CMO SE EXPERIMENTA
Determinacin de fsforo
y cafena en bebidas de cola
Norma C. Cavazos Rocha,1 Lydia Zrate Rivera,1 Esperanza Torres de Navarro1
Abstract (Phosphorus and caffeine
determination and cuantification in soft cola
drinks)
We present two methods for phosphorus and caffeine
determination and cuantification in soft cola drinks
that are quick and easy to perform. We think they
will catch the students interest.
Resumen
Presentamos dos mtodos para la determinacin y
cuantificacin de cafena y fsforo respectivamente
en bebidas de cola, los cuales son rpidos, fciles
de realizar y creemos que despertarn el inters
entre los estudiantes.
Introduccin
Mxico es el primer lugar per cpita en consumo de
refresco en el mundo. Segn encuestas realizadas en
1993, los pases con mayor consumo per cpita eran:
Estados Unidos con 200 litros/ao, Mxico con 140
litros/ao, Canad con 110 litros/ao, y a partir de
1989 se han incrementado estas cifras de 5 a 30%, lo
que ha llevado a nuestro pas a ser el nmero uno.
Segn datos de la Cmara Nacional de la Industria
de la Leche y de la Asociacin Nacional de Produc-
tores de Refrescos el consumo de refrescos casi
duplica al de la leche, aun cuando los primeros son
ms caros. (Internet).
En general, se piensa que los refrescos de cola
son bebidas relativamente inofensivas y que un ex-
cesivo consumo de estos productos no causa ms
dao que caries dental y aumento de peso debido al
alto contenido de azcar. Sin embargo, los daos
pueden ir ms all. Adems de azcar, un refresco
de cola tiene cido fosfrico, cafena y nuez de cola,
y estos elementos pueden llegar a causar diferentes
trastornos al organismo. El fsforo est ntimamente
relacionado con el calcio tanto en la nutricin huma-
na como en la absorcin de este mineral. Un aporte
1
Departamento de Qumica Analtica. Facultad de Medicina.
UANL. Av. Madero y Dr. Eduardo Aguirre Pequeo. A.P. 1565.
Monterrey, N.L. Mxico.
Recibido: 8 de abril de 1999; aceptado: 1 de junio de 2000.
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alto de fsforo impide la absorcin de calcio y au-
menta la cantidad de hormona paratiroidea, la cual
puede disminuir la formacin de huesos (Faras,
1988). La cafena, por su parte, es la droga psicotr-
pica de mayor consumo en el mundo. Tiene efectos
sobre el sistema nervioso central con sntomas como
insomnio, inquietud y excitacin, entre otros; tam-
bin, un exceso de cafena afecta el aparato digestivo
produciendo vmito, diarrea y dolor gstrico. Es
capaz de aumentar la diuresis. Adems existe el
sndrome de abstinencia por la supresin de cafena
a dosis tan bajas como 100 mg/ da, que expresado
en trminos de alimentos equivaldra a una taza de
caf, dos de t o tres refrescos de cola (Nutricin,
1996). El sntoma ms caracterstico de abstinencia
de cafena es la cefalea. Finalmente, la nuez de cola
produce cambios en la actividad motriz.
Un grupo importante de consumidores de pro-
ductos de cola es el de la poblacin universitaria.
Con la informacin dada anteriormente sobre estos
productos de cola y sus posibles efectos sobre la salud
creemos que el realizar la determinacin de fsforo
y cafena y conocer la cantidad de estos productos
que se ingiere por bebida consumida sera un tema
que lograra captar el inters de los estudiantes.
Consideramos que la labor de un docente no slo es
la de transmitir los conocimientos sino que hay que
hacerlo de una manera prctica y atractiva, buscan-
do con esto que el alumno comprenda, retenga los
conocimientos y finalmente acte, es decir, aplique
lo aprendido y lo relacione con su entorno. Para
lograr este fin, las prcticas de laboratorio son, sin
duda, una gran ayuda ya que representan la oportu-
nidad para demostrar, aplicar y complementar lo
aprendido en el aula. Adems, en ellas el alumno
adquiere habilidades y destrezas y aprende a evaluar
la calidad de su trabajo, lo que le permitir desarro-
llarse al mximo en el ejercicio de su profesin.
Por lo anterior, en este trabajo se propone la
determinacin y cuantificacin de fsforo y cafena
