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1 (2010): 34-43
Artculo resea
ENSAYO DE Artemia: TIL HERRAMIENTA DE TRABAJO PARA
ECOTOXICLOGOS Y QUMICOS DE PRODUCTOS NATURALES
Grupo de Plagas Agrcolas, Direccin de Proteccin de Plantas, Centro Nacional de Sanidad Agropecuaria
(CENSA). Carretera Jamaica y Autopista Nacional, Apartado 10, San Jos de las Lajas,
La Habana, Cuba. Correo electrnico: oriela@censa.edu.cu
RESUMEN: Este artculo pretende divulgar entre los investigadores de nuestro pas las nociones
fundamentales relacionadas con el bioensayo de artemia (Artemia spp.). Se recogen los aspectos biolgicos
generales de este organismo, las distintas variantes experimentales del ensayo y sus posibles aplicaciones,
as como las ventajas y desventajas de esta prueba. Se exponen ejemplos de los avances logrados con su
utilizacin, promoviendo su uso entre ecotoxiclogos y qumicos de productos naturales,
fundamentalmente en el campo del descubrimiento y desarrollo de nuevos plaguicidas de origen natural.
(Palabras clave: Artemia; bioensayo; productos naturales)
ABSTRACT: This paper is aimed at divulging the fundamental notions related to the brine shrimp
(Artemia spp.) bioassay among the researchers of our country. General biological characteristics of this
organism, different experimental variants of the bioassay and their applications, as well as their
advantages and disadvantages are summarized. Several examples about the advances achieved with
the application of this bioassay are included promoting its use by ecolotoxicologists and specialists of
natural products, mainly those concerned with the discovery and development of new natural pesticides.
(Key words: Artemia; brine shrimp; bioassay; natural products)
(nuevos modos de accin) y menor impacto sobre los aislar molculas con estructuras novedosas, sino ais-
ecosistemas. Universidades, institutos de investiga- lar nuevos compuestos bioactivos que tengan aplica-
cin y compaas de agroqumicos estn prestando ciones potenciales o puedan servir como compues-
especial importancia al estudio de productos natura- tos guas para las modificaciones sintticas (3, 8).
les, en respuesta al creciente inters en el descubri-
Un lugar sobresaliente dentro del grupo de
miento de nuevos productos para el desarrollo de una
bioensayos ms utilizados lo ocupa el ensayo de
agricultura sostenible y amigable con el medio am-
Artemia spp. Este es un ensayo general de amplio
biente (2).
uso que determina el efecto letal de los materiales en
La necesidad de sustituir los mtodos de lucha larvas de Artemia spp., y de esta manera se predice
contra plagas basados en los plaguicidas convencio- su habilidad para producir la muerte de clulas can-
nales, parece evidente por motivos medioambientales cergenas en cultivo de tejidos, matar insectos y/o ejer-
y esta necesidad de cambio est determinando la in- cer un amplio rango de efectos farmacolgicos (3, 4,
vestigacin actual en el campo agroqumico. Adems 5). Este artculo resea pretende divulgar entre los
de los aspectos medioambientales, otros factores fa- investigadores de nuestro pas, los aspectos funda-
vorecen el retorno al estudio de fuentes naturales mentales relacionados con el desarrollo histrico de
como origen de nuevos plaguicidas. Entre ellos figura este ensayo, sus distintas variantes experimentales
el gran desarrollo actual de las tcnicas de aislamien- y posibles aplicaciones, promoviendo su uso entre
to y determinacin de estructuras qumicas, pues tra- ecotoxiclogos y qumicos de productos naturales.
