Microbiologia

ESTRUCTURA BACTERIANA :Elementos facultativos y obligados

Las bacterias estructuralmente estn constituidas por :

Elementos obligatorios : estn presentes en todas las bacterias y son indispensables
para la vida de la propia bacteria.Son :
- Pared celular
- Membrana citoplasmtica
- Citoplasma
- Ribosomas
- Regin nuclear
Elementos facultativos: pueden estar o no presentes en la bacteria y son :
- Cpsula
- Flagelos
- Pelos
- Endosporas
- Inclusiones citoplasmticas
Pared celular m<rc;S<da.
Es el lmite externo de la clula. Tiene una estructura i;%I&a parecida a la pared celular
de las clulas vegetales . Tiene entre sus funciones las siguientes :
- Protege a la bacteria de cambios externos adversos
- Ayuda a mantener la morfologa de la clula
- Proporciona a la bacteria resistencia frente a los antibiticos
- Permite el paso selectivo de algunas sustancias
- Est implicada en la patogenicidad de la bacteria
Existen bacterias sin pared celular : Micoplasmas y otras que al perderla se tranforman
en formas L ( protoplastos esferoplastos )
La pared se pone de manifiesto mediante la tincin por el mtodo de gram, que permite ,
de acuerdo con la afinidad tintorial ,dividir a las bacterias en gram positivas y gram
negativas. No obstante tanto las bacterias gram positivas como las grarn negativas
poseen un componente comn, que es el peptidogiicano ( glucopptido 6 mureina ),
que es un heteropolisacrido formado por dos aminoazcares alteniantes :N-acetil-
glucosamina y el cido N-acetil- murmico .c& cadena p e r i e c e unida a las
adyacentes mediante un tetrapptido ,formndose una especie de malla red .

ESTRUCTURA DE PEPTIDOGLiCANO
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Pared celular de las bacterias gram wsitivas

En estas bacterias el peptidoglicano es muy abundante ,constituyendo entre el 50 y el
90 % del peso de la pared. Por fuera se suelen encontrar los cidos teicoicos ( polrneros
de ribitol -fosfato glicerol- fosfato) .

PARED CELULAR DE BACTERIAS GRAM POSITIVAS

teicoico-
~cido

Pared celular de las bacterias esam negativas

Es ms compleja en composicin y estructura . El peptidoglicano es slo una pequea
porcin de la pared ( 10 % ). El componente mayoritario es la membrana externa con un
alto contenido en lpidos y cuyo componente fundamental es el lipopolisacrido adems
de fosfolpidos y lipoprotenas. El lipopolisacrido est formado por tres componentes :
cadena glucdica ,que le confiere tipo especificidad ,al tratarse de un antgeno de
superficie ;parte central core que es grupoespecfica ,y una porcin lipdica
responsable de la toxicidad puesto que acta como endotoxina.
Hacia la cara externa de la membrana se localizan unas proteinas denominadas porinas ,
que forman tres canales poros en su interior.
Protena de trans-
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Membrana plasmtica
Es la estructura delgada que se encuentra por dentro de la pared celular ,encerrando el
citoplasma de la clula.
Sus funciones son :
- Acta como barrera selectiva : a travs de ella se produce el paso de
molculas en ambas direcciones debido a la presencia de permeasas
- En ella se localizan los enzimas respiratorios :citocromo-oxidasas
- Posee invaginaciones plegamientos grandes e irregulares llamados
mesosomas ,que parecen estar relacionados con la duplicacin del
cromosoma bacteriano y en la divisin celular.
- En su cara externa se localizan las PBP ( proteinas fijadoras de penicilina )
que intervienen en la sntesis del peptidoglicano y son la diana de los
betalactmicos.