contenidos en muestras de consumo popular, como
lo son los refrescos de cola, como tema para desa-
rrollar y practicar los mtodos de espectrofotome-
tra UV-Vis y cromatografa de lquidos de alta
resolucin dentro de un programa de prcticas de
laboratorio.
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MTODO
Mtodo espectrofotomtrico para fsforo
Los cidos molbdicos formados cuando un exceso
de molibdato reacciona en solucin cida con fosfa-
to, silicato, arsenato, germanato y otros oxo-aniones
son la base de mtodos sensibles utilizados para la
determinacin del elemento correspondiente (San-
dell, 1978). Para la determinacin de fsforo la reac-
cin es la siguiente:
7H3PO 4 + 12(NH 4)6Mo7O244H2O
7(NH 4)3(PO 4(MoO3 )12) + 51NH4 + + 51OH + 33H2O
El complejo de fosfomolibdato tiene una mezcla
de Mo+5 y Mo+6, su composicin es indefinida. Este
complejo es reducido a un compuesto azul soluble
cuya absorbancia es medida espectrofotomtrica-
mente y es proporcional a la cantidad de fsforo
presente en la muestra. Varios agentes reductores se
han utilizado para este fin, entre ellos el cloruro
estanoso, agentes reductores orgnicos como el cido
1-amino-2-naftol-4-sulfnico + sulfito e hidroquinona.
Recientemente se ha utilizado el cido ascrbico con
buenos resultados (Egan, 1988; Sandell, 1978).
En el presente trabajo se aplic un mtodo
espectrofotomtrico basado en la reaccin del fsfo-
ro, presente en la muestra, con molibdato de amonio
para producir el complejo de color azul de fosfomo-
libdato; como agente reductor se utiliz el cido
ascrbico.
Las muestras fueron adquiridas en diferentes
comercios de la zona metropolitana.
Reactivos
Fosfato dicido de potasio (KH2PO4)
Molibdato de amonio
cido ascrbico
Agua desionizada
H2SO4
Todos los reactivos utilizados fueron grado analtico.
Soluciones
Solucin stock de P2O5
Pesar 0.1915 g de KH2PO4 seco. Disolver con agua
desionizada y aforar a 1000 mL.
Esta solucin contiene 100 ppm de P2O5.
Solucin de trabajo
Diluir la solucin anterior a una concentracin
final de 4 ppm de P2O5
Abril de 2001
CMO SE EXPERIMENTA
Solucin reductora
Se compone de tres reactivos: a) 0.7800 g de molib-
dato de amonio en 39 mL de agua; b) 1.056 g de
cido ascrbico en 60 mL de agua; c) 11 mL
de H2SO4 concentrado en 125 mL de agua. Mezclar
a, b y c, y aforar a 250 mL con agua desionizada.
Todo el material utilizado fue lavado previamente
con agua desionizada.
Equipo
Espectrofotmetro Turner Modelo 390 con celdas
cilndricas de 1 cm de trayecto ptico.
Procedimiento experimental
Preparacin de la curva de calibracin
Se prepararon 5 estndares en matraces de afora-
cin de 10 mL correspondientes a 0.4, 0.8, 1.2, 1.6
y 2 ppm. A cada matraz se aadieron 1, 2, 3, 4 y
5 mL respectivamente de solucin de trabajo,
4 mL de solucin reductora y se aforaron a 10 mL
con agua desionizada. Se incubaron durante
45 minutos a 50C. Despus del tiempo de incu-
bacin se ley la absorbancia a 830 nm frente a
un blanco. Se graficaron los valores de absorban-
cia contra concentracin (figura 1).
Preparacin de la muestra
Se trabaj con refrescos de cola (Coca-Cola, Pepsi-
Cola y Coca-Cola Light, Pepsi Light y Pepsi Max)
los cuales fueron desgasificados con vaco y agi-
tacin constante. Se tom 1 mL de refresco des-
gasificado y se afor a 50 mL. De esta solucin se
tom 1 mL, se aadieron 4 mL de solucin reduc-
tora y se afor a 10 mL con agua desionizada. Se
trabajaron seis muestras de cada refresco y las
Curva de calibracin para fsforo
0.6
0.5
0.4
A
0.3
0.2
0.1
0
0 0.4 0.8 1.2 1.6 2
ppm de P2O5
Fiura 1. Curva de calibracin para fsforo.
117
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Tabla 1. Curva de calibracin para la determinacin de Tabla 2. Resultados del contenido de fsforo en bebidas
fsforo. de cola*.
Concentracin Absorbancia promedio Refresco Contenido promedio C.V.
ppm a 830 nm ppm %
0.4 0.107 Coca-Cola 215 1.78
0.8 0.217 Pepsi-Cola 223 1.14
1.2 0.320 Coca-Cola Light 199 0.79
1.6 0.414 Pepsi Light 186 1.32
2.0 0.494 Pepsi Max 201 3.00
* Concentracin expresada como P2 O5. *n=6

