Cancer de Mama Tesis

UNIVERSIDAD DE COLIMA
FACULTAD DE MEDICINA
FRECUENCIA DE LOS POLIMORFISMOS DE LOS GENES CYP1A1 Y

CYP1B1 EN MUJERES CON CNCER DE MAMA, EN JALISCO
TESIS
PARA OBTENER EL GRADO DE
MAESTRA EN CIENCIAS MDICAS
PRESENTA:
Biol. Laura Janin Muoz Islas
Asesor de Tesis:
Dr. en C. Ruth De Celis Carrillo
Investigador Asociado C
Centro de Investigacin Biomdica de Occidente, IMSS
Asesor de Tesis:
Dr. En C. Elena Margarita Castro Rodrguez
Investigador Titular A
Centro Universitario de Investigaciones Biomdicas
Universidad de Colima
Colima, Colima, Julio 2010

Maestra en Ciencias Mdicas Frecuencia de Polimorfismos de los genes CYP1A1
y CYP1B1 en mujeres con cncer de mama
Instituciones donde se realiz el proyecto:
Laboratorio de Inmunologa molecular de la Divisin de Inmunologa

Centro de Investigacin Biomdica de Occidente (CIBO)
Instituto Mexicano del Seguro Social (IMSS)
Unidad Mdica de Alta Especialidad No. 145 (UMAE)

Centro Mdico Nacional de Occidente (IMSS)
Hospital Civil, Fray Antonio Alcalde
Instituto de Ciruga Reconstructiva

Secretara de Salud.
Guadalajara, Jalisco
INSTITUTO MEXICANO DEL SEGURO SOCIAL

CENTRO DE INVESTIGACIN BIOMDICA DE OCCIDENTE
ONCOLOGA AMBIENTAL
Guadalajara, Jalisco a 28 de Julio del 2010
Dr. Carlos Enrique Tene Prez

Director de la Facultad de Medicina
De la Universidad de Colima
Presente
Por medio de este conducto quisiera hacer de su conocimiento que he revisado la

tesis en su ltima versin de mi estudiante Laura Janin Muoz Islas intitulada
Frecuencia de los polimorfismos de los genes CYP1A1 y CYP1B1 en mujeres
con cncer de mama, en Jalisco y verifique que las correcciones que les solicit
fueran incorporadas al manuscrito, por lo cual, considero que es apta para su
presentacin en pleno con el afn de obtener el grado de Maestro en Ciencias.
Sin mas por el momento, quedo de Usted
Atentamente,
Dra. Ruth De Celis Carrillo

Mat. 8637954
Investigador Asociado C N52
Oncologa Ambiental
Divisin de Inmunologa
Centro de Investigacin Biomdica de Occidente CIBO
IMSS
Investigador Nacional Nivel I
UNIVERSIDAD DE COLIMA
Colima, Colima 28 de Julio del 2010
Dr. Carlos Enrique Tene Prez

Director de la Facultad de Medicina
De la Universidad de Colima
Presente
Por medio de este conducto quisiera hacer de su conocimiento que he

revisado la tesis en su ltima versin de mi estudiante Laura Janin Muoz
Islas intitulada Frecuencia de los polimorfismos de los genes CYP1A1 y
CYP1B1 en mujeres con cncer de mama, en Jalisco y verifique que las
correcciones que les solicit fueran incorporadas al manuscrito, por lo cual,
considero que es apta para su presentacin en pleno con el afn de obtener el
grado de Maestro en Ciencias.
Sin ms por el momento, quedo de Usted
Atentamente,
____________________________________
Dra. Elena Margarita Castro Rodrguez
Investigador Titular A
Universidad de Colima
Agradezco de manera especial a:
CONACYT por la beca No.252200 otorgada durante la Maestra en Ciencias Mdicas, realizada en la
Universidad de Colima.
A la Universidad de Colima por abrirme sus puertas y brindarme la oportunidad de seguir con mi preparacin
acadmica y superacin personal.
Al Centro de Investigacin Biomdica de Occidente (CIBO), por su apoyo incondicional durante mi formacin
DEDICATORIAS
A mis padres Felipe y Mary a quien amo y admiro, porque gracias a ellos hoy estoy aqu, por transmitirme la bondad,
constancia y dedicacin. Por su apoyo y confianza, sin ustedes no hubiera podido cumplir mis metas, esta tesis tambin es su
premio.
A Francisco Rico por ser mi fuerza y soporte, por su enorme comprensin y paciencia, pero sobre todo por quererme
incondicionalmente. Gracias amor por impulsar mis sueos.
A mis hermanos Edgar, Alejandra, Felipe y Hctor, por estar conmigo en todo momento y brindarme de su optimismo y
entusiasmo, hacindome ver siempre el lado positivo de las cosas.
A mi cuada y sobrinos con mucho cario, porque me motivaron a seguir adelante.

AGRADECIMIENTOS
A la Dra. Ruth De Celis Carrillo por todo lo que me ha enseado y la confianza que ha depositado en m; sus
consejos, calidad humana, as como su dedicacin han sido fundamentales para dar forma a este trabajo.
A la Dra. Elena Margarita Castro por su disponibilidad y contribucin a lo largo de la maestra.
A mis asesores: Dra. Claudia Beltrn, Dr. Luis Felipe Jave, Dr. Alejandro Bravo y al Dr. Marco Gonzlez
gracias por su dedicacin y apoyo a este proyecto.
A Vernica Preciado Martnez por compartir conmigo no slo conocimientos sino experiencias de vida, pero sobre
todo por permitirme contar con su valiosa amistad todo este tiempo, muchas gracias por escucharme y estar
siempre a mi lado.
A Lupita, Elena y Paola por su oportuna participacin y entusiasmo en este proyecto al hacer ms ameno y
agradable el trabajo diario.
A mis profesores de la Maestra en Ciencias Mdicas por sus conocimientos y experiencias brindadas.
NDICE
ndice de cuadros y figuras
Abreviaturas
Resumen 1
Summary 2
Introduccin 3
Antecedentes 5
Polimorfismo y mutacin 5
Citocromo p450 6
Gen CYP1A1 8
Gen CYP1B1 8
Txicos 9
Cncer de mama 11
Signos y sntomas del cncer de mama 13
Epidemiologa del cncer de mama 13
Factores de riesgo para cncer de mama 15
Justificacin 19
Planteamiento del problema 19
Pregunta de investigacin 19
Hiptesis 20
Objetivos 20
Objetivo general 20
Objetivos particulares 20
Material y Mtodos 21
Diseo de estudio 21
Universo de trabajo 21
Tamao de la muestra 21
Descripcin de grupos de estudio 22
Criterios de seleccin 22
Criterios de inclusin 22
Criterios de exclusin 22
Variables 23
Operacionalizacin de variables 23
Descripcin de las tcnicas 24
Extraccin de ADN 24
Integridad y pureza 28
Deteccin de polimorfismos 32
Amplificacin por PCR 34
Descripcin de enzimas de restriccin 35
Anlisis Estadsticos 36
Consideraciones ticas 36
Resultados 37
Discusin 43
Conclusiones 47
Perspectivas 49
Anexos 51
Anexo I. Carta de consentimiento informado 53
Referencias Bibliogrficas 55
NDICE DE CUADROS Y FIGURAS
FIGURAS
Figura 1. Citocromo p450 6
Figura 2. Modelo 3D del gen CYP1A1 7
Figura 3. Modelo 3D del gen CYP1B1 8
Figura 4. Mamografa 11
Figura 5. Producto amplificado del polimorfismo Ile462Val 37
del gen CYP1A1
Figura 6. Producto digerido del polimorfismo Ile462Val del gen 38
CYP1A1
Figura 7. Producto amplificado del polimorfismo Leu432Val del 38
gen CYP1B1
Figura 8. Producto digerido del polimorfismo Leu432Val del 39
gen CYP1B1
Figura 9. Frecuencias genotpicas y allicas del polimorfismo 42
Ile462Val del gen CYP1A1 en grupo con cncer de mama
y de referencia
Figura 10. Frecuencias genotpicas y allicas del polimorfismo 42
Leu432Val
CUADROS
Cuadro 1. Clasificacin del carcinoma mamario de acuerdo a la OMS 12
Cuadro 2. Principales causas de muerte en Mxico 2005-2030 14
Cuadro 3. Factores que incrementan el riesgo de cncer de mama 17
Cuadro 4. Estrategias de deteccin de los genes de la familia CYP1 31
Cuadro 5. Condiciones de reaccin para la PCR
Cuadro 6. Condiciones de reaccin para la digestin conenzimas 32
de restriccin
Cuadro 7. Frecuencias genotpicas de los polimorfismos Ile462Val 40
y Leu432Val de los genes CYP1A1 y CYP1B1 en grupo con
cncerde mama y de referencia
Cuadro 8. Frecuencias allicas de los polimorfismos Ile462Val y 40
Leu432Val de los genes CYP1A1 y CYP1B1 en grupo
con cncer de mama y de referencia
Cuadro 9. Determinacin de equilibrio Hardy-Weinberg 41
Cuadro 10. Determinacin de Chi cuadrada y valor de P 41
ABREVIATURAS
C Grados centgrados
A Adenina
ADN cido Desoxirribonucleico
AHH Aryl hidrocarburos
Art Artculo
C Citosina
CIBO Centro de Investigacin Biomdica de Occidente
CYP Citocromo p450
dNTPs Desoxinucletidos trifosfatados
EDTA cido etilendiaminotetraactico
G Guanina
GST Glutatin-S-transferasas
gr Gramos
H Horas
Ile Isoleucina
KCl Cloruro de Potasio
Leu Leucina
Lt Litros
MgCl2 Cloruro de Magnesio
mg Miligramo
mL Mililitros
g Microgramo
L Microlitros
min Minutos
mM Milimolar
M Molar
ng Nanogramos
nm Nabometros
NAT N-acetiltransferasas
NaCl Cloruro de sodio
NH4Cl Cloruro de amonio
NH4NCO3 Bicarbonato de amonio
O2 Oxgeno
Pb Pares de bases
PCR Reaccin en Cadena de la Polimerasa
PAHs Hidrocarburos aromticos policclicos
RH Sustrato orgnico
RFLPs Fragmentos de restriccin polimrficos en longitud
rpm Revoluciones por minuto
SDS Dodecilsulfato sdico
seg Segundos
T Timina
Tris-HCl Tris-cido clorhdrico
TE Tris-EDTA
U Unidades
Val Valina
RESUMEN
Introduccin. El citocromo p450 es responsable del metabolismo oxidativo de

