ALIMENTOS - LISTA DE VERIFICACIÓN DE

MEDICIONES ANALÍTICAS
Rev.02 (MICROBIOLOGÍA)
Nombre del laboratorio

Nombre del Evaluado: No de referencia:

Nivel 1 Técnica: Microbiología

Nivel 2 Método: Vaciado en placa/ Número más Probable/ Extensión en Superficie/ Patógenos.
Nivel 3 Procedimiento: NOM-092-SSA1-1994, NOM-111-SSA1-1994, NOM-113-SSA1-1994 Y NOM-110-
SSA1-1994.
NOM-112-SSA1-1994, CCAYAC-004, BAM, AOAC, Compendium of Methods for
the Analytical Manual.
NOM-115-SSA1-1994, NOM-114-SSA1-1994, NOM-242-SSA1-2009, NOM-130-
SSA1-1995
MÉTODO Cumple
Inciso de la
Norma Descripción del Requisito Si No NA Observaciones

REGISTROS
4.13.2 Verificar en los registros en papel o electrónicos
que existe evidencia (registros técnicos) de los
puntos críticos del análisis como: pesos de
muestras, temperaturas y tiempos de
incubación, pH, (estos puntos varían de
acuerdo al método de ensayo).
SUPERVISIÓN Si No NA Observaciones
4.1.5 inciso Verificar que la supervisión de los registros
g) tanto en papel como en medio electrónico, en
especial los cálculos. Asegurarse que la
supervisión es eficaz y ha evitado que se
emitan informes con errores.
Nota: La supervisión no solo se evidencia con
firmas por lo que puede evidenciarse de
diferentes maneras.
PERSONAL Si No NA Observaciones
Verificar que los signatarios, personal operativo,
5.2 supervisor y gerencial involucrados en la
operación del laboratorio tienen evidencias
objetivas donde se evidencie su competencia
técnica dentro de la organización con respecto
a la actividad que desempeña, comparándolo
con los requerimientos (perfil de puesto)
establecidos por el laboratorio
Durante la entrevista los signatarios y personal
que realizan los métodos de prueba deben
demostrar que:
 Conoce los métodos de ensayo para los
que está propuesto.
 Conoce el fundamento del método
incluyendo las reacciones bioquímicas
básicas que se generan durante el
desarrollo del método.

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  Conoce e identifica los puntos críticos del
método.
 Conoce y aplica buenas prácticas de
laboratorio durante la realización de los
ensayos.
Pruebas de aptitud técnica(pruebas de desempeño) Si No NA Observaciones
Verificar que se tiene documentado como se
realizan las pruebas de aptitud técnica en el
cual se incluya la parte analítica, el análisis
estadístico de los resultados y los criterios de
aceptación y rechazo de los resultados
obtenidos.
Verificar que los resultados cumplen con los
criterios de aceptación y rechazo establecidos
ya sea por el método de prueba, por bibliografía
reconocida o por los resultados de la
confirmación o validación del método.
Como prueba de aptitud técnica para métodos
de cuantificación el laboratorio realiza como
mínimo lo siguiente (pruebas de aptitud técnica
de los signatarios y personal de apoyo):

Repetibilidad
Reproducibilidad
Porcentaje de recuperación
Como prueba de aptitud técnica para métodos
cualitativos el laboratorio realiza como mínimo:
Repetibilidad
Reproducibilidad
Verificar que el personal de nuevo ingreso no
reporta resultados de ensayos hasta no haber
realizado sus pruebas de aptitud técnica.
Para métodos donde exista una referencia
equivalente (Métodos iguales) no es necesario
realizar nuevamente la evaluación de
desempeño con diferentes matrices. Consultar
con el responsable de ema el listado de
métodos equivalentes.
INSTALACIONES Y CONDICIONES AMBIENTALES Si No NA Observaciones
5.3 Verificar que el laboratorio cuente con
separación efectiva entre áreas adyacentes a
microbiología, y cuando se analicen otras
matrices incompatibles (como aguas residuales,
residuos, entre otros).
Verificar que se efectúa monitoreo ambiental y
que existe evidencia.
Verificar las medidas que toma el laboratorio
para asegurar el orden y limpieza, así como su
frecuencia y registro.
METODO Si No NA Observaciones
5.4 Verificar que cuenta con los documentos donde
se establezcan los lineamientos de la norma de
referencia a acreditar, considerando las
actividades de aseguramiento de la calidad y
criterios de aceptación establecidos por el
método. Los documentos, deben estar

