UNIVERSIDAD DE COSTA RICA

ESCUELA DE QUMICA
LABORATORIO DE QUMICA ORGNICA GENERAL I
QU-0213

Estudiante: Mara Mercedes Daz Garca Carn: A82135

Asistente: Jos David Arroyo Grupo: 03

Prctica #7. Cromatografa.

Resumen

La presente prctica tena como objetivo realizar diferentes tipos de cromatografas: capa
fina (CF) con analgsicos y espinaca, de columna (CC) con espinaca y de papel (CP) con
pigmentos de M&Ms. La cromatografa de capa fina y de papel consisti en colocar una
muestra en una placa marcada y dejar que diluyente respectivo ascendiera a travs de esta,
durante el arrastre se separara los componentes de la muestra a diferentes alturas. Ac,
los Rf obtenidos para los analgsicos fueron: ibuprofeno Rf=0,49, aspirina Rf=0,91,
acetaminofn Rf=0,74, cafena Rf=0,38, cafioaspirina Rf de cafena y de aspirina. En la
cromatografa por columna, se empaquet la muestra, la separacin se dio de forma
descendente y se eligi el disolvente 70% hexano y 30% acetato de etileno, con el fin de
que salieran primero los carotenos. Por ltimo, en la cromatografa de papel los Rf dieron:
azul RF=0,67, amarillo RF=0,31, anaranjado RF=0,19 y rojo RF=0,17. Los tonos caf y
verde son una combinacin de colores primarios, por lo que sus RF tendrn parte de los
datos mencionados antes.

Introduccin

La cromatografa es un mtodo de separacin, en el que los componentes de una mezcla

interactan de forma diferente ante cierto disolvente y fase estacionaria. Aqu, la fase
mvil (disolvente) muestra afinidad hacia la mezcla y acelera el paso de la muestra a

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travs de una fase estacionaria, la cual no suele tener afinidad con los componentes y
retrasa el avance de la mezcla (Nicols, NA).

Asimismo, la cromatografa se divide en dos grupos: de adsorcin y de particin, los que

a su vez se subdividen en distintas clases. La cromatografa de adsorcin utiliza una
superficie slida como adsorbente (fase estacionaria) para separar los solutos que tienen
afinidad hacia el adsorbente, de ah que los compuestos de la mezcla de solutos no
avanzan a la misma velocidad que el disolvente lquido o gaseoso (fase mvil) durante la
elucin (Galagovsky, 1987).

La cromatografa de particin se caracteriza por tener su fase estacionaria lquida adherida

a un slido y su fase mvil lquida inmiscible a la fase estacionaria. Por esta razn, el
proceso de separacin es una distribucin selectiva de la mezcla de solutos entre las fases
mvil y estacionaria, selectividad denominada: constante de particin (Galagovsky,
1987).

Es importante destacar que en esta prctica se desarrollaron ambos tipos de cromatografa,

de las cuales la de capa fina y la de columna son por absorcin, mientras que la
cromatografa de papel realizada pertenece a de particin. Ac resulta fundamental que
en mucha literatura se llama cromatografa de intercambio inico a la de papel
(Galagovsky, 1987).

Ahora bien, la cromatografa de capa fina consiste en una capa delgada de adsorbente (gel
de slice, almina o celulosa) depositado sobre un soporte plano como una placa de vidrio,
aluminio o plstico. Utiliza disolventes o mezclas de disolventes orgnicos y es una
tcnica analtica, ya que permite determinar los componentes de una mezcla de manera
rpida, sencilla y con buenas separaciones entre los componentes (Nicols, NA).

A menudo se emplea para monitorizar las reacciones qumicas y el anlisis cualitativo de

los productos, por lo que sirve para medir pureza. Cabe destacar que fluye de forma
ascendente, es decir que el disolvente trepa en el adsorbente, arrastrando la mezcla de
solutos (Nicols, NA).

Por otro lado, la cromatografa de columna es una tcnica de purificacin, pues permite
aislar los compuestos deseados de una mezcla. Adems, emplea disolventes o mezclas de
disolventes orgnicos y utiliza una columna vertical de vidrio, a la cual se le adiciona un

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slido adsorbente humedecido con disolvente, la mezcla y el disolvente. En este caso, el
fluido se mueve de forma descendente, por gravedad el disolvente va a mover la mezcla
a travs de la columna y, por las diferentes interacciones con la fase estacionaria y mvil,
tendrn diferentes velocidades que llevarn a la separarn (Nicols, NA).