los xenobiticos. Su expresin es regulada por variabilidad gentica,
fisiopatolgica y ambiental; y presenta variabilidad en la respuesta
farmacolgica o diferente susceptibilidad a la accin de txicos o carcingenos.
Los genes asociados con el incremento de riesgo para desarrollar cncer de
mama son CYP1A1: (Ile462Val) y CYP 1B1: (Val432Leu).
Objetivo. Estimar la frecuencia de los polimorfismos Ile462Val y Val432Leude
los genes CYP 1A1 y CYP 1B1, en mujeres con cncer de mama.
Metodologa. Estudio descriptivo transversal. Se analizaron muestras de
sangre perifrica de mujeres con cncer de mama, pacientes de varias
instituciones de salud en Guadalajara, Jalisco. Se obtuvo ADN de cada paciente,
se identific el tipo de polimorfismo por medio de la reaccin en cadena de la
polimerasa (PCR) utilizando enzimas de restriccin especficas para los genes
CYP1A1 y CYP1B1, as como electroforesis en geles de agarosa.
Resultados: Se estudi un total de 151 muestras de sangre perifrica (76
grupo con cncer de mama; 75 grupo de referencia). Se utiliz Chi cuadrada
para el anlisis estadstico. El polimorfismo que mayormente se present fue
Ile462Val del gen CYP1A1 en 51 muestras del grupo con cncer de mama
(67.1%) y en 44 muestras grupo de referencia (58.6%); a diferencia del
polimorfismo Leu432Val del gen CYP1B1, el cual slo se present en 25
muestras del grupo con cncer de mama (32.9%) y en 31 de las muestras de
referencia (41.3%). Aunque la frecuencia de las variantes de los genes
estudiados no fue significativamente diferente a la reportada, concluimos que
fue importante identificarlas debido a que podra ser factible considerarlo en la
estimacin de riesgo para desarrollar cncer de mama y para contribuir a la
informacin de toxicidad de ciertas sustancias.
Palabras Claves: Citocromo p450, CYP1A1, CYP1B1, cncer de mama,

polimorfismos.
1
SUMMARY
Background: Cytochrome p450 is responsible for the oxidative metabolism of

xenobiotics. Its expression is regulated by genetic, pathophysiological and
environmental variability in the response showing pharmacological or different
susceptibility to toxic or carcinogenic action. The genes associated with
increased risk of developing breast cancer are CYP1A1 (Ile462Val) and CYP 1B1
(Val432Leu).
Objective. To estimate the frequency of polymorphisms Ile462Val and
Val432Leu gene CYP 1A1 and CYP 1B1 in women with breast cancer.
Methodology. Descriptive cross-sectional study. We analyzed peripheral blood samples of
survivors of breast cancer from different health institutions in Guadalajara, Jalisco. DNA was
obtained from each patient, type was identified through polymorphism chain
reaction (PCR) using specific restriction enzymes CYP1A1 and CYP1B1 genes
and agarose gel electrophoresis.

Results. We studied a total of 151 peripheral blood samples (76 breast cancer
group, 75 control group). Chi square was used for statistical analysis. The
polymorphism Ile462Val presented was mainly the CYP1A1 gene in 51 samples
from breast cancer (67.1%) and 44 samples reference group (58.6%)
Leu432Val polymorphism unlike CYP1B1 gene, which was only present in 25
samples from breast cancer (32.9%) and 31 reference samples (41.3%).
Although the frequency of the variants of the genes studied was not
significantly different from that reported, we conclude that it was important to
identify because it may be feasible to consider in estimating the risk of
developing breast cancer and to contribute to the toxicity of certain information
substances.
Keywords: Cytochrome P450, CYP1A1, CYP1B1, breast cancer,

polymorphisms.
2
INTRODUCCIN
En la actualidad, el cncer de mama es la neoplasia diagnosticada con mayor

frecuencia en las mujeres[3]. En Mxico, de acuerdo al Registro Nacional de
Cncer, se estima que cada da mueren diez mujeres por esta enfermedad. En
el 2005, se registraron 2,861 fallecimientos lo que representa el 21 por ciento,
en comparacin con el 19 por ciento a causa del cncer crvico-uterino [4].
Los principales factores de riesgo para desarrollar cncer de mama son

de tipo gentico y ambiental. Estos ltimos han despertado mayor inters [5] al
observar su trascendencia en la etiologa de algunos tipos de cncer como
prstata o mama [6].
Los efectos a la exposicin a sustancias txicas son variados, por lo cual

las personas no lo perciben como perjudicial para su salud [7-9]; sin embargo,
para nuestra defensa disponemos de sistemas qumicos como el citocromo
p450, el cual tiene como funcin actuar sobre sustancias exgenaspara
convertirlas en formas solubles de fcil excrecin, evitando de esta forma que
se acumulen en el organismo y alcancen concentraciones txicas o letales[2].
Dicho sistema se encuentra compuesto por varias subfamilias

conformadas a su vez por genes, entre ellas:la Familia 1, constituida por:
a) el gen CYP1A1 que contribuye a la desintoxicacin de sustancias como

los hidrocarburos aromticos policclicos (PAHs)[10] y a metabolizar estrgenos,
su polimorfismo con mayor frecuencia es (Ile462Val) [11].
b) El gen CYP 1B1 que se encuentra involucrado en el metabolismo de

PAHs y arilamidas cuyo polimorfismo ms frecuente es (Val432Leu); ambos
asociados con el incremento de riesgo para desarrollar cncer de mama [12].
3
ANTECEDENTES
Polimorfismo y mutacin
Un polimorfismo gentico es una variacin en la secuencia de un sitio

especfico del cido desoxirribonucleico (ADN), debido a la coexistencia de
alelos mltiples en un locus entre los individuos de una poblacin [13]. Cuando
se presentan en una secuencia codificante o reguladora, producen cambios
importantes en la estructura de alguna protena o en el mecanismo de
regulacin de su expresin, traducindose en diferentes fenotipos [14].
Consiste en la sustitucin de una base nitrogenada o puede ser ms complejo
como la repeticin de una secuencia determinada de ADN, donde un porcentaje
de individuos tenga un nmero estipulado de copias de una secuencia
especfica del ADN [15].
Cuando la variacin se observa en por lo menos el 1% de la poblacin,

se puede considerar como un polimorfismo [14]. Es importante destacar, que
slo un nmero muy pequeo de polimorfismos son responsables de
enfermedades genticas, la mayora no tienen efecto sobre el fenotipo.
Se conocen como: mutaciones, cuando los cambios en la secuencia de

bases en el ADN son poco frecuentes, stas son alteraciones en la informacin
gentica, que producen un cambio en las caractersticas, se presentan de forma
sbita y espontnea, y pueden trasmitirse o heredarse a la descendencia [15].
La unidad gentica capaz de mutar, es el gen, por poseer la informacin
hereditaria que forma parte del ADN.
Aunque la replicacin del ADN es muy precisa, no es perfecta; algunas

veces se producen errores, y el ADN nuevo contiene uno o ms nucletidos
cambiados [14].
5
Citocromo p450
En el curso de la evolucin las especies se desarrollaron sistemas de

defensa endgena que les permiti adaptarse y sobrevivir en hbitats y dietas
diferentes. Para cumplir con este objetivo, el hombre y la mayora de los seres
vivos, poseen el sistema citocromo p450 (Fig.1) cuya misin es actuar sobre
sustancias qumicas exgenas, convirtindolas en formas solubles, fcilmente
excretables, evitando que se acumulen en los organismos alcanzando
concentraciones txicas o letales[2].Despus de haber sido encontrado en
diferentes tipos de organismo, se cree que tiene su origen en un gen ancestral
que existi hace ms de tres millones de aos.
Fig. 1. Citocromo p450
El citocromo p450 una hemoprotena con un pico de absorbancia de

450nm, capaz de transportar electrones [2],funciona como una monooxigenasa
que cataliza reacciones en las que solamente incorpora un tomo de oxgeno
(O) en un sustrato orgnico (RH) y el otro se reduce a agua (HO). [16].
En general, las enzimas se clasifican en dos categoras: Fase I, que

cumple la funcin de metabolizar; Fase II, que tiene la misin de conjugar los
sustratos con otros compuestos [17]. El citocromo p450, es una enzima
importante en el metabolismo de fase I, acta dentro de las clulas en
6
compaa de las enzimas fase II, entre las que se encuentran las glutation-S-
transferasas (GST) y las N-acetiltransferasas (NAT). La mayor o menor
actividad de unas y otras tiene como consecuencia que las sustancias exgenas
que llegan a las clulas, resulten inocuas o tengan un efecto txico [2].
Por lo tanto, el citocromo p450 es el responsable de catalizar la

hidroxilacin de mltiples compuestos, as como del metabolismo de
xenobiticos entre los que se encuentran diversas drogas, alcaloides,
carcingenos, pesticidas e hidrocarburos aromticos policclicos (PAHs) [2, 18,
19].
Fig. 2. Modelo 3D gen CYP1A1.
ste sistema, participa activamente en el metabolismo oxidativo de una amplia

variedad de compuestos endgenos talescomo: esteroides, cidos grasos y
prostaglandinas; asimismose encuentra implicado en la sntesis de sustratos [2,
18].
Las duplicaciones de genes repetidos han dado lugar a una de las

mayores familias de mltiples genes.Las enzimas que incluye esta superfamilia
CYP son: CYP1, CYP2, CYP3 y algunas enzimas de CYP4 [18]. La familia CYP1
est constituida por los genes CYP 1A1, CYP 1A2 y CYP 1B1. Los tres se
caracterizan porque pueden ser activados por hidrocarburos aromticos
policclicos (PAHs) [2, 20].
7
El gen CYP 1A1(Fig. 2) constituye la mayor fraccin del citocromo p450

extraheptico. Se localiza en el cromosoma 15 q22-q24, posee siete exones y
seis intrones; esta conformado por 5,810 pares de bases, es una enzima
dominante en la bioactivacin de la fase I de los xenobiticos. Contribuye a la
desintoxicacin de numerosos compuestos, as como a la hidroxilacin de los
aryl hidrocarburos, catalizando la primera etapa del metabolismo de una gran
variedad de hidrocarburos aromticos policclicos (PAHs) [10]. Se encuentra
implicado en el metabolismo del estrgeno, al catalizar la hidroxilacin de 17-
estradiol en la posicin C-2[10, 11, 21].
Fig. 3. Modelo 3D gen CYP1B1
El gen CYP 1A1 codifica para una enzima con actividad aryl-hidrocarburo-
hidrolasa (AHH), que es inducible por ligandos de los receptores de aryl-
hidrocarburos en casi todos los tejidos estudiados, entre los que se encuentran:
linfocitos, tejido pulmonar, glndulas mamarias y placenta. Hasta la fecha han
sido identificados diecinueve polimorfismos de este gen; uno de los ms
comunes es: CYP 1A1*2 el cual consiste en la sustitucin de isoleucina en el
codn 462 por valina (Ile462Val); se asocia con el incremento del riesgo de
distintos tipos de cncer: pulmn, mama, prstata y crvico uterino [11].
Por otra parte, el gen CYP 1B1(Fig. 3) constituye tambin una fraccin
importante del CYP extraheptico con expresin en casi todos los tejidos, como
son: rin, prstata, glndulas mamarias y ovarios. Est localizado en el
8
cromosoma 2p21-p22, constituido por tres exones y dos intrones; similar en

tamao al gen CYP1A1 cuenta con 8.546 pares de bases de longitud.
Es una enzima que cataliza la formacin de genotxicos 4- hidroxi-

estradiol a catecol metabolito estrognico por lo que posee una actividad
estrognica significativa, este metabolito puede experimentar un ciclo redox
generando una mutacin al producir radicales libres que pueden ocasionar
cambios significativos en el ADN y otras estructuras celulares. Esta enzima
tambin est involucrada en el metabolismo de hidrocarburos aromticos
policclicos (PAHs) y arilaminas y se ha sugerido su sobreexpresin en algunos
tumores [12].
El gen CYP 1B1 presenta varios alelos, en la actualidad se han reportado