bajos que hace aos hubieran requerido mucho tiem-
po, hoy en da se puedan realizar con rapidez. PARTE ESPECIAL
La otra tecnologa de vital importancia para el des-
cubrimiento y desarrollo de nuevos productos de ori- Aspectos biolgicos generales y significado
gen natural son los ensayos biolgicos (3). En la lti- prctico
ma dcada, se han incorporado algunos ensayos de Artemia spp. son camarones minsculos de cuer-
gran utilidad y eficacia que requieren pequeas can- po blando, de color carmelita y transparentes a la luz;
tidades de muestras y permiten la evaluacin rpida pertenecen al Phylum Arthropoda, clase Crustaceae,
de extractos crudos y fracciones, conduciendo con subclase Branchiopoda. Se conocen comnmente por
seguridad a los principios activos y descartando todo el nombre de artemia, tambin llamados monos de
lo que no sea de inters. Hay que indicar claramente mar o brine shrimp en ingls (9). El gnero Artemia
la diferencia entre un estudio de productos naturales est compuesto por varias especies, de las cuales se
convencional, cuyo objetivo es el conocimiento de los han identificado al menos cinco especies bisexuales
componentes qumicos de una planta, y la bsqueda y varias poblaciones partenogenticas, entre ellas
de nuevos productos bioactivos que depende siem- Artemia salina Leach, Artemia persimilis Piccinelli y
pre de los ensayos biolgicos que guan el fracciona- Prosdocimi, Artemia franciscana Kellogg (bisexuales)
miento y el aislamiento final (3, 4, 5). En muchas oca- y Artemia partenogenetica Bowen y Sterling (10, 11).
siones, el factor clave que ha impedido el descubri-
Estas especies se encuentran distribuidas en todo
miento rpido de nuevos constituyentes bioactivos ha
el mundo en aguas de elevada salinidad, pueden cre-
sido el uso insuficiente e inadecuado de la tecnologa
cer a temperaturas entre 6 y 35C. Se alimentan de
del bioensayo (3, 4).
algas y bacterias y son fuente de alimento para pe-
En los ltimos aos, el objetivo de muchos labora- ces, pjaros y varios invertebrados. Las hembras pro-
torios relacionados con el estudio de productos natu- ducen huevos que, en condiciones externas favora-
rales ha sido desarrollar y utilizar nuevos procedimien- bles, eclosionan produciendo larvas de un tamao
tos de bioensayos; tratando de fomentar mtodos aproximado de 1 mm. Los huevos tambin pueden
baratos y fciles de utilizar, sin la necesidad de co- formar quistes y permanecer en esta forma por un
operacin de otros grupos de investigacin (3, 4, 6, ao o ms. Las artemias se convierten en adultos
7). Cada investigador realiza sus propios bioensayos transcurridas 6 a 8 semanas, alcanzando un tamao
de manera rpida, reproducible y obtiene resultados promedio de 7mm.
confiables estadsticamente. De esta manera, son
Artemia es hasta la fecha el nico gnero animal
detectados y aislados con rapidez compuestos
en todo el mundo cuyo estado criptobitico (quistes)
bioactivos novedosos a travs del cribado y fraccio-
est disponible comercialmente de manera continua,
namiento biodirigido de los extractos vegetales. El
como fuente de alimentos para peces y crustceos
objetivo principal de la investigacin no es solamente
en acuicultura. Esto ha constituido un elemento clave
en su utilizacin en ensayos biolgicos (12). Por ra- madas en algunos casos a los valores obtenidos utili-
zones prcticas, las especies con un estado zando Brachydanio spp. Aunque la prueba de artemia
criptobitico, durante su ciclo de vida son ms ade- fue nueva para las dos terceras partes de los 70 labo-
cuadas para el desarrollo de un bioensayo estndar. ratorios participantes, todos reconocieron que esta
La disponibilidad permanente de huevos (quistes) a requiere poca experiencia y no consume mucho tiem-
partir de los cuales pueden ser obtenidas las larvas po, aunque la sensibilidad del ensayo fue relativamen-
ofrece las siguientes ventajas: te baja, resultado que relacionan con la cepa y los
compuestos de referencia utilizados en este estudio.
