Universidad De Guadalajara Instrumentacin Analtica

Prctica No. 2

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Universidad de Guadalajara
Centro Universitario de Ciencias Exactas e Ingenieras
Departamento de Qumica

Instrumentacin Analtica





Prctica No. 2 Espectrofotometra al Ultravioleta







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Prctica No. 2

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Datos previos
La espectrofotometra ultravioleta-visible (UV/VIS) es una espectroscopia de emisin
de fotones y una espectrofotometra. Utiliza radiacin electromagntica (luz) de las
regiones visible, ultravioleta cercana (UV) e infrarroja cercana (NIR) del espectro
electromagntico, es decir, una longitud de onda entre 100 nm y 1000 nm. La
radiacin absorbida por las molculas desde esta regin del espectro provoca
transiciones electrnicas que pueden ser cuantificadas.

La espectroscopia UV-visible se utiliza para identificar algunos grupos funcionales de
molculas, y adems, para determinar el contenido y fuerza de una sustancia. Se utiliza
de manera general en la determinacin cuantitativa de los componentes de soluciones
de iones de metales de transicin y compuestos orgnicos altamente conjugados.
Se utiliza extensivamente en laboratorios de qumica y bioqumica para determinar
pequeas cantidades de cierta sustancia, como las trazas de metales en aleaciones o la
concentracin de cierto medicamento que puede llegar a ciertas partes del cuerpo.

El espectrofotmetro ultravioleta-visible
El espectrofotmetro es un instrumento que permite comparar la radiacin
absorbida o transmitida por una solucin que contiene una cantidad
desconocida de soluto, y una que contiene una cantidad conocida de la misma
sustancia.














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Todas las sustancias pueden absorber energa radiante. El vidrio, que parece ser
completamente transparente, absorbe longitudes de onda que pertenecen al espectro
visible; el agua absorbe fuertemente en la regin del IR. La absorcin de las radiaciones
UV, visibles e IR depende de la estructura de las molculas, y es caracterstica para
cada sustancia qumica. El color de las sustancias se debe a que absorben ciertas
longitudes de onda de la luz blanca que incide sobre ellas y slo dejan pasar a nuestros
ojos aquellas longitudes de onda no absorbida.

Esta espectrofotometra utiliza radiaciones del campo UV de 80 a 400 nm,
principalmente de 200 a 400 nm (UV cercano) y de luz visible de 400 a 800 nm, por lo
que es de gran utilidad para caracterizar las soluciones en la regin ultravioleta-visible
del espectro. Se rige por una ley muy importante: la ecuacin de Beer-Lambert. [1]

Ley de Beer-Lambert
Una expresin para la ecuacin de Beer-Lambert es la siguiente:



Dnde:
es el rango de luz captado por el tubo de fotocolorimetra,
es el rango de luz que sale del tubo de fotocolorimetra y que va a llegar a la
celda fotoelctrica donde es captada y medida
es la capacidad de captacin del haz del campo electromagntico,
es la longitud del tubo de fotocolorimetra, en cm.
es la concentracin de la muestra ya ubicada en el tubo de fotocolorimetra.


La ley de Beer permite cuantificar la concentracin de una muestra por UV, tambin
puede ser expresada de la siguiente manera:







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Dnde:
es la Absorbancia
es el Coeficiente de extincin (Caracterstico de cada sustancia).
es el Largo del paso de la cuba (cm).
es la Concentracin (moles/l).

La zona de longitudes de onda que se registra en un espectro UV-Vis es de entre 200 y
800 nm. En esta zona no absorben dobles ni triples enlaces aislados.
Slo van absorber enlaces pi conjugados y heterotomos con pares de electrones no
compartidos (O, N), como los grupos cromforos.

Tipos de Espectrofotmetros
Espectrofotmetro de doble haz: es aquel que cuenta con dos compartimientos para
celdas de muestra que le permite medir simultneamente la cantidad de energa
radiante absorbida por una matriz (blanco) y la energa absorbida por la muestra
compuesta por la matriz y la especie de inters.









