another host (for example,
(GbpA) and other factors to colonize the small
household spread) or entry into the aquatic environment.
intestine epithelium
 Características de Vibrio cholerae
ambientales

1. Casos clínicos Vc no-O1, no-O139: Chile

Características de Vibrio cholerae no-O1,
no-O139: isla de patogenicidad
 Vibrio cholerae

• Gamma Proteobacteria
• Posee 2 cromosomas
• Actualemente se describen 200 serogrupos
• A la fecha,sóloV.c 01 y 0139 son toxigénicos
• El cólera es una infección por Vc toxigénico
• TC y TCP son los principales factores de
virulencia y están corregulados
• La TGH es muy importante (presencia de
fagos, islas e integrones )
• V. cholerae presenta diversos patrones de
expresión génica (ambiental o Intestino del
hombre)
Gracias
MTU