42 variantes y aqullos con actividad enzimtica reducida han sido asociados
con glaucomas primarios congnitos[22].
El polimorfismo ms comn en CYP1B1 consiste en la sustitucin de Valina en

el codn 432 por Leucina (Val432Leu), este cambio se asocia directamente con
el incremento de riesgo para desarrollar cncer de mama [12, 23].
Txicos
La mayora de los txicos de uso frecuente son capaces de mutar al ADN

y transformar a las clulas hasta entidades totalmente extraas para el
organismo, pueden ejercer efecto estrognico sobre rganos o tejidos y pueden
causar inmunosupresin en los organismos [4].
Existe una larga lista de sustancias txicas, las cuales son consideradas
potencialmente peligrosas para la salud humana como son los hidrocarburos
aromticos policclicos (PAHs) un grupo de ms de cien sustancias qumicas
diferentes, formadas durante la combustin incompleta del carbn, el aceite, el
gas, la basura u otros compuestos orgnicos [24].
9
Desde hace mas de cinco dcadas los PAHs han sido el grupo de
compuestos que mayor inters ha despertado porque son empleados en
mltiples actividades y productos, por esa razn tienen una amplia distribucin
en el planeta, algunos son extremadamente txicos y la mayora son
qumicamente muy estables por lo tanto persisten en el ambiente por largos
perodos de tiempo y son bioacumulables tanto en alimentos como en tejido
adiposo de humanos y animales, de ah la importancia de su estudio [25,
26][4].
La exposicin a sustancias qumicas se lleva a cabo por la actividad
laboral de las personas [27], por la utilizacin o desecho de algunos productos
tales como: combustibles, lacas, pinturas, plsticos, hules, conservadores,
fumigantes, insecticidas, productos de limpieza, cosmticos y alimentos, entre
otros [25, 28, 29], y son pocas las personas que tienden a percibir que esta
exposicin a txicos es perjudicial para su salud [7-9]. Las principales formas
de ingreso al organismo es por inhalacin del aire contaminado; por el consumo
de alimentos con pesticidas; por el uso de frmacos y cosmticos, por el agua
para beber o absorcin drmica [30-32].
Los efectos de la exposicin a cualquier sustancia txica dependen de la dosis,
la duracin, la manera en que las personas estn expuestas, sus hbitos y
caractersticas genticas, as como de la presencia de otras sustancias qumicas
[33].
10
Cncer de mama
Es una enfermedad multifactorial dependiente de hormonas con una

clara relacin positiva a las altas concentraciones endgenas de estrgeno[34].
Representa una proliferacin maligna de clulas epiteliales que revisten los
conductos o lobulillos mamarios [35].
Fig. 4. Mamografa
Las mamas, estn formadas por tejido glandular (tejido conectivo) as

como por tejido graso; del 70 al 80 % del peso total de la mama corresponde al
tejido adiposo. En la mama se encuentran las glndulas productoras de
leche[36] (lobulillos); las cules se encuentran en el tejido de sostn donde
tambin se localizan los conductos, los vasos sanguneos y los linfticos. Estos
ltimos, transportan el lquido linftico cuyo contenido principal son protenas y
clulas del sistema inmunolgico las cuales son llevadas a los ganglios linfticos
11
axilares ubicados sobre la clavcula y otros lo conducen a los ganglios mamarios

internos ubicados cerca del esternn[36].
Al igual que otras neoplasias malignas, el cncer de mama se inicia

cuando una clula normal escapa a los controles habituales de replicacin y se
multiplica sin control. Esta evasin requiere de una acumulacin de mutaciones
en los genes que regulan la divisin celular y aseguran la sntesis y replicacin
del ADN. Ciertas hormonas y algunas sustancias txicas pueden promover
tambin el crecimiento celular anmalo hasta lograr el crecimiento del tumor en
la mama [33].
Los tumores invasivos de mama son histolgicamente heterogneos. Los

tipos de cncer de mama se clasifican histolgicamente en carcinoma ductal in
situ, carcinoma ductal infiltrante (o invasivo), casi el 80% de los casos de
cncer de mama son de este tipo; carcinoma lobular in situ; carcinoma lobular
infiltrante (o invasivo), este tipo de cncer se presenta en el 15% de las
mujeres que desarrollan cncer de mama; y carcinoma inflamatorio,se observa
en cerca del 3% de los casos; entre otros subtipos raros (cuadro 1)[37, 38].
Cuadro 1. Clasificacin del carcinoma mamario de acuerdo a la OMS [37, 38]

Tipo de tumor Clasificacin
Carcinoma lobulillar in situ
No infiltrante
Carcinoma ductal in situ
Carcinoma ductal invasor no especfico (NST)
Carcinoma ductal invasor con extenso componente intraductal
Carcinoma ductal invasor con enfermedad de Pager
Carcinoma lobulillar invasor
Carcinoma medular
Carcinoma muscinoso o coloide
Carcinoma papilar
Carcinoma tubular
Carcinoma adenoide qustico
Invasor
Carcinoma secretor (juvenil)
Carcinoma apcrifo
Carcinoma con metaplasma
Tipo escamoso
Tipo clulas fusiformes
Tipo cartilaginoso y seo
Tipo mixto
Carcinoma inflamatorio
12
En general, el cncer de mama se estratifica utilizando las directrices del Comit

Conjunto Americano del Cncer (American Joint Committee on Cancer AJCC-)
conocida como clasificacin TNM [39-41].
La clasificacin para los subgrupos se realiza con nmeros que van del I
al IV [39-41]. Los ndices de supervivencia relativa a cinco aos, segn el
estadio del cncer son los siguientes: I-98%, IIA-88%, IIB-76%, IIIA-56%,
IIIB-49% y IV-16%[35].
Signos y sntomas del cncer de mama
El indicio ms comn de cncer de mama, es la presencia de una

protuberancia en el seno, dura y fija. En casi la mitad de todos los casos esas
protuberancias suelen crecer cerca de los ganglios de la axila, en la parte
superior y externa de la mama; las cuales pueden llegar a distorsionar la forma
del seno hacindolo parecer ms grande o elevado, dndole un aspecto
asimtrico con respecto al otro seno [42].
El pezn de la mama afectada puede verse escamoso o reseco, retrado
o incluso sumido. En ocasiones puede presentarse salida de lquido por el
pezn, de color amarillento semi traslcido o con sangre [43].
La piel de la mama tambin puede verse afectada observndose
acartonada y con pequeos hoyitos, similar a la de una cscara de naranja.
Otras seales que podemos observar es inflamacin, enrojecimiento, irritacin,
descamacin o grietas en la piel de la mama o del pezn, dolor en el pezn o
en el brazo. As mismo pueden presentarse punzadas o piquetes que llegan
desde los hombros hasta el pezn o que se inician en el pezn y se profundizan
dentro de la mama en los conductos lactferos [43].
Epidemiologa de cncer de mama
Actualmente, el cncer de mama es la neoplasia que con mayor

frecuencia se diagnostica en las mujeres, representa 15% de todos los tipos de
13
cncer [3] es la segunda causa de muerte por cncer en mujeres a nivel

internacional (las 411,000 muertes anuales representan el 14 por ciento de
muertes femeninas por este tipo de cncer) [44].
Segn la Organizacin Mundial de la Salud (OMS) en el ao 2005

murieron 58 millones de personas en todo el mundo, de las cuales casi ocho
millones murieron por cncer, y se estima que en el ao 2015 aumentar a
nueve millones y para el 2030 a ms de once millones de fallecimientos por
cncer.[45-47].
Cuadro 2.Principales causas de muerte en Mxico 2005-2030. Fuente OMS
De acuerdo al Registro Nacional de Cncer, se ha estimado que en

Mxico cada da mueren diez mujeres por cncer de mama y una de cada ocho
mujeres lo desarrolla; por tal razn, en algunos estados del pas esta es la
principal causa de muerte de mujeres en edad reproductiva (entre 15 y 64
aos), 47 por ciento del total de muertes ocurre en mujeres entre 45 y 64 aos,
debido a que el riesgo aumenta con la edad, como sucede con cualquier tipo de
cncer[48].
14
Tan slo en el 2005, a nivel nacional se registraron 2,861 fallecimientos

de mujeres por cncer de mama, lo que representa el 21 por ciento de las
muertes de mujeres por cncer, comparado con el 19 por ciento que murieron
por cncer crvico-uterino.
La incidencia de cncer de mama se ha incrementado en Mxico ao tras

ao. Segn el Sistema Nacional de Informacin en Salud (SINAIS), en el ao
2000 se registr una incidencia de 10,758 y se tiene una estimacin de 19,811
para el ao 2012; esto representa un incremento anual del 1 por ciento en
promedio[47].
La tasa de mortalidad por cncer de mama en mujeres mexicanas se

estim en 14.7 por 100 mil mujeres mayores de 25 aos, con una sobre vida de
38 por ciento dentro de los primeros cinco aos despus de haberse establecido
el diagnstico y de 22 por ciento en los diez aos posteriores al diagnstico[4].
Factores de riesgo para cncer de mama
Cuando el organismo funciona adecuadamente, es capaz de reconocer

microorganismos, virus o clulas que estn daadas o clulas tumorales, y los
destruyen para controlar las infecciones o el crecimiento de tumores[43, 49].
Los principales factores de riesgo para desarrollar cncer de mama son factores
de tipo gentico, principalmente mutaciones en los genes p53, BRCA1, BRCA2,
Her2, Her2Neu, otros son de tipo reproductivo, una menarca temprana (antes
de los 12 aos), menopausia tarda (despus de los 52 aos), uso de hormonas
exgenas (contraceptivos orales, terapia de hormona de reemplazo), edad del
primer embarazo a trmino (despus de los 30 aos), nuliparidad, ausencia de
lactancia materna, pero tambin existen otros factores como malos hbitos en
la alimentacin como exceso de grasas de origen animal, pobre ingesta de
antioxidantes o vitaminas de origen vegetal, ciertas adicciones como
alcoholismo o tabaquismo y drogadiccin, y otros factores de tipo ambiental
como exposicin laboral a txicos o residencia en reas altamente
contaminadas[50].
15
Dos tipos de cambios en el genoma son la acumulacin de mutaciones

somticas y el desarrollo de inestabilidad gentica. Muchos tipos de cncer
tienen un mayor nmero de mutaciones comparado con las clulas normales.
Existe una correlacin directa entre la progresin del tumor y el nmero
de mutaciones. La mutacin de genes reparadores conduce a un aumento en el
dao del ADN y con esto tambin se incrementa la tasa en que las mutaciones
pueden ocurrir. La inestabilidad gentica est reflejada en cambios en el
nmero de genes en clulas cancerosas. Esto puede ser el resultado de
pequeas duplicaciones o deleciones, translocaciones de material de un
cromosoma a otro o incluso cambios que afectan a cromosomas completos. La
inestabilidad cromosmica puede ser causada por complejos o protenas que
actan en la particin (anafase) durante la mitosis (cuadro 2) [51].
Los factores genticos, incluyendo los genes de mayor susceptibilidad,
pueden explicar hasta el 10% de los casos de cncer de mama en pases
desarrollados [22, 52], pero su prevalencia en la poblacin es demasiado baja
para explicar el aumento del uno por ciento anual sostenido a lo largo de los
ltimos 20 aos a nivel internacional. Por lo que se cree, que la mayora debe
ser por lo tanto, una consecuencia a diversas exposiciones ambientales [5], [8,
27, 53].
De hecho recientemente se ha sugerido que el residir cerca de una zona
industrial y estar expuesto a las sustancias contaminantes del ambiente que
derivan de los procesos industriales puede ser la causa potencial del aumento
en las tasas de incidencia de cncer de mama y de la posible variacin en las
tasas alrededor del mundo [6]. Investigaciones recientes han demostrado que
los factores ambientales pueden desempear un papel importante en la
etiologa de algunos tipos de canceres tales como tumores malignos en mama
o prstata[4, 29, 49, 54].
16
Factores de riesgo de cncer de mama Magnitud

