D E PA RTA M E N T O L A B O R AT O R I O B I O M D I C O N A C I O N A L Y D E R E F E R E N C I A

Instituto de
Salud Pblica
Ministerio de Salud

DOCUMENTOS TCNICOS PARA EL LABORATORIO CLNICO

RECOMENDACIONES PARA LA DETECCIN

E IDENTIFICACIN DE ANTICUERPOS
IRREGULARES ERITROCITARIOS
DICIEMBRE, 2014
RECOMENDACIONES PARA LA DETECCIN E IDENTIFICACIN
DE ANTICUERPOS IRREGULARES ERITROCITARIOS

AUTOR:
TM. Mg. Cs. Andrs Aburto Almonacid.
Encargado rea de Inmunohematologa. Seccin de Hematologa e
Inmunohematologa. Departamento Laboratorio Biomdico Nacional y
de Referencia. Instituto de Salud Pblica de Chile.

REVISORES INSTITUTO DE SALUD PBLICA DE

CHILE:
TM. Mg. Mitzy Celis Morales.
Jefe Seccin Coordinacin de Redes de Laboratorios. Subdepartamento
Coordinacin Externa. Departamento Laboratorio Biomdico Nacional y
de Referencia. Instituto de Salud Pblica de Chile.
Dra. Vernica Ramrez Muoz.
Jefe Subdepartamento Coordinacin Externa. Departamento Laboratorio
Biomdico Nacional y de Referencia. Instituto de Salud Pblica de
Chile.

