linfocitos B

INMUNOLOGIA BASICA
Dra. Esthela Loyo de López

Sociedad de Lupus, Reumatología y Autoinmunidad en República Dominicana, Inc.

Friday, September 17, 2010

 • El proceso mediante el cual progenitores linfoides de MO se
convierten en linfocitos maduros que irán a poblar tejidos linfoides
periféricos se conoce como maduración linfocitaria.

• La colección de receptores para Ag’s, es decir especificidades,

expresadas en linfocitos B y T se denomina repertorio linfocitario.

• Durante su maduración, el programa de expresión secuencial de

genes conduce a proliferación de células en desarrollo,
generación del repertorio, cambios en fenotipos celulares,
adquisición de competencia funcional y selección de eventos para
asegurar que la mayoría de linfocitos que penetran tejidos periféricos
son útiles, y que responderán a Ag extraños pero no a muchos Ag
propios.

• La expresión de genes para los receptores antigénicos es la

característica central de maduración; hay gran similitud en los
procesos entre B y T, donde B adquiere la capacidad de expresar
genes de inmunoglobulinas (Ig) para el receptor de B (BCR) y T la
capacidad de expresar genes para el receptor de T (TCR).

Friday, September 17, 2010

 generación y maduración de
linfos B [2008]

La generación de B maduras
principia en el embrión y
prosigue toda la vida

Saco vitelino, hígado y MO fetal;

MO adulto

Cada día produce 1 billón de linfos

B, durante toda la vida

Friday, September 17, 2010

 generación y maduración de
linfos B [2008]

La generación de B maduras
principia en el embrión y
prosigue toda la vida

Saco vitelino, hígado y MO fetal;

MO adulto

Cada día produce 1 billón de linfos

B, durante toda la vida

Friday, September 17, 2010

 1) DNA DE CELULAS EMBRIONARIAS Y DE
CELULAS ADULTAS DE MIELOMA,
DIGERIDAS CON ENDONUCLEASAS DE
RESTRICCION

2) SEPARACION DE FRAGMENTOS Y ANALISIS

DE SU CAPACIDAD DE HIBRIDIZAR CON
CADENA KAPPA DE mRNA MARCADA

3) DOS FRAGMENTOS DEL DNA EMBRIONARIO

PERO SOLO UNO DE CELULAS ADULTAS
HIBRIDIZARON

TEORIA: DURANTE DIFERENCIACION DE

LINFOS B, GENES V – C EXPERIMENTAN
REORDENACION

COMPROBACION DEL MODELO DE DOS GENES

S. TONEGAWA; N. HOZUMI
Proc. Natl. Acad. Sci, USA 1976, 73:3628

Friday, September 17, 2010

 médula ósea tejido linfoide periférico

Friday, September 17, 2010

 La maduración de linfocitos B y T consiste de estadios secuenciales en maduración de
genes tempranos que tienen que ver con selección de linajes y su proliferación,
expresión de genes para receptores antigénicos y selección de repertorios maduros.

Exones múltiples codifican porciones de una sola cadena H o L de Ig.

Sufren reordenación a genes funcionales, antes de ser transcritos y expresados.
Durante generación, ciertos exones se escogen al azar mediante sistema genético
dinámico capaz de generar más de10'°combinaciones.

Friday, September 17, 2010

 La maduración temprana de B y T
se caracteriza por elevada
actividad mitótica, estimulada por
interleucina 7 (IL-7).
Mutaciones en la cadena de IL-7R, cadena γ común a
varios receptores origina severa inmunodeficiencia,
inmunodeficiencia combinada severa ligada al
cromosoma X (X-linked severe combined
immunodeficiency disease [X-SCID]).

SCF = stem cell factor, división y proliferación a pre-B; expresión de IL-7R

Friday, September 17, 2010


BCR:
exones de cadena pesada se
hallan en cromosoma 14
linfocito B:
BCR asociado al
heterodímero alfa:beta

Cada linfo B tiene 2

cromosomas 14, pero elabora
un solo tipo de BCR, por tanto
hay que “silenciar” los
segmentos de un cromosoma

Friday, September 17, 2010

 genes V,D,J,C para cadena pesada
múltiples copias de genes con ligeras variantes, alineados en cromosoma 14

genes V,J,C para cadena ligera

cromosoma 2 (k), cromosoma 22 (l)

Friday, September 17, 2010

 +/- 100 +/- 4 +/- 6 +/- 10

Recombinación de cadena
pesada

Dos uniones DNA para

generar un gene funcional de
CP:
Dh a Jh y Vh a DhJh.