Espectrofotmetro de haz simple: cuenta con un nico compartimiento de celda con
lo cual se debe realizar la medida de absorcin del blanco para poder registrar un
cero (o referencia) y luego medir la absorcin de la muestra.[2]


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Procedimiento
Se pesan 2 mg de una muestra problema. Se disuelven con una pequea cantidad de
solvente (se debe hacer un examen preliminar para determinar el solvente adecuado),
se pasan a un matraz aforado de 25 mL. Usualmente se usa metanol, etanol, hexano,
agua, etc. Y se lleva hasta la marca (Solucin A).
Se transfieren 5 mL de la solucin anterior a un matraz aforado de 25 ml y se llevan
hasta el aforo con solvente (Solucin B).
Se llena una cubeta de slice (Precaucin: son muy caras y delicadas), con el solvente y
otras dos con cada una de las soluciones A y B.
Se determina la absorbancia de ambas soluciones contra el solvente desde 350 a 200
nm. Se comparan las grficas obtenidas con las grficas de los estndares puros y se
determina el compuesto problema.
Si no se cuenta con las grficas de referencia, se le proporcionar al alumno el nombre
del compuesto qumico estudiado y la comparacin se har entre los espectros
obtenidos.
Parmetros instrumentales
Espectrofotmetro (rango de 200-350 nm de )
Pipetas de volmenes variados
2 tubos de ensayo
Solventes: agua y metanol.
Reactivos: cido benzoico, cido tnico, cido acetil saliclico, cafena, vainilla,
sulfato de quinina.
Matraces

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Datos obtenidos
Datos obtenidos con el espectrofotmetro.

Para obtener la longitud de onda de mxima absorcin determinamos el pico de
absorbancia , y presenta una longitud de onda
Tambin el profesor nos proporcion b de para obtener la absortividad molar
.

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Clculos
Para obtener la absortividad molar calculamos la concentracin de la muestra
problema (Solucin A), tomando en cuenta el pico caracterstico ms alto.
Clculo de la concentracin




|


|


|

La absortividad molar es igual a:

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Resultados
1.


2.

3. El compuesto de la muestra problema es cido acetil saliclico.
4. Espectro experimental de la muestra problema con absorbancia y
longitud de onda











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Anexos
Comentarios
1. Para la muestra problema se utiliz metanol como solvente. Se comprob
que el metanol era el solvente ms adecuado que el agua para utilizar en la
solucin A y B.
2. Para determinar el compuesto como cido acetil saliclico comparamos la
grfica de la muestra problema con las grficas de estndares puros de
referencia.

Grficas de estndares puros
cido acetil saliclico alcohol etlico cido benzoico alcohol etlico





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Cafena alcohol etlico Sulfato de quinina alcohol etlico


cido tnico alcohol etlico Vainillina alcohol etlico











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Problemas que presentan los espectrofotmetros UV/VIS
[3] La espectrometra ultravioleta-visible o espectrofotometra UV-Vis implica la
espectroscopia de fotones en la regin de radiacin ultravioleta-visible. Utiliza la luz en
los rangos visible y adyacentes (el ultravioleta (UV) cercano y el infrarrojo (IR) cercano.
En esta regin del espectro electromagntico, las molculas se someten a transiciones
electrnicas.
Los problemas que presenta el espectrofotmetro como instrumento es que requieren
frecuentes calibraciones para mantener la exactitud y la precisin del instrumento. La
eleccin del tipo de material a utilizar como calibrador requiere el conocimiento del
tipo de muestra que se analiza. Sin embargo, el anlisis de muestra utilizando UV-vis es
un proceso muy rpido en comparacin con otros mtodos de deteccin, tales como
HPLC. Este anlisis rpido se logra slo a travs de la calibracin adecuada.
La luz difusa puede ser un problema para los espectrmetros UV-vis. Esto puede ser
causado por el usuario que intenta detectar la muestra usando un rango de longitud
de onda demasiado ancho o por un diseo pobre del instrumento.
Las principales desventajas que presenta este elemento dispersor son:
No pueden obtenerse ancho de banda estrechos.
No permite realizar lecturas a dos longitudes de onda en forma simultnea.













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Conclusin
En la prctica observamos la absorcin de la luz ultravioleta por algunos compuestos
orgnicos, en nuestro equipo, por el cido acetil saliclico. Observamos cmo se utiliza
el espectrofotmetro de alta eficiencia y se mide la absorbancia en regiones de luz uv
con respecto a la longitud de onda de 200 a 350 nm. Obteniendo la grfica de
absorcin del compuesto para despus compararla con las grficas de estndares
puros de referencia, encontrando la grfica ms similar y determinar que el compuesto
era cido acetil saliclico.

Referencias
[1] F.C. Jentoft, Diffuse Reflectance IR and UV-vis Spectroscopy Fritz-Haber-
Institut der Max-Planck-Gesellschaft. 2004.
[2] http://www.espectrometria.com/espectrometra_ultravioleta-visible

[3] http://www.ehowenespanol.com/ventajas-desventajas-espectrometro-uvvis-
lista_163021/