ANATOMIA , FISIOLOGIA BACTERIANA

Alumna:
Noami Arredondo

Preguntas:
 1- Célula bacteriana y sus características morfológicas.

-Las bacterias son microorganismos unicelulares que se reproducen por fisión

binaria. La mayoría son de vida libre, a excepción de algunas que son de vida
intracelular obligada, como Chlamydias y Rickettsias. Tienen los mecanismos
productores de energía y el material genético necesarios para su desarrollo y
crecimiento.

-Las bacterias son células muy sencillas; carecen de núcleo y tampoco presentan
orgánulos en el citoplasma. Se las denomina Procariotas. Son organismos
unicelulares y se encuentran en todos los ecosistemas.

Las bacterias son un numeroso grupo de seres vivos, con características muy
diversas. En la clasificación de los Dominios, Woese, aparecen dos grupos de
Procariotas, el Dominio Archaea, que engloba a los organismos más antiguos del
Planeta, y el Dominio Bacteria, en el que se encuentran la gran mayoría de los
organismos bacterianos actuales, también conocidos con el nombre de Eubacterias.

 El tamaño de las bacterias oscila entre las 0.5 y 3 µm, pudiendo llegar en
algunos tipos a 10 µm
 Las bacterias de interés médico tienen un tamaño entre 0.4 y 2 µm.
 A modo comparativo, una célula eucariota
 mide más de 5 µm (un eritrocito tiene un diámetro de 7µm), mientras que un
reovirus mide menos de 0.1µm
 Su tamaño pequeño determina una relación entre la superficie y el volumen
elevada, con alta tasa metabólica.
 La forma de las bacterias al microscopio está determinada por la rigidez de
su pared celular.
 Básicamente, se diferencian según su forma en cocos (esféricas u
ovaladas), bacilos (cilíndrica o de bastones; rectos o curvos) y espirilos
(espiral)
 La morfología bacteriana debe ser observada con el microscopio óptico o el
microscopio electrónico, dado el tamaño pequeño de estos microorganismos.

2- Elementos estructurales de la célula bacteriana.

- Las diferentes estructuras bacterianas que observamos las podemos dividir, según
sean constantes en las células o no, en estructuras permanentes o variables. Dentro
de las primeras se destaca: la pared celular, la membrana celular, los ribosomas y el
material genético.

Las estructuras variables son: los flagelos, las fimbrias o pilis, la cápsula y los
esporos.

 Vaina o cápsula bacteriana: Es una capa externa que puede estar ausente
en algunas bacterias, aunque aparece en casi todas las patógenas. No
presenta una estructura definida y es rica en glúcidos y glucoproteínas.

 Pared bacteriana: Estructura rígida y resistente que aparece en la mayoría

de las células bacterianas. La pared bacteriana se puede reconocer
mediante la tinción Gram, que permite distinguir dos tipos de paredes
bacterianas:

-Bacterias Gram +: Son bacterias con paredes anchas, formadas por gran cantidad
de capas de peptidoglucandos unidos entre sí.

-Bacterias Gram -: Son bacterias con paredes estrechas, con una capa de
peptidoglucanos, rodeada de una bicapa lipídica muy permeable. Este tipo de
bacterias son más resistentes a los antibióticos.

-La función de la pared bacteriana consiste en impedir el estallido de la célula por la

entrada masiva de agua. Éste es uno de los mecanismos de actuación de los
antibióticos; crean poros en las paredes bacterianas, provocando la turgencia en la
bacteria hasta conseguir que estalle.
Bacterias Gram + (arriba), y Gram -
(abajo).

 Membrana plasmática: Envoltura que rodea al citoplasma. Está formada por

una bicapa de fosfolípidos. No contiene colesterol. La bicapa lipídica está
atravesada por gran cantidad de proteínas (80%), relacionadas con las
distintas
actividades
celulares.
  Citoplasma: Es el espacio que se encuentra dentro de la membrana
plasmática. Contiene inclusiones cristalinas, sustancias de reserva, gotas
lipídicas, enzimas y otras proteínas.

-Se encuentran de forma libre los ribosomas. Presentan la misma función que los
eucariotas, es decir, realizan la síntesis de proteínas, aunque su tamaño es algo
menor. También en el citoplasma se encuentran las inclusiones, dispersas y sin
membrana que las rodee, y que son gránulos de reserva alimenticia de distintas
sustancias.