REVISORES EXTERNOS:
TM. Mg. Cs. Leonor Armanet Bernales.
Directora Escuela de Tecnologa Mdica. Universidad de Chile.
TM. Mg. Ped. Univ. Hugo Henrquez Bello.
Director Docente Escuela de Tecnologa Mdica. Universidad Mayor.
TM. Guillermo Herrera Calderon.
TM. Banco de Sangre Hospital Clnico de la Universidad Catlica de
Chile.
Dr. Federico Liendo Palma.
Jefe UMT/Banco de Sangre. Complejo Asistencial Barros Luco Trudeau.
Dra. Mara Cristina Martnez Valenzuela.
Directora Centro de Sangre Concepcin.
TM. Ramn Schifferli Salazar.
TM. Encargado de Calificacin Microbiolgica e Inmunohematolgica.
Centro de Sangre y Tejidos de Valparaso.
TM. Carolina Villalobos Urbina.
Jefe de Centro y Encargada de Calidad UMT/Banco de Sangre.
Complejo Asistencial Barros Luco Trudeau.
RECOMENDACIONES PARA LA DETECCIN E
IDENTIFICACIN DE ANTICUERPOS IRREGULARES
ERITROCITARIOS
RESUMEN
Este documento presenta recomendaciones
para el procedimiento de deteccin e identifica-
cin de anticuerpos irregulares, y est dirigido
a los Centros de Sangre, Unidades de Medicina
Transfusional, Bancos de Sangre y Laboratorios
Clnicos. Para su elaboracin se recogieron las
opiniones y sugerencias de los participantes del X
Taller Nacional para Centros de Sangre y Unidades
de Medicina Transfusional, realizado en mayo de
2013 en el Instituto de Salud Pblica de Chile, y
ha sido consensuado con el Comit de Expertos
PEEC del rea de Inmunohematologa.
Este documento entrega las directrices para la
realizacin de una correcta deteccin e identifica-
cin de anticuerpos irregulares, a fin de contribuir
en asegurar la calidad de estos estudios inmuno-
hematolgicos en cada institucin.
OBJETIVO
El objetivo de estas recomendaciones es dispo-
ner de una metodologa para la deteccin e iden-
tificacin de anticuerpos irregulares contra antge-
nos eritrocitarios que contribuya a la obtencin de
resultados confiables y reproducibles.
ALCANCE
Estas recomendaciones aplican a los Centros
de Sangre, Unidades de Medicina Transfusional,
Bancos de Sangre y Laboratorios Clnicos que
realizan deteccin con o sin identificacin de an-
ticuerpos irregulares eritrocitarios en la sangre de
donantes, pacientes y embarazadas.
INTRODUCCIN
Los anticuerpos irregulares corresponden a
aquellos anticuerpos distintos a los anticuerpos na-
turales del sistema ABO, que pueden aparecer en
respuesta a la exposicin a un antgeno eritrocitario
extrao (transfusin o trasplante), por incompati-
bilidad materno-fetal o sin un estmulo identifica-
ble. En algunos casos, su presencia se asocia a la
exposicin a antgenos ambientales, bacterianos
o virales de caractersticas bioqumicas similares
a los antgenos eritrocitarios. En nuestro pas, los
anticuerpos irregulares ms frecuentemente encon-
trados en donantes de sangre son: anti-Lea, anti-K y
anti-E, mientras que en pacientes son: anti-D, anti-E
y anti-K. Todos estos anticuerpos son capaces de
provocar hemlisis in vivo y acortamiento en la so-
brevida normal de los glbulos rojos (Anexo 1).
La heterogeneidad de los anticuerpos, en cuanto
a su tipo, clase de inmunoglobulina, temperatura de
reaccin, tipo de hemlisis asociada, su capacidad
de activar complemento, entre otras caractersticas,
hacen que la pesquisa e identificacin de ellos, deba
hacerse de una manera estandarizada y controlada.
La deteccin e identificacin de anticuerpos irre-
gulares habitualmente se realiza mediante tcnicas
de aglutinacin en tubo, en columna o en micro-
placa, con etapas a temperatura ambiente, 37C y
antiglobulina humana. En algunas ocasiones y de
acuerdo a condiciones observadas en cada labo-
ratorio, se puede realizar anlisis a 4C frente a la
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 RECOMENDACIONES PARA LA DETECCIN E IDENTIFICACIN
DE ANTICUERPOS IRREGULARES ERITROCITARIOS
sospecha de crioaglutininas.
Cuando se detecta la presencia de un aloanti-
cuerpo, se debe determinar su especificidad me-
diante la identificacin y la consiguiente deduccin
de su significado clnico, empleando un enfoque
sistemtico descrito en el algoritmo (Anexo 2).
DEFINICIONES Y ABREVIACIONES
a) Abreviaciones:
ACD: cido ctrico, citrato, dextrosa.
CE: Comunidad Europea
CI: Centrifugacin Inmediata
EDTA: cido Etilendiaminotetraactico.
FDA: Food and Drug Administration
GR: Glbulos Rojos
LISS: Solucin de Baja Fuerza Inica
NISS: Solucin Salina de fuerza inica normal
PA: Prueba Autloga
PBS: buffer fosfato salino pH 6.9 a 7.2
SAGH: Suero Antiglobulina Humana
TAD: Test Antiglobulina Humana Directa
TAI: Test Antiglobulina Humana Indirecta
b) Definicin de conceptos
- Aloanticuerpo: anticuerpo producido en un
individuo que est dirigido contra antgenos
eritrocitarios que l carece, presentes en otro
individuo de su misma especie.
- Autoanticuerpo: anticuerpo producido en un
individuo que est dirigido contra antgenos
que expresan sus propios eritrocitos.
- En los sets de dos clulas, uno de los frascos
- Identificacin bsica de anticuerpos irregula-
res: procedimiento del laboratorio de inmu-
nohematologa que permite identificar la es-
- Suero Antiglobulina Humana: tipo poliespecfi-
pecificidad de la mayora de los anticuerpos
eritrocitarios de importancia clnica, detectados
en el TAI. Involucra el uso de clulas panel de
identificacin bsico y tcnicas con potencia-
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dores de reaccin (suero antiglobulina humana
poliespecfico y solucin LISS), que permiten
determinar la especificidad de anticuerpos ni-
cos o algunas mezclas de anticuerpos.
DESARROLLO
I. DETECCIN DE ANTICUERPOS IRREGULARES
a) Muestras
Suero o plasma obtenido a partir de sangre total
sin o con anticoagulante (EDTA, ACD), respectiva-
mente, de acuerdo a las especificaciones del fabri-
cante del mtodo o reactivo que utiliza. El uso de
plasma podra impedir la deteccin de anticuerpos
irregulares que se revelan solamente por la presen-
cia de complemento adherido a los eritrocitos. Para
estudios automatizados se requiere plasma y en tests
manuales es deseable el uso de suero. Las muestras
para estudio deben ser almacenadas a 4C y las prue-
bas deben ser realizadas en el menor tiempo posible,
no excediendo las 72 horas desde su obtencin.
b) Reactivos
- Clulas Panel para deteccin de anticuerpos
irregulares: sets comerciales de 2 o 3 frascos
y en concentracin adecuada para cada tipo
de tcnica. Ej. Tubo: 2-4%, Columna: 0,8-
1%. Ests clulas deben tener certificacin de
fabricacin ISO 13485 o estar aprobadas por
organismos (FDA, CE), sobre su capacidad de
detectar anticuerpos clnicamente significati-
vos, debiendo expresar al menos los siguientes
antgenos: D, C, E, c, e, M, N, S, s, P1, Lea, Leb,
K, k, Fya, Fyb, Jka y Jkb. El laboratorio debiese
disponer de reactivos con expresiones homo-
cigotas para los antgenos D, C, E, S, s, Fya,
Fyb, Jka y Jkc .
debe ser R1/R1 y el otro R2/R2, en los sets de
tres clulas, el tercero debe ser r/r.
co, apropiado para cada tipo de tcnica (incor-
porado en los sistemas de aglutinacin en co-
lumna o en presentaciones para su utilizacin
en tubos).
 RECOMENDACIONES PARA LA DETECCIN E IDENTIFICACIN
DE ANTICUERPOS IRREGULARES ERITROCITARIOS

- LISS: de acuerdo a la estandarizacin del reac- d) Procedimiento

tivo o a las recomendaciones del fabricante 1.- Identificar las muestras a estudiar y centri-
(incorporado en los sistemas de aglutinacin fugarlas de acuerdo al tiempo estandariza-
en columna o en presentaciones para su utili- do en la centrfuga, para obtener suero o
zacin en tubos). plasma.
- Suero AB inerte: plasma convertido en suero y 2.- Verificar que los reactivos estn vigentes y
calentado a 56C por 1 hora. que tanto reactivos como equipos cumplan
- Suero fisiolgico tamponado, PBS o solucin con los parmetros definidos en el control
diluyente recomendada para la tcnica utilizada. de calidad del laboratorio de inmunohemato-
loga. Las clulas panel deben utilizarse a la
concentracin definida por el fabricante para
c) Tcnicas realizar la tcnica.
Los mtodos de deteccin disponible son: hema-
glutinacin en tubo, adhesin de eritrocitos en fase 3.- Para cada muestra a procesar se deben realizar
slida (microplaca) y hemaglutinacin en columnas. en forma independiente las siguientes reaccio-
En los dos ltimos mtodos se dispone de sistemas nes, utilizando volmenes de suero o plasma y
semiautomatizados y automatizados, a diferencia del suspensin de glbulos rojos de acuerdo a la
mtodo en tubo que corresponde a una tcnica manual. tcnica empleada: ver tabla 1.