Grupos

-
Protelnasintegrales de membrana Molcula de losfolipido

Membrana plasmatira: mosaico

Citoplasma
Limitado por la membrana ,es una masa heterognea que engloba todos los dems
elementos de la clula ,incluyendo los ribosomas ,el material gentico e inclusiones de
reserva ( polifosfatos ,glucgeno ,lpidos ...)
Est formado por un 80% de agua, principios inmediatos ,minerales y enzimas.
Material gentico
No existe membrana nuclear que los separe del citoplasma
Es una sola molcula de ADN bicatenario circular ( 1 cromosoma )
A veces existe ADN extracromosmico : plsrnidos ,que son molculas circulares con
capacidad autoreplicativa que pueden integrarse en el cromosoma bacteriano e incluso
transferirse por conjugacin a otras bacterias. Entre sus funciones est la resistencia a
antibiticos ,metales pesados ,toxinas etc.
La reproduccin en bacterias se realiza de forma asexual por duplicacin del material
gentico y ocasionalmente se pueden dar mecanismos de intercambios de material
gentico con otras bacterias ( r.sexua1) por tres mecanismos : transformacin ,
transduccin y conjugacin .

Elementos facultativos

Cpsula
Capa mucosa presente en algunas bacterias tanto gran positivas como gran negativas ,
constituida por polmeros sintetizados por la propia bacteria y que se depositan por
fuera de la pared celular ,pegada a esta.
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Puede ser de naturaleza polisacm'dica ( Ej K.pneumoniae ,S.pneum0nia.e y H

influenzae ) proteica ( Ej gen Bacillus )
Funciones
- Proteccin fiente a la fagocitosis ,luego es un factor de virulencia
- Capacidad antignica
- Proteccin fiente a fagos y antibiticos
Glicoclix
Homopolisacrido sintetizado por algunas bacterias y en posicin extracelular ,formado
por un entramado de fibras polisacardicas que facilitan la adherencia a superficies .Ej
Streptococcus mutans ,productor de la caries dental
Funciones
- Adherencia a superficies
. Intervencin en la respuesta inmune
- Disminucin de la eficacia de loa antibiticos

Flagelos
Son apndices filamentosos y largos que nacen de la membrana celular y estn
constituidos por una proteina contrctil antignica ( antgeno H ) .Constituyen el
rganos de locomocin y su presencia es mucho ms frecuente en los bacilos que en los
COCOS.
Dependiendo del node flagelos y de su disposicin ,las bacterias se clasifican en
- Monotricas
Lofotricas

- Peritricas

Fimbrias 6 pili
Apndices de naturaleza proteica que poseen algunas bacterias . Son ms cortos y
numerosos y se disponen por toda la superficie bacterina.
Su funcin es la adherncia a superificies ( sobre todo epitelio vas urinarias )
Existe una subclase de mbrias ( pili ) que son ms largas y poco numerosas ,cuya
funcin es la intervenvin en la conjugacin bacteriana.
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Endosporas
Son estructuras presentes en algunas especies bacterianas exclusivamente bacilares.
Pueden estar en el interior de la bacteria (endosporas ) o permanecer libres ,y estas
ltimas constituyen la forma de resistencia de las bacterias . Las formas libres aparecen
en los cultivos viejos como consecuencia de la desintegracin de las bacterias.
Esponilacin es el paso de una bacteria en forma vegetativa a su forma esponilada y
gerrninacin es el fenmeno inverso.
La localizacin de la endospora dentro de la bacteria y su tamao se utiliza como
caracterstica para la identificacin .La espora puede ser central ,terminal ( en un
extremo ) subterminal ( prxima a un extremo )

Para la clasificacin de bacterias con esporas utilizamos:

Localizacin: Central, Terminal Subterminal

Deformacin o no del soma bacteriano (depende del tamao )

Las esporas no se tien con los colorantes habituales ,necesitan tcnicas de tincin
especiales.

