CURSO DE ACTUALIZACIÓN EN EL

“MANEJO DEL PICUDO Y ENFERMEDADES DEL AGAVE”

Actualización en el Manejo Integrado de

Enfermedades del Agave tequilana.

Dr. Martin Eduardo Avila Miranda

Noviembre de 2015
 ¿Que causa una enfermedad?
Patosistema
Patógeno (virulento)

Propicio (patógeno)

ó
Hospedero
(susceptible) Desfavorable (planta)
Agentes causales de enfermedades

Hongos
Bióticos Bacterias, Fitoplasmas
Virus, viroides
Nematodos
Protozoarios

Temperaturas extremas
Niveles de humedad extrema
Abióticos pH
Deficiencias
Intoxicaciones
Enfermedades causadas por factores Bióticos

Llamadas también Enfermedades Infecciosas

Estas enfermedades son las que resultan de la infección

de una planta por un patógeno.
En tales enfermedades el patogeno puede crecer o
multiplicarse rapidamente sobre la planta enferma.
Este patógeno puede dispersarse de la planta enferma a
plantas sanas y causar que adicionalmente mas plantas
enfermen, dando lugar a una pequeña o una gran
epidemia.
 Hongos
Agentes causales de
enfermedades
Bióticos:

Fitoplasmas

Nemátodos

Plantas parásitas
Virus Bacterias
 Tizon tardío en papa

Proceso dinámico por sobreposición de ciclos de enfermedad

Patogenicidad es la habilidad de un
parásito de interferir con uno o mas de
las funciones esenciales de la planta y
de este modo causa enfermedad.
HONGOS
Principales características de los hongos:
•Formados de hifas que en conjunto se denominan micelio
•Pared celular compuesta predominantemente de quitina
•Estructura celular eucariotica
•Nutrición heterotrofa y osmotrofica
•Reproduccion por esporas (sexuales y asexuales)
•No moviles
En las enfermedades uno puede distinguir desarrollo al paso del
tiempo, son Progresivas.

Son producto de contagio, no se presentan de manera repentina en

toda la población, tienen un patrón de distribución definido.
El proceso de contagio de una planta enferma a una sana es discreto
y ocurre en un orden predecible

Ciclo de infección es una sucesión de eventos en una estrecha

relación patógeno-hospedero:

•Germinación del propágulo

•Infección
•Desarrollo del patógeno en el hospedero.
•Producción y dispersión de inóculo
 Enfermedades Monociclicas

Enfermedades que realizan solo un ciclo de infección

durante el ciclo de vida del hospedero
 Enfermedades Policiclicas

Enfermedades que presentan varios ciclos de infección

dentro de un ciclo de vida del hospedero
 Tizon tardío en papa
Producción y deposición
de inóculo

Germinación

Infección

Desarrollo del
patógeno en el
hospedero
Agrios, 2005
¿Como se dispersan los propagulos de los patógenos?
¿Como sobreviven los patógenos entre ciclos de cultivo?
El diagnóstico de la enfermedad es muy importante, para poder
aplicar estrategias efectivas de manejo de enfermedades.

Sin diagnóstico, no puede haber manejo de enfermedades. El proceso

de diagnóstico involucra el reconocimiento de los sintomas
(que están asociados a la enfermedad) y los signos.

Las enfermedades deben de ser diagnosticadas a estados de

desarrollo temprano de la epidemia, para tener la oportunidad de
prevenir efectivamente el incremento de la epidemia.

Las fases tempranas de las epidemias, no son notorias visualmente

sino hasta que el nivel de daño es suficientemente alto.
Incidencia:

Numero de unidades planta que están visiblemente

enfermas en referencia a un numero total.

Plantas, ramas, hojas, raíces, frutos etc.

Incidencia es la medida adecuada para

enfermedades en los que una lesión es fatal
(virus, marchiteces o enfermedades sistémicas).
Nos podemos referir a Incidencia en frutos

Incidencia en raíces, etc.