Tabla 1

TUBO,
COLUMNA O SUERO O PLASMA GLBULOS ROJOS UTILIDAD
MICROPLACA

Deteccin de anticuerpos irregulares

Panel I (R1/R1), en concentracin
Reaccin I Muestra en estudio dirigidos hacia antgenos presentes en
adecuada a la tcnica usada
el Panel I

Deteccin de anticuerpos irregulares

Panel II (R2/R2) en concentracin
Reaccin II Muestra en estudio dirigidos hacia antgenos presentes en
adecuada a la tcnica usada
el Panel II

Deteccin de anticuerpos irregulares

Panel III (r/r) en concentracin
Reaccin III Muestra en estudio dirigidos hacia antgenos presentes en
adecuada a la tcnica usada
el Panel III (opcional)

Muestra en estudio en
Determinacin de presencia de alo y/o
PA Muestra en estudio concentracin adecuada a la
autoanticuerpo
tcnica usada

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DE ANTICUERPOS IRREGULARES ERITROCITARIOS

4.- Mezclar y centrifugar de acuerdo a la calibra- - Aglutinacin en columna: la lectura se

cin para lectura de aglutinacin de la centrfu-
ga, o a los tiempos y revoluciones establecidas
por el inserto de la tcnica utilizada.
5.- Observar en busca de aglutinacin y/o hemli-
sis, de acuerdo a la tcnica de lectura automa-
tizada que recomiende el fabricante o tecnica
estandarizada en el laboratorio.
realiza en una etapa, permitiendo detectar prin-
cipalmente los anticuerpos clnicamente sig-
nificativos, pero no estableciendo la clase de
inmunoglobulina y la temperatura ptima a la
cual son activas. Tambin es posible detectar
anticuerpos de clase IgM que presentan amplio
rango trmico.

6.- Registrar los resultados obtenidos en intensi- - Adhesin de eritrocitos en fase slida:
dad de cruces, de acuerdo a la tabla de reac-
cin del Anexo 3.
7.- Dependiendo de la tcnica utilizada, el procedi-
miento debe asegurar que se cumplan las dis-
tintas etapas de lectura propias de la tcnica:
- Tubo: Se recomienda realizar en medio de
LISS-Coombs por su mayor sensibilidad que
el medio NISS. La lectura se puede realizar en
tres etapas, permitiendo diferenciar anticuerpos
que actan en salino a temperatura ambiente,
en salino a 37C y con SAGH, permitiendo in-
ferir la clase de inmunoglobulina (IgM y/o IgG)
y la temperatura ptima a la cual son activas.
uno de los componentes de la reaccin antge-
no-anticuerpo es inmovilizado en pocillo (fase
slida) a la que se adiciona antgeno/anticuer-
po libre (muestra) y el punto final de la reaccin
se evidencia por la adicin de eritrocitos que
pueden ser parte de la reaccin antgeno-anti-
cuerpo o se pueden usar como clulas indica-
doras.
e) Interpretacin
Ejemplos de reacciones que pueden observarse
en deteccin de anticuerpos irregulares y su com-
plemento con otras metodologas se muestran en la
siguiente tabla: ver tabla 2.

Tabla 2

RESULTADO DE
REACCIN REACCIN
PA TAD DETECCIN DE INTERPRETACIN
PANEL I PANEL II
ANTICUERPOS

+ + 0 0 Positivo Aloanticuerpo

0 + 0 0 Positivo Aloanticuerpo

+ 0 0 0 Positivo Aloanticuerpo

0 0 0 0 Negativo Ausencia de Anticuerpos

+ + + +/0 Positivo Autoanticuerpo + Aloanticuerpo

0 0 + +/0 Positivo Autoanticuerpo/Crioaglutinina

0 = No hay reaccin de aglutinacin

+ = Aglutinacin de cualquier intensidad (4+, 3+, 2+, 1+)