Finalmente, en cuanto a la cromatografa con papel, se destaca que es muy sencilla y

rpida, solo basta con agregar agua (acta como adsorbente) con bajas concentraciones
de sal al papel y los pigmentos. Es importante notar que, dadas las estructuras de los
colorantes, es necesario la presencia de sal en el agua porque los pigmentos no suben solo
con el agua, sino que necesitan interaccin inica para aumentar la solubilidad en el agua,
efecto es conocido como Salting-in o efecto salino, de esta manera es posible que el
colorante suba conforme asciende el agua por el papel.

Este efecto es de gran ayuda en cromatografas de papel, pues la interaccin inica es la

verdadera causa de la separacin de los pigmentos, resinas, protenas y dems sustancia
de inters. Por ello, la verdadera categora de esta cromatografa, segn la literatura, es
Cromatografa de intercambio inico (Galagovsky, 1987).

Seccin experimental

El procedimiento se tom del Manual de Laboratorio de Qumica Orgnica General I

(Prez, Lamoureux, Artavia, Corts y Arias, 2017), de la pgina 90 a la 98, experimento
#7, de cromatografa. Las modificaciones realizadas fueron las siguientes: no se realiz
la determinacin de muestras incgnitas, por lo que no se pusieron en la placa
cromatogrfica los puntos M1 y M2. Esto se cambi por un punto que llevara
Cafiaspirina, diluida al 1% en etanol).

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Resultados
Cromatografa de capa fina con analgsicos.

Figura 1. Placa bajo luz UV Figura 2. Placa sin luz ultravioleta

Cuadro I. Rfs para analgsicos y CafiAspirina en la placa de alumina. (dd=4,70cm)

Analgsico Distancia recorrida (cm) RfN

Acetaminofn 3,5 0,7447

Ibuprofeno 2,3 0,4893

Aspirina 4,3 0,9150

Cafena 1,8 0,3830

CafiAspirina 1,8 y 4,2 0,3830 y 0,8936

Cromatografa de papel con M&Ms

Figura 3. Placa con pigmentos de M&Ms

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Cuadro II. Rfs para pigmentos artificiales de M&Ms en la placa de papel.
(dd=8,90cm)

Analgsico Distancia recorrida (cm) RfN

Rojo 1,5 0,17

Azul 6,0 0,67

Caf 1,9 y 0,8 0,21 y 0,090

Verde 6,0 y 2,7 0,67 y 0,30

Amarillo 2,8 0,31

Anaranjado 1,7 0,19

Cromatografa de columna con extracto espinaca

Figura 4. C.C. de extracto de espinaca con disolvente 70% hexano y 30% acetato de
etilo y carotenoides obtenidos.

Cromatografa de capa fina con extracto espinaca.

Figura 5. Placa con extracto de espinaca con disolvente 1:1 hexano : acetato de etilo
(izquierda) y 7:3 hexano : acetato de etilo (derecha)

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Muestra de clculos:

a) Clculo del Recorrido frontal, ejemplo con acetaminofn:

= (1)

= 3,5cm4,70 = 0,7447

Nota: Para los clculos de Rf se tom un promedio de las manchas.

Discusin

Como se indic al inicio, se realizaron diferentes tipos de cromatografas: capa fina con
analgsicos y extracto de espinaca, de columna con extracto de espinaca y de papel con
pigmentos artificiales de M&Ms.

Para la cromatografa de capa fina con analgsicos se prepararon disoluciones de

acetaminofn, aspirina, cafena e ibuprofeno al 1% en etanol, las cuales fueron usadas
como referencias. Luego, se macerizaron unas cuantas pastillas de CafiAspirina para
preparar una disolucin al 1% en etanol.

Las referencias y la CafiAspirina fueron colocadas en una placa de alumina, con ayuda
de un capilar (uno por muestra), despus se colocaron en un Beaker con 5,00mL de una
mezcla de acetato de etilo y cido actico 95:5 (disolvente) y se cerr con un vidrio reloj.
Finalmente se sac la lmina, se dej evaporar el disolvente, se observ el resultado con
luz UV y se marcaron las manchas vistas.

En la cromatografa de papel con M&Ms se disolvi el pigmento de un M&M de cada

color con de agua y ayuda de un capilar, luego se coloc el pigmento en una placa de
papel a 1,00cm del borde de la placa, la cual fue llevada a un Beaker con 2,00mL de
disolucin al 0,1% de NaCl (disolvente) y se cerr con un vidrio reloj. Para finalizar se
sac la lmina de la disolucin, se dej secar y medieron los Rfs.

Con respecto a la cromatografa de columna con extracto de hojas de espinaca, se

trituraron las hojas de espinaca en un Beaker y se deshidrataron con 15,00mL de etanol
al 95%, se filtr y se procedi a tratar el residuo slido con 10,00mL de ter de petrleo
y 30-40,00mL de hexano. Luego se volvi a filtrar la mezcla y esta se concentr con
ayuda de una plantilla. Una vez preparado el extracto, se empaquet la columna con
algodn, arena, slica, el disolvente y un 1,00mL del extracto de espinaca.