- no hay necesidad de mantener una colonia viva per-
Los autores concluyeron que este bioensayo es un
manentemente,
valioso instrumento como prueba en una primera eva-
- las pruebas pueden realizarse dnde y cundo sea luacin para categorizar la toxicidad de productos
necesario, qumicos y como prueba de referencia para el am-
- se dispone siempre de un nmero suficiente de indi- biente marino.
viduos de la misma edad y condicin fisiolgica. Evaluacin biolgica de productos naturales: extrac-
tos crudos, fracciones y compuestos puros
Aplicaciones y comparacin con otros ensayos
biolgicos Artemia es tambin til para predecir actividades
Las larvas de Artemia spp. se han utilizado por ms plaguicidas y farmacolgicas, responde a un amplio
de 40 aos en estudios toxicolgicos y rango de compuestos qumica y farmacol-gicamente
ecotoxicolgicos (7, 12) y se ha estudiado su biologa diversos; es por ello que resulta tan importante su
y usos potenciales en diversos campos como un m- aplicacin en programas de descubrimiento y desa-
todo prctico y econmico para la determinacin de rrollo de nuevos plaguicidas y medicamentos de ori-
bioactividad de compuestos sintticos y productos gen natural (3, 4, 5, 19, 20). Adems, el ensayo per-
naturales (3, 13, 14, 15, 16, 17). mite la evaluacin rpida de las relaciones estructu-
ra-actividad y son fcilmente observables las
Prueba ecotoxicolgica para el ambiente marino interacciones entre compuestos (21).
Para la proteccin del ambiente marino, son ne- En 1982, Meyer et al. (13), fueron los primeros
cesarios mtodos de ensayos ecotoxicolgicos sim- en introducir el uso de las larvas de Artemia spp. en
ples y confiables para determinar el impacto poten- sustitucin de animales superiores en la evaluacin
cial sobre la biota marina de sustancias xenobiticas de extractos vegetales para el descubrimiento de
(7). Adems, la implementacin correcta de medidas compuestos con actividad antitumoral y citotxica.
regulatorias, tanto en el mbito nacional como inter- Este ensayo se utiliza para la pre-evaluacin de ex-
nacional, requiere que los mtodos toxicolgicos usa- tractos vegetales en el descubrimiento de compues-
dos sean confiables y reproducibles (12, 18). tos antitumorales (17). Inicialmente, se determin que
En 1984, Vanhaecke et al. (12) del Centro de Re- existe una correlacin positiva entre la mortalidad
ferencia de artemia en Blgica, despus de un estu- de las larvas de artemia y la citotoxicidad frente a
dio extensivo de la literatura cientfica relacionada con las clulas 9KB (carcinoma nasofarngeo humano) y
el uso de este organismo en investigaciones sobre la la lnea celular 3PS(P388) (leucemia in vivo) (3). En
contaminacin ambiental, desarrollaron un ensayo general, los valores de ED50 para las citotoxicidades
estndar de toxicidad aguda (a corto plazo), conocido son aproximadamente una dcima parte de los va-
como ARC-TEST o ensayo del Centro de Referencia lores de LC 50 encontrados en los ensayos con
de Artemia. Este ensayo est basado en la determi- Artemia spp. En el Laboratorio de Cultivo de Tejidos
nacin de la LC50 a las 24 horas de las larvas (instares del Pardue Cancer Center se utiliz el ensayo de
II-III) de una cepa especfica de Artemia sp. El proce- artemia para la evaluacin inicial de seis lneas ce-
dimiento fue sometido a un estudio colaborativo que lulares de tumores humanos. De este modo, es po-
involucr centros de investigacin en Europa y Am- sible detectar y entonces monitorear el fracciona-
rica para determinar el grado de estandarizacin del miento de extractos con actividad citotxica, utilizan-
protocolo experimental propuesto. Al comparar los do el ensayo de mortalidad de larvas ms que otros
resultados de este estudio con los obtenidos utilizan- ensayos antitumorales in vivo o in vitro que resultan
do los organismos diana de uso comn en pruebas ms tediosos y costosos. En este centro se han des-
toxicolgicas, se determin que la repetibilidad y cubierto hasta el momento ms de 300 compuestos
reproducibilidad son al menos iguales que las de una antitumorales y plaguicidas utilizando este bioensayo
prueba a corto plazo usando Daphnia spp. y aproxi- en la pre-evaluacin (1).