NUTRICIN , METABOLISMO Y CRECIMIENTO BACTERIANO

Para que una bacteria pueda vivir y reproducirse necesita unos nutrientes esenciales
que le proporciones energa y materia prima para elaborar nuevos componentes
celulares ,otros nutrientes especficos y unas condiciones fsico-qumicas adecuadas

1.1 Nutrientes esenciales :

Los microorganismos necesitan de ciertos elementos en grandes cantidades ,estos son :
-Agua
-Sales minerales ( fosfatos ,sulfatos ,calcio ,sodio y cloro ). Sirven para mantener el
equilibrio inico ,como elementos metablicos de grupos enzimticos ,pigmentos etc.
- Algunas necesitan oligoelementos en cantidades mnimas : manganeso ,cinc, cobre ,
cobalto ,niquel ,boro etc
- Carbohidratos :son los alimentos energticos ms importantes y pueden proceder de
diversas fuentes ( glucosa ,lactosa .... )
- Proteinas : pueden proceder del medio ( proteinas ,aminocidos ,sales de amonio ,
nitratos ,nitritos ) indirectamente de reacciones de desaminacin nitratoreduccin.
- Los lpidos, tambin pueden ser utilizados como fuente de energa por algunas
bacterias .

1.2 Elementos especficos

Hay bacterias incapaces de sintetizar algunos metabolitos esenciales ,por lo que hay
que aadirlos al medio , se llaman tambin factores de crecimiento y son :
- Aminocidos ,necesarios para sintetizar las proteinas
- Purinas y pirimidinas ,para la sntesis de cidos nucleicos
- Vitaminas ,ya que forman parte de cofactores enzimticos y en pequeas cantidades
tambin para el crecimiento ( Ej vit K ... anaerobios )
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- Cofactores :factor X ( hemina ) y factor V ( NAD y NADP ,aceptores de electrones

en la cadena respiratoria ) .Son factores de la sangre esenciales para el crecimiento de
Haemophilus )

1.3 Condiciones fisico - qumicas

Incluso cuando se hallan presentes todas las sustancias nutritivas requeridas ,el
crecimiento y desarrollo de los microorganismos depende de determinadas condiciones :

1. Concentracin de iones hidrgeno ( pH )

2. Temperatura
3. Presin osmtica
4. Presencia de oxgeno
5. Presencia de CO 2
6. Humedad y desecacin
7. Luz y otras radiaciones

1.3.1 Concentracin de hidrgeno ( pH )

El pH ptimo de las bacterias patgenas se encuentra entre 6,5- 7,5 ,aunque existen
excepciones ( Lactobacillus se desarrolla en pHs bajos ,es acidfila y Vibrio cholerae
tolera los pHs alcalinos ) .Para mantener el pH es necesario aadir a los medios de
cultivo soluciones tampn .

1.3.2. Temperatura
Para cada bacteria hay una temperatura ptima de crecimiento ,que puede variar entre
unos lmites mximos y mnimos .
La mayora de las bacterias que viven en el hombre produciendo enfermedad o no ,
tienen como temperatura ptima, la del cuerpo humano ( 37 O )
Las bacterias se clasifican en funcin de la temperatura en :
- Psicrfilas :crecen entre O y 20 O C ,con un ptimo en 15 "C. Suelen
contaminar los alimentos ,la sangre refkigerada y las aguas Mas de
manantiales o lagos.
- Mesfilas :las que se desarrollan entre 20 y 45 O C . A este grupo pertenecen
la mayora de las bacterias patgenai ,cuya temperatura ptima de
crecimiento est en 37 O C
- Termlas :tienen una temperatura ptima por encima de los 45 OC . Son las
que forman la mayor parte de los suelos calientes y fuentes termales .

1.3.3. Presin osmtica

Como resultado de la presencia de membrana plasmli~,las bacterias ,igual que otras
clulas estn sujetas a los fenmenos osmticos.
La mayora de las bacterias crecen con concentraciones de sal del 0,l al 1 % ,y su
exposicin a altas concentraciones salinas puede producir plasmlisis .Existen bacterias
denominadas hallas ,que pueden crecer a ms altas concentraciones ,pero la mayora
no son patgenas.

1.3.4. Presencia de oxgeno

Segn las necesidades de oxgeno de las bacterias se clasifican en :
Aerobias estrictas ,necesitan oxgeno como aceptor nal de electrones.
Anaerobias estrictas ,no crecen en presencia de oxgeno
Anaerobias facultativas ,crecen en presencia 6 ausencia de oxgeno.
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.
Microaerofilicas necesitan para su crecimiento de concentraciones de oxgeno muy
pequeas .