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Tambin se realiz cromatografa de capa fina con extracto de hojas de espinaca y los
disolventes 1:1 hexano:acetato de etilo y 7:3 hexano:acetato de etilo. Se coloco el extracto
en una lmina de alumina con un capilar y se sumergi en la cmara hecha con un Beaker
y un vidrio de reloj, en las cuales se encontraban 2,00mL del disolvente respectivo.
Finalmente se sac la lmina y se dej evaporar el disolvente

Una vez realizado los procesos anteriores, se puede destacar que, en la cromatografa de
capa fina con analgsicos, se tiene las siguientes estructuras de relevancia:

Figura 6. Figura 7. Figura 8. Figura 9.

Acetaminofn Aspirina Cafena Ibuprofeno

En esta parte la fase mvil era Hexano con cido actico (95:5). El hexano, el cual es un
disolvente poco polar, disminua la velocidad de avance del cido actico en la placa de
alumina, ya que estos dos ltimos son bastante polares. En cuanto al orden de polaridad
de los analgsicos en estudio sera: Ibuprofeno, aspirina, acetaminofn y cafena.

El Ibuprofeno y aspirina tienen hidrgenos sumamente lbiles que provienen de un cido

carboxlico y como se recordar por orden de elucin, los cidos van a ser los ms polares.
Luego les sigue el acetaminofn, pues tiene un hidrgeno ligeramente lbil que proviene
de un alcohol y otro de una amina secundaria, y por ltimo la cafena, la cual es muy poco
polar y esto se refleja en que no presenta hidrgenos suficientemente lbiles (Galagovsky,
1987).

Estos datos no calzan idealmente con los resultados obtenidos en la placa, ya que, si se
observan las figuras 1 y 2 as como el cuadro 1, el ibuprofeno (Rf=0,49) es menor que la
aspirina (Rf=0,91) y el acetaminofn (Rf=0,74), adems el valor ms bajo lo tiene la
cafena (Rf=0,38). Con respecto a la Cafioaspirina, se puede ver una separacin de los
compuestos que la forman, aspirina y cafena, los cuales concuerdan con los valores
tomados para cada uno de los compuestos por separado.

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Los datos obtenidos y su variacin con la teora podran deberse a fallas como muchas
gotas de los antibiticos en la placa, mala manipulacin de la placa o el haber permitido
el paso de la fase mvil ms all del lmite establecido al inicio. Tambin, pudo ocurrir
que el disolvente empleado no se prepar de forma correcta y ello se ve reflejado en los
resultados.

En cuanto a la cromatografa con espinaca, es importante detallar que se usa etanol y

hexano para extraer los compuestos fotosintticos de la espinaca, dado que estos son
sumamente polares en compuestos orgnicos y entre ms largas sean las cadenas de
carbono, mejor extraccin se puede realizar de dichos compuestos (Rodriguez, 2012). Los
compuestos extrados se muestran en el siguiente cuadro:

Cuadro III. Estructuras de las familias de componentes extrados de la espinaca.

Familia Estructura Polaridad

Caroteno No polar

Clorofila A Polar

Clorofila B Polar

Xantofilas Polar

Fuente: http://www.actiweb.es/equipo1qe/practica_7.html

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Para este extracto se realizaron las cromatografas de capa fina y de columna, la primera
se emple para determinar cul de los dos disolventes, 1:1 hexano:acetato de etilo o 7:3
hexano:acetato de etilo, era el ms adecuado para llevar a cabo la cromatografa de
columna. En la figura 5 se puede apreciar que el mejor resultado se obtuvo con el
disolvente 7:3 hexano:acetato de etilo, pues posee mayor cantidad de hexano (no polar)
y, como se dijo antes y se observa en el cuadro III, la espinaca posee tanto compuestos
polares como no polares, de ah que si se desean obtener primero los carotenos se va a
necesitar de un disolvente no polar fuerte que sea capaz de atraer a todos aquellos
componentes no polares de la planta.

El otro disolvente, al ser 50% polar y 50% no polar, resulta menos eficiente durante la
separacin de compuestos, por lo que en la figura 5 solo se observa un punto verde.
Mientras que con el otro disolvente se ven diferentes tonos de verde y amarillo, indicador
de que el disolvente empleado es una buena opcin para desarrollar la cromatografa por
columna.