Se pueden usar proporciones o porcentajes

10 hojas enfermas de 20 =
50% de incidencia
0.5 en proporción

Se cuantifica con valores binarios o sea:

Enferma o Sana, + ó -, 1 o 0.
Severidad:

Es la proporción o el porcentaje estimado o medido

del tejido de la planta con síntomas de la enfermedad

Se puede expresar como escala de severidad.

Especialmente en enfermedades virales o en

expresión aérea de daños en tejido vascular o raíz
Incremento de la incidencia de una enfermedad foliar

Phytophthora
Phytophthora infestans
infestans
Si se grafica la cantidad de enfemedad al paso del tiempo

Incidencia

Días después de la primera lluvia

Curva de progreso de la enfermedad

 0 HORAS
7 DIAS

24 HORAS

72 HORAS
Colonización

Producción
y
dispersión
de inóculo

Germinación
de propágulos
Infección
Cantidad de inóculo de Verticillium dahliae y la cantidad de
marchitez vascular en papa.
Representación esquemática de una epidemia monociclica causada en un cultivo
en monocultivo por un patógeno de suelo a través de un periodo de 4 años.
 Inóculo inicial
Infección Infección

primaria secundaria

Supervivencia
Actividad
saprofíticaacoa Contribución al
reservorio de
inóculo en el suelo

Reservorio
de inóculo
en suelo

Gilligan, 1979
Marchitez del agave
 Agente causal Fusarium spp

Genero de la Clase Deuteromycetes

Familia Tuberculareace

• Macroconidios en forma de “canoa” de una o varias células

• Además, forma microconidios unicellares y clamidosporas

Principalmente desdobladores de celulosa en suelo.

Algunos son patógenos de plantas que causan pudriciones de raíz, tallo o

fruto así como marchiteces vasculares.
 Algunas especies del genero Fusarium

Fusarium acuminatum Fusarium anthophilum Fusarium aquaeductuum

Fusarium avenaceum Fusarium beomiforme Fusarium camptoceras
Fusarium chlamydosporum Fusarium coccophilum Fusarium compactum
Fusarium crookwellense Fusarium culmorum Fusarium decemcellulare
Fusarium dimerum Fusarium dlamini Fusarium equiseti
Fusarium graminearum Fusarium graminum Fusarium heterosporum
Fusarium larvarum Fusarium lateritium Fusarium merismoides
Fusarium moniliforme Fusarium napiforme Microdochium nivale (Fusarium nivale)
Fusarium nygamai Fusarium oxysporum Fusarium pallidoroseum
Fusarium poae Fusarium polyphialidicum Fusarium proliferatum
Fusarium reticulatum Fusarium sambucinum Fusarium scirpii
Fusarium solani Fusarium sporotrichioides Fusarium subglutinans
Plectosporium tabacinum (Fusarium tabacinum) Fusarium tricinctum
Fusarium tumidum Fusarium xylarioides
 Fusarium solani Fusarium moniliforme

Fusarium proliferatum Fusarium poae

 Fusarium equiseti

Fusarium moniliforme

Fusarium graminearum
 F. solani

F. solani
Fusarium proliferatum

Fusarium poae
Fusarium oxysporum
 Fusarium oxysporum Schlecht, 1824 emend Sny. & Hans. 1940

Es una especie ampliamente distribuida en los suelos del mundo

Saprófito
Mayoría spp. Endofitico (algunos con potencial como Agentes de C.B.)
Fitopatógeno causante de marchiteces vasculares.

Practicamente imposible diferenciarlos morfológicamente.

Agrios, 2005.
El sistema de formas especiales se basa en el limitado rango de
hospederos que de manera individual tiene cada cepa patogénica.

F. o. f.sp. cubense Plátano

F. o. f.sp. lycopersici Tomate
F. o. f.sp. vasinfectum Chile, algodón.
F. o. f.sp. phaseoli Frijol
F. o. f.sp. niveum Sandía
F. o. f.sp. medicaginis Alfalfa
F. o. f.sp. apii Apio

Existen reportes de hasta 100 f. sp.