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f) Informe de resultados
La denominacin recomendada para el informe
del resultado de este estudio es:
DETECCIN DE ANTICUERPOS
IRREGULARES: POSITIVO; NEGATIVO
(segn corresponda al paciente o donante estudiado).
En caso de ser positivo, se recomienda registrar
las alternativas posibles de especificidades de los
anticuerpos detectados de acuerdo al panel utiliza-
do. Se adjunta en Anexo 4, propuesta de registro de
resultados.
II. IDENTIFICACIN BSICA DE ANTICUER-
POS IRREGULARES Lea, Leb, K, k, Fya, Fyb, Jka y Jkb.
a) Muestras
La identificacin de anticuerpos irregulares debe
realizarse con muestras sanguneas con las mismas
caractersticas definidas en este documento para la
Deteccin de Anticuerpos Irregulares, en su punto I.a).
Para el estudio de mezclas de anticuerpos complejos
o mltiples, es fundamental disponer necesariamente
de los glbulos rojos de la muestra para realizar estu-
dios de fenotipificacin, autocontrol o TAD.
La solicitud de examen que acompaa a la mues-
tra debe incluir al menos la identificacin comple-
ta del paciente (nombre con dos apellidos), fecha,
procedencia, edad, sexo, pertenencia a alguna et-
nia, historial mdico con especial nfasis en his-
toria transfusional reciente, embarazos, patologas
asociadas, consumo de algn medicamento, etc., lo
que ser de utilidad en el proceso de identificacin
de anticuerpos e interpretacin de resultados.
b) Reactivos
- Clulas Panel para identificacin de anti-
cuerpos irregulares: El panel bsico de iden-
tificacin generalmente presenta entre 8 a 11
frascos de clulas con diferentes especifici-
dades antignicas. Existen estos paneles de
clulas en presentaciones de hasta 16 tipos
de glbulos rojos de distintos donantes. La
eleccin del tipo de panel debe ser realiza-
da en base a las caractersticas del labora-
torio, el tipo de pacientes que atiende y las
estadsticas de los casos estudiados en el
curso de un ao, es deseable que el labora-
torio construya tablas con la prevalencia de
las especificidades identificadas durante el
ao. El panel debe permitir que se identifi-
quen claramente las especificidades de los
aloanticuerpos ms prevalentes en la pobla-
cin y de mayor importancia clnica (Anexo
1). Debe verificarse y considerarse las si-
guientes caractersticas bsicas del panel de
identificacin:
a) Presentar especificidades para los siguien-
tes antgenos: D, C, E, c, e, M, N, S, s, P1,
b) Poseer al menos dos clulas panel que
presenten y dos clulas panel que carez-
can de los antgenos sealados en el punto
anterior. En la tabla de trabajo (Anexo 5)
se puede observar que los antgenos e y k
no cumplen esta regla, por lo que se debe
incorporar al anlisis, las clulas del panel
de deteccin de anticuerpos irregulares,
logrando as cumplir esta regla.
c) Disponer de clulas con doble dosis (homo-
cigotas) especialmente de los antgenos Jka,
Jkb, S, s, Fya, y Fyb, ya que estos antgenos se
expresan ms dbilmente cuando los genes
involucrados estn en forma heterocigota.
d) Poseer clulas rr (cde/cde) en el panel y
que entre ellas expresen los antgenos K,
Fya, Fyb, Jka, Jkb, M, S, s, de preferencia
al estado homocigoto, de manera de po-
der evidenciar la presencia de ellos junto
al anti-D, dada la frecuencia de este anti-
cuerpo.
e) Verificar que el inserto de especificacin
del reactivo y la tabla de trabajo que vie-
nen con el panel, coincidan con el nme-
ro de lote del reactivo. Este punto es muy
importante al momento de querer inter-
pretar los resultados.
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DE ANTICUERPOS IRREGULARES ERITROCITARIOS

f) Las clulas panel no deben utilizarse ms d) Procedimiento

all de la fecha de expiracin indicada por 1.- Rotular la muestra a investigar y centrifugarla
el fabricante. de acuerdo al tiempo estandarizado en la cen-
g) Cada laboratorio de acuerdo a su realidad trfuga para obtener suero o plasma.
(frecuencia de anticuerpos irregulares, ca- 2.- Verificar que los reactivos estn vigentes y que
ractersticas tnicas de la poblacin que tanto reactivos como equipos cumplan con los
atiende, entre otras), debe definir al mo- parmetros definidos en el control de calidad del
mento de su compra, caractersticas espe- laboratorio de inmunohematologa. Las clulas
ciales del panel a utilizar. panel deben utilizarse a la concentracin definida
- Suero Antiglobulina Humana: Ver punto Ib) de para la tcnica a realizar en el inserto del fabricante.
Deteccin de anticuerpos irregulares. 3.- Verificar que la hoja de trabajo del panel de
- LISS: de acuerdo a la estandarizacin del reac- identificacin est disponible y su nmero de
tivo o a las recomendaciones del fabricante, en lote corresponde al del reactivo que se utilizar.
caso de ser usado para esta metodologa (in- 4.- Para cada muestra a procesar, se deben efectuar
corporado en los sistemas de aglutinacin en tantas reacciones de acuerdo al nmero de clulas
columna o en presentaciones para su utiliza- panel bsico utilizado en el laboratorio: ver tabla 3.
cin en tubos).
5.- Mezclar y centrifugar de acuerdo a la calibracin
- Suero fisiolgico tamponado, PBS o solu- de la centrfuga para lectura, o a los tiempos y
cin diluyente recomendada para la tcnica revoluciones establecidas por el fabricante.
utilizada.
6.- Observar en busca de aglutinacin y/o hemli-
sis, de acuerdo a la tcnica de lectura automa-
c) Tcnicas tizada o manual que recomiende el fabricante.
Existen tcnicas manuales, semiautomatizadas y 7.- Registrar los resultados obtenidos en intensidad de
automatizadas, en tubo, columna y microplaca. cruces, de acuerdo a la tabla de reaccin del Anexo 3.
Tabla 3

TUBO,
COLUMNA O SUERO O PLASMA GLBULOS ROJOS UTILIDAD
MICROPLACA

Panel 1 en concentracin adecuada Detectar reaccin de acuerdo al

Reaccin 1 Muestra en estudio
a la tcnica usada fenotipo del Panel 1

Panel 2 en concentracin adecuada Detectar reaccin de acuerdo al

Reaccin 2 Muestra en estudio
a la tcnica usada fenotipo del Panel 2

Panel 3 en concentracin adecuada Detectar reaccin de acuerdo al

Reaccin 3 Muestra en estudio
a la tcnica usada fenotipo del Panel 3

Panel n en concentracin Detectar reaccin de acuerdo al

Reaccin n* Muestra en estudio
adecuada a la tcnica usada fenotipo del Panel n

Muestra en estudio en
Determinacin de presencia de alo y/o
PA Muestra en estudio concentracin adecuada a la
autoanticuerpo
tcnica usada
*n: nmero de clulas del panel utilizadas en la identificacin.