La actividad detectada a travs del ensayo de solo compuesto activo sino a una mezcla de ellos, y
artemia es un indicador de la toxicidad frente a pla- las proporciones relativas de los compuestos
gas de insectos. Mawardi et al. (19) comprobaron la bioactivos individuales pueden variar de un lote a otro
correspondencia entre el efecto frente a las larvas de mientras que la actividad biolgica permanece dentro
artemia del extracto crudo de Glycosmis pentaphylla de los lmites tolerables. Por lo tanto, el anlisis fsico
(Retz.) Correa y un alcaloide activo aislado como re- o qumico de un componente individual en tales mez-
sultado de su fraccionamiento biodirigido, y la activi- clas no es completamente satisfactorio. Para lograr
dad inhibidora del crecimiento de ambas sustancias la estandarizacin y control de la calidad de las mate-
frente a la mosca de la fruta (Drosophila melanogaster rias primas, procesos y productos deben emplearse
Meigen). Otros investigadores, encontraron corres- de forma armonizada los ensayos biolgicos y los
pondencia entre los altos niveles de actividad frente a mtodos fsico-analticos, tales como cromatografa,
artemia de coumarinas y cromonas presentes en un para lograr la sensibilidad requerida frente a las com-
extracto de Flourensia thurifera (Mol.) D.C. y la activi- plejidades qumicas encontradas en los productos
dad antialimentaria del mismo frente a Spodoptera naturales. La estandarizacin de los productos, em-
littoralis Boisduval (22). pleando este anlisis integral qumico y biolgico de
los componentes bioactivos, contribuir a una acep-
El ensayo de artemia result preponderante en el
tacin ms generalizada de los productos botnicos
descubrimiento de una nueva clase de compuestos
heterogneos y generar beneficios pues resultar en
conocidos como acetogeninas, reconocidas por sus
la confianza del consumidor.
efectos biolgicos diversos (23). En los aos 80, in-
vestigaciones detalladas condujeron al aislamiento de Comparacin del ensayo de artemia con otros ensa-
un nmero elevado de estos derivados de cidos yos biolgicos utilizados en la investigacin y desa-
grasos de cadena larga, con actividad insecticida. rrollo de productos naturales bioactivos
Estas sustancias son venenos estomacales de ac-
En general, todos los sistemas de ensayos biol-
cin lenta, particularmente efectivos frente a insectos
gicos usados en la investigacin de nuevos
tales como lepidpteros y Leptinotarsa decemlineata
agroqumicos a partir de productos naturales poseen
Say (23, 24). Leatemia e Isman (25, 26) demostraron
aspectos positivos y negativos. Cada equipo de in-
recientemente que extractos etanlicos y acuosos de
vestigacin debe realizar la seleccin de cul o cu-
semillas de Annona squamosa L. son efectivos frente
les utilizar en correspondencia con los objetivos pro-
a Plutella xylostella L. Un buen nmero de estos com-
pios de cada proyecto de investigacin, nmero de
puestos, tales como asimacina y annonacina, que
muestras a evaluar y cantidad disponible de cada una
demostraron una actividad citotxica potente en el
de ellas, infraestructura y recursos existentes, prepa-
ensayo de artemia (valores de LC50 entre 0,002 y 33
racin tcnica del personal requerida, entre otros.