Vh21, Dh7 y Jh3

Friday, September 17, 2010

 Cadena asociada a CL substituta (Vpre-B + lambda 5),
asociadas a heterodímero Ig-alfa/Ig-beta

Friday, September 17, 2010

 Reordenación de
cadena ligera en
cromosoma 2 (k)

Friday, September 17, 2010

 Cada segmento de gene V es precedido en la terminal 5ʼ de un exón que codifica a un péptido líder (L), el cual
guía la cadena pesada o ligera a través del retículo endoplásmico.
Cada linfo B maduro produce una sola clase de BCR o de Ac.
La estrategia de “corte y pega” favorece diversidad de BCR y reconocimiento de cualquier molécula orgánica posible

Friday, September 17, 2010

 Al madurar, tendrá una secuencia funcional V de cadena pesada y ligera.
Cada clona comprometida a un epitope específico.

Friday, September 17, 2010

 En órganos linfoides periféricos: reordenación de exones para nuevas
secuencias funcionales de regiones constantes = cambio de isotipo
y por ende de funciones efectoras biológicas sin cambiar la
especificidad Ag original

Friday, September 17, 2010

 DNA germinal

reordenación somática de
segmentos germinales para
generar un gen funcional

gen funcional

Friday, September 17, 2010

 mIg = BCR, sIg = Ac ‘s no hay TCR soluble

Friday, September 17, 2010

 linfocito T:
TCR asociado al complejo CD3

Friday, September 17, 2010

 receptor de un linfocito B,
selección clonal

Friday, September 17, 2010

 exclusión de alelos

• Se expresan los genes

de CP y CL de un solo
cromosoma heredado,
por célula

• Seguridad de una clona

B específica para un
epitope determinado

Friday, September 17, 2010

 Se permite progresión si la reordenación es “productiva”: 1 de cada 3 pro-B a pre-B
Cuando pre-B exhibe receptor, experimenta múltiples divisiones: 32 a 64 descendientes
Cada progenie puede reordenar de nuevo diferentes exones de cadena ligera: mayor diversidad de Ac

Friday, September 17, 2010

 Diversidad del repertorio:
recombinación somática,
adición de nucleótidos,
otros

Friday, September 17, 2010

Friday, September 17, 2010
 tolerancia de B

SELECCION NEGATIVA
90% de linfos B producidos cada día
sufren apoptosis

SUPRESION CLONAL
eliminación de B inmaduras que
expresen auto-Ac, vg contra Ag
propios expresados en MO

Friday, September 17, 2010

 dinámica propuesta de poblaciones B convencionales

médula ósea

repertorio abierto de B inmaduras

10 a 20 x 106 inducción de tolerancia

falla de B para penetrar

folículos linfoides órganos linfoides periféricos, sangre

vida media de aprox 3 días inducción de tolerancia adicional, B

linfos B inmaduras auto-tolerantes, B anérgicas

estimulación por Ag’s penetración exitosa a folículos linfoides

B de memoria, recirculantes, muy vida media prolongada de B naîves maduras

larga vida, alta afinidad IgG, IgA o IgE recirculantes (3-8 semanas vida promedio)

Friday, September 17, 2010

 activación y proliferación de linfocitos B

generación y maduración ocurren en médula

ósea, independiente de Ag

activación, proliferación y diferenciación ocuren en

órganos linfoides periféricos, requieren presencia de Ag

Friday, September 17, 2010

 Th activan B, controlan
cambio de isotipo e inician
hipermutación somática

RESPUESTA HUMORAL
Anticuerpos secretados por
células plasmáticas

Friday, September 17, 2010

 activación de B según naturaleza del Ag

Ag-TD: dependiente de
colaboración Th

Ag-TI: independiente de
colaboración Th

Friday, September 17, 2010


(1) señal de competencia, fase G0 a G1 temprana
(2) señal de progresión, G1 a S, G2 y mitosis
TIMO - DEPENDIENTES
* contacto directo con Th
* activación específica de B por T
sensibilizadas al mismo Ag depende de
presentación adecuada de péptidos en
contexto CMH Clase II
Friday, September 17, 2010
HLA-CII:TCR
B7:CD28
CD40:CD40L
TIMO - INDEPENDIENTES
TIPO 1: componentes de pared
bacteriana; mitógenos
* verdaderamente independientes
* activadores policlonales de B
* activan B maduros e inmaduros
* LPG de Gram (-)
TIPO 1I: moléculas muy repetitivas
Respuesta Humoral para Ag-TI es muy
diferente: débil, no hay memoria,
predominan respuestas tipo IgM
 ¿Cómo funciona BCR?
BCR completo:
mIg reconoce el epitope o
determinante antigénico

heterodímero transduce

ITAMs = immune tyrosine activation motifs

Friday, September 17, 2010

 La decisión de si un invasor es o no es
peligroso la realiza el sistema innato.