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8.- Dependiendo de la tcnica definida en sus pro- nes sealadas en la tabla de trabajo (Anexo 5). Es
tocolos, debe asegurarse de cumplir con las importante verificar que ella corresponda al lote de
distintas etapas de lectura que se requieren: panel celular que se haya utilizado. A continuacin
- Tubo: la lectura realizada en las tres etapas, se seala un ejemplo de identificacin bsica de an-
puede permitir diferenciar la deteccin de an- ticuerpos irregulares con especificidad anti-S:
ticuerpos que actan a temperatura ambiente, 1.- Identificar y registrar adecuadamente la inten-
a 37C y con SAGH. Adems, la lectura y el sidad de cruces para cada clula panel, lo cual
registro de las intensidades en cruces puede puede orientar a la especificidad del o los anti-
orientar a la especificidad de un solo anticuer- cuerpos en la muestra.
po o a una mezcla de ellos. 2.- Proceda a descartar aquellas especificidades de
- Aglutinacin en columna: la lectura se puede anticuerpos para las cuales el estudio muestra
realizar en una etapa, permitiendo detectar los an- un resultado negativo (descarte por reacciones
ticuerpos clnicamente significativos, pero no per- negativas) con clulas de expresin homocigo-
mite establecer la clase y la temperatura a la cual ta. En la figura se deben analizar las clulas 1,
ellos son activos. El anlisis de las intensidades 3, 8, 10 y 11. La clula 1 permite descartar las
en cruces puede orientar a la especificidad de un especificidades D, C, e, M, s, k, P1, Leb y Jkb
solo anticuerpo o a una mezcla de ellos. (tachado azul); la clula 3 permite descartar las
especificidades E, c, N, Lea, Fyb (tachado rojo);
la clula 8 no descarta especificidades adicio-
e.- Interpretacin nales; la clula 10 descarta la especificidad Jka
La asignacin de la identificacin de anticuerpos (tachado verde); la clula 11 descarta la espe-
irregulares, debe realizarse a travs de la interpreta- cificidad Fya (tachado negro). Este anlisis no
cin del registro de los resultados de las reaccio- permiti excluir las especificidades S y K.

Cel Rh MNS Kell P Lewis Duffy Kidd Cel Resultado

D C E c e M N S s K k P1 Lea Leb Fya Fyb Jka Jkb TA 37C AHG CC

1 R1R1 + + 0 0 + + 0 0 + 0 + + 0 + + + 0 + 1 0

2 R1R1 + + 0 0 + + + + 0 0 + + 0 0 0 0 + 0 2 2+

3 R2R2 + 0 + + 0 0 + 0 + 0 + 0 + 0 0 + + + 3 0

4 rr 0 + 0 + + + 0 + + 0 + + 0 + + 0 + 0 4 2+

5 rr 0 0 + + + 0 + + + 0 + + 0 + 0 + 0 + 5 2+

6 rr 0 0 0 + + + 0 + 0 + + + 0 + + 0 0 + 6 2+

7 rr 0 0 0 + + + + + + 0 + + 0 + 0 + + 0 7 2+

8 R0r + 0 0 + + 0 + 0 0 0 + + 0 0 0 0 0 + 8 0

9 rr 0 0 0 + + + + + + + 0 0 + 0 + 0 + + 9 2+

10 rr 0 0 0 + + + 0 0 + + + + 0 0 0 + + 0 10 0

11 R1R1 + + 0 0 + + + 0 + 0 + + 0 + + 0 0 + 11 0

PA PA

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Cel Rh MNS Kell P Lewis Duffy Kidd Cel Resultado

D C E c e M N S s K k P1 Lea Leb Fya Fyb Jka Jkb TA 37C AHG CC

1 R1R1 + + 0 0 + + 0 0 + 0 + + 0 + + + 0 + 1 0

2 R1R1 + + 0 0 + + + + 0 0 + + 0 0 0 0 + 0 2 2+

3 R2R2 + 0 + + 0 0 + 0 + 0 + 0 + 0 0 + + + 3 0

4 rr 0 + 0 + + + 0 + + 0 + + 0 + + 0 + 0 4 2+

5 rr 0 0 + + + 0 + + + 0 + + 0 + 0 + 0 + 5 2+

6 rr 0 0 0 + + + 0 + 0 + + + 0 + + 0 0 + 6 2+

7 rr 0 0 0 + + + + + + 0 + + 0 + 0 + + 0 7 2+

8 R0r + 0 0 + + 0 + 0 0 0 + + 0 0 0 0 0 + 8 0

9 rr 0 0 0 + + + + + + + 0 0 + 0 + 0 + + 9 2+

10 rr 0 0 0 + + + 0 0 + + + + 0 0 0 + + 0 10 0

11 R1R1 + + 0 0 + + + 0 + 0 + + 0 + + 0 0 + 11 0

PA PA

3.- Proceda a comparar el patrn de reacciones Aspectos a considerar en la identificacin