g. mL-1) poseen un futuro comercial muy promisorio
como plaguicidas. Existen patentes obtenidas por in- En los ltimos aos se ha incrementado el uso de
vestigadores estadounidenses sobre insecticidas ba- bioensayos muy especficos, computarizados, in vitro
sados en acetogeninas provenientes de Asimina basados en los mecanismos de accin. Estos
triloba Dunal (27) y otra patente similar obtenida por bioensayos simulan los efectos de algunos compues-
Bayer AG (Alemania) basada tambin en este tipo de tos previamente conocidos que poseen un mecanis-
compuestos pero a partir de otras especies vegetales mo de accin especfico. Muchas compaas qumi-
pertenecientes al gnero Annona (28). McLaughlin et cas multinacionales utilizan una batera de bioensayos
al. (29) han aislado cientos de acetogeninas a partir in vitro o incluso pruebas biolgicas sin clulas, que
de las Anonceas, y muchas de ellas poseen poten- se centran en la actividad sobre enzimas especficas,
cial no solo como plaguicidas sino tambin como agen- receptores o rutas bioqumicas. Mientras que tales
tes anticancergenos. pruebas biolgicas requieren cantidades bajas de ma-
terial y se logran altos rendimiento de procesamiento
Otra aplicacin potencial del ensayo de artemia,
throughput, no existe una correspondencia confiable
se relaciona con las ventajas especiales que ofrecen
con la eficacia bajo condiciones reales (en campo).
los bioensayos en la estandarizacin y control de la
Por otro lado, los investigadores deben ser muy cui-
calidad de productos botnicos heterogneos (3).
dadosos con los ensayos biolgicos basados en me-
Tales productos pueden ser heterogneos debido a
canismo de accin, pues deben asegurar que el al-
la presencia de mezclas de compuestos bioactivos
cance de estos sea lo suficientemente amplio para
provenientes de la misma fuente botnica o pueden
incluir mecanismos desconocidos y diversos, as como
ser mezclas preparadas a propsito. La respuesta
nuevas entidades qumicas. Adems, en estos
biolgica deseada con frecuencia no se debe a un
bioensayos especficos los extractos deben ser anali- tema particular de compuestos o de reacciones (20,
zados muchas veces antes de detectar actividades. 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38). La respuesta biolgica
Es ms recomendable realizar una preevaluacin uti- debe ser lo suficientemente amplia como para incluir
lizando ensayos generales, desechar los negativos, y diferentes y nuevos mecanismos de accin y estruc-
utilizar los ensayos especficos con los activos. turas qumicas novedosas. La utilidad del ensayo de
artemia como un bioensayo general, indicador de va-
Si se trata de ensayos in vivo y el propsito de la
rios tipos de actividades, se ha validado por el descu-
investigacin es descubrir nuevos plaguicidas, ha
brimiento de centenares de compuestos activos (35,
habido mucha discusin en cuanto al organismo ms
39, 40).
apropiado para el bioensayo. Algunos investigadores
han utilizado las larvas de mosquito (generalmente La eficiencia del mtodo para predecir actividades
Aedes aegypti L.) como organismo de prueba (3). Si plaguicidas y farmacolgicas es reconocida, no obs-
el propsito de la investigacin es el desarrollo de un tante se debe prestar especial atencin a dos aspec-
producto contra el mosquito, el mrito de esta prueba tos al estandarizar este bioensayo: sensibilidad de la
biolgica es obvio. Por otra parte, Isman et al. (30) especie utilizada y correspondencia entre la actividad
plantean que si el propsito del estudio es descubrir frente a artemia y la actividad biolgica de inters.