de riesgo
Edad incrementada ++
Regin geogrfica (EU y pases del Oeste) ++
Historia familiar de cncer de mama ++
Mutaciones en los genes BRCA1 y BRCA2 ++
Mutaciones en otros genes de alta penetrancia (p53, ATM,
++
NBS1,LKB1)
Exposicin a radiacin ionizante (en la niez) ++
Historia de enfermedad de mama benigna ++
Edad tarda de menopausia (mayor de 54 aos) ++
Factores confirmados Edad tarda de menopausia (mayor de 54 aos) ++
Edad temprana de menarca (menos de 12 aos) ++
Nuliparidad y edad avanzada en el primer embarazo a
++
trmino
Alta densidad en tejido mamario ++
Terapia de remplazo hormonal ++
Uso prolongado de anticonceptivos orales ++
Obesidad en mujeres post-menopusicas +
Consumo de alcohol (una copa por da) +
Estatura alta +
Altos niveles de factor de crecimiento parecido a insulina 1
++
(IGF1)
Altos niveles de prolactina +
Factores probables
Consumo de grasas altamente saturadas +
Polimorfismos en genes de baja penetrancia +
Alto status socioeconmico +
Factores de riesgo de cncer de mama Magnitud
de riesgo
Regin geogrfica (Asia y frica) ++
Edad temprana en el primer embarazo a trmino ++
Alta paridad ++
Lactancia (entre cuatro y seis meses de duracin) ++
Factores confirmados
Obesidad en mujeres premenopusicas ++
Consumo de frutos y vegetales ++
Actividad Fsica ++
Agentes quimiopreventivos ++
Drogas anti-inflamatorias no esteroideas ++
Factores probables
Polimorfismos en genes de baja penetrancia +
Cuadro 3. Factores que incrementan el riesgo de cncer de mama[50]
17
JUSTIFICACIN
Debido a que la mayora de las personas estn expuestas a una mezcla de

txicos presentes en el ambiente, resulta de gran importancia conocer la
frecuencia de los polimorfismos que presentan los genes CYP 1A1 y 1B1 en
mujeres con cncer de mama y que han estado expuestas a txicos en forma
ms prolongada o por ms tiempo. Si se encontrara que alguno de los
polimorfismos es ms frecuente que otros, podra ser factible considerarlo en la
estimacin de riesgo para desarrollar este tipo de cncer en mujeres,
posteriormente est informacin sirva de base para realizar estudios ulteriores
que permitan contribuir a la informacin de toxicidad de ciertas sustancias.
PLANTEAMIENTO DEL PROBLEMA
Si se considera que de los genes en p450 CYP 1A1 y CYP 1B1, codifican para
las enzimas involucradas en el metabolismo de ciertos txicos [2], resulta
importante conocer las frecuencias de los polimorfismos de estos genes en
mujeres con cncer de mama.
PREGUNTA DE INVESTIGACIN
Cul de lospolimorfismos que presentan los genes CYP 1A1 y 1B1 ser ms
frecuente en mujeres que han desarrollado cncer de mama?
19
HIPTESIS DE TRABAJO
Algunos de los polimorfismos que se presentan en los genes CYP 1A1 y 1B1,
entre ellos Ile462Val y Val432Leurespectivamente, estn asociados al cncer de
mama.
OBJETIVOS DE INVESTIGACIN
OBJETIVO GENERAL
Identificar y estimar la frecuencia de los polimorfismosde los genes CYP

1A1 y CYP 1B1 (Ile462Val y Val432Leu, respectivamente) en mujeres
que han desarrollado cncer de mama y en un grupo de referencia,
mediante la reaccin en cadena de la polimerasa (PCR).
OBJETIVO PARTICULAR
Identificar y describir las frecuencias genotpicas y allicas para los

polimorfismos Ile462Val y Val432Leu, en los genes CYP 1A1 y CYP 1B1.
20
MATERIALES Y MTODOS
Diseo del estudio. Transversal.
Universo de trabajo
Mujeres con Cncer de Mama, que fueron pacientes de diferentes Hospitales o

Institutos, tales como la Unidad Mdica de Alta Especialidad No. 145 (UMAE);
Hospital de Especialidades; del Centro Mdico Nacional de Occidente del IMSS,
as como del Hospital Civil, Fray Antonio Alcalde en Guadalajara, Jalisco y del
Instituto de Ciruga Reconstructiva; ambos de la Secretara de Salud.
Tamao de Muestra
Se considero todas las muestras de sangre perifrica de pacientes con

diagnstico de cncer de mama reciente o que tuvieron cncer,
correspondientes al perodo del 1 de enero del 2009 al 31 de diciembre del
2009, de acuerdo a los criterios de inclusin. El nmero total de muestras
seleccionadas fueron 151.
De las cuales 76 pertenece a muestras de sangre perifrica de pacientes con
cncer de mama, y 75 a muestras referencia de sangre perifrica de individuos
del banco de sangre de Centro Mdico Nacional de Occidente (CMNO).
21
Descripcin de grupos de estudio
Casos con cncer de mama. Pacientes que mediante ecosonograma de

mamas o mamografa presenten cncer de mama con diagnstico confirmado
mediante biopsia.
Referencia. Individuos pertenecientes a poblacin en general de los cuales se

desconozcan sus datos clnicos, antecedentes personales y familiares. Este
grupo se consider para establecer parmetros poblacionales de los
polimorfismos que se seleccionaron en el presente proyecto.
CRITERIOS DE SELECCIN
Criterios de inclusin (pacientes)
Mujeres con diagnstico reciente o que tuvieron cncer de mama.

Derechohabientes de la Unidad Mdica de Alta Especialidad No. 145
(UMAE); Hospital de Gineco-obstetricia; Instituto de Ciruga
reconstructiva y; Hospital Civil; Guadalajara, Jal.
Referencia:
Individuos que acudieron al Banco de sangre del CMNO, como
donadores, de quienes se desconocen sus datos clnicos, antecedentes
personales y familiares.
Criterio de exclusin
Muestra de sangre insuficiente, sea perdida involuntariamente, se degrade o

contamine, antes o durante todos los procedimientos del anlisis molecular.
22
VARIABLES
Variable dependiente
Polimorfismos encontrados de los genes CYP1A1 Y CYP1B1.
Polimorfismo: variacin en la secuencia de un lugar determinado del ADN entre

los individuos de una poblacin.
Polimorfismos Gen CYP1A1: Ile462Val

Polimorfismos Gen CYP1B1: Val432Leu
Variable independiente
Como variable independiente se considerar el diagnstico de cncer de mama.
Cncer de mama: Proliferacin acelerada, desordenada y no controlada de

clulas con genes mutados, los cuales suprimen o estimulan la continuidad del
ciclo celular pertenecientes a distintos tejidos de una glndula mamaria.
Cuadro de Operacionalizacin de variables

Variable Interrelacin Naturaleza Medicin Anlisis
Nominal
Polimorfismos Dependiente Cualitativa Dicotmica Chi
CYP1A1 (Ile462Val) y (ausente/presente) cuadrada
CYP1B1 (Val432Leu)
Nominal
Cncer de mama Independiente Cualitativa Dicotmica Chi
(ausente/presente) cuadrada
23
Descripcin de las Tcnicas
Extraccin de ADN.
Se obtuvieron muestras de sangre perifrica de pacientes con cncer de mama.

Se llev a cabo la extraccin de ADN de cada muestra mediante protocolos
previamente descritos. La sangre perifrica (5 mL) se colect en tubos con
EDTA como anticoagulante y la extraccin de ADN se realiz por el mtodo
Miller. La integridad y pureza se determin mediante espectrofotometra y
electroforesis en gel de agarosa al 1.5% teido con bromuro de etidio. Todas
las muestras una vez cuantificadas se ajustaron a 100 g/mL para utilizarlas en
los procedimientos moleculares.
Macromtodo de Miller
Tipo de muestra: Sangre perifrica.
Reactivos Necesarios:
Solucin buffer de lisis

Solucin B
SDS
Proteinasa K
NaCl 6M
Etanol 100%
Etanol 70%
TE
24
Preparacin de reactivos
Solucin buffer de lisis
Pesar 15.4 gr. de cloruro de amonio (NH4Cl) 0.44M y aforar en 2 Lt de agua

destilada.
Pesar 0.158 gr. de bicarbonato de amono NH4NCO3 0.01M.e hidratar en 200 mL

de la solucin de NH4Cl 144 M mezclar y agregar al matraz de la primera
solucin aforar a 2 Lt.
Solucin B Miller.
Sustancias. Mili pH Gramos

moles
Tris base 10 mM 7.5 0.6055
NaCl 40 mM 11.688
EDTA 2 mM 8.0 0.3722
En un Vaso 1000 mL colocar un agitado magntico

Vaciar 350 mL de agua bidestilada
Agregar el tris base ya que est disuelto agregar en NaCl y al final el
EDTA
Ajustar pH a 8.2 (con HCl diluido)
Vaciar a un matraz de 1000 mL llevar a esterilizar
Posteriormente vaciarlo a un matraz volumtrico de 500 mL y aforar con
agua destilada estril, mezclar y almacenar.
SDS al 20%.
Pesar 5 gr. de SDS y disolver en 25mL de agua destilada.
25
Proteinasa K
Reactivo Gramos
Proteinasa K 0.050
SDS 0.5
EDTA 0.0372
Aforar a 50 mL para 100 muestras.
Colocar un agitador magntico limpio poner 35 mL de agua des-ionizada estril

colocar el vaso en un plato con agitador agregar primero el EDTA, ya que est
disuelto, vaciar el SDS (agitar suavemente cuidando que no se forme espuma),
agregar la proteinasa K hasta que se disuelva, vaciar a un tubo de 50 mL y
aforar.
*Cubrir de la luz con papel aluminio.
NaCl 6M
Pesar 35.1gr. de cloruro de sodio (NaCl) en 100 mL de agua destilada.
Etanol al 70%
Tomar 35 mL de etanol al 100% y aforar con 15 mL de agua destilada estril.
TE
Reactivo Gramos
Tris base 0.0605
EDTA 0.0186
Pesar todo en ese orden, disolver y aforar a 50 mL con H2O destilada estril.
26
Equipo
Centrfuga refrigerada
Incubadora
Micro centrifuga
Congelador
Procedimiento
1.- Para obtener el botn se depositarn 10 mL de sangre perifrica con EDTA

ms solucin buffer de lisis hasta aforar los tubos a 35 mL.
2.-Refrigerar por 10 minutos.
3.-Centrifugar a 3900rpm durante 15 min. 4C.
4.-Decantar y lavar el botn con un poco de solucin de lisis con movimiento
circular, retirar el sobrenadante y desbaratar el botn, .despus agregar
solucin de lisis hasta alcanzar un volumen de 25 mL.
5.-Centrifugar nuevamente a 3900 rpm 15 min. a 4C.
6.-Decantar y guardar el botn a -20C (opcional).
7.-Se re suspender el botn en 3 mL de solucin B (bffer de lisis de Miller).
8.-Agregar 200 L de SDS al 10% + 500L de solucin de proteinasa K,
agitar suavemente, 15 seg. en un vrtex.
.9.-Incubar 24-48 h. a 37C.
10.-Despus de incubar se adicionar 1mL NaCl 6M
11.-Agitar en el vrtex durante 15 seg.
12.-Centrifugar a 3900rpm durante 15 min. a -4C.
13.-Se tendr preparados 10 mL de etanol fri al 100% en un tubo de 15 mL,
posteriormente se agrega el sobrenadante y se agita suavemente hasta
precipitar.
14.- Transferir el ADN precipitado en un tubo de 1.5 mL con una pipeta y se
agrega 750L de etanol al 70%.
15.-Centrifugar a 10,000 rpm de 3-5min.
1.6-Decantar el etanol
27
17.-Realizar un segundo lavado con 750L de etanol a 70%, centrifugando a