BCR y co-receptor
* disminuye hasta 100
veces la necesidad de
“clustering” de BCR
* vuelve a B muy sensibles
vg Ag reconocidos por SI
como peligrosos

CD19,
CD21,
CD81
prevención de
autoinmunidad

Friday, September 17, 2010

Friday, September 17, 2010
 PAPEL DE Th EN
RESPUESTA HUMORAL

HLA-CII:TCR
B7:CD28

CD40:CD40L

CD40:CD40L
conjugado T:B
*CD40L pertenece a familia de
reorganización de Golgi, receptores de TNF [TNFR]
liberación de citoquinas, *CD40 pertenece a familia de
regulación de CD40L en T
TNF y de citoquinas solubles que
programan proliferación y
apoptosis
* activación de vías tirosin-kinasas
[Lyn, Syk, fosfolipasa C, factores
de transcripción]

Friday, September 17, 2010

 la respuesta humoral

¿es respuesta primaria?

¿es respuesta secundaria?
PRIMARIA * naturaleza del Ag
lag más corto, * ruta administración
más rápida e intensa, * presencia o ausencia de adyuvantes
más prolongada * especie a inmunizar
Friday, September 17, 2010
 APLICACIONES

QUIMERAS

Clona de DNA recombinante

que contiene secuencias
promotoras, líderes y de
regiones variables murinas,
y exones de regiones
constantes humanas.

Rituximab
Infliximab

Friday, September 17, 2010

 Rituximab, Ac monoclonal quimérico
(humano-murino) anti-CD20
Linfoma de células B
Artritis Reumatoide
¿LES, vasculitis?

Herceptin, anti-HER2

Gleevec (imatinib)
*Linfoma no Hodgkin
*Ca de mama:anti-HER2
*Leucemia mielógena crónica (LMC)
*¿Esclerodermia?

Friday, September 17, 2010

 Heteroconjugados o Ac
biespecíficos:

híbridos de 2 moléculas
diferentes de Ac.

Friday, September 17, 2010

 Bibliotecas de genes que codifican
fragmentos Fab.
El mRNA aislado para CP y CL se
amplía gracias a PCR (polymerase
chain reaction) y se clona en
vectores.

Combinaciones al azar de genes CP

y CL generan constructos CP-CL de
antigenicidad específica diferente.

Science 1989, 246:1275

Friday, September 17, 2010

 murino
knockout
singénico
congénico
transgénico

Aún más lejos…

Células embrionarias
reciben miniloci de genes
humanos, se derivan líneas
de ratones transgénicos que
producen Ac Ag-específicos
humanos.
N. Lonberg et al. Nature 1994, 368:856

Friday, September 17, 2010

 Tipo de tumor Translocación cromosomas Genes involucrados en translocación

Derivado de linfocitos B

Linfoma de Burkitt t(8;14) (q24.1;q32.3) más común c-myc, IgH

Leucemia Linfoblástica Aguda (pre-B

t(12;21) (p13;q22) (25% en infancia) TEL1, AML1
ALL)

Pre-B ALL; también Leucemia t(9;22) (q34;q11.2) (25% ALL del adulto,
bcr, abl (cromosoma Filadelfia)
Mielógena Crónica) 3% de ALL infantil)

Linfoma Folicular t(14;18) (q32.3;q21.3) bcl-2, IgH

Linfoma Difuso células B, células

t(3;14) (q27;q32.3) bcl-6 (DNA-binding protein), IgH
grandes

Linfoma Manto t(11;14) (q13;q32.3) cyclin D1, IgH

Derivado de linfocitos T
t(1;14) (p32;q11.2) (5% de casos); del
Leucemia Linfoblástica Aguda Pre-T TAL1, TCRα; TAL1, SCL
(1p32) (20% de casos)