un insecticida de amplio espectro, o al menos un pro- Var et al. (11) plantearon que la existencia de dife-
ducto eficaz contra insectos fitfagos, entonces las rencias en la biologa y fisiologa entre especies y
larvas de mosquito son probablemente un mal indica- cepas del gnero Artemia puede provocar variacio-
dor pues los extractos de plantas y los productos na- nes en las sensibilidades de las distintas formas a los
turales que son altamente activos contra las larvas de mismos compuestos. Estas observaciones alertan
mosquito a menudo muestran una actividad dbil, si sobre el uso indiscriminado de cualquier fuente de
la hay, contra los insectos fitfagos. Artemia spp., e indican la importancia de reoptimizar
el bioensayo general para cada nueva especie y/o
Isman et al. (30) en un programa de investigacin,
cepa usando compuestos de referencia para estable-
dirigido al descubrimiento y desarrollo de insecticidas
cer el grado de sensibilidad de la cepa empleada.
botnicos, utilizaron rutinariamente dos especies de
Tambin, debe corroborarse en cada caso la corres-
orugas noctuidas para el estudio de extractos crudos
pondencia entre la actividad frente a este organismo
de plantas, su fraccionamiento biodirigido y el aisla-
y la actividad plaguicida de inters, pues existen au-
miento de los compuestos activos. Estas son
tores que sugieren que la ausencia en A. salina de
Spodoptera litura (Fabricius) y Peridroma saucia
estructuras desarrolladas como receptores puede
(Hubner); ambos insectos son altamente polfagos de
generar la posibilidad de obtener falsos resultados
plantas cultivables. Sin embargo, es muy posible ob-
negativos (10).
viar compuestos activos al utilizar solo los noctuidos;
por ejemplo, los gingkolidos, sesquiterpenos del El ensayo de Artemia spp. tiene las ventajas de
Gingko biloba L., son insecticidas potentes contra ser ms rpido (24 horas), barato y sencillo (no se
Nilaparvata lugens (Stal), aunque son inactivos con- requieren tcnicas aspticas). Se pueden utilizar f-
tra S. litura (3). cilmente un gran nmero de organismos para la vali-
dacin estadstica, no necesita equipamiento espe-
Desventajas comunes a estos ensayos in vivo, in-
cial y se emplean pequeas cantidades de muestras
dependientemente de la diana, son la necesidad de
(2-20mg o menos). Adems, no se requiere suero
mantener una colonia del organismo, se pueden pro-
animal que si es necesario para las citotoxicidades.
bar cantidades limitadas de muestras al mismo tiem-
Este sistema de bioensayo puede ser utilizado fcil-
po, la obtencin de los resultados toma varios das, y
mente por farmaclogos y qumicos de productos
en ocasiones no es posible discriminar si la inhibicin
naturales; cada tcnico de laboratorio conduce sus
del crecimiento se presenta por alteracin del com-
propias pruebas biolgicas, y obtiene de una manera
portamiento (efecto antialimentario) o por efecto fisio-
rpida y reproducible los resultados estadsticos
lgico post-ingestin.
confiables del bioensayo. De esta manera, los com-
Los sistemas de ensayos biolgicos simples, son puestos bioactivos novedosos se pueden detectar y
de gran importancia para identificar los principios ac- aislar rpidamente mediante un fraccionamiento
tivos; la prueba de Artemia spp. es una prueba biol- biodirigido de los extractos de las plantas. Por ltimo,
gica general, particularmente til con este propsito. los defensores de los derechos de los animales no
Un bioensayo general debe ser sensible a un amplio han objetado el uso de estos invertebrados para el
rango de actividades ms que estar dirigido a un sis- trabajo experimental (3).
Variantes experimentales del ensayo de Artemia que son incubadas en la oscuridad a una tempera-
spp. tura de 251C.