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formalizados de acuerdo a su sistema de
gestión.
Verificar que cuando se solicita acreditar
métodos internos los documentos al menos
contengan la siguiente información:
Referencia bibliográfica con sustento técnico.
El alcance y descripción del tipo de muestras a
ensayar.
Los parámetros y los intervalos a ser
determinados.
Los equipos e instrumentos, incluidos los
requisitos técnicos de funcionamiento y
verificaciones intermedias requeridas.
Los patrones de referencia y/o los materiales de
referencia requeridos.
La cepa microbiana o grupo bacteriano que se
identifica o cuantifica.
Las condiciones ambientales requeridas y/o
cualquier período de estabilización que sea
necesario.
Definición de las herramientas y procedimientos
del control de calidad empleados en el método
propuesto.
Para la Preparación de Diluciones se basa en
la NOM-110-SSA1-1994 u otra referencia.
Verificar que se realizan las diluciones
necesarias de tal manera que se asegure
después de la incubación que los recuentos
estén dentro del intervalo de conteo
establecido por la norma de referencia:
25-250 UFC (NOM-092).
10-150 UFC (NOM-111).
15-150 UFC (NOM-113).
Verificar que cuenta con registros de la
aplicación de testigos de esterilidad del medio
de cultivo y diluyente.
Verificar que cuenta con evidencia del control
de volumen y pH de la solución diluyente
después de la esterilización.
Para la determinación de Recuento en Placa
(NOM-092-SSA1-1994, NOM-111-SSA1-1994,
NOM-113-SSA1-1994), el laboratorio debe:
Verificar que cuenta con el material necesario
para realizar las diluciones correspondientes.
Verificar que se realiza el vaciado en placa por
duplicado por cada dilución ensayada.
Verificar que se mantienen los registros de
conteos de las diluciones ensayadas por
duplicado, cálculos en apego a lo indicado en la
norma oficial (092), redondeo a dos cifras
significativas y uso de valor estimado.
Indicar en el informe final UFC/g ó ml, las
condiciones de temperatura, tiempo de
incubación y medio de cultivo utilizado.
Utilizar placas que contengan entre:

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 25-250 UFC (NOM-092-SSA1-1994).
15-150 UFC (NOM-113-SSA1-1994).
10-150 UFC (NOM-111-SSA1-1994).
Coliformes totales, fecales y E. coli por NMP; NOM-112-SSA1-1994, BAM, AOAC, Compendium of Methods
for the Analytical Manual.
Verificar que se realizan las diluciones
necesarias de tal manera que los tubos de las
últimas diluciones arrojen resultados positivos y
negativos.
Verificar que se utiliza una concentración del
medio de cultivo caldo lactosado y/o caldo lauril
sulfato apropiada para compensar el volumen
de la muestra en los tubos.
Verificar que se incuba el medio presuntivo
inoculado a 35°C ± 2°C durante 24 ± 2 horas,
en ausencia de gas en los tubos incuba otras 24
horas.
Verificar que para la determinación de
coliformes totales:
Se Incluya los cultivos control positivo (una
cepa coliforme) y control negativo (una cepa no
coliforme)
Verifica que para la determinación de
coliformes fecales: incluye cultivos control
positivo (Escherichia coli) y control negativo
(Enterobacter aerogenes).
Para la prueba confirmativa de coliformes
totales, utiliza caldo verde brillante y caldo EC
para coliformes fecales.
Bacteriological Analytical Manual
Chapter 4 Enumeration of Escherichia coli and the Coliform Bacteria
Para todos los alimentos
Incuba los tubos de caldo EC a 45,5 °C ± 0,2ºC
durante 24 horas en ausencia de gas en los
tubos incubar otras 24 horas.
Para agua
Incuba los tubos de caldo EC a 44,5 °C ± 0,2ºC
durante 24 horas en ausencia de gas en los
tubos incubar otras 24 horas.
Uso de cepas como control positivo y
negativo
Como control positivo en caldo lauril o
lactosado: E coli o E aerogenes
Como control negativo: S aureus
Como control positivo en caldo bilis verde
brillante: E coli o E aerogenes como positivo
Como control negativo: S aureus
Como control positivo en caldo EC: E coli
Como control negativo: E aerogenes
Como control positivo en caldo EC + MUG:
E coli MUG
Como control negativo: E aerogenes o
Klebsiella pneumoniae
Compendium of methods for the analytical
manual

