CROMATOGRAFIA DE COLUMNA

OBJETIVOS:

 Conocer la cromatografía en columna como técnica de separación de mezclas de

sustancias, sus características y los factores que en ella intervienen. Utilizar la
cromatografía en columna para la purificación de una sustancia contaminada con
un colorante. Controlar con cromatografía en capa fina el proceso de separación
de mezclas por cromatografía.

FUNDAMENTO:

 Se emplea para la separación de mezclas o purificación de sustancias a escala

preparativa. Como fase estacionaria se usa, generalmente, gel de sílice o alúmina
dentro de una columna. La elección del disolvente es crucial para una buena
separación. Dicho disolvente pasa a través de la columna por efecto de la
gravedad o bien por aplicación de presión (cromatografía flash). La columna se
prepara mezclando el soporte con disolvente y se rellena la columna poniendo
en el fondo de ésta un poco de algodón o lana de vidrio, para evitar que la sílica
o la alúmina queden retenidas en la columna y que el disolvente se engrasada
hasta el nivel del soporte. A continuación se introduce la muestra por la parte
superior de la columna y se eluye con el disolvente elegido, recogiéndose por lo
general en tubos de ensayo. Una columna de cromatografía es un tubo de vidrio
relleno con una sustancia sólida de propiedades adsorbentes constituida por
pequeñas partículas: gel de sílice y alúmina son las más usadas. Este relleno es lo
que se conoce en cromatografía como la fase estacionaria. A través de la
columna se hará pasar una corriente de un disolvente o mezcla de disolventes
denominada eluyente y/o fase móvil. La mezcla de compuestos a separar se
disuelve en una pequeña cantidad de disolvente y se coloca sobre el adsorbente,
en la parte superior de la columna, quedando adsorbida por el mismo. A
continuación se pasa un flujo de eluyente a través de la columna. Los
compuestos constituyentes de la mezcla son arrastrados por el eluyente a su
paso, haciéndoles avanzar a lo largo de la columna. Sin embargo, no todos los
compuestos avanzan a la misma velocidad, y esta es precisamente la clave de la
cromatografía. Algunos compuestos se ven más fuertemente retenidos por el
adsorbente (fase estacionaria) y por lo tanto avanzarán más despacio. Por el
contrario, otros apenas son retenidos y avanzarán a mayor velocidad. En general
se dice que la separación en la cromatografía se basa en la afinidad diferencial
de los distintos compuestos por la fase móvil o la fase estacionaria.
MATERIALES:

 Embudo de vidrio
 Soporte universal
 Tubo de vidrio
 Válvula
 Vaso de precipitado
 Hexano
 Probeta
 Algodón
REACTIVOS:

 Extracto de espinaca
 Acetona
 Oxido de aluminio

OXIDO DE ALUMINIO 226 SOPORTE UNIVERSAL

VASO DE PRECIPITADO VALVULA

EMBUDO DE VIDRIO PROBETA

TUBO DE VIDRIO ACETONA

ESPATULA
PROCEDIMIENTO:

 A través del embudo vierta la suspensión en la columna golpeando

ligeramente con los dedos para que el empacado sea uniforme. Usando una
pipeta larga, agregue algo de la mezcla de pigmentos directamente a la
arena. Añadir suficiente para llenar la capa de arena con el color. Abra la llave
de paso y deje que el nivel del liquido caer a la parte superior de la alúmina.
Agregue suavemente éter de petróleo para llenar la capa de arena. Abra la
llave de paso y deje que el nivel del liquido caiga a la parte superior de la
alúmina. Repita estos pasos al menos tres veces o hasta que todos los
compuestos coloreados estén en la alúmina.

RESULTADOS:

 Se logro ver que el caroteno y la clorofila fueron desplazándose hacia la parte

baja del tuvo de vidrio y se logro ver dos sustancias una que era amarilla
perteneciente al caroteno, la sustancia Con tonalidad verde intenso
perteneciente a la clorofila.

Se observa la sustancia del amarilla se observa la sustancia verdosa

(Caroteno) (clorofila)
CONCLUSIONES:

 La cromatografía en columna es quizás el método más general, utilizado para

la separación, a la vez que para la purificación, de diferentes compuestos
orgánicos que se encuentren en estado sólido o líquido. La estructura de los
 pigmentos vegetales, los hace insolubles en agua, razón por la cual se
necesitó de disolventes orgánicos (hexano y acetona). La polaridad de los
pigmentos varía significativamente en siendo los no polares los carotenos,
continuando con una mayor polaridad que los carotenos la xantofilas, a
continuación más polar que las xantofilas pero menos que la clorofila b,
tenemos a la clorofila a y de la cual se obtuvo la mayor cantidad, la más polar,
la clorofila b.

BIBLIOGRAFIA:

 http://depa.pquim.unam.mx(9/oct/2006)
 http://www.fq.uh.cu/dpto/qi/Aimee/sintesis_inor_web/co. (28/ago/2006)
 www.ugr.es/~quiored/lab/oper_bas/crom.htm - 22k(Oct/9/2006)
 http://www.uprm.edu/biology/profs/velez/cromatografias.tm(9/oct/2006)