Segn Vanhaecke y Persoone (12) los aspectos Se desarrolla una prueba preliminar para determi-
que deben ser considerados para desarrollar una prue- nar el rango crtico (una placa Petri por concentracin
ba de Artemia spp. estndar son los siguientes: y una como control). Para ello se prepara una serie
de diluciones del txico con agua de mar artificial. Para
- utilizar los estadios larvales tempranos para prue-
sustancias qumicas: 10 000; 1 000; 100; 10; 0,1; 0,01
bas de toxicidad aguda,
mg.L-1 y para afluentes: 1 000 000; 100 000; 10 000;
- los huevos tienen que eclosionar bajo condiciones 1 000; 10 mg.L-1.
estrictamente controladas de temperatura, salinidad,
Despus de 24 horas, se determina el nmero de
aireacin, luz y pH,
larvas muertas en cada placa Petri. La larva es consi-
- las larvas tienen que ser exactamente de la misma derada muerta si no se observa movimiento de los
edad al inicio de cada prueba, apndices durante 10 segundos. Inmediatamente
- durante la prueba, la larva no debe transformarse despus del conteo, se mide la concentracin de ox-
en otro estadio con una sensibilidad diferente, geno en la placa Petri con la menor concentracin de
compuesto txico que induce un 100% de mortalidad.
- las pruebas deben realizarse con quistes del mismo
Bioensayo general para productos naturales con acti-
origen geogrfico,
vidad biolgica
- las condiciones experimentales de la prueba tienen
que ser definidas con gran exactitud, Alcance y campo de aplicacin
Esta variante la desarrollaron en 1982, Meyer et
- realizar una prueba control en paralelo con un qu-
al. (13) y ha sido mejorada desde entonces por dife-
mico de referencia.
rentes investigadores. Aqu se presenta la versin pu-
Existen diferentes variantes experimentales del blicada en 1998 por McLaughlin et al. (3). El ensayo
procedimiento cuyas principales caractersticas se permite la evaluacin rpida y conveniente de extrac-
presentan a continuacin. tos crudos, fracciones y compuestos puros; y ade-
Ensayo del Centro de Referencia de Artemia ms comparar varias partes de la planta y establecer
variaciones estacionales en plantas individuales. Tam-
Alcance y campo de aplicacin bin puede ser utilizado para establecer la actividad
Este mtodo estndar se desarroll en el Labora- biolgica de compuestos sintticos.
torio de Maricultura del Centro de Referencia de Principio
Artemia, Universidad Estatal de Ghent, Blgica; con
el objetivo de determinar la toxicidad aguda en larvas Se basa en la determinacin de la mortalidad in
de Artemia spp. de: sustancias qumicas y afluentes vivo de un organismo zoolgico simple, las larvas de
industriales y domsticos considerados por su verti- Artemia spp. en 24 horas a dosis iguales o menores
miento en el ambiente marino (12). de 1000 g.mL-1 (3, 13).
Ensayo de la movilidad ptica de las larvas de nmero de muestras y diluciones (8, 10, 21, 42). Otros
Artemia spp. autores han utilizado discos de papel de filtro sobre el
cual se absorbe la muestra y esto contribuye a que la
Usualmente, un parmetro conveniente para ex-
solucin de las larvas de artemia se encuentre ms
presar la toxicidad es la LC50, pero sus valores no
limpia de contaminantes y los compuestos a evaluar
consideran los efectos que son menos severos que
entren en contacto ms eficientemente con los orga-
aquellos que resultan en la muerte y que sin embar-
nismos (43).
go, constituyen un signo de toxicidad (4). Un nuevo
mtodo ptico que mide la movilidad de las larvas de Potencialidades de uso del ensayo de artemia en
artemia se desarroll con el objetivo de obtener re- la bioprospeccin de la flora cubana como fuente
sultados ms exactos y definidos biolgicamente. En de plaguicidas
1985, Schmidt (9) determin la inhibicin de la
Para desarrollar plaguicidas fitoqumicos
motilidad de las larvas en lugar de su letalidad. La
ambientalmente benignos, se deber dar un nfasis
actividad de los animales se mide utilizando un con-
apropiado a la conservacin y estudio de la
tador ptico de motilidad. Esta se calcul consideran-
biodiversidad, an inexplorada en relacin con sus
do el nmero de interrupciones del haz de luz en
propiedades plaguicidas. Al afrontar estos estudios la
10seg. El procedimiento es ms fcil y menos tedio-
qumica de productos naturales deber, para lograr
so que contar con un estreo microscopio. Pueden
aplicacin prctica, combinar el uso de tcnicas de
ser detectados an pequeos daos en las larvas y
separacin, mtodos de elucidacin estructural y prue-
esto es una mejora significativa en comparacin con
bas biolgicas simples, enfoque investigativo que fa-
otras variantes del mtodo y permite la deteccin de
cilita el descubrimiento y desarrollo de nuevos pro-
pequeas cantidades de toxinas. La desventaja prin-
ductos bioactivos de origen natural.