10,000 rpm durante 3min.
18.-Decantar el etanol y dejar secar a temperatura ambiente.
19.-Agregar bffer TE para re suspender el ADN.
Integridad y pureza
Mtodo Electroforesis en geles de Agarosa
Equipo y Materiales
Cmara para electroforesis horizontal

Cama o soporte para hacer geles
Plancha de calentamiento
Balanza Analtica
Fuente de poder
Peine para hanchura de pozos de 8 dientes
Matraz Erlenmeyer de 100 mL
Guantes
Reactivos
Agarosa
Bffer TBE 1X
Agua Bidestilada
Nota: El gel debe prepararse en el mismo bffer de corrimiento, para
proporcionar las mismas condiciones en el soporte (gel) y en la fase lquida. El
corrimiento se realiza a un voltaje moderado que puede ser de 65 V durante 30
min. (hasta que se separen los colorantes del bffer cargador o jugo azul) y 80
V durante 30 min, dependiendo tambin del tamao del fragmento y de la
cmara de electroforesis.
28
Procedimiento
1. Pesar 0.75 gr. de agarosa y agregar cuidadosamente a un matraz

Erlenmeyer de 150 mL con 50 mL de TBE 1X, a pH de 8.0. Se coloca
sobre la placa para calentar (o en el microondas), se espera a que
comience a hervir.
2. Se agita suavemente el matraz para diluir todos los residuos de
agarosa, hasta que la solucin quede cristalina.
3. Revisar el volumen de la agarosa disuelta y completar (aforar) a 100
mL con TBE 1X, mezclando suavemente por agitacin.
4. Lavar previamente el molde en que se vaciar el gel y la cmara de
electroforesis. Poner el molde en una tabla o mesa nivelada.
5. Esperar a que la temperatura llegue aproximadamente a 55 C para
as aplicar la agarosa en el molde, cuidando que no queden burbujas
en la matriz del gel.
6. Poner el peine y esperar a que gelifique completamente, para
despus remover el peine cuidando de no romper los bordes de los
pozos.
7. Colocar el gel en la cmara de electroforesis y adicionar TBE 1X a un
pH de 8.0 observando que el nivel del bffer este aproximadamente
0.5 1cm por encima de la superficie del gel.
8. Colocar las muestras de ADN (previamente mezcladas sobre un
parafilm con jugo azul) en los pozos del gel. La cantidad depender
del tamao de los pozos.
9. Conectar los cables de la fuente de poder. El voltaje debe estar en un
rango de 60 a 80 V. Recordar que el ADN tiene una migracin
andica: tiene carga negativa (-) y migrar hacia el ctodo (+) o polo
positivo.
Anotar condiciones de corrimiento para cada experimento particular.
29
Rango de separacin de ADN en geles de agarosa

Cantidad de Agarosa en el gen Rango de separacin efectivo de ADN en
(% [peso/volumen]) geles de agarosa
0.3 5-60
0.6 1-20
0.7 0.8-10
0.9 0.5-7
1.2 0.4-6
1.5 0.2-3
2.0 0.1-2
Mtodo de tincin con bromuro de etidio
Equipo y material
Lmpara de luz ultravioleta o transiluminador

Mscaras protectora de luz ultravioleta
Charola para colocar el gel
Gasas
Guantes
Reactivos
Solucin de bromuro de etidio

Agua bidestilada
Procedimiento
1. Colocar el gel en un envase plano (preferiblemente de vidrio) con 300

mL de solucin de bromuro de etidio en 300 mL de agua destilada por 5-
15 min.
30
2. Pasar el gel a una charola con agua bidestilada por 1 2 min. Segn se
requiera.
3. Observar el gel con el ADN en el transiluminador de luz UV utilizando la
proteccin adecuada.
Mtodo para cuantificacin de ADN
Para cuantificar la cantidad de ADN o ARN, deben tomarse las lecturas de la

densidad ptica (DO) o absorbancia a 260 nm y 280 nm. La lectura a 260 nm
permite calcular la concentracin de cido nucleico en la muestra. Una DO de 1
corresponde a aproximadamente 50 g/mL de ADN de doble cadena, 40 g/ml
de ADN de cadena sencilla y ARN, y alrededor de 20 g/mL de oligonuclotidos
de cadena sencilla. La tasa entre las lecturas a 260 nm y 280 nm (DO260/ DO280)
proporciona un estimado de la pureza del cido nucleico.
Las preparaciones puras de ADN o ARN tienen valores de DO260/DO280 de
1.8 y 2, respectivamente. Si hay una confirmacin con protenas o fenol, este
valor ser significativamente menor y no ser posible la cuantificacin exacta
del cido nucleico.
Procedimiento
1. Las muestras perfectamente homogneas se bajan en la
microcentrfuga.
2. Encender en el espectro la lmpara de luz UV, si es computarizada
utilizar el programa para cidos nucleicos.
3. Ajustar con el blanco el espectro, midiendo 1000 L de agua bidestilada
o inyectable en la celdilla de cuarzo para el espectrofotmetro.
4. Rotular un tubo de 1.5 mL por cada muestra.
5. Colocar 995 L de agua MilliQ en cada tubo.
6. Adicionar 5 L de ADN a su tubo correspondiente.
7. Para cuantificar se coloca el contenido de cada tubo en la celdilla de
cuarzo, agitar perfectamente la solucin y leer la muestra.
31

8. Se repiten los pasos 3 al 7 para cada muestra.
9. Registrar las lecturas de densidad ptica (DO) a 260 nm y 280 nm, para
calcular la cantidad de pureza del ADN.
Frmula para calcular la concentracin del ADN

Considerando que:
50 g/mL de ADN de doble hebra absorben 1 DO a 260 nm.
La relacin de lecturas de DO 260 nm/DO 280 nm nos proporciona
una estimacin de la pureza de los cidos nucleicos. Las
preparaciones puras de ADN presentan valores aproximados de 1.7 a
2.0.
CONCENTRACIN DE ADN (g/mL) = (DO 260nm) (Factor de dilucin) (50)
El factor de dilucin en este caso es el volumen total de la celdilla entre el

volumen de la muestra (en este caso 200/1 0 200).
Deteccin de polimorfismos
Para la deteccin de los polimorfismos se disearon protocolos de PCR/RFLP, la

descripcin de cada uno se muestra en el cuadro 3.
T de Producto Enzima de Corte de

Gen Polimorfismo Iniciadores alineamiento amplificado restriccin Enzima
(C)
(pb)
F:5GGC CCC AAC TAC TCA GAG GCT

CYP1A1 (Ile462Val) 3 56 147 MspI C CGG
R:5 GC TGA GCA ATC TGA CCC TA 3
F:5 AAT TTC AGC TTG CCT CTT G 3
CYP1B1 (Val432Leu) R:5 TCA CTT GCT TTT CTC TCT CC 3 55 113 AcuI CTGAAG_N(16)
Cuadro 4. Estrategias de deteccin de los genes de la familia CYP1. Iniciadores y

enzima de restriccin correspondiente para la genotipificacin de cada polimorfismo.
32
Para la seleccin de los polimorfismos de los genes CYP1A1 Y CYP1B1 se

consult la base de datos SNP del NCBI. Se disearon iniciadores especficos a
partir de la secuencia obtenida del
GenBankhttp://www.ncbi.nlm.nih.gov/Genebank para la amplificacin de
fragmentos de ADN que contiene a los polimorfismos seleccionados de los
genes CYP1A1 Y CYP1B1 mediante el programa OligoTM v6.0.
Se llev a cabo la estandarizacin a partir de las condiciones de reaccin
mostradas en el cuadro 4 tanto para amplificacin por PCR como para la
reaccin de digestin con enzimas de restriccin mostradas en el cuadro 5 para
la deteccin de los polimorfismos del cuadro 3.
Reactivos Concentracin L por reaccin

Muestra DNA 500ng/L 1
Iniciador 1 (foward) 15 pmol/L 1.5
Iniciador 2 (reverse) 15 pmol/L 1.5
dNTPs 100nM 2
Bffer 10 x (Mg+) 1X 2.5
HO cbp 25 L 16.5
Taq pol 0.5 U 0.2
Volumen total por - 25
tubo
Cuadro 5. Condiciones de reaccin para la PCR.
*Mg+, mercurio
*Taq pol
Reactivos Concentracin L por reaccin

Bffer (depende de cada enzima) 1X 2
Enzima de restriccin 1U 0.2
Agua cbp 20 L 2.8
Producto amplificado - 15
Volumen final 20
Cuadro 6. Condiciones de reaccin para la digestin con enzimas de restriccin.
33
Tcnica Reaccin en Cadena de la Polimerasa (PCR)
La Reaccin en Cadena de la Polimerasa o PCR (por sus siglas en ingls

Polymerase Chain Reaction) es un mtodo que permite la amplificacin
selectiva in vitro de secuencias especficas del ADN blanco a partir de una
fuente heterognea y grande como el ADN genmico.
Condiciones
95 C/4min
95 C/10seg
60 C/30seg
72 C/1 1/2min
72 C/5min
Ciclos: 35
Paso 1.-Se preparar Mix1, en un tubo estril de 0.2 L (en hielo) de la

siguiente manera:
MIX1 Volmenes
cDNA 1.0 L
Primer 1 1.5 L
Primer 2 1.5 L
H2O 1.5 L
= 5.5 L
Paso 2.-Se preparar Mix2 cbp todas las relaciones del paso anterior en un tubo
de 2 ml estril (en hielo).
Paso 3.- Agregar 15.0 l de la Mix2 a cada tubo del paso 1 (trabajar en hielo)
Paso 4.-Homogenizar cada tubo y colocar en el termociclador.
34
Descripcin de enzimas de restriccin
MspI
Sitio de reconocimiento: C CGG

GCC G
Temperatura de reaccin: 37 C
Concentracin: 5 U/L46
AcuI
Sitio de reconocimiento: CTGAAGNNNNNNNNNNNNNNNNN ... ...