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 Verificar que se incuba los tubos de caldo EC a
44,5 °C ± 0,2ºC durante 24horas ± 2 horas en
ausencia de gas en los tubos incubar otras 24
horas.
Verificar que se realizan pruebas bioquímicas al
menos IMViC para la identificación de
Escherichia coli.
Verificar que se reporta E coli como número
más probable
Determinación de Staphylococcus aureus NOM-115-SSA1-1994
Verificar que Utiliza el medio de agar Baird
Parker suplementado con yema de huevo y
telurito de potasio al 1% para el aislamiento en
placa.
Verificar que se Incuban las placas de agar
Baird Parker a 35°C ± 2°C durante 48 horas ± 2
horas.
Selecciona placas que tengan entre 15-150
colonias típicas.
Verificar que se realiza la prueba de coagulasa.
Verificar que se realiza la prueba de
termonucleasa.
Verificar que se utiliza cepa control positivo
(Staphylococcus aureus) y cepa control
negativo (Staphylococcus epidermidis) a partir
del caldo BHI.
Verificar que se realiza correctamente el
cálculo y expresión de resultados.

Salmonella spp (NOM-114-SSA1-1994). Vibrio cholerae (NOM-242-SSA1-2009). Listeria monocytogenes

(NOM-143-SSA1-1995). Mesofílicos, termofílicos aerobios y anaerobios (NOM-130-SSA1-1995)
Salmonella spp
Verificar que se utiliza un medio de cultivo de
preenriquecimiento de acuerdo al tipo de
muestra por analizar (caldo lactosado, agua
peptonada, caldo soya tripticaseina, leche
descremada, disolución verde brillante, caldo
tetrationato ó caldo selenito cistina).
Verificar que se pesa la cantidad de muestra
suficiente para que al agregar el caldo de
preenriquecimiento se mantenga una
proporción 1:10.
Verificar que antes de incubar deja en reposo
durante 60 minutos y medir el pH.
Verificar que se ajusta el pH en caso de ser
necesario a 6,8 ± 0,2 con soluciones estériles
de hidróxido de sodio 1N o ácido clorhídrico 1N.
Verificar que se agrega 0,2 ml de solución yodo
yoduro de potasio y 0,1ml de disolución verde
brillante al tubo de caldo tetrationato.
Verificar que se realiza la incubación del caldo
selenito cistina y caldo tetrationato ó caldo
Vassiadilis Rappaport a 35°C ± 2°C durante 24
horas ± 2 horas.
Verificar que se utiliza por lo menos tres de los

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siguientes medios de cultivo de diferente
selectividad y diferenciales para el aislamiento:
-Xilosa lisina desoxicolato
-Salmonella Shigella
-Sulfito de bismuto
-Agar verde brillante
-Agar entérico de Hektoen
Utiliza cepa control positivo y negativo en cada
una de las etapas del proceso de análisis.
Realiza pruebas bioquímicas para la
identificación (TSI, LIA, Urea, citrato, rojo de
metilo, Vogues Proskauer.
Nota: los sistemas bioquímicos comerciales
validados pueden ser usados como alternativa
para las pruebas bioquímicas convencionales.
Realiza prueba serológica de aglutinación con
antisuero polivalente de Salmonella.
Listeria monocytogenes
Verificar que se pesa 25 ml o 25 g de la
muestra en un recipiente conteniendo 225 ml de
medio de enriquecimiento (EB), homogeneizar e
incubar por 48 h a 30ºC.
Verificar que se suplementa el medio de
enriquecimiento (EB) con los antibióticos que
indica la NOM-143-SSA1-1995.
Verificar que se realiza la resiembra en los
medios de cultivo:
-Agar LMP incubado a 30°C por 24 a 48 horas.
-Agar Oxford incubado a 35°C por 24 a 48
horas.
Verificar que se selecciona cinco colonias
típicas del medio LPM y Oxford y estriar en
placas de medio ASTEL Incubar a 35ºC por 24
h.
Verificar que se realiza pruebas bioquímicas
preeliminares como: oxidasa, catalasa, prueba
de movilidad en fresco, tinción de gram, prueba
de hemolisis.
Verificar que se realiza la prueba de CAMP
Verificar que se utiliza cepa control positivo
(Listeria monocytogenes) y cepa control
negativo (Staphylococcus aureus) en cada una
de las etapas del proceso de análisis.
Verificar que se realiza prueba serológica de
aglutinación con el antisuero polivalente de
Listeria monocytogenes.
Vibrio cholerae
Verificar que se utiliza agua peptonada alcalina
con un pH de 8,5 ± 0,2 para el pre
enriquecimiento.
Verificar que se incuba el caldo de pre
enriquecimiento y las diluciones a dos
temperaturas (35 °C ± 2 °C y 42 °C ± 2 °C).
Verificar que se Realiza la resiembra en alguno
de los siguientes dos medios de cultivo:

