linfocitos B

inmunología básica
2010

Sunday, May 30, 2010

 • El proceso mediante el cual progenitores linfoides de MO se
convierten en linfocitos maduros que irán a poblar tejidos linfoides
periféricos se conoce como maduración linfocitaria.

• La colección de receptores para Ag’s, es decir especificidades,

expresadas en linfocitos B y T se denomina repertorio linfocitario.

• Durante su maduración, el programa de expresión secuencial de

genes conduce a proliferación de células en desarrollo,
generación del repertorio, cambios en fenotipos celulares,
adquisición de competencia funcional y selección de eventos para
asegurar que la mayoría de linfocitos que penetran tejidos periféricos
son útiles, y que responderán a Ag extraños pero no a muchos Ag
propios.

• La expresión de genes para los receptores antigénicos es la

característica central de maduración; hay gran similitud en los
procesos entre B y T, donde B adquiere la capacidad de expresar
genes de inmunoglobulinas (Ig) para el receptor de B (BCR) y T la
capacidad de expresar genes para el receptor de T (TCR).

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 generación y maduración de
linfos B [2008]

Sunday, May 30, 2010

 generación y maduración de
linfos B [2008]

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 1) DNA DE CELULAS EMBRIONARIAS Y DE
CELULAS ADULTAS DE MIELOMA,
DIGERIDAS CON ENDONUCLEASAS DE
RESTRICCION

2) SEPARACION DE FRAGMENTOS Y ANALISIS

DE SU CAPACIDAD DE HIBRIDIZAR CON
CADENA KAPPA DE mRNA MARCADA

3) DOS FRAGMENTOS DEL DNA EMBRIONARIO

PERO SOLO UNO DE CELULAS ADULTAS
HIBRIDIZARON

TEORIA: DURANTE DIFERENCIACION DE

LINFOS B, GENES V – C EXPERIMENTAN
REORDENACION

COMPROBACION DEL MODELO DE DOS GENES

S. TONEGAWA; N. HOZUMI
Proc. Natl. Acad. Sci, USA 1976, 73:3628

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 médula ósea tejido linfoide periférico

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 La maduración de linfocitos B y T consiste de estadios secuenciales en maduración de
genes tempranos que tienen que ver con selección de linajes y su proliferación,
expresión de genes para receptores antigénicos y selección de repertorios maduros.

La generación de linfos B maduros inicia en el embrión y prosigue toda la vida.

En el embrión, saco vitelino, después hígado y médula ósea fetal. Adultos solo médula ósea.
Cada día producimos aprox 10 (a la 10) de linfos B, durante toda la vida

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 La maduración temprana de B y T
se caracteriza por elevada
actividad mitótica, estimulada por
interleucina 7 (IL-7).
Mutaciones en la cadena de IL-7R, cadena γ común a
varios receptores origina severa inmunodeficiencia,
inmunodeficiencia combinada severa ligada al
cromosoma X (X-linked severe combined
immunodeficiency disease [X-SCID]).

SCF = stem cell factor, división y proliferación a pre-B; expresión de IL-7R

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 Cadena asociada a CL substituta (Vpre-B + lambda 5),
asociadas a heterodímero Ig-alfa/Ig-beta

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 Cada segmento de gene V es precedido en la terminal 5ʼ de un exón que codifica a un
péptido líder (L), el cual guía la cadena pesada o ligera a través del retículo
endoplásmico.

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 Recombinación de cadena pesada

Se requieren 2 uniones DNA para

generar un gene funcional de CP:
Dh a Jh y Vh a DhJh.

En el ejemplo, se unen Vh21, Dh7

y Jh3.

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Sunday, May 30, 2010
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 DNA germinal

reordenación somática de
segmentos germinales para
generar un gen funcional

gen funcional

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 linfocito B:
BCR asociado al
heterodímero alfa:beta

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 linfocito T:
TCR asociado al complejo CD3

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 receptor de un linfocito B,
selección clonal

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 exclusión de alelos

• Se expresan los genes

de CP y CL de un solo
cromosoma heredado,
por célula

• Seguridad de una clona

B específica para un
epitope determinado

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 Diversidad del repertorio:
recombinación somática,
adición de nucleótidos,
otros

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 Tipo de tumor Translocación cromosomas Genes involucrados en translocación

Derivado de linfocitos B

Linfoma de Burkitt t(8;14) (q24.1;q32.3) más común c-myc, IgH

Leucemia Linfoblástica Aguda (pre-B

t(12;21) (p13;q22) (25% en infancia) TEL1, AML1
ALL)

Pre-B ALL; también Leucemia t(9;22) (q34;q11.2) (25% ALL del adulto,
bcr, abl (cromosoma Filadelfia)
Mielógena Crónica) 3% de ALL infantil)

Linfoma Folicular t(14;18) (q32.3;q21.3) bcl-2, IgH

Linfoma Difuso células B, células

t(3;14) (q27;q32.3) bcl-6 (DNA-binding protein), IgH
grandes

Linfoma Manto t(11;14) (q13;q32.3) cyclin D1, IgH

Derivado de linfocitos T
t(1;14) (p32;q11.2) (5% de casos); del
Leucemia Linfoblástica Aguda Pre-T TAL1, TCRα; TAL1, SCL
(1p32) (20% de casos)

Linfoma de células T, anaplásico de ALK (tyrosine kinase), NPM (función

t(2;5) (p23;q35)
células grandes desconocida)

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 QUIMERAS

Clona de DNA recombinante

que contiene secuencias
promotoras, líderes y de
regiones variables murinas,
y exones de regiones
constantes humanas.