cipal relacionada con esta variante experimental, es
que exige la disponibilidad de un contador y por esa Debido a la diversidad de la flora tropical, existe la
razn su uso es menos frecuente. necesidad de realizar evaluaciones masivas de ex-
tractos vegetales para determinar la presencia de com-
Las dos primeras variantes experimentales des-
puestos bioactivos pues productos naturales poten-
critas se diferencian fundamentalmente en las con-
cialmente activos permanecen sin descubrir, sin in-
centraciones de las muestras que se sugieren para el
vestigar, sin desarrollar y/o sin utilizar en este gran
trabajo, lo que se encuentra condicionado a la inter-
depsito de material vegetal. La flora cubana posee
pretacin final de los resultados. Como ensayo para
enormes potencialidades como fuente de productos
establecer las propiedades txicas de algunas sus-
activos de origen natural; sin embargo, estas solo han
tancias es conveniente determinar la cantidad mni-
sido explotadas muy someramente. Nuestro pas es
ma de cada sustancia que representar un peligro para
considerado como uno de los de mayor biodiversidad
el medio ambiente y el hombre y por tanto, se ajusta
botnica en el mundo, en lo que se refiere al nmero
el rango de concentraciones en cada caso hacindo-
total de especies, y tiene la biodiversidad florstica ms
se lo ms estrecho posible. Para productos natura-
rica de todas las islas en el continente americano y el
les, sin embargo, es ms eficaz evaluar las muestras
Caribe insular. Se informan alrededor de 6 700 espe-
en un rango que garantice que los compuestos selec-
cies de plantas superiores (agrupadas en 1300 gne-
cionados posean el potencial para el desarrollo futuro
ros y 101 familias), aproximadamente el 50% de la
de un medicamento o un plaguicida y no se inviertan
flora terrestre conocida es endmica y la mayor parte
recursos y tiempo en la investigacin de compuestos
de nuestras especies no han sido investigadas a pro-
no promisorios.
fundidad (44).
A partir de estos protocolos de referencia han tra-
Existe informacin relacionada con la actividad bio-
bajado numerosos investigadores introduciendo pe-
lgica de muchas de estas plantas y su uso popular
queas variaciones encaminadas fundamentalmente
como medicamentos y plaguicidas naturales, pero los
a reducir el volumen de muestra necesario, aspecto
compuestos activos no se han estudiado en la mayo-
este de vital importancia, sobretodo en las ltimas eta-
ra de los casos (8). El trabajo realizado en el rea del
pas de purificacin y aislamiento de los compuestos.
descubrimiento y desarrollo de sustancias con activi-
Por ejemplo, en lugar de viales o placas Petri han sido
dad plaguicida es an ms reducido (45). Si bien es
utilizadas placas de 24 96 pocillos, que requieren
cierto, que el campesinado cubano ha hecho uso
menor cantidad de muestra para realizar los estudios
emprico de las propiedades de las plantas para pro-
biolgicos. Estas placas, adems, proporcionan la
teger sus cultivos de las plagas, no existe un estudio
posibilidad de evaluar simultneamente un mayor
cientfico sistemtico y riguroso que sustente o res-
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