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-Agar TCBS incubado a 35-37°C durante 18 a
24 horas.
-Agar Mcpc incubado de 39 - 40°C durante 18 a
24 horas.
Verificar que se selecciona por lo menos tres
colonias típicas sospechosas de cada placa por
dilución y tiempo de incubación y se estría en
agar T1N1.
Verificar que se realiza pruebas bioquímicas
preeliminares como: oxidasa, desarrollo en
caldo triptona con cloruro de sodio al 0% y 3%.
Verificar que se realiza prueba serológica de
aglutinación con el antisuero polivalente de
Vibrio cholerae del grupo 01.
Verificar que se utiliza cepa control positivo
(Vibrio cholerae) en cada una de las etapas del
proceso de análisis.
Mesofílicos, termofílicos aerobios y
anaerobios
Verificar que el tiempo de incubación de los
recipientes envasados cumple con lo solicitado
por la norma
Verificar que abren los envases al final de la
incubación y registrar por lo menos lo siguiente:
cambios en el color, olor, consistencia y pH del
alimento. No debe probarse.
Verificar que se realiza frotis, teñir con azul de
metileno o tinción de gram, observar al
microscopio y registrar el resultado.
Verificar que se utiliza el medio de cultivo de
acuerdo al tipo de alimento (baja acidez pH >
4,6 ó alta acidez pH < 4,6).
Verificar que se calienta el caldo hígado o caldo
carne cocida previamente a 100°C para
expulsar el oxígeno disuelto.
Verificar que se abre la lata entre dos mecheros
o en campana de flujo laminar vertical.
Verificar que se Inocula 2g ó 2ml de muestra en
cada uno de los 4 tubos con medio de cultivo.
Verificar que se transfiere los alimentos líquidos
por medio de una pipeta, utilizando un bulbo o
propipeta.
Verificar que se Incuba los tubos de acuerdo al
siguiente esquema:
 Caldo hígado a 35°C 96h/120h para
mesofílicos anaerobios.
 Caldo hígado a 55°C 24h/72h para
termofílicos anaerobios.
 Caldo púrpura de bromocresol a 35°C
96h/120h para mesofílicos aerobios.
 Caldo púrpura de bromocresol a 55°C
24h/72h para termofílicos aerobios.
 Caldo ácido a 30°C por 96/120h horas
para lactobacilos, hongos y levaduras.
 Caldo ácido a 55°C por 24/72h horas