La variabilidad en la virulencia de las cepas de una forma especial

hacia determinado cultivar de un hospedero da lugar a un sistema
de clasificación de razas fisiológicas dentro de la forma especial.

raza 0, 1, 2, 3 ...
F. oxysporum f. sp. melonis F. oxysporum f. sp. vasinfectum
 Fase de expresión Fase Determinativa II Fase Determinativa I

Inducción de Colonización y respuesta Colonización y respuesta

síntomas dentro del sistema vascular fuera del sistema vascular

Periodo de incubación Largo

Colonización del
huesped moribundo
PARASITISMO Infección
Infección

Formación de Inóculo
SAPROFITISMO
clamidosporas Sub-ciclos en
no-hospederos
u hospederos
Desintegración del
resistentes o bajo
hospedero
condiciones
medioambientales
Deposición de
limitantes
Clamidosporas Sub-ciclos en
Lisis de las hifas Residuos orgánicos
y exudados radiculares

Clamidosporas Clamidosporas Clamidosporas

Ciclo de vida de F. oxysporum causante de marchitez vascular

Si el agente causal de la marchitez del agave es un hongo
de la especie F. oxysporum.

•Este patógeno debe de inducir síntomas de marchitez

vascular.

•Debe de tener periodos de incubación largos.

•No debe de inducir pudrición generalizada de la raíz.

•Debe de reportarse como F. oxysporum f. sp. ?????

 EXTRACCIÓN DE DNA
M 1 2 3 4 5 6 7

M = marcador, (27cepas) ADN extraído de F. oxysporum.

• Concentraciones obtenidas 318-765 ng/ul

• Purezas 1.82-1.90
 Actividades de PCR
Análisis molecular Diversidad genética
(PCR) rep-PCR

Protocolo de rep- PCR

Reacción
Muestras PCR Amplificación
DNA
Analisis de grupos

Electroforesis Imagen Analisis interpretación

Avila y col, 2010
Planta con marchitez, vecinas en mejores condiciones
La planta tiene un buen anclaje al suelo
Su raíz es abundante y sin necrosis evidente
No hay pudrición en la corona

Se aisló de tejido de tallo una cepa de Fusarium oxysporum cuya huella coincidió
Planta con marchitez
Al empujarla lateralmente la planta se desprende fácilmente
 Perdida de anclaje al suelo

Necrosis generalizada de la corona y de la raíz

Fusarium oxysporum no provoca una necrosis de esta magnitud
Pudrición generalizada de raíz y base del tallo
Ireta y col, 2002
Aceves, 2003.
 L F
E O
S L
I I
O A
N R
E E
S S
Daños en tallo

Pudriciones
radiculares
 Principales enfermedades causadas por hongos
en el agave tequilero (Agave tequilana Weber var azul).
Enfermedades del Sistema Radical
Causadas por hongos
Marchitez del agave Fusarium oxysporum
Fusarium solani
Pudrición negra del agave Thielaviopsis paradoxa

Enfermedades foliares.
Causadas por Hongos
Mancha gris o tizon foliar Cercospora agavicola
Mancha foliar Botriodiplodia sp.
Didymosphaeria sp.
Mancha foliar Phytophthora sp.
Mancha foliar Alternaria sp.
Mancha anular Didymosphaeria sp.
Causadas por Bacterias
Pudrición del cogollo Erwinia cacticida
Pantoea agglomerans
Pseudomonas sp.
Botriodiplodia

Cercospora Cercospora

Botriodiplodia

Botriodiplodia
MANCHA FOLIAR O TIZON FOLIAR
 0 HORAS

72 dias
16 dias

9 dias
PUDRICIÓN DEL COGOLLO
A) B). C).
.
Manejo de Enfermedades
 Como la epidemiología se estudia las poblaciones de patógenos en
poblaciones de hospederos, la enfermedad resultante, bajo la influencia
de condiciones ambientales y la influencia humana.