GACTTCNNNNNNNNNNNNNNNNN ... ...
Temperatura de reaccin: 37 C
Concentracin: 10 U/L
35
Anlisis Estadstico
Se realiz conteo gnico para establecer frecuencias gnicas y

genotpicas y mediante la prueba de 2 de bondad de ajuste se calcul el
equilibrio Hardy-Weinberg. Las frecuencias de los genotipos fueron
2
determinadas por conteo genotpico y la prueba estadstica fue .
Se calcul un Intervalo de Confianza de 95 % para las mediciones
obtenidas y un valor de p < 0.05 se considero significativo.
Consideraciones ticas
El protocolo de estudio fue elaborado de acuerdo con la Norma Oficial

Mexicana en materia de investigacin en humanos y de acuerdo con las normas
de biotica que establece al respecto en la Ley General de Salud de la
Repblica Mexicana haciendo hincapi en los artculos estipulados en el titulo
segundo captulo I (Art.13, 14, 15, 16). Conforme al artculo 17 el presente
proyecto se encuentra en la categora de investigacin con riesgo mnimo [55].
Durante todo el estudio, se observaran los lineamientos definidos en el tratado
de Helsinki y en las enmiendas realizadas a ste, en Tokio, en relacin con la
realizacin de investigacin en humanos [56].
36
RESULTADOS
Poblacin estudiada
Se captaron un total de 151 muestras de sangre perifrica que se

clasificaron en 76 casos (con cncer de mama) y 75 individuos de referencia
(poblacin general) para establecer parmetros poblacionales de los
polimorfismos.
Anlisis Molecular
Las figuras 4 y 5 muestran la amplificacin y digestin del polimorfismo

Ile462Val del gen CYP1A1. El fragmento amplificado tiene un tamao de 147
pb. En la digestin con la enzima MspI se observaron dos bandas de 90 y 61
pb.
147 pb
Figura 5. Producto amplificado del polimorfismo Ile462Val del gen CYP1A1. Gel de
agarosa al 1.5% teido con bromuro de etidio. El producto amplificado observado en todos los
carriles es de 147 pb, M: escalera de 100 pb.
37
Figura 6. Producto digerido del polimorfismo Ile462Val del gen CYP1A1. Gel de agarosa al 1.5%
teido con bromuro de etidio. Se observan dos bandas de 90 y 61 pb. Genotipos en nmeros negros:
genotipo 1, Ile/Ile (carriles 1,3,5,6,7), genotipo 2, Ile/Val (carriles 2,4,8,9,10,11,13) y genotipo 3, Val/Val
(carril 12).
Se detect el polimorfismo Leu432Val del gen CYP1B1 al amplificar un producto

de 113 pb y digestin de este con la enzima AcuI donde se observaron dos
bandas de 95 y 75 pb lo que se muestra en las figuras 6 y 7.
Figura 7. Producto amplificado del polimorfismo Leu432Val del gen CYP1B1. Gel de agarosa al
1.5% teido con bromuro de etidio. El producto amplificado observado en todos los carriles es de 113 pb,
M: escalera de 100 pb.
38
Figura 8. Producto digerido del polimorfismo Leu432Val del gen CYP1B1. Gel de agarosa al 1.5%
teido con bromuro de etidio. Genotipos en nmeros negros: genotipo 1, Leu/Leu (carril 1), genotipo 2,
Leu/Val (carriles 4,5) y genotipo 3, Val/Val (carril 3).
Anlisis estadstico
Mediante conteo gnico se realiz la determinacin de la frecuencia de

los polimorfismos Ile462Val y Leu432Val de los genes CYP1A1 Y CYP1B1 en
mujeres con cncer de mama. Se determin la frecuencia de los polimorfismos
mencionados en poblacin en general (referencia) para determinar si los
genotipos se encontraban en equilibrio Hardy-Weinberg, ya que los
polimorfismos no han sido analizados en poblacin Mexicana por lo que se
desconocen sus frecuencias en sta.
El polimorfismo que mayormente se present fue Ile462Val del gen CYP1A1 en
51 casos de mujeres con cncer de mama (67.1%) y en 44 muestras de la
poblacin de referencia (58.6%) a diferencia del polimorfismo Leu432Val del
gen CYP1B1 que se present slo en 25 casos de mujeres con cncer de mama
(32.9%) y en 31 de las muestras de referencia (41.3%). La frecuencia de los
polimorfismos analizados en los grupos cncer de mama y en la poblacin de
referencia se muestra en el cuadro 6 y 7.
39
Polimorfismo Genotipos Ca mama Referencia

Casos (porcentaje) Casos (porcentaje)
AA 10 (19.60) 13 (29.54)
Ile462Val AG 18 (35.29) 11 (25)
GG 23 (45.09) 20 (45.45)
Total 51 44
GG 7 (28) 10 (32.25)
Leu432Val GC 10 (40) 12 (38.70)
CC 8 (32) 9 (29.03)
Total 25 31
Cuadro 7. Frecuencia genotpica de los polimorfismos Ile462Val y Leu432Val de los genes

CYP1A1 y CYP1B1, en grupo con cncer mama y de referencia.
Polimorfismo Alelos Ca mama Referencia

Casos (porcentaje) Casos (porcentaje)
A 37 (36.27) 29 (32.95)
Ile462Val G 65 (63.72) 59 (67.04)
Total 102 88
G 17 (34) 42 (67.74)
Leu432Val C 33 (66) 20(32.25)
Total 50 62
Cuadro 8. Frecuencia allica de los polimorfismos Ile462Val y Leu432Val de los genes CYP1A1
y CYP1B1, en grupo con cncer de mama y de referencia.
Los genotipos de los polimorfismos Ile462Val y Leu432Val de los genes CYP1A1

Y CYP1B1, se encuentran en equilibrio Hardy-Weinberg. Las consideraciones
estadsticas entre los grupos se describen en el cuadro 8.
40
Polimorfismo Ca mama Referencia

Ile462Val 2=2.5851 2= 0.4084
P= 0.0582 P=0.4152
2
Leu432Val =1.1918 2=1.8476
P=0.5494 P=0.3970
Cuadro 9. Determinacin de equilibrio Hardy-Weinberg de la distribucin de los genotipos de los

polimorfismos Ile462Val y Leu432Val de los genes CYP1A1 y CYP1B1 en los grupos de estudio.
La determinacin de la prueba de chi cuadrada y el valor de p de los

polimorfismos Ile462Val y Leu432Val de los genes CYP1A1 y CYP1B1 se
describen en el cuadro 9.
Polimorfismo Ca mama Referencia

% %
Ile462Val 67.10 58.66
Leu432Val 32.89 41.33
2 = 0.47870634 2 = 0.67709214
P = 0.7921 P = 0.2785
Cuadro 10. Determinacin de chi cuadrada y valor de p en los polimorfismos Ile462Val y Leu432Val
de los genes CYP1A1 y CYP1B1.
41
Las frecuencias genotpicas y allicas para los polimorfismos Ile462Val y

Leu432Val de los genes CYP1A1 Y CYP1B1 se muestran en la figura 8 y 9
respectivamente.
Figura 9. Frecuencias genotpicas y allicas del polimorfismo Ile462Val del gen CYP1A1 en
grupo con cncer de mama y de referencia
Figura 10. Frecuencias genotpicas y allicas del polimorfismo Leu432Val del gen CYP1B1 en
el grupo con cncer de mama y grupo de referencia
42

DISCUSIN
En mujeres, el cncer de mama es una de las principales causas de muerte. La

complicacin ms frecuente es la invasin, la cual puede presentarse por un
gran nmero de factores entre los cuales estn un diagnstico tardo o errneo,
antecedentes familiares y la susceptibilidad personal hacia la metstasis. En la
bibliografa internacional numerosos estudios describen y clasifican los genes
que intervienen o participan en el cncer de mama. El presente estudio analiza
los genes que se asocian al incremento del riesgo de cncer de mama mediante
la identificacin de genotipos particulares. Los polimorfismos Ile462Val y
Leu432Val de los genes CYP1A1 y CYP1B1 respectivamente, no han sido
analizados en poblacin Mexicana, nicamente se han estudiado en poblacin
Caucsica y China pero con asociacin a otro tipo de cncer como el de
pulmn.
Existen varios factores que pueden alterar no slo la produccin, sino tambin
la exposicin a las hormonas endgenas, como la edad de la menarqua, edad
del primer embarazo a trmino, nmero de embarazos y la edad de la
menopausia, y muchos de estos factores tienen un efecto adicional en el riesgo
de desarrollar cncer de mama[5, 34, 57]. Por lo tanto, los genes implicados
en el metabolismo de las hormonas sexuales son candidatos a genes de
susceptibilidad para desarrollar cncer de mama.
Los genes que estn en la ruta de biosntesis de hormonas sexuales pueden

afectar la sntesis y el periodo de exposicin del estrgeno ms activo, el
estradiol. Los genes que se encuentran en esta va son los de la familia de
CYP.[45, 46]
En este estudio nosotros consideramos importante estudiar estos genes debido
a que muchos txicos ambientales tienen la capacidad de ingresar al organismo
y competir por el sitio activo del receptor a estrgeno con lo cual sin tener una
naturaleza de hormona, se comportan como tal y pueden ejercer algunas de las
43
funciones que se han descrito para las hormonas, en particular, para los
estrgenos, como son la capacidad de incrementar el ndice mittico en muchos
tipos de clulas, pero algunos txicos adicionalmente tambin pueden inducir
mutaciones e inmunosupresin[4, 58]. Por esta razn muchos hidrocarburos
han sido llamados xenoestrgenos y han sido asociados al incremento del
riesgo para desarrollar algunos tipos de tumores malignos, en especial aquellos
que son de tipo hormono-dependiente como es el cncer de mama o el de
prstata [29, 49, 58].
En particular la CYP1A1 es una enzima extraheptica. Su expresin

constitutiva es muy baja, pero es muy inducible por ligandos del receptor Ah
(hidrocarburos aromticos policclicos, dioxinas, humo del tabaco y otros
xenoestrgenos) por lo que la exposicin a estos compuestos aumenta de
forma significativa sus niveles en tejidos como el pulmn, la placenta, la
glndula mamaria o los linfocitos [10, 11, 59].
En otras poblaciones estudiadas anteriormente algunas de las variantes

polimrficas, se han relacionado con una mayor incidencia del cncer de
pulmn en algunos grupos de poblacin, sin embargo no haba evidencia de un
riesgo mayor de desarrollar cncer de mama entre las mujeres que
presentaban alguna de las variantes polimrficas de los genes CYP1A1 o
CYP1B1. [12, 20, 60]
Ningn reporte anterior demostr un aumento de riesgo de cncer de
mama asociado con algn polimorfismo en particular de estos genes. Sin
embargo, se public recientemente un meta-anlisis que inform de un OR de
0.91 (IC 95% 0.79, 1.04) asociado con la condicin de ser heterocigoto Asn/Ser
y un OR de 0.85 (95% IC 0,54, 1,34) asociado con la condicin de ser
homocigoto Ser/Ser para estos genes y un riesgo mayor para desarrollar cncer
de mama[23]. Esto es importante debido a algunas variantes polimrficas de
los genes CYP1A1 y CYP1B1 han mostrado ser funcionalmente ms eficientes
en su actividad cataltica para la conversin de estrgeno a 4-hidroxi-estrgeno
44
y de algunos txicos en compuestos menos agresivos, por medio de procesos