 ADN bacteriano: El ADN está constituido por una sola molécula circular de
tipo bicatenario, muy plegada, y que suele estar unida a los mesosomas.
También puede haber una o más moléculas pequeñas de ADN
extracromosómico, denominadas plásmidos. La región del ADN bacteriano
que se encuentra condensada, asociada a proteínas parecidas a las
histonas, se denomina nucleoide. La función del ADN es mantener y
perpetuar la información genética y, mediante su expresión, dirigir el
funcionamiento del metabolismo.
 Flagelos: Son prolongaciones finas cuya longitud es varias veces la de la
bacteria. Son más sencillos que los de los eucariotas. Tiene dos partes: zona
basal y tallo y permiten la locomoción de las bacterias que los poseen.

 Pelos y fimbrias: Son estructuras huecas y tubulares constituidas por
proteínas que aparecen en la superficie externa de algunas bacterias Gram
negativas. Las fimbrias son cortas y muy numerosas, mientras que los pelos
son largos y están presentes en número de uno o dos por bacteria. Parece
que las fimbrias permiten a las bacterias fijarse al sustrato. Los pelos
participan en el intercambio de material genético entre bacterias.
 3- Clasificación de las bacterias según :

 Morfología y agrupación

- La forma de las bacterias al microscopio está determinada por la rigidez de su

pared celular. Básicamente, se diferencian según su forma:

 Los cocos son bacterias redondeadas

 Los bacilos son bacterias alargadas
 Los vibriones son bacterias alargadas, con un extremo más estrecho, dando
forma de "coma ortográfica".
 Los espirilos son bacterias con forma de muelle.

-A nivel

macroscopico las bacterias pueden presentarse como individuos sueltos, o

formando colonias. Se pueden encontrar colonias de:

 Diplococos (bacterias redondeadas, de dos en dos).

 Diplobacilos (bacterias alargadas, de dos en dos).
 Estreptococos (cordones de bacterias redondeadas).
 Estafilococos (masas laminares de bacterias redondeadas) .
 Sarcinas (conglomerados tridimensionales de bacterias redondeadas).

Diplococos Estreptococos Diplobacilos

Estafilococos
  Tincion Gram:

-Bacterias Gram +: Son bacterias con paredes anchas, formadas por gran cantidad
de capas de peptidoglucandos unidos entre sí.

-Bacterias Gram -: Son bacterias con paredes estrechas, con una capa de
peptidoglucanos, rodeada de una bicapa lipídica muy permeable. Este tipo de
bacterias son más resistentes a los antibióticos.

Tinción de Gram
Bacterias Bacterias
Solucion Tiempo de grampositivas gramnegativas
aplicacion
Colorante: Cristal 30s Violeta Violeta
violeta
Mordiente: Lugol 1minuto Violeta Violeta
Decolorante: 10-15 minutos Violeta Incolora
Alcohol Acetona
Colorante de 1minuto Violeta Rosada
contraste:
Safranina

4- Metabolismo , anabolismo y catabolismo

- El anabolismo es el conjunto de procesos del metabolismo que tienen por fin la

síntesis de componentes celulares a partir de precursores de baja masa molecular,
por lo que también recibe el nombre de biosíntesis. Es una de las dos partes en que
suele dividirse el metabolismo.

- El metabolismo es el conjunto de reacciones bioquímicas y procesos

fisicoquímicos que ocurren en una célula y en el organismo

- El catabolismo es la parte del proceso metabólico que consiste en la degradación

de nutrientes orgánicos transformándolos en productos finales simples, con el fin de
extraer de ellos energía química y convertirla en una forma útil para la célula.

Si se sabe que el anabolismo y catabolismo son parte del proceso metabolico ,

entonces , si vemos el metabolismo desde el punto de vista microbiano lo
definiríamos como:
-El conjunto de procesos por los cuales un microorganismo obtiene la energía y los
nutrientes (carbono, por ejemplo) que necesita para vivir y reproducirse. Los
microorganismos utilizan numerosos tipos de estrategias metabólicas distintas y las
especies pueden a menudo distinguirse en función de estas estrategias. Las
características metabólicas específicas de un microorganismo constituyen el
principal criterio para determinar su papel ecológico, su responsabilidad en los ciclos
biogeoquímicos y su utilidad en los procesos industriales.

