Evaluacin de la actividad insecticida sobre larvas de Aedes aegypti del

extracto etanlico de hojas de la especie Higuereta (Ricinus Communis L.)

Investigadores:

Lilibeth Echvez Molina.

Daniela Nio Gmez.

Colaborador:
Alfredo Lagares Guzmn, QF, MSc.

Universidad Del Atlntico.

Facultad De Qumica Y Farmacia.
VI Semestre.
Diseo de proyecto de investigacin.
Grupo 2.
Barranquilla- Atlntico.
Diciembre/2014.

Evaluacin de la actividad insecticida sobre larvas de Aedes aegypti del

extracto etanlico de hojas de la especie Higuereta (Ricinus Communis L.)

Planteamiento del Problema.

Las enfermedades transmitidas por vectores ocurren cuando un agente biolgico
especfico que produce una patologa, es transferido al husped por un portador
no humano denominado vector (1). En la naturaleza se encuentran mltiples
vectores responsables de causar patologas como dengue, malaria, mal de
Chagas, fiebre amarilla, chinkungua y dems (2). Uno de los vectores ms
comunes es el mosquito, el cual es uno de los insectos que ms transmite
enfermedades por este mecanismo. De todas las especies de mosquitos
conocidos con importancia en salud pblica, la Aedes aegypti. es considerada la
ms peligrosa por tener la capacidad de transmitir el mayor nmero de
enfermedades al hombre (3). Se cree que sta especie se introdujo al continente
americano desde que se dieron las primeras incursiones colonizadoras, llegando a
establecerse principalmente en los trpicos y subtrpicos (1, 2)
Segn estadsticas presentadas por la Organizacin Mundial de la Salud (OMS)
en marzo de 2014, las enfermedades transmisibles por vectores representan ms
del 17% de todas las enfermedades infecciosas, adems, las cifras revelan que
ms de 2500 millones de personas, en ms de 100 pases, corren el riesgo de
contraer dengue, paludismo, mal de Chagas, Malaria, entre otras. Siendo
Colombia uno de los pases ms afectados por este tipo de patologas dado a los
problemas de acceso de agua potable en algunas zonas del pas, a servicios de
saneamiento inadecuados y a carecer de un sistema de salud que brinde servicios
de calidad; Sumado a esto, su ubicacin geogrfica hace que se presente un clima
hmedo tropical favorable para la proliferacin de vectores como el Aedes Aegypti.
Un claro ejemplo de ello son los casos presentados en el primer trimestre de 2011,
los cuales superan ms de 14 mil casos de dengue en todo el territorio nacional de
acuerdo a un informe dado por el Ministerio de Salud de Colombia (4).
Es importante resaltar que el mosquito Aedes aegypti es un vector que crece en
aguas contenidas en recipientes artificiales como cacerolas, latas, botellas,
neumticos que se encuentran en exteriores y dentro de las viviendas, es muy
comn encontrar larvas en floreros y plantas acuticas, as como en lugares
donde almacenan agua (bebederos de animales, piletas, cisternas, tanques y
rejillas) (1, 5). Este mosquito es el vector del dengue, fiebre hemorrgica del
dengue y de la fiebre amarilla. Entre el cuadro clnico presentado en personas con
este tipo de enfermedades se encuentran cefaleas, nauseas, vmitos, cuadro
febril agudo, dolor muscular, ictericia como la sintomatologa ms caracterstica,