Una vez montado el equipo para la cromatografa de columna y teniendo el disolvente

adecuado para hacer que las clorofilas se desplacen por la placa y se separen, se empez
el proceso de separacin y se obtuvo una columna con diferentes colores, entre ellos el
amarillo y el verde, ver figura 4. Como se emple un disolvente que posee mayor cantidad
de un compuesto no polar, los primeros en la separacin fueron los carotenos, lquido de
color amarillo.

Es importante destacar que por el mtodo de cromatografa de columna es posible separar

los componentes en distintos frascos, mientras que en cromatografa de capa fina solo era
posible conocer las identidades de los componentes de la mezcla y no se poda hacer uso
de los mismos. Sin embargo, la cantidad de material usado en la cromatografa de
columna es mayor y ms complejo, porque se debe realizar un muy buen
empaquetamiento (orden adecuado y sin dejar burbujas o hundimientos) para realizar una
correcta cromatografa.

Finalmente, en cuanto a la cromatografa de papel se analizaron los siguientes colorantes:

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Cuadro IV. Estructura de los pigmentos utilizados para la coloracin de los M&Ms.

Nombre Numeracin Color Estructura

Curcumina E100 Amarillo a Anaranjado

cido Carmnico E120 Rojo carmn

Azul brillante FCF E133 Azul

Carotenoides E160a Anaranjado a amarillo

Beta Apocarotenal E160e Anaranjado a rojo

Fuentes:

Informacin nutricional M&Ms: http://mmsmake.com/producto-2/

Estructuras y colores. https://pubchem.ncbi.nlm.nih.gov/

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Por si solos los pigmentos poseen una baja polaridad, es por esto que, para poder realizar
este procedimiento se debe agregar una disolucin salina con muy poca sal, para que los
iones causen el efecto salting-in, el cual aumenta la polaridad de estas molculas. Si la
disolucin hubiera tenido mucha sal, se crea un efecto contrario llamado saltin-out el
cual genera una reduccin de la solubilidad, por lo tampoco subira el pigmento a travs
del papel (Galagovsky, 1987).

Dadas las estructuras anteriores, es fcil notar que el azul brillante FCF tiene presencia
de muchos iones, incluido sodio (puntos celestes), por lo que es el que se ve favorecido
por la efecto salino y va a tender a subir ms en el papel, seguido por el color amarillo
(curcumina, E100), luego el carotenal y beta apocarotenal y finalmente el rojo carmn
(Chang, 2010). Lo que concuerda correctamente con los resultados, ver cuadro II y figura
3, puesto que azul es el color con el Rf de mayor magnitud (RF=0,67), seguido por el
amarillo (RF=0,31), el anaranjado (RF=0,19) y por ltimo el rojo (RF=0,17). Tambin,
es necesario sealar que el color verde y el caf son una composicin del colorante azul
y el amarillo (verde), y azul, amarillo y rojo (caf).

Conclusiones

La concentracin de la muestra a estudiar no puede ser muy grande ni muy

pequea porque se hace difcil o imposible determinar los componentes que posee
la mezcla.
Los pigmentos artificiales que dan color a los confites no necesariamente son un
color uniforme, sino que pueden ser la unin de pigmentos de otros colores.
Suele ser ms eficiente la mezcla de disolvente, que el uso de un solo disolvente
puro para la realizacin de una cromatografa (Ya sea C.C.F., C.C. o C.P.)
La correcta eleccin de un disolvente (o mezcla de disolventes) es esencial en una
cromatografa, pues puede mejorar o empeorar los resultados obtenidos, dado que
un disolvente puede aumentar la cantidad de fases en las que se separa una
muestra.

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 Una cromatografa por columna es mucho ms eficiente y podra tener ms usos
a nivel industrial que una cromatografa de capa delgada, sin embargo, es ms
complicado armar el equipo necesario para empaquetar la columna de
cromatografa. No obstante, esta puede tener dimensiones mucho mayores, lo que
la vuelve ms eficiente.

Bibliografa

Chang, R. (2010). Qumica. Mxico D.F: McGraw-Hill.

Galagovsky, L. (1987). Fundamentos Terico-Prcticos para el Laboratorio.

Buenos Aires: EUDEBA.

Marcano, D., & Hasegawa, M. (2002). Fitoquimica Organica. Carcas,

Venezuela: Editorial Torino.

Nicols, E. (NA). Universidad de Barcelona. Recuperado de: http://www.ub.Edu

/oblq/ oblq%20 castellano/extraccio.html.

Rodriguez, W. (2012). Biologiapuntocom. Recuperado de: http://biologiapu

ntocom.blogspot.com/2012/10/practico-extraccion-y-separac ion -de.html.

Yurkanis, P. (2008). Qumica Orgnica. Mxico D. F.: Pearson Educacin

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