5- Metodos de cultivos y clasificacion de los mismos

Los medio de cultivo se pueden clasificar en:

Según su estado físico

 Líquidos

Usualmente se denominan caldos ya que contienen los nutrientes disueltos en agua.

Permiten obtener suspensiones con un elevado número de microorganismos.

Ej. Caldo nutritivo.

 Sólidos

Se pueden preparar a partir de medios líquidos a los cuales se les añaden agentes
solidificantes como agar, gelatina o sílica gel. Se utilizan con frecuencia en el
aislamiento y mantenimiento de los microorganismos en el laboratorio.

Ej. Agar nutritivo.

Según la naturaleza de sus constituyentes

 Medios naturales o complejos

Están constituidos por sustancias complejas de origen animal o vegetal y

usualmente se complementan con el añadido de minerales y otras sustancias.

No se conocen todos los componentes del medio de cultivo, ni las cantidades

exactas en que están presentes.

Ej. Extracto de carne, extracto de levaduras.

  Medios sintéticos o químicamente definidos

Se preparan a partir de ingredientes químicamente puros y por lo tanto se puede

conocer exactamente su composición cuali y cuantitativa. Por su costo sólo se
emplean en procedimientos especiales.

Según sus propósitos de uso

 Medios de enriquecimiento

Se llama enriquecimiento a cualquier cultivo en medio líquido que resulte en un

incremento en el número de un tipo dado de microorganismo en relación con el
número de otros tipos de microorganismos que puedan estar en el inóculo. Un
medio de enriquecimiento puede contener sustancias que favorezcan el crecimiento
del microorganismo que nos interesa o que inhiban el crecimiento de los otros tipos
de microorganismos presentes. La selectividad de un cultivo de enriquecimiento no
está determinada únicamente por la composición química del medio usado, sino que
en un medio dado puede ser variada significativamente modificando otros factores
tales como: temperatura, pH, fuerza iónica, iluminación, aireación etc.

Ej. Caldo tetrationato utilizado para el enriquecimiento de las especies del género
Salmonella provenientes de muestras de heces, orina, agua o alimentos.

 Medios selectivos

Son básicamente iguales a los de enriquecimiento, se diferencian por ser medios

sólidos y están diseñados para el aislamiento de microorganismos específicos.

Ej. Agar desoxicolato citrato utilizado para el aislamiento de patógenos entéricos.

 Medios diferenciales

No contienen sustancias inhibidoras, es decir, permiten el crecimiento de muchos

tipos de microorganismos, pero si contienen indicadores de productos derivados de
la actividad metabólica de los microorganismos sobre algunos de los componentes
del medio. Se utilizan para la identificación de los microorganismos.

Ej.: Agar base rojo fenol utilizado para detectar fermentación de carbohidratos.
  Medios selectivos diferenciales

A veces se combinan en un mismo medio las características de ser selectivo y

diferencial.

Ej.: el agar Mac Conkey contiene sales biliares y cristal violeta, que inhiben el
crecimiento de las bacterias gram positivas. Pero como también contiene lactosa y
un indicador de pH permite distinguir entre las bacterias fermentadoras de lactosa y
las que no lo son.

Cultivos puros y métodos de aislamiento

Cultivo puro:

Se denomina así a una población celular formada por una única especie de
bacterias. El cultivo puro es en la mayoría de los casos un estado artificial impuesto
en el laboratorio.

Aislamiento de bacterias:

Nuestro objetivo es conocer como se aislan las diferentes especies en cultivo puro
partiendo de una mezcla de varias especies. Las técnicas de siembra deben
efectuarse siguiendo las reglas de asepsia, para impedir que desarrollen al mismo
tiempo las bacterias en estudio y microorganismos del medio ambiente. Dichas
prácticas deben realizarse al abrigo de las corrientes de aire (las puertas y ventanas
cerradas) con movimientos pausados, sin brusquedad y a una distancia no mayor
de 15 cm de la llama del mechero.

Técnicas de aislamiento:

Técnica de aislamiento de placas en estrías o por agotamiento en superficie:

Sobre la superficie de un medio sólido se deposita con un ansa de inoculación una

pequeña cantidad de muestra bacteriana y se distribuye rayando la superficie. En
esta operación se van "extendiendo las bacterias" o "diluyendo su concentración"
sobre la superficie del agar. Se obtienen colonias aisladas y se supone que cada
colonia está formada por la descendencia de una sola célula y es por consiguiente
un cultivo puro. Las técnicas de siembra en estrías y en superficie pueden
efectuarse con facilidad y con material de laboratorio muy reducido siendo los
procedimientos habituales o típicos para aislar bacterias.