1.3.5. Presencia de CO 2
Todas las bacterias requieren la presencia de pequeas cantidades de dixido de carbono
para su crecimiento ,que normalmente proviene de la atmsfera de su propio
metabolismo ,pero existen algunas bacterias que requieren concentraciones de Coz del
5 - 10 % ,por lo que se debe suministrar a los medios de cultivo ( Ej Haemphilus ,
Neisseria )

1.3.6. Influencia de la humedad y la desecacin

Las bacterias estn constituidas por una elevada proporcin de agua ( 80 % ) y precisan
adems de un ambiente hmedo para su crecimiento. Algunas bacterias son
extremadamente sensibles a la desecacin ( Ej Neisseria ,Treponema. ) ,otras en
cambio pueden sobrevivir a la desecacin ( Ej Bacilllus antracis puede vivir de 5- 6
aos en el suelo ) .

13.6 Influencia de la luz y las radiaciones

La oscuridad proporciona condiciones favorables de crecimiento . Por el contrario los
rayos ultravioleta destruyen los microorganismos ,lo mismos ocurre con las radiaciones
ionizantes.

2. METABOLISMO

Es el conjunto de reacciones qumicas que se producen en las clulas vivas . Las

reacciones metablicas se dividen en
CATABOLISMO :descomposicin de sustancias nutritivas en compuestos ms
sencillos con liberacin de energa, que las bacterias utilizan para su biosntesis .
La mayora de las bacterias son hetertrofas ,obtienen la energa por descomposicin
de compuestos orgnicos ,mediante una serie de reacciones enzimrticas .
En cuanto a la forma de descomponer los compuestos orgnicos ,se produce una
oxidacin de las sustancias orgnicas con liberacin de energa ( ATP ).
Este mecanismo se puede producir a travs de dos vas:
- Fosforilacin oxidativa :respiracin
- Fosforilacin a nivel de sustrato : fermentacin
En ambos procesos se llevan a cabo oxidaciones con liberacin de electrones e
hidrgeno y se diferencian en :

Respiracin :Es un proceso en el que se produce la oxidacin de un compuesto

orgnico con liberacin de electrones e hidrgeno capaces de reducir un aceptor final .
Cuando el aceptor final es el oxgeno, el proceso se denomina respiracin aerobia, y
cuando es otro compuesto distinto al oxgeno : rapiracin anaerobia.

Fermentacin :puede ser definida como un proceso de oxidacin que comporta la

oxidacin de un compuesto orgnico ,en ausencia de oxgeno ,con liberacin de
electrones e hidrgeno ,capaces de reducir una molcula orgnica . Por ello ,en este
proceso de xido reduccin tanto el dador como el aceptor de electrones son un
compuesto orgnico .
Muchos de los microorganismos que realizan proceso fermentativos son anaerobios
obligados y otros son anaerobios facultativos

Segn los productos cidos liberados podemos distinguir distintos tipos de

fermentaciones :
Fermentacin alcohlica : se produce etanol como consecuencia de la fermentacin por
rnicroorgauismo como algunas levaduras
Fermentacin lctica : se produce cido lctico .Ej lactobacillus
Fermentacin propinica : se produce cido propinico. Ej clostndium

ANABOLISMO : conjunto de reacciones qumicas que tienen por objeto la sntesis de

materiales constitutivos de la clula bacteriana .
Productos resultantes de los procesos anablicos:
- Sustancias solubles especficas como polisacridos capsulares
- Toxinas : C1 tetani, C. Diphteriae
- Exotoxinas
- Antibiticos
- Vitaminas :complejo B ( Enterobacterias )
- Pigmentos......
3.CRECIMIENTO BACTERIANO