(positivas y negativas) de su columna de re- de anticuerpos
sultados con las columnas para la especifici- El suero o plasma del paciente debe ser ana-
dad S y K. El patrn de reaccin en esta etapa lizado por la misma tcnica que se us en la
permite descartar la especificidad K, ya que la deteccin del anticuerpo. La inclusin de gl-
clula 10 positiva para Kell presenta reaccin bulos rojos del paciente puede ser til en el re-
negativa. conocimiento de anticuerpos dirigidos contra
4.- La especificidad probable del anticuerpo es antgenos de alta frecuencia o la presencia de
anti-S, lo cual se debe demostrar por la au- autoanticuerpos.
sencia del antgeno S en el fenotipo de los La especificidad del anticuerpo slo se debe
globulos rojos. asignar cuando es reactivo con al menos dos
5.- Cuando no es posible identificar los anti- clulas panel que tienen el antgeno y no reac-
cuerpos en una muestra a travs del panel tivo con al menos dos clulas panel que care-
bsico, se deben utilizar tcnicas adiciona- cen del antgeno. Siempre que sea posible, la
les (fenotipo eritrocitario, panel enzimtico, presencia de anti-Jka, -Jkb,-S, -s, -Fya, y Fyb
elucin-adsorcin) o derivar a laboratorio debe excluirse usando clulas que tengan ex-
de Referencia para completar estudio. presiones homocigotas del antgeno relevante.
Se debe utilizar un suero control anti-D dbil
f.- Informe de resultados ( 0,1 UI / ml) para asegurar la eficacia del pro-
La denominacin recomendada es: cedimiento, incluyendo la expresin antignica
sobre clulas panel.
IDENTIFICACIN DE ANTICUERPOS IRRE- Cuando una especificidad de anticuerpos ha
GULARES: anti-D, anti-K, anti-Fyb sido identificada, es esencial que la presencia
(segn corresponda al paciente o donante estudiado). de otros anticuerpos clnicamente significativos

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DE ANTICUERPOS IRREGULARES ERITROCITARIOS

no sean omitidos. Anticuerpos mltiples slo se b) Control de calidad de cada nuevo lote
pueden confirmar por la eleccin de las clulas de reactivos: corresponde a la verificacin
panel negativas para la especificidad reconoci- para asegurar la conformidad con los criterios
da, pero positivas para otros antgenos capaces utilizados. Cualquier reactivo que no cumpla
de producir anticuerpos clnicamente significa- con las especificacin requeridas para los test,
tivos. El conocimiento de los fenotipos del pa- no se debe utilizar.
ciente puede ayudar en la seleccin de clulas Tomar al azar uno o dos frascos de reac-
para el proceso de identificacin y exclusin. tivos a verificar del nuevo lote como m-
Cuando se ha identificado un anticuerpo, los nimo y examinarlos por inspeccin visual,
glbulos rojos del paciente deben ser fenotipa- en cuanto a corroborar que el volumen y la
dos para establecer la ausencia del antgeno (s) etiqueta sealan aspectos especficos del
correspondiente a la especificidad de los an- reactivo, N de lote y fecha de vencimiento
ticuerpos identificados. Se deben utilizar con- con un plazo adecuado a las necesidades
troles apropiados, es decir, antgeno positivo del servicio. Adems verificar presencia
(heterocigoto) y antgeno negativo. del inserto que especifica caractersticas,
modo de uso y control de calidad.
Evaluar en el laboratorio de Inmunohe-
III. CONTROL DE CALIDAD matologa sus caractersticas en cuanto
a) Control de Calidad Interno: a actividad, especificidad, sensibilidad y
potencia, segn corresponda. Si es-
Seguir los procedimientos de control de calidad
tos reactivos han sido evaluados por una
recomendados por los fabricantes de reactivos y equi-
entidad de referencia, deben solicitarse los
pos. Cada laboratorio debe realizar control de calidad.
resultados y verificar la coherencia con el
N de lote, marca y fecha de vencimiento
Control negativo: utilizar un suero AB iner-
del reactivo en uso.
te estandarizado, como muestra en estudio.
Debe dar un resultado negativo. Los paneles de identificacin deben pre-
sentar para los anticuerpos simples por lo
Control positivo: utilizar un suero con an-
menos dos tipos de clulas positivas y tres
ticuerpos irregulares de clase IgG, como
negativas, o una positiva y siete negativas
muestra en estudio. Debe presentar una
para permitir identificar con un valor de p
intensidad de reaccin de 2+ (anti-D dbil
de 0,05.
( 0,1 UI / ml)) con alguno de los glbu-
los rojos utilizados en el test. Este reactivo Se recomienda controlar al azar una o dos
control debe ser de origen humano y es- expresiones antignicas heterocigotas (fe-
tandarizado por el encargado de calidad del notipar) de las clulas de deteccin e iden-
laboratorio. tificacin.
Control de lavado o Clulas Control c) Con cada nueva tcnica o tecnologa:
Coombs (se usa slo en tcnicas en tubo adems de probar los reactivos como se descri-
y cuando el resultado de la deteccin en ben anteriormente, es conveniente realizar junto
la etapa AGH es negativa): corresponde a a este nuevo mtodo, si es posible, en paralelo
GR sensibilizados con cantidades bajas de con el mtodo que se estaba usando, de acuer-
IgG, de manera que ellos son capaces de do al protocolo de verificacin implementado en
revelar el suero AGH que queda libre, en el laboratorio. Incluyendo al menos 10 muestra
aquellos test que muestran un resultado de sueros con anticuerpos irregulares positivos
negativo. Este reactivo control debe dar un (almacenadas en serotecas), para evaluar repro-
resultado positivo. ducibilidad y concordancia de los resultados.