Pasos de aislamiento en superficie

Técnica de aislamiento en placa:

  Distribuir el agar fundido a utilizar en placas. Dejar enfriar y solidificar a
temperatura

ambiente.

 Secar la superfice del agar de cada placa, en forma invertida en estufa de

cultivo de 37 a 50 °C
 Cuando la superficie está completamente libre de humedad, depositar sobre
la placa una porción del material a estudiar y distribuirlo de lado a lado hasta
una superficie de 1,5 a 2 cm de altura
 Quemar el ansa, esperar que se enfríe, y tocando la primera estría NO MÁS
DE 5 VECES efectuar una segunda estría
 Quemar el ansa, esperar que se enfríe, y tocando la segunda estría NO
MÁS DE 5 VECES efectuar una tercer estría
 Quemar el ansa, esperar que se enfríe, y tocando la tercer estría NO MÁS
DE 5 VECES efectuar una cuarta estría
 Incubar en la atmosfera y temperatura de acuerdo al origen de la muestra

Otras técnicas de asilamiento:

Técnicas de aislamiento de una sola célula:

En este procedimiento se utiliza, asociado al microscopio, un instrumento especial

(el micromanipulador) que permite tomar un sólo organismo de una preparación de
gota pendiente. Mediante el micromanipulador, el operador puede dirigir una
micropipeta dentro de la gota y tomar de ella una sola célula microbiana, la cual se
transfiere a un medio apropiado para su crecimiento. La aplicación de esta técnica
se reserva para estudios muy especializados y se requiere gran habilidad.

Técnicas complementarias previas al aislamiento:

Técnica de Enriquecimiento de Cultivo:

Para mejorar las posibilidades de aislar algunos tipos de bacterias poco frecuentes,
puede procederse al enriquecimiento del cultivo en un caldo antes de la siembra en
placa. En principio se trata de proporcionar un medio ambiente de cultivo destinado
a favorecer el crecimiento del tipo particular de bacteria que se busca, e impropio
para el desarrollo de otros tipos. En general, estos enriquecimientos de cultivo se
usan cuando el tipo de bacteria que quiere aislarse se presenta en proporción
relativamente pequeña, y crece más lentamente que muchas otras especies de la
población mixta de la muestra.

 Técnica de inoculación en animales:

Otro medio complementario de la siembra en placas, al que se recurre en ocasiones

para el análisis de muestras que contienen organismos patógenos, consiste en la
inoculación en animales o en un huésped suceptible. Después de desarrollarse la
infección, ciertos tejidos del huésped pueden contener al organismo en cultivo puro,
lo cual se confirma en general con la siembra en placa.

Técnica de dilución en serie:

Si el organismo que se trata de aislar en un cultivo mixto, se encuentra en mayor

número que los demás organismos de la mezcla puede ser posible obtenerlo en
cultivo puro después de efectuar una serie de diluciones en tubos con medio
apropiado. Las diluciones más avanzadas de la muestra sólo contendrán una
especie, la más abundante. También en este caso es conveniente confirmar la
pureza del cultivo aislado con la siembra en placa.

Características de las colonias:

Uno de los principales distintivos de las bacterias, es el aspecto resultante del

crecimiento en diversos medios. Características tales como el color, la abundancia
de crecimiento, olor, etc. Proporcionan indicios para la identificación de un cultivo
desconocido.

En una placa de agar observamos las siguientes características de las colonias:

TAMAÑO: Alcanza desde el sumamente pequeño (puntuales) que sólo miden una
fracción de mm, hasta las que miden varios mm o cm. influye el período de
incubación. Algunos microorganismos como Bacillus y Proteus, tienen tendencia a
cubrir toda la superficie del agar.

FORMA: Puede ser muy variada. Hay puntiformes, circulares, fusiformes. En

algunos casos pueden ser irregulares, filamentosas o rizoides.

MARGEN O BORDE: La periferia de las colonias bacterianas presenta formas muy

diferentes según las especies. Puede ser circular lisa, como el borde de una gotita o
presentar irregularidades como lóbulos redondos, muescas irregulares,
proyecciones filamentosas o rizoides.