determinaciones se realizaron por triplicado. Se
calcul el promedio y el coeficiente de variacin
para evaluar la reproducibilidad del mtodo.
Mtodo por CLAR para determinacin de
cafena
Las llamadas bebidas ligeras que tienen sabor de cola
contienen cafena puesto que estn elaboradas con
las semillas del rbol cola acuminata. Estas semillas
llamadas nueces de cola contienen aproximada-
mente 2% de cafena. (Goodman 1991). Este alcaloi-
de estimula la corteza cerebral, produce un pensa-
miento rpido y claro, y aleja la pesadez y la fatiga.
La cafena es determinada por cromatografa de
lquidos de alta resolucin (CLAR) utilizando fase
inversa octadecilsilano con una mezcla metanol-
agua como fase mvil.
Reactivos
---- Cafena grado analtico
---- Agua filtrada por el sistema Milli-Q
---- Metanol grado cromatogrfico
Soluciones
---- Solucin de cafena 1 mg/mL en agua
desionizada.
Equipo
Cromatgrafo de lquidos Beckman System Gold
con bomba binaria modelo 126. Detector UV-Vis con
arreglo de dodos modelo 168.
cin y se graficaron los valores de altura de pico
en funcin de la concentracin.
Preparacin de la muestra
La muestra fue desgasificada y filtrada con el kit
para muestras con un filtro millipore de 0.45 m
de dimetro. El filtrado obtenido se inyect direc-
tamente en el cromatgrafo en donde se trabaj
con una columna de fase inversa octadecilsilano
de 150 4.6 mm y con un tamao de partcula de
5 m. Como fase mvil se utiliz metanol-agua en
una proporcin 40/60 a una velocidad de flujo
de 1 mL/min. Se inyectaron 20 L. La deteccin
fue por UV a 254 nm.
RESULTADOS
Para fsforo
Se obtuvo la linearidad de la curva de calibracin en
un rango de 0.4 a 2 ppm de P2 O5.
Con los datos obtenidos y aplicando mnimos
cuadrados se lleg a la ecuacin Y = 0.2428 X --
0.0191 con un coeficiente de correlacin (r) de 0.999.
Las lecturas obtenidas se muestran en la tabla 1.
Las lecturas promedio de absorbancia obtenidas
para las muestras analizadas se interpolaron en la curva
de calibracin para obtener la concentracin de P2O5.
Para encontrar el fsforo presente en el refresco,
tomando en cuenta la dilucin realizada, se hizo el
siguiente clculo:
62g de P
ppm de P = X ppm de P2O5 50 10
142g de P2O5