de metilacin, as como diferentes respuestas ante la exposicin a txicos y
niveles de dao al ADN, este mecanismo puede ser el ms relevante en la
presentacin de una enfermedad benigna del tejido mamario y su progresin
hasta cncer de mama, incluso con la formacin de metstasis[61-63].
Nuestros resultados mostraron que el polimorfismo que mayormente

se present fue Ile462Val del gen CYP1A1 en 51 casos de mujeres con cncer
de mama (67.1%) y en 44 muestras de la poblacin de referencia (58.6%) con
un valor de p=0.7921; a diferencia del polimorfismo Leu432Val del gen CYP1B1
que se present slo en 25 casos de mujeres con cncer de mama (32.9%) y
en 31 de las muestras de referencia (41.3%) con un valor de p=0.2785.
Consideramos que pese a que nuestra muestra fue pequea, la

diferencia que encontramos puede sugerir que debido a que las enzimas
CYP1A1 y CYP1A2 juegan un papel importante en la activacin de algunos pro-
carcingenos, convirtindolos en metabolitos intermediarios que pueden unirse
al ADN originando mutaciones[1],y que la CYP1A1 activa el beno(a)pireno y
otros hidrocarburos aromticos policclicos, y participa fundamentalmente en la
activacin de nitrosaminas, aflatoxina B1 y aminas aromticas[59, 64], con las
cuales muchas personas tienen exposicin no slo por actividad laboral o por
lugar de residencia, sino tambin por txicos que son ingeridos en los
productos para la alimentacin o para uso domestico, y es muy posible que la
variante polimrfica que nosotros encontramos como ms frecuente, no sea la
ms apta para el adecuado metabolismo de los txicos y que muchas de las
mujeres que desarrollaron este tipo de tumor hubieran sido susceptibles por
esta deficiencia en esta enzima.
En el caso del CYP1B1 que tambin se expresa de forma constitutiva en el
rin, prstata, glndula mamaria o el ovario, pero no en el hgado [12, 61]. Y
que en general su expresin basal (en situaciones de no induccin) es mayor
que la del CYP1A1 y que participa tanto en el metabolismo de estrgenos como
45
de hidrocarburos aromticos policclicos y de aminas heterocclicas [19, 22, 61,

62]. Para este gen del CYPlB1 se han descrito diferentes variaciones allicas
algunas de las cuales se traducen en una alteracin funcional [22, 63]. Se ha
sugerido un posible papel del enzima como modulador de ciertos procesos de
crecimiento y diferenciacin, as como una sobreexpresin del mismo en
algunos tumores[12, 62]. Sin embargo, en este estudio nosotros observamos
que esta variante Leu432Val del gen CYP1B1 (32.9%) que fue encontrada para
esta poblacin estudiada no fue significativamente diferente a la reportada para
la variante Ile462Val del gen CYP1A1(67.1%), lo cual podra tener explicacin
en el tipo de agentes txicos a los que estuvieron expuestas estas pacientes o
sus factores de exposicin a estrgenos endgenos que pudieron jugar un
papel importante como ya lo hemos mencionado.
Es importante sealar que las limitantes principales de este estudio fue el

de encontrar personas que de acuerdo a los criterios de inclusin desearan
participar en el estudio, lo cual redujo nuestro universo de trabajo. Sin
embargo, aun cuando nuestra poblacin de estudio fue pequea la posibilidad
de identificar la frecuencia de los polimorfismos de los genes de la familia CYP1
fue importante debido a que podra ser factible considerarlo en la estimacin
de riesgo para desarrollar cncer de mama y para contribuir a la informacin de
toxicidad de ciertas sustancias.
46
CONCLUSIONES
Los resultados del presente estudio indican una clara diferencia en la

frecuencia de los polimorfismos Ile462Val del gen CYP1A1 en 51 casos de
mujeres con cncer de mama (67.1%) y en 44 muestras de la poblacin de
referencia (58.6%) a diferencia del polimorfismo Leu432Val del gen CYP1B1
que se present slo en 25 casos de mujeres con cncer de mama (32.9%) y
en 31 de las muestras de referencia (41.3%). Siendo el polimorfismos del gen
CYP1A1 el que con mayor frecuencia se observ en el grupo con cncer de
mama, a diferencia del grupo tomado como referencia.
47

PERSPECTIVAS
La identificacin y estimacin de la frecuencia de los polimorfismos de los

genes de la familia CYP1, es importante debido a que podra ser factible
considerarlo en la estimacin de riesgo para desarrollar cncer de mama y para
contribuir a la informacin de toxicidad de ciertas sustancias.
Es necesario hacer un estudio con un mayor tamao de muestra, ya que

el anlisis estadstico puede encontrarse en el lmite de la diferencia
significativa, por el reducido nmero de individuos analizados debido a las
dificultades tcnicas para conseguir muestras.
El cncer de mama es una enfermedad hetergenea debido a sus

mltiples formas de presentacin, es por esto que es importante realizar otros
estudios que permitan determinar la distribucin de los polimorfismos en todo
el pas, as como su interaccin con otros factores tanto genticos como
ambientales
Es el primer estudio en nuestro conocimiento que realiza una estimacin de la

frecuencia de los polimorfismos presentados asociados con el incremento del
riesgo para cncer de mama en poblacin Mexicana. Es necesario incrementar
el nmero de polimorfismos de los genes estudiados para poder analizar de qu
manera contribuyen al desarrollo de este tipo de tumor y de esta forma poder
considerarlo, en un futuro, en la estimacin de riesgo.
49

ANEXOS



Anexo I. Carta Consentimiento Informado
Guadalajara, Jalisco a _____de_____del 200_
A quien corresponda:
Por este medio comunico que se me ha informado con detalle, los objetivos, alcances y
beneficios del proyecto de investigacin Frecuencia de los polimorfismos de los genes CYP1A1
y CYP1B1 en mujeres con Cncer de Mama, en el cual deseo participar libre y voluntariamente.
Se me ha explicado claramente que mi participacin consiste, en permitir que el personal

responsable del proyecto, me realice preguntas para la elaboracin de mi historia clnica, que
me tomen muestras de sangre, en las fechas que se me indique. Asimismo estoy informada que
voy a recibir los resultados de mis estudios y que puedo solicitar mas informacin si tuviera
alguna duda en cuanto a ellos.
Se me ha indicado tambin, que puedo dejar de participar en el proyecto en el momento en

que yo as lo desee y que esta decisin no tendr ninguna consecuencia negativa para m, ni
para recibir la atencin mdica que requiera.
____________________________________
Nombre y firma del participante
Domicilio ____________________________
Telfono ____________________________
____________________________ _________________________
Nombre del Testigo Firma del Testigo
____________________________ ______________________________
Investigador Responsable
Dra. Ruth De Celis Carrillo Biol. Laura Janin Muoz Islas
Lab. de Oncologa Ambiental Lab. Oncologa Ambiental
Divisin de Inmunologa, CIBO, IMSS Divisin de Inmunologa, CIBO, IMSS
53