PLANTA

Complejo

HOMBRE

PATÓGENO MEDIOAMBIENTE

La influencia humana con estrategias de manejo puede afectar negativamente

el desarrollo de la epidemia
 Manejo de las enfermedades en plantas
Aplicar los conceptos de Van der Plank (1960)

Podemos retrasar el progreso de una epidemia si logramos:

Se reduce la cantidad o efectividad del inoculo inicial

y/ó

Reducir la tasa de incremento de la epidemia

Si el inoculo es acarreado en el material de propagación
(hijuelos, planta de in virto):

Pudricion del Cogollo

¿Es posible reducir o eliminar el inoculo inicial? ¿Cómo?

Mancha gris
¿Es posible reducir o eliminar el inoculo inicial? ¿Cómo?

Tizón foliar
¿Es posible reducir o eliminar el inoculo inicial? ¿Cómo?

Marchitez
Vascular

¿Es posible reducir o eliminar el inoculo inicial? ¿Cómo?

Pudrición de tallo

¿Es posible reducir o eliminar el inoculo inicial? ¿Cómo?

Si el inoculo se encuentra en residuos de cosecha o suelo:

Pudrición del Cogollo

¿Es posible reducir o eliminar el inoculo inicial? ¿Cómo?

Mancha gris
¿Es posible eliminar o reducir la efectividad del inoculo inicial? ¿Cómo?

Tizón foliar
¿Es posible eliminar o reducir la efectividad del inoculo inicial? ¿Cómo?

Marchitez
Vascular

¿Es posible eliminar o reducir la efectividad del inoculo inicial? ¿Cómo?

Pudrición de tallo

¿Es posible eliminar o reducir la efectividad del inoculo inicial? ¿Cómo?

 CONTROL QUIMICO
La mayoría de los fungicidas son productos protectores

Se requiere aplicarlos sobre la superficie de la planta para

reducir el numero de infecciones.

Inhiben la germinación o matan las esporas.

Otros fungicidas actuan en hongos que ya invadieron
la planta y actuan como erradicantes o suprimen su
esporulación.
Algunos son parcialmente sistemicos.
Otros pueden traslocarse internamente en la planta.
MANEJO DE LA MARCHITEZ DEL AGAVE

El control de las enfermedades es mas fácil y económico si:

Se cuenta con la información suficiente del cultivo como:

Los patogenos que lo afectan.

El historial de enfermedades en años anteriores
Resistencia varietal a enfermedades
Condiciones ambientales que se esperan
Para cumplir su meta principal el manejo de enfermedades es:

En epidemias monociclicas

• Eliminar o reducir el inóculo inicial

• Reducir la efectividad del inoculo inicial

• Incrementar la resistencia del hospedero

Para marchitez del agave que se puede hacer en manejo de enfermedades:

• Eliminar o reducir el inóculo inicial

En el material de propagación.

Que provenga de cultivo de tejidos

Que se obtenga de huertas madre (de hijuelos)
Que se arranquen de plantas sanas de tres años
Que no tengan clavo

Combinar estas acciones con:

Utilizar terrenos que no se hayan sembrado de agave en varios años
con textura media y buen drenaje
Utilizar terrenos que se tenga certeza que en el ciclo anterior de agave
no tuvieron problemas de marchitez
Para marchitez del agave que se puede hacer en manejo de enfermedades:

• Reducir la efectividad del inoculo inicial

Tratar con fungicidas de contacto y sistémicos, efectivos contra Fusarium

el volumen de suelo sobre el que se plantará el hijuelo.

Tratar con agentes de control biológico, probadamente efectivos contra Fusarium

el volumen de suelo sobre el que se plantará el hijuelo.
Micoparasitismo de Trichoderma
Sobre Fusarium patógeno de agave
 Apariencia de raices de plantas de agave
60 días después de la inoculación con cepas de
Trichoderma spp y F. oxysporum

F. oxysporum TrZAP61-M + TrBar 3-3-1 + Control

F. oxysporum F. oxysporum no-inoculado

No difference in root dry weight

 Incidencia de pudrición radicular y raices no turgentes
60 días después de la inoculación con cepas de
Trichoderma spp y F. solani