Rituximab
Infliximab

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 Rituximab, Ac monoclonal quimérico
(humano-murino) anti-CD20
Linfoma de células B
Artritis Reumatoide
¿LES, vasculitis?

Herceptin, anti-HER2

Gleevec (imatinib)
*Linfoma no Hodgkin
*Ca de mama:anti-HER2
*Leucemia mielógena crónica (LMC)
*¿Esclerodermia?

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 Heteroconjugados o Ac
biespecíficos:

híbridos de 2 moléculas
diferentes de Ac.

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 Bibliotecas de genes que codifican
fragmentos Fab.
El mRNA aislado para CP y CL se
amplía gracias a PCR (polymerase
chain reaction) y se clona en
vectores.

Combinaciones al azar de genes CP

y CL generan constructos CP-CL de
antigenicidad específica diferente.

Science 1989, 246:1275

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 murino
knockout
singénico
congénico
transgénico

Aún más lejos…

Células embrionarias
reciben miniloci de genes
humanos, se derivan líneas
de ratones transgénicos que
producen Ac Ag-específicos
humanos.
N. Lonberg et al. Nature 1994, 368:856

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 • Linfocitos B y T provienen de un precursor común en MO, comprometido
desde estadios tempranos al linaje linfoide. La maduración de B
continúa en MO, mientras que los progenitores tempranos de T migran y
completan su maduración en timo. La maduración temprana se
caracteriza por proliferación celular inducida por citoquinas, en particular
IL-7, que incrementa muchísimo el número de linfocitos inmaduros.

• Maduración de B y T implica recombinación somática de

segmentos genéticos para receptores de Ag’s y la expresión de
moléculas de Ig en los precursores de B y moléculas para TCR en
precursores de T.
• La expresión de Receptores de Ag’s es crucial para la
supervivencia y maduración de linfocitos en desarrollo y para los
procesos de selección que conducen a repertorios diversos con
especificidades antigénicas útiles muy variadas.

• Los receptores para B y T son codificados por genes derivados de la

recombinación somática de un limitado número de segmentos genéticos
que se hallan segregados espacialmente en los loci del DNA germinal.

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 • Hay loci separados que codifican la cadena pesada de
Ig, la cadena ligera Ig κ, cadena ligera Ig λ, cadena TCR
β, cadenas TCR α y γ, y cadenas TCR δ.

• Estos loci contienen segmentos génicos V, J, y en la

cadena pesada de Ig y en loci TCR β y δ , segmentos
génicos D.
• Recombinación somática de ambos loci Ig y TCR,
implica unión de segmentos D-J en el loci que contiene
los segmentos D, seguido de la unión de segmentos V
a los segmentos DJ recombinados en estos loci, o bien
unión directa V a J en el otro loci.

• Este proceso de recombinación genética es mediado

por un complejo enzimático de recombinasas, que
incluye componentes linfocitarios específicos
denominados RAG-1 y RAG-2.

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 • La diversidad de repertorios de Ac y TCRs es generado por la asociación
combinada de múltiples genes de línea germinal V, D, y J y por la diversidad
de unión generada por la adición al azar de nucléotidos en los sitios de
recombinación. Estos mecanismos generan mayor diversidad en la unión
de regiones V y C que conforman la tercera región HV (CDR3) en los
polipéptidos de Ac y del TCR.

• La maduración de B ocurre en estadios secuenciales, caracterizados por

patrones distintos de recombinación de genes de Ig y su expresión.

• En precursores muy tempranos de B, (células pro-B), los genes para Ig’s se

hallan en configuración germinal. En el estadio pre-B, ocurre
recombinación D-J y V-D-J en el locus de la cadena pesada. Se produce el
transcripto primario de RNA que contiene el complejo VDJ y los segmentos
genéticos de C, y los exones de la región Cµ del RNA de cadena pesada se
empalman al segmento VDJ para generar mRNA maduro, el cual se traduce
en la proteína µ de cadena pesada.

• Se forma el precursor de BCR (pre-BCR) al parear la cadena pesada µ con

un surrogado no variable de cadena ligera y por asociación con las
moléculas de señalización Igα-Igβ. Este receptor elabora señales que
inhiben la reordenación del otro alelo de la cadena pesada (exclusión
alélica) mientras que estimula la proliferación celular.

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 • En la etapa de B inmadura, hay recombinaciones de loci κ
o λ, y se expresan cadenas ligeras.
• Se ensamblan cadenas pesadas y ligeras en moléculas
intactas IgM que se expresan en la superficie celular.
• B inmaduras abandonan MO para poblar tejidos linfoides
periféricos, donde completan su maduración final.
• B maduras son capaces de sintetizar ambas cadenas
pesadas µ y δ en la misma célula debido a empalme
alterno de los transcriptos primarios de RNA de cadena
pesada, por tanto una misma célula expresa IgM e IgD de
membrana.

• Durante la maduración de B, procesos de selección eliminan

o inactivan precursoras de B que expresen receptores
antigénicos de alta afinidad para Ag propios presentes en MO
(tolerancia central y periférica).

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 próxima clase:

• Linfocitos T

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 TCD4, subpoblaciones y área de influencia

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