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 para termofílicos de descomposición
ácida.
 Caldo extracto de malta a 30°C por
96/120h horas para lactobacilos,
hongos y levaduras.
Verificar que se realiza frotis y resembrar a
placa de agar hígado de ternera o agar nutritivo
e incuba una placa en aerobiosis a 35 °C y
55°C y otra placa en anaerobiosis a 35 °C y
55°C, si hay crecimiento.
Verificar que se selecciona un número
representativo de los diferentes tipos y
resiembra en caldo hígado o caldo carne cocida
e incubar a 35°C 96h/120h y 55°C 24h/72h, si
hay desarrollo de colonias.
Verificar que se obtiene cultivos puros de la
cepa o cepas encontradas.
Verificar que se realiza la confirmación de la
cepa encontrada inoculando otro envase del
mismo producto y el mismo lote que el anterior.
Verificar que se utiliza cepa control positivo
mesofilo anaerobio (Clostridium esporogenes u
otro) y mesofilo aerobio (Bacillus subtilis u otro)
en cada una de las etapas del proceso de
análisis.
Verificar que se utiliza cepa control positivo
termofilo anaerobio (Clostridium
thermosaccarolyticum u otro) y termofilo
aerobio (Bacillus stearothermophylus u otro) en
cada una de las etapas del proceso de análisis.
Verificar que se utiliza cepa control positivo
Lactobacilo, moho ó Levadura; bacteria
termofíica aerobia de descomposición ácida en
cada una de las etapas del proceso de análisis
CONFIRMACIÓN DEL MÉTODO Si No NA Observaciones
Verificar que el Informe de la confirmación del
método contenga: resultados rastreables,
conclusión y aprobación de los resultados.
Como confirmación para métodos cuantitativos
verificar que el laboratorio haya realizado como
mínimo lo siguiente:
Repetibilidad.
Reproducibilidad.
Porcentaje de recuperación
Como confirmación para métodos cualitativos
verificar que el laboratorio haya realizado como
mínimo lo siguiente:
Repetibilidad.
Reproducibilidad.
Verificar que en los métodos de número más
probable se evalúa con el 95% de confianza
que indica el método
Verificar que para el manejo de datos se aplica
cualquier herramienta Estadística técnicamente

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 válida, basada en bibliografía reconocida.
Verificar que los resultados cumplen con los
criterios de aceptación y rechazo establecidos
por la referencia analítica y en caso de que no
lo indique, los establecidos por el laboratorio
basados en bibliografía reconocida, datos
históricos y justificados estadísticamente
Para métodos donde exista una referencia
equivalente (Métodos iguales) no es necesario
realizar nuevamente la confirmación del método
con diferentes matrices. Consultar con el
responsable de ema el listado de métodos
equivalentes.
EQUIPOS Y MATERIALES Si No NA Observaciones
Verificar que se tienen los equipos,
5.5 instrumentos, material y accesorios que solicita
el método de prueba.
Verificar que se utiliza el contador tally o
equivalente para el recuento de colonias.
Verificar que se tiene el horno para esterilizar
que alcance una temperatura mínima de 170ºC
provisto de termómetro calibrado.
Verificar que se Incuba con termostato que evite
variaciones mayores de 1ºC y que sea capaza
de mantener la temperatura de incubación
indicada por la referencia analítica, provista con
termómetro calibrado.
Verificar que el potenciómetro con una escala
mínima de 0,1 unidades de pH a 25ºC, se
encuentra calibrado analíticamente con
materiales de referencia trazables.
Verificar que se tiene una Autoclave que
alcance una temperatura de 121ºC ± 1ºC.
Verificar que la balanza granataria y/o analítica
se encuentra calibrada y verificada.
Verificar que el Conductímetro se calibre
analíticamente con MR o MRC o solución
preparada con un estándar primario a la
concentración empleada.
REACTIVOS Si No NA Observaciones
Verificar que se cuenten con los reactivos y
5.4 medios de cultivo necesarios para el desarrollo
del método de acuerdo a la norma de
referencia. Así como la calidad y el tipo de agua
que se utiliza en el ensayo. Criterios de
aceptación y rechazo.
Verificar las condiciones de almacenamiento de
los reactivos y medios de cultivo utilizados de
acuerdo a las especificaciones del proveedor y
fecha de apertura.
ASEGURAMIENTO DE CALIDAD Si No NA Observaciones
5.9 Verificar que el laboratorio cuente con
procedimientos en donde se indiquen todos los
elementos de aseguramiento de la calidad que
realiza durante el desarrollo de sus actividades
de análisis. En dichos procedimientos deben