que al no ser tratadas pueden desencadenar complicaciones que pueden llevar a

la muerte, lo que constituye un problema de salud pblica (6).
A la fecha no se conoce una vacuna disponible para evitar dichas enfermedades y
la nica forma de controlarlas es mediante la erradicacin o reduccin a niveles
extremadamente bajos del vector, utilizando insecticidas qumicos. Las sustancias
qumicas utilizadas para la elaboracin de estos productos insecticidas producen
efectos perjudiciales en la salud del hombre al ser estos bioacumulables en los
compartimientos adiposos del cuerpo, producen afecciones en el sistema nervioso
central, falla renal, pulmonar y heptica principalmente, adems por su gran
persistencia y residualidad en el medio ambiente pueden degradarse en periodos
de hasta 50 aos (7); el uso de insecticidas botnicos es una alternativa de control
accesible y de bajo costo para los campesinos y comunidades debido a que varias
especies vegetales que poseen actividad insecticida reconocida, como la que
presentan algunas especies de las familias Anacardiaceae, Euphorbiaceae y
Meliaceae crecen con facilidad o son endmicas en estas reas geogrficas (8).
Un ejemplo de especies vegetales con posibles metabolitos activos que puedan
ser utilizados como insecticida es el Ricinus conmunis L, conocido comnmente
como Higuereta ya que estudios anteriores han demostrado que el uso de la
misma es eficaz en el combate de vectores como el Nematodo Barrenador, Musca
Domstica, entre otros (9, 10), y un muestra de ello es su amplia utilidad por parte
de comunidades indgenas como la Mokan, presentes en el corregimiento de
Paluato, Galapa (Departamento del Atlntico), como una especie de insecticida.
Este hecho sirve de precedente en la solucin de la problemtica utilizando
recursos de la naturaleza, teniendo en cuenta sustancias precursoras como la
Ricina, a la cual se le atribuye esta propiedad y la cual est presente en la
Higuereta (9, 10). Adems los insecticidas de origen vegetal tienen la ventaja de
ser ms biodegradables que sus contrapartes sintticas; son de disponibilidad
inmediata y bajo costo, ya que los extractos se pueden preparar mediante
tratamientos caseros y ser aplicados de forma inmediata sin requerir de la
utilizacin de aspersores o implementos costosos (11)

OBJETIVOS.
Objetivo General.

Evaluar la actividad insecticida del extracto etanlico de hojas de la

especie vegetal Ricinus Communis L. (Higuereta) sobre larvas de cuarto
estadio de mosquito Aedes aegypti.

Objetivos Especficos.
Comparar la actividad insecticida de las distintas concentraciones del
extracto etanlico de hojas de Ricinus Communis L. sobre larvas de cuarto
estadio de mosquito Aedes aegypti.

Establecer la concentracin letal media (CL50) del extracto etanlico de

hojas de la especie vegetal Ricinus Communis L. sobre larvas de cuarto
estadio de mosquito Aedes aegypti.
Identificar a partir de pruebas colorimtricas la presencia de metabolitos
secundarios en el extracto etanlico de hojas de Ricinus Communis L. con
actividad insecticida remarcable.

JUSTIFICACIN.

Con la realizacin de este proyecto se busca una posible alternativa para la

erradicacin de vectores como el Aedes Aegypti en zonas tanto urbanas como
rurales, con la cual se minimice los efectos negativos sobre la salud de la
poblacin y la conservacin del medio ambiente que tienen en s los insecticidas
de composicin qumica. A travs de la evaluacin de la actividad insecticida de la
especie Vegetal Ricinus Communis L. se espera confirmar que posee dicha
actividad insecticida sobre el Aedes aegypti y dar as un paso adelante hacia la
elaboracin de insecticidas de origen vegetal que no produzcan daos sobre la
biomasa y la salud de las personas que trabajan con este tipo de qumicos.
Adems los resultados obtenidos de dicha investigacin servirn de apoyo a
nuevas investigaciones sobre esta iniciativa, dado que no se encuentra
evidenciada gran informacin de la actividad de esta planta sobre larvas de Aedes
aegypti, el cual posee gran resistencia a insecticidas a base de qumicos utilizados
actualmente.
En este trabajo se plantea la posibilidad de implementar el uso de extractos
etanlico vegetales , con el objetivo de tratar la proliferacin Aedes aegypti, vector
principal causante de enfermedades como el dengue y la Malaria, para ello se
propone trabajar con la especie Ricinus Communis L, de la cual ya existen
algunos antecedentes efectivos en el control de insectos como la Melia Azedarach
(Paraso), Trichillia Glauca (Trichillia), sobre la hormiga comn (Acromyrmex
Lundi) (8), Musca Domestica (9), y Nematodo Barrenador (10).

ESTADO DEL ARTE.