ELEVACION: Las colonias pueden ser muy planas o espesas (elevadas)

presentando estas distintos grados de convexidad superficial.

CROMOGENESIS O PIGMENTACION: Pueden ser colonias coloreadas o no.

CARACTERES OPTICOS: Opacas, traslúcidas u opalescentes.

CONSISTENCIA O ADHERENCIA DEL CRECIMIENTO: Butirosa o mantecosa que

se retira fácilmente con el alambre, viscosa o fibrosa, seca y quebradiza.

En caldo nutritivo veremos:

CANTIDAD DE CRECIMIENTO: Escaso, moderado o abundante.

DISTRIBUCION DEL CRECIMIENTO EN EL CALDO: Uniformemente distribuído,

turbidez limitada a la superficie del caldo, como velo o película, acumulado en
sedimento, granuloso o viscoso.

6- Estructura del ADN Bacteriano

- El ADN se organiza en unas estructuras conocidas como cromosomas.

El ADN está constituido por una sola molécula circular de tipo bicatenario, muy
plegada, y que suele estar unida a los mesosomas. También puede haber una o
más moléculas pequeñas de ADN extracromosómico, denominadas plásmidos. La
región del ADN bacteriano que se encuentra condensada, asociada a proteínas
parecidas a las histonas, se denomina nucleoide. La función del ADN es mantener y
perpetuar la información genética y, mediante su expresión, dirigir el funcionamiento
del metabolismo.

7- Mutación y tipos de mutación :

-Una mutación es un cambio heredable en la secuencia de bases de los ácidos

nucleicos que constituyen el genoma de un organismo; ésta se produce en
condiciones naturales con baja frecuencia y se deben fundamentalmente a errores
en los procesos de replicación del ADN.

Además de las mutaciones espontáneas, pueden ocurrir mutaciones inducidas,

provocadas por agentes mutagénicos (químicos, físicos o biológicos) que
proporcionan una herramienta para introducir cambios en el genoma bacteriano en
el laboratorio. La mayoría de estos errores o alteraciones introducidos en el
genoma, son corregidos por los mecanismos de reparación del ADN, pero algunos
escapan a la corrección y pueden originar cambios heredables que proporcionan
una diversidad genética. Dada la baja frecuencia de mutaciones, solo los
microorganismos con alta tasa de crecimiento, pueden alcanzar cifras
suficientemente altas como para que sean detectables. Las mutaciones en las
bacterias, frecuentemente afectan propiedades fácilmente reconocibles como
requerimientos nutricionales, morfología o resistencia antibiótica.

Algunas mutaciones pueden conferir al mutante una ventaja frente a la cepa que le
dio origen, bajo ciertas condiciones ambientales, de manera que la progenie de
dicha célula mutante es capaz de superar el crecimiento de la cepa original y
sustituirla. Este es el caso de las mutaciones que confieren resistencia a los
antibióticos, en las que el mutante resistente se seleccionará en un ambiente en el
que las bacterias estén expuestas al antibiótico en cuestión.

Este tipo de mutaciones se denominan selectivas. En cambio, frente a una mutación

no selectiva la bacteria no adquiere beneficios en relación a su progenitor, por
ejemplo la pérdida de pigmento de las colonias de Serratia marcescens que se
observa cuando se cultivan en agar.

Las mutaciones puntuales, son aquellas que implican un cambio en una única base;
pueden provocar que se cambie un aminoácido por otro en el producto proteico
(mutación por cambio de sentido). Otras veces no se traducen en ningún cambio
(mutación silenciosa), dado que como sabemos existe más de un codón para cada
aminoácido. También puede suceder que el codón se convierta en una señal de
terminación (mutación sin sentido) y en ese caso se traducirá una proteína
incompleta no funcional.

Las deleciones y las inserciones producen cambios más notorios en el ADN,

provocando la pérdida o la incorporación de cualquier número de pares de bases.
Por lo tanto, siempre que éste no sea múltiplo de tres se producirán mutaciones por
desplazamiento del marco de lectura, que suele provocar la pérdida total del
fenotipo.

-Muchas mutaciones que originan un producto proteico defectuoso, pueden ser

suprimidas por un segundo evento de mutación en otro sitio del genoma
(mutaciones supresoras), restaurándose el fenotipo original.