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estar establecidos los criterios de aceptación y
rechazo de cada uno de ellos. Entre los
controles a aplicar no siendo limitativos están:
1.- Control en el recibo de insumos (materiales,
medios de cultivo y cepas.
2.- Pruebas de promoción de crecimiento:
Medios de cultivo para cuantificación
(efectividad de medios de cultivo). Mantener
registro de la recuperación bacteriana, para lo cual
debe conocer la concentración bacteriana que se
inocula y que porcentaje se recupera.
Medios de cultivo diferenciales probar con la
cepa que es especifica al medio de cultivo y
alguna no especifica.
Medios de cultivo líquidos probar con la cepa
que es especifica al medio de cultivo y alguna no
especifica.
Bioquímicas evaluar reactividad en función con la
cepa que es especifica al medio de cultivo y
alguna no especifica.
3.- Agua destilada y/o desionizada
Controlar como mínimo el pH, conductividad y
cloro del agua destilada y/o desionizada.
4.- Perdida de volumen
Controlar la perdida de volumen de las
soluciones diluyentes después del proceso de
esterilización.
5.- Potenciómetro con una escala mínima de
0,1 unidades de pH a 25ºC (calibrado
analíticamente con materiales de referencia
trazables)
6.- Conductímetro (calibrado analíticamente
con materiales de referencia trazables) o
solución preparada con un estándar primario a
la concentración empleada.
Control de Esterilización Si No NA Observaciones
Control de Esterilización vía húmeda
empleando termómetro de máximas calibrado
para autoclave y olla de presión, por carga.
Control de Esterilización vía seca emplear
termómetro calibrado a la temperatura de
trabajo para el horno.
Si la autoclave cuenta con termómetro calibrado
no es obligatorio contar con termómetro de
máximas.
Emplear controles biológicos en función de la
carga de trabajo y respaldarlo con una evaluación
del laboratorio ó bien por medio de una referencia
bibliográfica.
Verificar la esterilidad del material después del
ciclo de esterilización (húmeda o seca).
Utilizar blancos de los medios de cultivo y
soluciones para dilución.
Realizar prueba de desafío o reto microbiano
mínimo por lote (al menos de dos
desinfectantes).
Realiza rotación de desinfectantes utilizar al

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 menos dos.
Realiza control del medio ambiente en el área
de siembra.
Realiza el lavado y control del material de vidrio.
Para el control de cepas, el laboratorio debe:
Manejar el cepario con cepas positivas y
negativas de acuerdo a lo que solicita el método
de prueba con registro de procedencia,
frecuencia de resiembra y pruebas bioquímicas.
Para el mantenimiento de cepas debe
considerar:

 El medio de cultivo de mantenimiento

 Periodicidad de resiembra
 Forma de almacenar las cepas
 Contar con cepas de trabajo
 Realizar al menos, tinción de gram en la
resiembra periódica.
 Realizar pruebas bioquímicas a las
cepas al menos una vez al año.
Para laboratorios que estén dentro una industria
no es obligatorio contar con cepas microbianas,
por ejemplo para realizar la promoción de
crecimiento y reto microbiano lo puede contratar
con un laboratorio acreditado.
Debe estar documentado en el sistema de
gestión de la empresa la imposibilidad de contar
con cepas.
Verificar que los datos obtenidos son analizados
en base a los criterios de aceptación y rechazo
establecidos por el laboratorio y que en su caso
se toman las medidas.
INFORME DE RESULTADOS Si No NA Observaciones
5.10 Los resultados son expresados de acuerdo al
método, en lo que se refiere a:
PARA VACIADO EN PLACA
-Tiempo de incubación.
-Temperatura de incubación.
-Medio de cultivo utilizado.
Los resultados de los informes analíticos
coinciden con los valores obtenidos en sus
registros ya sea en papel, electrónicos u hojas
de cálculo.
Verificar que cuando en los informe de prueba
se haga alusión a la acreditación, se
especifique de forma clara el alcance acreditado
y/o los métodos que están dentro del alcance
de la acreditación. 5.10 de CA 17025 vigente.
Verificar que a los informes de análisis no se les
llama certificado de análisis o Dictamen de
laboratorio.

FOR-LAB-021-01
Simbología:
Evaluador Líder, Evaluador Líder Técnico, Evaluado
N/A= No aplica Evaluador, Evaluador Técnico, Experto
Técnico

Fecha de evaluación: Nombre y firma Nombre y firma

FOR-LAB-021-01