Principalmente los insectos tienen el potencial de transmitir enfermedades a los
humanos; a estos se les denominan vectores. El vector recibe el organismo
patgeno de un portador infectado, animal o humano, y lo transmite o bien a un
portador intermediario o directamente a un portador humano, la transferencia
ocurre directamente por picadura de los mosquitos y/o las garrapatas, que son los
vectores de enfermedades ms notables ya que el modo de transmisin ms
importante es a travs de alimentacin sangunea (13).
Segn la Organizacin Mundial de la Salud, las enfermedades de transmisin
vectorial afectan sobre todo a los pases en va de desarrollo y con mayores
ndices de
pobreza, generando un impacto negativo en la productividad
econmica y en la calidad de vida de sus habitantes as como un incremento del
gasto en salud (7).
Debido a la ausencia de un medicamento especfico y de vacunas para su
aplicacin a gran escala, se ha considerado como una alternativa viable la
interrupcin de la transmisin de la enfermedad, controlando los vectores adultos
mediante la aplicacin de insecticidas piretroides de accin residual en paredes y
sitios de reposo de los mosquitos adultos y de organofosforados, principalmente el
Abate, aplicado mediante tratamiento focal y perifocal en los sitios de cra de las
larvas (7).
La creciente preocupacin acerca de los riesgos para la salud y el ambiente
asociados con el uso actual de insecticidas sintticos ha promovido el esfuerzo por
encontrar alternativas viables, efectivas y ms seguras. En este sentido, desde
hace varios aos se realizan investigaciones sobre la actividad insecticida de
semioqumicos vegetales sobre diversas plagas, constituyendo una alternativa
menos txica y contaminante, biodegradable y disponible para su uso (12, 14).
La mayora de plantas producen metabolitos como fenoles, terpenoides,
alcaloides, acetilenos, cidos carboxlicos, cidos grasos, entre otros, con
propiedades insecticidas, acaricidas y nematicidas, convirtindolas en
herramientas tiles para el manejo de plagas agrcolas. Una de las formas de
aprovechar estos metabolitos es mediante la preparacin de sus tejidos en
extractos vegetales o infusiones utilizando diferentes solventes como agua,
alcohol, ter etlico, aceites, cetonas y benceno. Un ejemplo de una planta con
sustancias qumicas con efectos nematicidas e insecticidas es la higuerilla o castor
(Ricinus communis L). Esta especie contiene terpenoides con una capacidad
insecticida ya probada en hormigas podadoras y plodia interpunctella HBN. (9,14).

La higuerilla (Ricinus communis L.) pertenece a la familia Euphorbiaceae y es

conocida como ricino, trtago, mamoneira, mamona, palma christi, higuereta,
castor, castor bean y castor oil plant. El gnero Ricinus es considerado
monotpico, y la especie R. communis es la nica que incluye diversos tipos
polimrficos (12). La planta vara en el color del follaje y del tallo, tamao de la
semilla, color y contenido de aceite y en sus hbitos de crecimiento, siendo
algunas veces desde perenne, que a menudo se desarrollan como arboles (>7 m),
hasta plantas enanas, anuales y de ciclo corto; an como cultivo de ciclo anual,
se caracteriza por presentar una maduracin no uniforme y una tendencia hacia el
crecimiento indeterminado, lo que conlleva, a encontrar distintas fases del
desarrollo, alternas, de ciclos vegetativos y reproductivos durante su cultivo (15).
En investigaciones realizadas en el ao 2010 y 2012 se afirma que esta especie
vegetal produce metabolitos secundarios como albminas (ricina) y alcaloides
(ricinina). Los tejidos de higuerilla liberan compuestos txicos y dos lectinas, la
ricina y la ricinus-aglutinina. .) Se encuentra la ricina en la testa de la semilla, la
ricinina en las hojas y una fraccin proteica alergnica en el polen (10, 12).
En Colombia son pocas las investigaciones orientadas a la evaluacin del
potencial insecticida de las especies vegetales, lo cual es un factor negativo
debido a que los productos de origen natural pueden ser considerados en el
control de insectos y adems no se puede olvidar que el pas posee una extensa
biodiversidad, con especies vegetales aun no estudias.
Con el objetivo de hacer una aproximacin bioracional, con la investigacin de
especies vegetales en la produccin de insecticidas naturales y de acuerdo a la
informacin etnobotnica, se evaluar el potencial insecticida de los extractos
etanlico de Ricinus Cummunis mediante la realizacin de bioensayos para
determinar su toxicidad. En esta investigacin se presentaran y analizaran los
resultados de las evaluaciones que sern realizadas bajo condiciones de
laboratorio con los extractos etanlicos obtenidos de las hojas de Ricinus
communis (Euphorbiacea) mediante evaluaciones de toxicidad sobre larvas de
Aedes Aegypti de cuarto estadio.

Metodologa.
Se realizar un estudio descriptivo, exploratorio y expermiental de la actividad
insecticida del extracto etanlico de la especie Riccinus Communis L. sobre larvas
(estadio IV) de mosquito Aedes Aegypti, el cual ser desarrollado en el laboratorio
de Fitoqumica de la Universidad del Atlntico.
Para el cumplimiento de los objetivos propuestos se llevarn a cabo una serie de
actividades con el fin de obtener los resultados esperados. En el desarrollo del
objetivo general se realizarn las siguientes actividades:
1. Obtencin de A. aegypti.
Las larvas de A. aegypti se colectarn a partir de una poblacin natural de aguas
estancadas en lugares determinados en la ciudad de Barranquilla. Para la
obtencin de las larvas se har uso de redes de malla fina de 0.03 mm y 30 cm
de dimetro, las larvas obtenidas se depositaran en tubos de muestras de vidrio
esterilizados para luego ser llevadas al laboratorio. Las muestras sern pasadas
a recipientes ms amplios con agua limpia y libre de cloro, para evitar la muerte de
las mismas (16).