Linfoma de células T, anaplásico de ALK (tyrosine kinase), NPM (función

t(2;5) (p23;q35)
células grandes desconocida)

Friday, September 17, 2010

 próxima clase:

• Linfocitos T

Friday, September 17, 2010

 TCD4, subpoblaciones y área de influencia

Friday, September 17, 2010

 RESUMEN
• Linfocitos B y T provienen de un precursor común en MO, comprometido
desde estadios tempranos al linaje linfoide. La maduración de B
continúa en MO, mientras que progenitores tempranos de T migran y
completan maduración en timo. La maduración temprana se caracteriza
por proliferación celular inducida por citoquinas, en particular IL-7, que
incrementa muchísimo el número de linfocitos inmaduros.

• Maduración de B y T implica recombinación somática de

segmentos genéticos para receptores de Ag’s y expresión de
moléculas de Ig en precursores de B y moléculas para TCR en
precursores de T.
• La expresión de Receptores de Ag’s es crucial para la
supervivencia y maduración de linfocitos en desarrollo y para los
procesos de selección que conducen a repertorios diversos con
especificidades antigénicas útiles muy variadas.

• Los receptores para B y T son codificados por genes derivados de la

recombinación somática de un limitado número de segmentos genéticos
que se hallan segregados espacialmente en loci del DNA germinal.

Friday, September 17, 2010

 • Hay loci separados que codifican la cadena pesada de
Ig, la cadena ligera Ig κ, cadena ligera Ig λ, cadena TCR
β, cadenas TCR α y γ, y cadenas TCR δ.

• Estos loci contienen segmentos génicos V, J, y

segmentos génicos D en cadena pesada de Ig y en loci
TCR β y δ.
• Recombinación somática de ambos loci Ig y TCR,
implica unión de segmentos D-J en el loci que contiene
los segmentos D, seguido de unión de segmentos V a
los DJ recombinados en estos loci, o bien unión
directa V a J en el otro loci.

• Este proceso de recombinación genética es mediado

por un complejo enzimático de recombinasas, que
incluye componentes linfocitarios específicos
denominados RAG-1 y RAG-2.

Friday, September 17, 2010

 • La diversidad de repertorios de Ac y TCRs es generado por la asociación
combinada de múltiples genes de línea germinal V, D, y J y por la diversidad
de unión generada mediante adición al azar de nucléotidos en sitios de
recombinación. Estos mecanismos generan mayor diversidad en la unión
de regiones V y C que conforman la tercera región HV (CDR3) en
polipéptidos de Ac y del TCR.

• La maduración de B ocurre en estadios secuenciales, caracterizados por

patrones distintos de recombinación de genes de Ig y su expresión.

• En precursores muy tempranos de B, (células pro-B), los genes para Ig’s se

hallan en configuración germinal. En el estadio pre-B, ocurre
recombinación D-J y V-D-J en el locus de la cadena pesada. Se produce el
transcripto primario de RNA que contiene el complejo VDJ y los segmentos
genéticos de C, y los exones de la región Cµ del RNA de cadena pesada se
empalman al segmento VDJ para generar mRNA maduro, el cual se traduce
en la proteína µ de cadena pesada.

• Se forma el precursor de BCR (pre-BCR) al parear la cadena pesada µ con

un surrogado no variable de cadena ligera y por asociación con las
moléculas de señalización Igα-Igβ. Este receptor elabora señales que
inhiben la reordenación del otro alelo de la cadena pesada (exclusión
alélica) mientras que estimula la proliferación celular.

Friday, September 17, 2010

 • En la etapa de B inmadura, hay recombinaciones de loci κ
o λ, y se expresan cadenas ligeras.
• Se ensamblan cadenas pesadas y ligeras en moléculas
intactas IgM que se expresan en la superficie celular.
• B inmaduras abandonan MO para poblar tejidos linfoides
periféricos, donde completan maduración final.
• B maduras son capaces de sintetizar ambas cadenas
pesadas µ y δ en la misma célula debido a empalme
alterno de los transcriptos primarios de RNA de cadena
pesada, por tanto una misma célula puede expresar IgM e
IgD de membrana al mismo tiempo.

• Durante maduración de B, procesos de selección eliminan o

inactivan precursoras de B que expresen receptores
antigénicos de alta afinidad para Ag propios presentes en MO
(tolerancia central y periférica).

Friday, September 17, 2010