Procedimiento experimental El contenido de este elemento en los refrescos

Preparacin de la curva de calibracin
Se prepararon 5 estndares a una concentracin
final de 0.0625, 0.125, 0.25 y 0.5 mg/mL a partir
de la solucin de 1 mg/mL. Con estas cinco
concentraciones se realiz una curva de calibra-
118
analizados se muestra en la tabla 2.
Para cafena
En la figura 2 se observa el cromatograma obtenido
para un estandar de 0.5 mg/mL de cafena. El pico
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 CMO SE EXPERIMENTA

Figura 2. Cromatogramas para: (A) Estndar de cafena de 0.5 mg/mL; (B) Refresco de cola normal, y (C) Refresco de cola light. En los tres
cromatogramas el pico 1 corresponde a la cafena, con un tiempo de retencin de 3.54 min. Las condiciones cromatogrficas utilizadas
estn descritas en el texto.

tuvo un tiempo de retencin de 3.54 min. En la figura 2 preparacin. La solucin reductora, una vez prepa-
tambin se observan los cromatogramas repre- rada, se almacen mximo durante una semana en
sentativos de refrescos de cola normal y light respec- refrigeracin y oscuridad. La determinacin se lle-
tivamente. Adems del pico de la cafena se observan va a cabo de una manera rpida y sencilla y los re-
otros picos pequeos y uno muy notable, debido sultados obtenidos son reproducibles tanto para la
probablemente al edulcorante utilizado. La identifi- curva de calibracin como para el anlisis de las
cacin se hizo por el parmetro de tiempo de reten- muestras.
cin y por coinyeccin. Tanto para estndares como El color del refresco interfiere con el mtodo
para muestras el tiempo de retencin fue reproduci- colorimtrico, por lo que algunos autores (Lozano-
ble. No se requiri de dilucin del refresco por lo que Calero, 1996) recomiendan una separacin del cido
los resultados se obtuvieron directamente de la cur-
va de calibracin tomando como base la altura de Tabla 3. Resultados del contenido de cafena en bebidas
pico obtenida del cromatograma de cada una las de cola*.
muestras analizadas. Los resultados se muestran en Refresco Cafena C.V.
la tabla 3. mg/mL %
Coca-Cola 0.158 0.50
Discusin y conclusiones
Coca-Cola Light 0.169 1.65
De entre los diferentes mtodos que se reportan para
la determinacin de fsforo se utiliz el espectrofo- Pepsi-Cola 0.139 1.58
tomtrico del azul de molibdeno con el molibdato Pepsi-Cola Light 0.170 2.23
de amonio y cido ascrbico para desarrollar el
Pepsi Max 0.150 5.20
color, presentando ste las ventajas de que los reac-
tivos se consiguen fcilmente y son rpidos en su *n=6

Abril de 2001 119

CMO SE EXPERIMENTA
fosfrico del resto de los componentes de la muestra
por cromatografa de intercambio inico antes de
realizar la determinacin Se prob este tcnica de se-
paracin pero en nuestro caso se observ que la
muestra eluda conservaba el color del refresco. A
la par se realiz una dilucin 1 a 50 directa de la
muestra. Se determin el fsforo en las muestras lim-
pias y en las muestras directas con el procedimiento
descrito anteriormente y se compararon los resulta-
dos observndose que no haba diferencia entre ellos
por lo que se decidi excluir la cromatografa.
Se observ que los refrescos de dieta contienen
una mayor cantidad de cafena y una menor cantidad
de fsforo que los normales. De acuerdo con nues-
tros resultados 355 mL de un refresco de cola pro-
porcionaran entre 66 y 85 mg de fsforo y entre 49
y 60 mg de cafena. Podra pensarse que tal vez estas
dosis sean muy bajas y no causen dao a la salud.*
Existen datos en donde se menciona que en escola-
res, la ingestin de cuatro refrescos de 355 mL a la
semana se asocia con hipocalcemia, mientras que
una dosis de cafena de slo 32 mg puede afectar la
conducta, que un solo trago es suficiente para iniciar
el dao en los dientes, etctera (Amato, 1995). De
aqu que no es conveniente el declarar que el tomar
una cierta cantidad de refresco sea seguro y/o no
cause efectos en el organismo. Lo que deber tomar-
se en cuenta es que los riesgos a la salud provocados
por la ingesta de refrescos depende de qu grupo de
la poblacin lo est tomando pero sobre todo de la
frecuencia con que lo haga. Los posibles daos son
muy diversos de manera que vale la pena difundir
esta informacin y recomendar ser prudente con el
consumo de estos productos sobre todo cuando se trata
de lactantes y nios.
Consideramos estas dos prcticas interesantes,
ya que, por un lado, se cumple el objetivo del desa-
rrollo de dos de las tcnicas instrumentales ms
importantes aplicadas en el anlisis de alimentos,
particularmente bebidas, en donde el tratamiento de
la muestra es sencillo. Los dos mtodos desarrollados
por el alumno son sencillos y rpidos pero a la vez
requieren de actividad y atencin constante. Por otro
lado, con la informacin que se ofrece acerca de los
posibles efectos de estos productos en nuestro or-
ganismo, sobre todo cuando son consumidos en
* Las cifras normales de fsforo srico inorgnico en los
adultos son entre 2.8 y 4 mg/100 mL y la excrecin por la
orina de fosfatos obtenidos de una dieta normal es de apro-
ximadamente 70%. Anderson, 1995).
120
forma excesiva, tal vez pueda favorecerse una con-
ducta ms responsable entre los consumidores uni-
versitarios. ?
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