Eleccin de larvas (estadio I y II)

Posterior a su recoleccin, las muestras sern identificadas taxonmicamente para

la confirmacin de la especie A. aegypti; luego se seleccionaran aquellas larvas de
estadio I y II de su ciclo vital, ya que el este ciclo larval dura de 5-7 das para esta
especie.

Mantenimiento de las muestras

Es importante mantener el espacio de las larvas ya que influye en el ciclo vital de

las mismas, as como la temperatura y el alimento suministrado. Por lo anterior
se mantendr una temperatura entre 28 y 29 C, y sern alimentadas con
alimentos de peces hasta pasar al estadio IV (16).

2. Obtencin del material vegetal

Todo el material vegetal de Ricinus Communis L. se adquirir de Paluato
corregimiento de Galapa, Atlntico. Solo sern recolectadas las hojas de la
especie vegetal madura y posteriormente sern seleccionadas segn su tamao.
Para el cumplimiento de esta actividad se deben cumplir unas precauciones de
seguridad, tales como el uso de implementos que protejan las manos de las

personas encargadas de la recoleccin. Tambin se debe preservar el habita del

lugar, por ende se evitar el despojamiento total de la planta.
3. Preparacin del Extracto total etanlico de la Higuereta.
La elaboracin del extracto etanlico de Ricinus Communis L. est dado por las
siguientes etapas:

Secado

Las hojas recolectadas sern sometidas a secado, con este proceso se eliminar
todo el contenido de agua presente en las misma. Las hojas sern secadas en
papel absorbente durante siete das bajo sombra evitando cualquier tipo de
contaminacin y degradacin del material por efecto de los rayos solares (6)

Molienda

Las hojas una vez secas, sern llevadas a un molino con el objetivo de reducir el
tamao del material vegetal. El polvo resultante ser tamizado para poseer un
polvo fino de partculas homogneas. Se necesitaran 300 gramos
aproximadamente (6).

Extraccin en frio

Para la preparacin del extracto se adicionara al material vegetal pulverizado 3

litros de etanol al 95%, se mezclar y se mantendr en extraccin durante 7 das.
Este procedimiento debe ser realizado en un frasco estril preferiblemente de
color mbar para evitar la degradacin del material vegetal y en su defecto de los
metabolitos a obtener (6).

Filtracin

Con papel filtro Whatman No. 01 se filtrar el extracto, el filtrado que ser obtenido
se depositar en contenedores de vidrio en fracciones de 25 mL para favorecer de
esta manera la evaporacin del solvente. La evaporacin se realizar a bao de
mara a 50 C (6).

En el cumplimiento del primer objetivo especfico, se llevar a cabo bioensayos de

la accin de insecticida del extracto etanlico. Este consiste en:
Bioensayos.

Realizar diluciones del extracto etanlico en diferentes concentraciones (0.5, 1, 5,

10 ,50 y 100 mg/mL) para su posterior aplicacin y determinacin de su accin
insecticida sobre Aedes Aegypti. El tiempo de exposicin y control estipulado ser
de 48 horas con intervalos de 12 horas, por ende las lecturas de mortalidad se
realizaran a las 12, 24, 36 y 48 horas. Los bioensayos se llevarn a cabo a una
temperatura de 24 C para determinar as los estados de los ensayos de
mortalidad y repelencia. Cada recipiente con las diferentes concentraciones
contarn con 25 larvas, y dicho ensayo ser realizado por triplicado. Para el
control del bioensayo se utilizar vaselina neutra. Las larvas se consideraran
muertas cuando no reaccionen al momento de ser tocadas con un puntero punta
roma en la regin cervical (16, 17).

Para el desarrollo del segundo objetivo especfico se realizarn ensayos de

concentracin letal media del extracto etanlico de Ricinus communis L y anlisis
estadsticos. Para el anlisis estadstico se utilizar el paquete estadstico SAS
System v 8.2. Los bioensayos de toxicidad se analizaran mediante el
procedimiento PROBIT para la determinacin de la concentracin letal media
(LC50) del extracto etanlico de Higuereta (16).