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DE ANTICUERPOS IRREGULARES ERITROCITARIOS

Esa semana de prueba puede utilizarse tambin b.- Sensibilidad:

como etapa de induccin y capacitacin del per-
sonal que utilizar la nueva tcnica o tecnologa.
En esta etapa es imprescindible la participacin
del proveedor para la entrega de informacin,
asesora y capacitacin. Esto deber asegurar
que el mtodo es apto para su uso rutinario.
No debe presentar hemlisis o aglutinacin des-
pus de una incubacin con suero fresco inerte y
compatible, como en una prueba de compatibilidad,
usando las siguientes clulas no sensibilizadas: 2
clulas A, 2 clulas B, 2 clulas O.
Se deben obtener reacciones positivas con:

Especificaciones de los reactivos Glbulos rojos RhD positivos (preferiblemente

R1r) sensibilizadas con un dbil anti-D (0,1 UI/
Suero Antiglobulina humana - poliespecfi- ml o 20 nanogramos/ml)
co (SAGH)
Glbulos rojos recubiertos con C3b y C3d.
a.- Inspeccin visual Reacciones negativas se deben obtener
- Etiqueta con el nombre del producto, el n- Con las mismas clulas, pero no sensibilizadas
mero de lote (serie), la fecha de vencimiento, con anti-D ni complemento.
las condiciones de almacenamiento y el nom-
bre del fabricante o su logo.
- Inserto del producto debe aportar los mis- c.- Potencia:
mos detalles que los sealados en la etiqueta, Obtener el mismo ttulo o ms alto, sin prozo-
pero explicitando el mtodo recomendado para na, que el obtenido con una solucin de potencia
su uso, los controles de calidad a aplicar, los mnima o un AHG con licencia al da (FDA o CE),
diluyentes recomendados etc., que pueden ser usando glbulos rojos RhD positivos recubiertos
necesarios, adems de cualquier limitacin o con un anti-D de 0,1 UI/ml o 20 nanogramos/ml
advertencias en el uso de ese reactivo. Debe (reaccin de 2+ en SAGH).
incluir tambin detalles de la composicin del Es til tener un pequeo panel de anticuerpos
reactivo, entregar las advertencias de biosegu- dbiles (1+ a 2+) de especificidad conocida por ej.
ridad, y aportar detalles para su uso seguro. anti-Fya adems de un anti-D, para utilizar tanto en
Todos los reactivos no-celulares deben estar estudios de especificidad como potencia.
libres de hemlisis, precipitados, partculas o for-
macin de gel.

Salino LISS

pH 6.6-6.8 6.6-6.8

Conductividad mS/cm 15-18 3.4-4.0

Osmolaridad mOsmol/kg 285-305

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Solucin salina de baja fuerza inica (LISS) REFERENCIAS BIBLIOGRFICAS

Aspecto; sin turbidez, ni partculas. No hemoli- American Association of Blood Banks. AABB
zar, ni causar aglutinacin de las clulas. Standards for Blood Bank and Transfusion Ser-
vices, 25th ed., Bethesda, Maryland, 2008.
Guidelines for the blood transfusion services in
El LISS se puede utilizar de dos maneras: sus- the United Kingdom, 7th edition 2005.
pendiendo los glbulos rojos de prueba en LISS
(1,5 - 2%) o agregando un volumen igual de la so- Harmening DM, Modern Blood Banking and
lucin de LISS al suero y utilizando glbulos rojos Transfusion Practices, 6th ed., 2012.
suspendidos en salino (3%). Las clulas suspendi- Ministerio de Salud de Chile. Orientaciones
das en LISS no se deben conservar ms de 24 horas para Centros de Sangre y Unidades de Medi-
para ser usadas. cina Transfusional, MINSAL, 2007.
Roback JD, editor. AABB Technical Manual,
17th ed., Bethesda, Maryland, 2011.
b) Control de Calidad Externo:
Los Centros de Sangre, Unidades de Medicina
Transfusional, Bancos de Sangre y Laboratorios
Clnicos del pas que realizan esta determinacin
deben participar en algn programa de evaluacin
externa de la calidad, para que en conjunto con el
control de calidad interno, se asegure la calidad de
la deteccin e identificacin de anticuerpos irregu-
lares eritrocitarios.

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ANEXO 1
Caractersticas de los anticuerpos irregulares de significancia clnica y sus frecuencias en donantes y pacientes en dos Servicios
de Sangre chilenos durante los aos 2011-2013.

Reactividad Asociado a Frecuencias

Sistema Donantes1 Pacientes2

Anticuerpo 4C 22C 37C AGH EHRN RHT
Sanguneo n % n %

Anti-M Raro Raro Raro 27 7.9 13 3.4

Mayora
Anti-N Raro No Raro 4 1.2 1 0.3
Mayora Mayora
MNS Anti-S Mayora S S 4 1.2 10 2.6
Mayora Mayora
Anti-s Mayora S S 1 0.3
Anti-U Mayora S S

P1PK Anti-P1 Mayora Mayora No Raro 2 0.6 2 0.5

Anti-D Algunos Algunos Mayora S S 51 15.0 103 27.3

Anti-C Algunos Algunos Mayora S S 5 1.5 12 3.2
Rh Anti-E Algunos Algunos Mayora S S 63 18.5 81 21.4
Anti-c Algunos Algunos Mayora S S 8 2.4 13 3.4
Anti-e Algunos Algunos Mayora S S 5 1.3

Anti-Lua Mayora Mayora Raro No 1 0.3 4 1.1

Lutheran
Anti-Lub Algunos Mayora Leve S 3 0.9

Anti-K Mayora S S 63 18.5 63 16.7

Anti-k Mayora S S
Anti-Kpa Mayora S S 2 0.5
Kell Algunos
Anti-Kpb Mayora S S
Anti-Jsa Mayora S S
Anti-Jsb Mayora S S