REFERENCIAS BIBLIOGRFICAS
1. Santiago, C.F.B.y.F.G.G., Citocromo P450: Papel como marcador
biolgico. Medicina del Trabajo, 2002: p. 130-140.
2. Santiago, F.B.y.F.G.-G., CITOCROMO P450: PAPEL COMO MARCADOR
BIOLGICO. Medicina del Trabajo, 2002: p. 130-140.
3. Parkin, D.M., et al., Global cancer statistics, 2002.CA Cancer J Clin, 2005.
55(2): p. 74-108.
4. De Celis, R.Morgan G., et. al. , Breast cancer and exposure to aromatic
hydrocarbon. e-Gnosis online 2006. 02-09 DOI: .
5. Boffetta, P. and F. Nyberg, Contribution of environmental factors to
cancer risk. Br Med Bull, 2003. 68: p. 71-94.
6. Laden, F., et al., 1,1-Dichloro-2,2-bis(p-chlorophenyl)ethylene and
polychlorinated biphenyls and breast cancer: combined analysis of five
U.S. studies. J Natl Cancer Inst, 2001. 93(10): p. 768-76.
7. Kroenke, C.H., et al., Caregiving stress, endogenous sex steroid hormone
levels, and breast cancer incidence. Am J Epidemiol, 2004. 159(11): p.
1019-27.
8. Rushton, L., How much does the environment contribute to cancer?
Occup Environ Med, 2003. 60(2): p. 150-6; quiz 156, 80.
9. Tse, L.A. and I.T. Yu, Re: 'Occupational exposures and risks of liver
cancer among Shanghai female textile workers--a case-cohort study'. Int
J Epidemiol, 2006. 35(5): p. 1359.
55
10. Masson, L.F., et al., Cytochrome P-450 1A1 gene polymorphisms and risk
of breast cancer: a HuGE review. Am J Epidemiol, 2005. 161(10): p.
901-15.
11. Kisselev, P., et al., Association of CYP1A1 polymorphisms with differential
metabolic activation of 17beta-estradiol and estrone. Cancer Res, 2005.
65(7): p. 2972-8.
12. De Vivo, I., et al., Association of CYP1B1 polymorphisms and breast
cancer risk.Cancer Epidemiol Biomarkers Prev, 2002. 11(5): p. 489-92.
13. Tamarn., H.R., Principios de Gentica. Revert ed. 1996. 250-51.
14. Stanfield, W.D., Gentica. Mc Graw Hill ed. 1992. 340-343.
15. Lewin, B., Genes VII. Oxford University Press ed. Vol. I. 2000. 41-4.
16. Lai, J., et al., CYP gene polymorphisms and early menarche. Mol Genet
Metab, 2001. 74(4): p. 449-57.
17. Orellana, M. and V. Guajardo, [Cytochrome P450 activity and its
alteration in different diseases]. Rev Med Chil, 2004. 132(1): p. 85-94.
18. McFadyen, M.C., W.T. Melvin, and G.I. Murray, Cytochrome P450
enzymes: novel options for cancer therapeutics. Mol Cancer Ther, 2004.
3(3): p. 363-71.
19. Green, R.M., et al., Reactive oxygen species from the uncoupling of
human cytochrome P450 1B1 may contribute to the carcinogenicity of
dioxin-like polychlorinated biphenyls. Mutagenesis, 2008. 23(6): p. 457-
63.
56
20. Mense, S.M., J. Chhabra, and H.K. Bhat, Preferential induction of
cytochrome P450 1A1 over cytochrome P450 1B1 in human breast epithelial
cells following exposure to quercetin. J Steroid Biochem Mol Biol, 2008.
110(1-2): p. 157-62.
21. Taylor, R.T., et al., Roles of coactivator proteins in dioxin induction of
CYP1A1 and CYP1B1 in human breast cancer cells. Toxicol Sci, 2009.
107(1): p. 1-8.
22. Dong, L.M., et al., Genetic susceptibility to cancer: the role of
polymorphisms in candidate genes. Jama, 2008. 299(20): p. 2423-36.
23. Paracchini, V., et al., Meta- and pooled analyses of the cytochrome P-450
1B1 Val432Leu polymorphism and breast cancer: a HuGE-GSEC review.
Am J Epidemiol, 2007. 165(2): p. 115-25.
24. ATSDR and A.f.t.s.a.d. registry, Toxicological profile for polycyclic
aromatic hydrocarbons (PAHs). in Polycyclic aromatic hydrocarbons
(PAHs). 2002: Atlanta, G.A.
25. Bonner, M.R., et al., Breast cancer risk and exposure in early life to
polycyclic aromatic hydrocarbons using total suspended particulates as a
proxy measure. Cancer Epidemiol Biomarkers Prev, 2005. 14(1): p. 53-
60.
26. Burns, C., et al., A cancer incidence and mortality study of Dow Chemical
Canada Inc. manufacturing sites. Occup Med (Lond), 2005. 55(8): p.
618-24.
57
27. Gunier, R.B., et al., Estimating exposure to polycyclic aromatic
hydrocarbons: a comparison of survey, biological monitoring, and
geographic information system-based methods. Cancer Epidemiol Biomarkers
Prev, 2006. 15(7): p. 1376-81.
28. Roberts, R.J., J. Steward, and G. John, Cement, cancers and clusters: an
investigation of a claim of a local excess cancer risk related to a cement
works. J Public Health Med, 2003. 25(4): p. 351-7.
29. Engel, L.S., et al., Pesticide use and breast cancer risk among farmers'
wives in the agricultural health study. Am J Epidemiol, 2005. 161(2): p.
121-35.
30. McElroy, J.A., et al., Potential exposure to PCBs, DDT, and PBDEs from
sport-caught fish consumption in relation to breast cancer risk in
Wisconsin. Environ Health Perspect, 2004. 112(2): p. 156-62.
31. Fawell, J. and M.J. Nieuwenhuijsen, Contaminants in drinking water. Br
Med Bull, 2003. 68: p. 199-208.
32. Rusiecki, J.A., et al., Cancer incidence among pesticide applicators
exposed to atrazine in the Agricultural Health Study. J Natl Cancer Inst,
2004. 96(18): p. 1375-82.
33. Hoyer, A.P., et al., Organochlorine exposure and risk of breast cancer.
Lancet, 1998. 352(9143): p. 1816-20.
34. Hankinson, S. and D. Hunter, Breast cancer. Textbook of cancer
epidemiology. 2002, New York. 301-39.
58
35. PD, S. Cuadro clnico del cncer de mama. Exmenes de laboratorio.
[cited 2007; Available from:
http://escuela.med.puc.cl/paginas/alumnos/Quinto/temas
Quinto/medicina/28spring.htm. .
36. Dickson, R. and M. Lippman, Molecular Biology of Breast Cancer, in
Cancer, Principles & Practice of Oncology, H.S. DeVita VT, Rosenberg
SA., Editor. 2001, Lippincott Williams & Wilkins: Philadelphia, PA 19106
USA. p. 1633-1651.
37. Ahearne PM, L.S., Feig BW, Cncer de mama invasivo. Segunda edicin
ed. En MD Adreason Oncologa. 2000, Marban Espaa. 13-37.
38. Deteccin y atencin integral del cncer de mama. Ed. Martnez
Montaez OG, Mainero Ratchelous F. ed. Gua tcnica. 2004.
39. Woodward, W.A., et al., Changes in the 2003 American Joint Committee
on Cancer staging for breast cancer dramatically affect stage-specific
survival. J Clin Oncol, 2003. 21(17): p. 3244-8.
40. Singletary, S.E., et al., Revision of the American Joint Committee on
Cancer staging system for breast cancer. J Clin Oncol, 2002. 20(17): p.
3628-36.
41. Singletary, S.E. and J.L. Connolly, Breast cancer staging: working with
the sixth edition of the AJCC Cancer Staging Manual. CA Cancer J Clin,
2006. 56(1): p. 37-47; quiz 50-1.
59
42. Cancer, C.G.o.H.F.i.B., Breast cancer and hormone replacement therapy:
collaborative reanalysis of data from 51 epidemiological studies of 52,
705 women with breast cancer and 108, 411 women without breast
cancer. Lancet, 1997. 350: p. 1047-1050.
43. El Hanchi, Z., et al., [Bilateral breast cancer. Incidence and risk factors].
Gynecol Obstet Fertil, 2004. 32(2): p. 128-34.
44. Parkin, D.M., F.I. Bray, and S.S. Devesa, Cancer burden in the year
2000. The global picture. Eur J Cancer, 2001. 37 Suppl 8: p. S4-66.
45. Bakken, K., [Is estrogen therapy of significance for the incidence of
breast cancer?]. Tidsskr Nor Laegeforen, 2004. 124(21): p. 2801; author
reply 2801.
46. Bajdik, C.D., et al., Do work-related breast cancer risks in pre-
menopausal women depend on family history?Chronic Dis Can, 2004.
25(3-4): p. 147-51.
47. Epidemiologa, D.G.d., Registro Nacional de Cncer. 2003, Secretara de
Salud: Mxico.
48. Bray, F., P. McCarron, and D.M. Parkin, The changing global patterns of
female breast cancer incidence and mortality. Breast Cancer Res, 2004.
6(6): p. 229-39.
49. Gapstur, S.M., et al., Associations of breast cancer risk factors with
breast density in Hispanic women. Cancer Epidemiol Biomarkers Prev,
2003. 12(10): p. 1074-80.
60
50. Dumitrescu, R.G. and I. Cotarla, Understanding breast cancer risk --
where do we stand in 2005? J Cell Mol Med, 2005. 9(1): p. 208-21.
51. Lewin, Genes VIII. Pearson Pretince Hall ed. Vol. Oncogenes and cancer.
2004, Upper Saddle River. 889-938.
52. McPherson, K., C.M. Steel, and J.M. Dixon, ABC of breast diseases.
Breast cancer-epidemiology, risk factors, and genetics. Bmj, 2000.
321(7261): p. 624-8.
53. Guo, S., et al., Green tea polyphenol epigallocatechin-3 gallate (EGCG)
affects gene expression of breast cancer cells transformed by the
carcinogen 7,12-dimethylbenz[a]anthracene. J Nutr, 2005. 135(12
Suppl): p. 2978S-2986S.
54. De Celis, R., A. Feria-Velasco, et al, "Expression of NK cells activation
receptors after occupational exposure to toxics A preliminary
study".Immunology Letters, 2008. 118: p. 125131.
55. Salud, S.N.d., Ley General de Salud, in Diario Oficial del Gobierno del
Mxico. 2001: Mxico, D.F.
56. Association, W.M., Declaration of Helsinki. Ethical principles for medical
research involving human subjects. Note of Clarification on Paragraph 30
added by the WMA General Assembly, Tokyo. 2004.
57. Kelsey, J.L., M.D. Gammon, and E.M. John, Reproductive factors and
breast cancer.Epidemiol Rev, 1993. 15(1): p. 36-47.
61
58. De Celis, R.a.A.F.-V., Efecto de la contaminacin ambiental por
hidrocarburos sobre la respuesta inmune.Inmunidad y Ambiente, 2004:
p. 218.
59. Whitlock, J.P., Jr., Induction of cytochrome P4501A1. Annu Rev
Pharmacol Toxicol, 1999. 39: p. 103-25.
60. McFadyen, M.C., W.T. Melvin, and G.I. Murray, Cytochrome P450
CYP1B1 activity in renal cell carcinoma. Br J Cancer, 2004. 91(5): p.
966-71.
61. Wen, W., et al., Cytochrome P450 1B1 and catechol-O-methyltransferase
genetic polymorphisms and breast cancer risk in Chinese women: results
from the shanghai breast cancer study and a meta-analysis. Cancer
Epidemiol Biomarkers Prev, 2005. 14(2): p. 329-35.
62. Hanna, I.H., et al., Cytochrome P450 1B1 (CYP1B1) pharmacogenetics:
association of polymorphisms with functional differences in estrogen
hydroxylation activity. Cancer Res, 2000. 60(13): p. 3440-4.
63. Shimada, T., et al., Catalytic properties of polymorphic human
cytochrome P450 1B1 variants. Carcinogenesis, 1999. 20(8): p. 1607-13.
64. Schwarz, D., P. Kisselev, and I. Roots, CYP1A1 genotype-selective
inhibition of benzo[a]pyrene activation by quercetin.Eur J Cancer, 2005.
41(1): p. 151-8.
62

Cancer de Mama Tesis

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UNIVERSIDAD DE COLIMA

FRECUENCIA DE LOS POLIMORFISMOS DE LOS GENES CYP1A1 Y

Biol. Laura Janin Muoz Islas

Colima, Colima, Julio 2010

Instituciones donde se realiz el proyecto:

Laboratorio de Inmunologa molecular de la Divisin de Inmunologa

Unidad Mdica de Alta Especialidad No. 145 (UMAE)

Hospital Civil, Fray Antonio Alcalde

Instituto de Ciruga Reconstructiva

INSTITUTO MEXICANO DEL SEGURO SOCIAL

Guadalajara, Jalisco a 28 de Julio del 2010

Dr. Carlos Enrique Tene Prez

Por medio de este conducto quisiera hacer de su conocimiento que he revisado la

Sin mas por el momento, quedo de Usted

Dra. Ruth De Celis Carrillo

Colima, Colima 28 de Julio del 2010

Dr. Carlos Enrique Tene Prez

Por medio de este conducto quisiera hacer de su conocimiento que he

Sin ms por el momento, quedo de Usted

Agradezco de manera especial a:

A mi cuada y sobrinos con mucho cario, porque me motivaron a seguir adelante.

A la Dra. Elena Margarita Castro por su disponibilidad y contribucin a lo largo de la maestra.

NDICE DE CUADROS Y FIGURAS

Introduccin. El citocromo p450 es responsable del metabolismo oxidativo de

Palabras Claves: Citocromo p450, CYP1A1, CYP1B1, cncer de mama,

Background: Cytochrome p450 is responsible for the oxidative metabolism of

and agarose gel electrophoresis.

Keywords: Cytochrome P450, CYP1A1, CYP1B1, breast cancer,

En la actualidad, el cncer de mama es la neoplasia diagnosticada con mayor

Los principales factores de riesgo para desarrollar cncer de mama son

Los efectos a la exposicin a sustancias txicas son variados, por lo cual

Dicho sistema se encuentra compuesto por varias subfamilias

a) el gen CYP1A1 que contribuye a la desintoxicacin de sustancias como

b) El gen CYP 1B1 que se encuentra involucrado en el metabolismo de

Un polimorfismo gentico es una variacin en la secuencia de un sitio

Cuando la variacin se observa en por lo menos el 1% de la poblacin,

Se conocen como: mutaciones, cuando los cambios en la secuencia de

Aunque la replicacin del ADN es muy precisa, no es perfecta; algunas

En el curso de la evolucin las especies se desarrollaron sistemas de

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En general, las enzimas se clasifican en dos categoras: Fase I, que

Por lo tanto, el citocromo p450 es el responsable de catalizar la

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ste sistema, participa activamente en el metabolismo oxidativo de una amplia

Las duplicaciones de genes repetidos han dado lugar a una de las

El gen CYP 1A1(Fig. 2) constituye la mayor fraccin del citocromo p450

Fig. 3. Modelo 3D gen CYP1B1

cromosoma 2p21-p22, constituido por tres exones y dos intrones; similar en

Es una enzima que cataliza la formacin de genotxicos 4- hidroxi-

El gen CYP 1B1 presenta varios alelos, en la actualidad se han reportado

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