Por ltimo se realizarn pruebas qumicas colorimtricas preliminares con el fin de

determinar la propiedad insecticida remarcable en los metabolitos secundarios
presentes en la especie Ricinus Communis L. (Higuereta) con el fin de obtener los
resultados que permitan el desarrollo del tercer objetivo especfico:

Deteccin de Alcaloides

Para la determinacin de alcaloides en la especie se maceraran dos hojas frescas

de Higuereta con tres (3) mL de etanol, el macerado obtenido se mezclar con 40
mL de solucin de cido clorhdrico al 5% y se pasara a bao de mara por seis
minutos, por ltimo se filtrar.
Se tomaran 5 mL
siguientes reactivos:

de filtrado y se agregarn 5 gotas de cada uno de los

Prueba de Mayer: Los alcaloides se detectan como un precipitado blanco o de

color crema soluble en cido actico y etanol.
Prueba de Dragendorff: La presencia de alcaloides se detecta por la formacin de
un precipitado naranja rojizo cuando se le adiciona esta reactivo a una solucin
cida de alcaloides (18, 19)

Prueba de Wagner: La presencia de alcaloides se detecta por la formacin de un

precipitado marrn.

Deteccin de Flavonoides

Usualmente se usa la reaccin de Shinoda, donde el magnesio metlico es

oxidado por el HCl concentrado, dando como productos al H2, que es eliminado
en forma de gas y el MgCl2, que es el que forma complejos con los flavonoides
dando coloraciones caractersticas. A una alcuota del extracto etanlico o acuoso
se le aade 1 ml de cido clorhdrico concentrado y un pedacito de cinta de
magnesio metlico. Despus de la reaccin se espera 5 minutos. El ensayo se
considera positivo cuando aparecen coloraciones en amarillo, rojo o carmes
intenso (18).
Deteccin de Esteroles y Terpenoides
La reaccin de Liebermann-Burchard es tpica de los esteroides que contienen dos
dobles enlaces conjugados en un mismo anillo, en dos anillos adyacentes o un
doble enlace de un anillo adyacente con un grupo hidroxilo. La reaccin debe
realizarse en un medio absolutamente anhidro ya que al existir molculas de agua
estas reaccionan con el anhdrido actico, anulando de esta manera la reaccin
con el ncleo esteroidal o triterpenoide.
Se toma un mililitro del extracto y se le adiciona 1mL de anhdrido actico y se
mezcla bien. Por la pared del tubo de ensayo se dejan resbalar 2-3 gotas de cido
sulfrico concentrado sin agitar. Se considera positivo un cambio rpido de
coloracin. Del rosa-azul a verde oscuro-negro al final de la reaccin (18).
Deteccin de Saponinas
En el extracto alcohlico se pueden detectar saponinas, del tipo esteroidal como
triterpnica. Se diluye un volumen del extracto en cinco volmenes de agua y se
agita fuertemente por 5-10 minutos. El ensayo se considera positivo si aparece
espuma en la superficie del lquido de ms de 2 mm de altura y persistente por
ms de dos minutos (18).
Deteccin de Cumarinas
La prueba de Baljet es til para reconocer la presencia de compuestos con
agrupamiento lactnico, en particular Cumarinas, aunque otros compuestos
lactnicos pueden dar positivo.

Se basa en la formacin de un complejo entre el cido Pcrico y la lactona , , y

insaturada, dicho complejo presenta coloracin rojo claro a oscuro. Si la muestra a
probar no est en alcohol, debe evaporarse el disolvente y redisolverse en 1 ml de
alcohol. Se aade 1 mL del reactivo. La prueba es positiva cuando aparece una
coloracin o precipitado color rojo (18, 19).
Deteccin de compuestos fenlicos/taninos
El ensayo con cloruro frrico determina en un extracto alcohlico tanto fenoles
como taninos. A una alcuota del extracto alcohlico se le adicionan 3 gotas de una
solucin de tricloruro frrico al 5% en una solucin salina (cloruro de sodio al 1%
en agua). Si el extracto es acuoso, el ensayo fundamentalmente determina
taninos. A una alcuota del extracto se aade acetato de sodio para neutralizar y
tres gotas de una solucin de tricloruro frrico al 5% en solucin salina, un ensayo
positivo puede dar la siguiente informacin general:
Desarrollo de una coloracin rojo-vino, compuestos fenlicos en general.
Desarrollo de una coloracin verde intensa, taninos del tipo pirocateclicos.
Desarrollo de una coloracin azul, taninos del tipo pirogalotnicos (18, 19).

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