Anti-Lea Mayora Mayora Mayora Mayora No Raro 83 24.4 42 11.1

Lewis
Anti-Leb Mayora Mayora Mayora Mayora No No 7 2.1 2 0.5
Anti-Fya Mayora S S 11 3.2 8 2.1
Duffy
Anti-Fyb Mayora S S 1 0.3 1 0.3
Anti-Jka Mayora S S 6 1.8 13 3.5
Kidd
Anti-Jkb Mayora S S 3 0.8
Anti-Dia Mayora S S
Diego
Anti-Di, Mayora S S
Anti-Yta Mayora No S
Yt
Anti-Ytb Mayora No No

Xg Anti-Xga Algunos Mayora No No

Anti-Sc1 Mayora No No
Scianna
Anti-Sc2 Mayora No No
Anti-Doa Mayora No S
Dombrock
Anti-Dob Mayora No S
Anti-Coa Mayora S S
Colton
Anti-Cob Mayora S S
TOTAL 340 100 378 100

Fuente: Manual Tcnico AABB, 2011 (adaptado)

1 Datos obtenidos sobre un total de 142.812 donantes del Centro Metropolitano de Sangre y Tejidos, Santiago.
2 Datos obtenidos sobre un total de 45.584 pacientes del Hospital Guillermo Grant Benavente, Concepcin.

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ANEXO 2
Algoritmo para la deteccin e identificacin de anticuerpos irregulares eritrocitarios.

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ANEXO 3
Intensidades de Reaccin de acuerdo a las distintas tcnicas de aglutinacin.

AGLUTINACIN EN
INTENSIDAD AGLUTINACIN
AGLUTINACIN COLUMNA
DE MICROPLACA
TUBO/MICROPLACA (GEL Y ESFERAS DE
REACCIN (FASE SLIDA)
VIDRIO)

Banda homognea de
Botn nico. Fondo claro. Sin La adherencia es fuerte, cubriendo
4+ aglutinados en la parte
clulas libres. por completo la monocapa.
superior de la columna.

Varios aglutinados de gran
3+ tamao. Fondo claro. Sin
clulas libres.
El grado de adherencia es
Banda superior de aglutinado
moderado a fuerte, ligera
y desplazamiento en la parte
formacin de clulas en el centro
superior de la columna.
del pocillo.

Muchos aglutinados de Aglutinados pequeos en la El grado de adherencia es

2+ mediano tamao. Fondo claro. columna y a lo largo de la moderado, botn celular irregular
Sin clulas libres. columna. con agujero.

Numerosos aglutinados
Algunos aglutinados El grado de adherencia es ligero a
1+ pequeos. Fondo turbio por GR
pequeos en la columna. pequeo, botn celular difuso.
libres.

Apenas la aglutinacin es Escasos aglutinados de

+/- visible. Fondo turbio por GR pequeo tamao en la No aplica.
libres. columna.

0 Ausencia de aglutinacin
Banda de GR al fondo de la
No hay adherencia, botn celular
columna, resto de la columna
central bien definido.
sin aglutinados.

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ANEXO 4
Elementos bsicos de un registro recomendado para anotar los resultados de la deteccin de anticuerpos irregulares eritrocitarios

Fecha:_______________ Tecnlogo Mdico responsable:_________________

Reaccin Panel Reaccin Panel PA Resultado

Identificacin I (intensidad de II (intensidad de (intensidad de Deteccin de Interpretacin Posibles
paciente/ cruces) cruces) cruces) Anticuerpos (Caractersticas especificidades
del o los
donante involucradas
Anticuerpos)
CI 37C AGH CI 37C AGH CI 37C AGH

Ejemplos de
-
reacciones

Ausencia de
Paciente XXXX 0 0 0 0 0 0 0 0 0 Negativo
anticuerpos

Anti-c; Anti-E;
Paciente XXXX 0 0 0 0 0 2+ 0 0 0 Positivo Aloanticuerpo
anti-K..

Paciente XXXX 0 0 4+ 0 0 4+ 0 0 0 Positivo Aloanticuerpo Anti-D; ..

Autoanticuerpo
Paciente XXXX 2+ 0 0 2+ 0 0 2+ 0 0 Positivo
fro

Paciente n.

Reactivo Lote N de serie Marca Fecha vencimiento

Panel celular

Columna (soporte)

AGH

LISS

Otro reactivo

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ANEXO 5
Ejemplo de tabla de trabajo para la identificacin de anticuerpos irregulares.

Cel Rh MNS Kell P Lewis Duffy Kidd Cel Resultado

D C E c e M N S s K k P1 Lea Leb Fya Fyb Jka Jkb TA 37C AHG CC

1 R1R1 + + 0 0 + + 0 0 + 0 + + 0 + + + 0 + 1

2 R1R1 + + 0 0 + + + + 0 0 + + 0 0 0 0 + 0 2

3 R2R2 + 0 + + 0 0 + 0 + 0 + 0 + 0 0 + + + 3

4 rr 0 + 0 + + + 0 + + 0 + + 0 + + 0 + 0 4

5 rr 0 0 + + + 0 + + + 0 + + 0 + 0 + 0 + 5

6 rr 0 0 0 + + + 0 + 0 + + + 0 + + 0 0 + 6

7 rr 0 0 0 + + + + + + 0 + + 0 + 0 + + 0 7

8 R0r + 0 0 + + 0 + 0 0 0 + + 0 0 0 0 0 + 8

9 rr 0 0 0 + + + + + + + 0 0 + 0 + 0 + + 9

10 rr 0 0 0 + + + 0 0 + + + + 0 0 0 + + 0 10

11 R1R1 + + 0 0 + + + 0 + 0 + + 0 + + 0 0 + 11

PA PA

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