El crecimiento de una bacteria se define como el aumento de sus componentes celulares

que puede tener como resultado ,un incremento de su tamao del nmero de su
poblacin de ambos .
El anlisis del crecimiento bacteriano puede realizarse mediante estudio cuantitativo 6
cualitativo.
Estudio cuantitativo :el crecimiento de una poblacin de bacterias ( originada de una
sola bacteria ) ,se estudia amiizando la curva de crecimiento de un cultivo bacteriano
en al laboratorio .La curva resultante nos analiza el crecimiento bacteriano sobre un
medio de cultivo lquido en funcin del tiempo :
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Este ciclo tiene una morfologa y una divisin de clulas asincrnica. Se divide en
cuatro fases:

e Fase de Latencia: Es la fase de adaptacin al medio, existe aumento de la masa

celular pero no hay aumento en el nmero de clulas.
e Fase de Crecimiento Exponencial: Es la fase donde se produce un incremento
exponencial del nmero de rnicroorganismos.

Fase Estacionaria: Es la fase a la que se llega cuando se ha agotado la fuente de

energa.
e Fase de Muerte: Es la fase que se caracteriza por una disminucin exponencial
del nmero de microorganismos.

La fase de latencia puede ser inducida por un rpido cambio en las condiciones del
cultivo. En un medio fresco, el largo de la fase de latencia va a depender del tamao del
inculo, de la edad del inculo, y de los cambios en la composicin y concentracin de
los nutrientes que experimenten las clulas.

Un pequeo volumen de inculo transferido a un gran volumen de medio fresco va a

producir una salida por difusin de iones, vitaminas y cofactores que son indispensables
para la actividad de muchas enzimas intracelulares. Si las clulas provenientes de un
medio rico son inoculadas en un medio mnimo, el tiempo de latencia puede estar
afectado por el tamao del inculo como un resultado de los nutrientes remanentes del
medio original.

La edad del inculo va a influir en el tiempo de latencia en el medio fresco debido a la

acumulacin de materiales txicos y a la falta de nutrientes esenciales dentro de la
clula durante el crecimiento anterior.

En general, inculos viejos alargan la fase de latencia.

Cambios en la composicin y concentracin de nutrientes entre el cultivo del inculo y

el medio fresco pueden desencadenar el control y la regulacin de la actividad
enzimtica dentro de las clulas o la diferenciacin morfolgica, como la formacin de
esporas. Si las clulas son transferidas de un medio simple a un medio rico, se van a
necesitar ms tiempo y nutrientes para incrementar la concentracin de enzirnas
necesarias para el metabolismo

Para conocer el nmero de bacterias presentes en cada momento existen varios mtodos
siendo el ms utilizado la turbidimetra : que mide la cantidad de luz transmitida por la
suspensin en la que se encuentran las bacterias . La medida se realiza en el
espectrofotmetro .
Utilidad de la curva de crecimiento bacteriano : conociendo la absorbancia de una
cultivo liquido bacteriano podemos saber cal es el nmero de bacterias en el mismo
y tambin podemos calcular el tiempo de tiempo de duplicacin ( o tiempo de
generacin ) de esa bacteria concreta ,que es el tiempo que tarda una poblacin
bacteriana en duplicarse .Por ej para Proteus a 37 O y medio de cultivo apropiado sera
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de 17 min ;en Staphylococcus aureus , 3 0 min .;para Mycobacterium tuberculosis es de

varias horas...

Estudio cualitativo ( se ver en las prcticas ms adelante )

Prcticamente todas las bacterias ( excepto M-leprae ,Treponema pallidum ,rickettsias ,
Treponema pallidum ...) pueden crecer sobre los medios de cultivo artificiales ,lquidos
y slidos .
El resultado del crecimiento en medios lquidos da lugar en general a un enturbiamiento
visible . Mientras que el crecimiento sobre la superficie de los medios slidos da lugar a
la formacin de colonias : masa constituida por millones de bacteria que se aprecia a
simple vista . El tamao ,la forma y el aspecto de esa colonias es bastante constante
para las distintas bacterias de ah que pueda utilizarse como punto de partida para
comenzar la identificacin bacteriana.