81.26 a 46.6 b 10.22 c 0 c

F. solani TrZAP61-M + TrBar 3-3-1 + Control
F. solani F. solani no-inoculado
PUDRICIÓN DEL COGOLLO

COFUPRO-CRT-ITTJ
Schaad y col., 2001
 Caracterización
Morfológica
Muestreo Aislamiento
Tinción de Gram
Bacilos cortos Gram
negativos

Capacidad pectinolítica
(Cristal Violet Pectate Purificación Prueba anaerobiosis Caracterización
medium) (Hugh y Leifson) Bioquímica

Caracterización
bioquímica (Biolog) Fluorescencia en KB
Coloración en YDC
(King’s medium B agar)
(Yeast-extract-dextrose)
Purificación Extracción DNA

Amplificación gen
16s, secuenciación
consulta en el Gen
Bank

REP-PCR

Caracterización génica
Schaad y col., 2001
 Prueba de patogenicidad

Tratamientos
A
B
C
Purificación AB
Aparición de
BC
Inoculación síntomas de
AC
ABC en plantas pudrición de cogollo
in vitro
Inyección o contacto
A Pantoea agglomerans
B Erwinia cacticida
C Pseudomonas spp.

Aislamiento del mismo

microorganismo
inoculado a partir del
tejido infectado

Postulados de Koch
MUESTREO
 MUESTREO

Selección de material vegetal

AISLAMIENTO
PURIFICACIÓN
 CEPARIO

8 aislados obtenidos del muestreo

3 aislados del cepario del ITTJ como agentes causales de Pudrición del cogollo
 CARACTERIZACIÓN MORFOLÓGICA

Tinción de Gram

Sta. Anita 1a Pandillo 3-1 Sta. Anita 1b1

Pandillo 3-2 Sta. Anita 1b2 Sn. Vicente

ANAEROBIOSIS
 CARACTERIZACIÓN MORFOLÓGICA

Extracción de DNA

Marcador

BEB 4.3

BEB 1.3

BEB cc/

A1D1
A1B1

A1B2
A1-1

P3-1

P3-2

P3-3

SV1
DNA total

1000 pb
500 pb
AMPLIFICACIÓN 16S

Se tiene la amplificación de 16S de

todos los aislados, se requiere
incrementar su cantidad para llevar a
secuenciar al LANGEBIO en Irapuato.
y posteriormente hacer el análisis de
diversidad y comparación con bases
de datos en el Gen Bank.
Se cuenta ya con los reactivos y equipamiento necesario para
empezar a obtener huellas génicas utilizando amplificación de
fragmentos repetidos (Rep-PCR), a partir de los aislados con
los que se cuenta.

Se cuenta con plantas de agave azul obtenidas por cultivo de tejidos para utilizarlas
en pruebas de patogenicidad
Laboratorio del Dr. Victor Olalde Portugal CINVESTAV-Irapuato
BIOLOG
Aislad Biolog Prob. 16S Huella
o
A1B1 2 Pantoea agglomerans 100 Pantoea agglomerans

A1 1 Pantoea agglomerans 99 Pantoea agglomerans

Ps 3 Pseudomonas fuscovaginae ---

SV Salmonella ---
P3 Enterobacter ---
A1D1 Pantoea aglomerans 100 Pantoea agglomerans

P3 Breviudimonas --
A1B1 Pantoea agglomerans 100 Pantoea agglomerans
 Utilización de secuencia del fragmento 16 S

Pseudomonas
Bacillus subtilis

Enterobacteria
Enterobacteriaceae
Enterobacteriaceae

Pantoea agglomerans
Pantoea agglomerans
Pantoea agglomerans
Pantoea agglomerans
Pseudomonas
OBJETIVOS NECESARIOS PARA CUBRIR

Mayor numero de sitios de muestreo

Mayor numero de evidencias gráficas de síntomas de iniciales de pudrición del cogollo

Mayor numero de aislados

Saber si las bacterias presentes en lesiones iniciales coinciden entre sitios de muestreo
y conocer la mas prevalente.

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