AISLAMIENTO E IDENTIFICACION DE ADN

INTRODUCCION

El DNA no existe como molcula libre en las clulas, por el contrario se

encuentra asociado con protenas y RNA. Es por esto, que los procesos de
extraccin y aislamiento de DNA de una clula y de otras molculas es el
primer paso para muchos procedimientos de laboratorio en biotecnologa,
biologa molecular, gentica e inmunologa entre otras ciencias. Estos procesos
involucran generalmente, rompimiento de las clulas, desnaturalizacin de
protenas y la precipitacin del DNA como material fibroso. Una vez obtenido el
DNA puede ser sometido a diferentes procedimientos como: estudios de
paternidad, trabajos forenses para captura de criminales, la amplificacin
mediante PCR de secuencias especficas con fines comerciales o teraputicos,
el estudio de expresin de genes entre otros procedimientos (s quieres
aprender ms acerca de las aplicaciones y manipulacin del DNA consulta los
enlaces interactivos que aparecen al final de la practica). Los pasos que se
darn en esta prctica, son similares a los utilizados en los equipos sofisticados
de las industrias biotecnolgicas; razn por la cul el estudiante debe
comprender la importancia de cada uno estos. Ve a la galera de imgenes
para que observes los niveles de empaquetamiento del DNA.

OBJETIVOS:

OBJETIVO GENERAL

Aislar e identificar DNA de muestras de cebolla.

OBJETIVOS ESPECIFICOS

Comprender la importancia de cada uno de los reactivos empleados

para la obtencin de DNA.
Diferenciar el DNA de otros componentes celulares mediante una
reaccin de coloracin.

AISLAMIENTO DE ADN

El ADN se encuentra estructurado en entidades discretas denominadas

cromosomas; en procaritas el ADN est suspendido en el citoplasma mientras
que en eucariotas se encuentra compartimentado en el ncleo; adems existe
ADN en otras estructuras como los virus y dentro de las clulas eucariotas en
los cloroplastos y las mitocondrias.

En trminos generales la purificacin o aislamiento de ADN implica el

rompimiento de la estructura que lo contiene y la eliminacin de cualquier
sustancia contamnate o molcula unida a ste, como son las protenas, las
membranas y las sales, etc.
El primer paso en la elaboracin del ADN recombinante es el aislamiento del
ADN donante y el vector. Los protocolos generales para el aislamiento de ADN
han estado disponibles desde antes del desarrollo de la tecnologa del ADN
recombinante, con el uso de estos mtodos el ADN extrado puede ser nuclear
en eucariotes o el genoma principal en procariotes; estos son algunos de los
tipos de ADN requerido para estos anlisis. El procedimiento utilizado para
obtener un ADN del vector depende de la naturaleza del mismo. Los plsmidos
son comnmente utilizados como vectores y estos vectores pueden ser
purificados del ADN genmico bacteriano. Uno de los protocolos utilizados para
el aislamiento del plsmido es por ultracentrifugacin; el ADN del plsmido
forma una banda diferente despus de la ultracentrifugacin en un gradiente de
densidad de cloruro de cesio conteniendo bromuro de etidio. La banda del
plsmido es colectada por medio de una perforacin en el tubo; otro tipo de
protocolo se basa en el pH alcalino de la solucin en el cual el ADN genmico
bacteriano se degradada pero el plsmido no, despus de la neutralizacin el
ADN genmico se precipita pero el ADN plasmdico se mantiene en la solucin.
Los fagos como el l tambin puede ser aislados y utilizados como vectores en
sistemas bacterianos, el ADN del fago es aislado desde una suspensin pura
de fagos y recuperado desde un fago lisado. (Griffiths 2000).

IDENTIFICACION DE ADN

La identificacin gentica mediante de ADN se hace para analizar la formacin

de ADN nico de una persona especfica. Es extremadamente raro que dos
personas tengan la misma informacin de ADN en las clulas de sus cuerpo. El
ADN se recolecta mediante la sangre, saliva, semen, la raz de un cabello y
rozaduras de la piel. La identificacin gentica de ADN tiene muchos usos,
particularmente relacionados con la identificacin y las relaciones.

Determinar relaciones familiares

La identificacin de ADN se puede utilizar para determinar si dos personas

estn relacionadas. La prueba de ADN puede decir si un padre o madre son los
verdaderos padres del hijo, y tambin puede decir si dos personas son
hermanos. Esta identificacin se ha utilizado en casos en donde dos bebs se
han cambiado en el nacimiento. Tambin se ha usado en casos donde la
paternidad de un nio est en duda y necesita comprobarse si un hombre en
especfico es en realidad el padre biolgico de un nio.

Resolver un crimen

La identificacin gentica de ADN tambin se puede usar para determinar si

una persona estuvo involucrada en un crimen, lo presenci o es el perpetrador
del mismo. Una persona que comete una violacin se puede identificar por el
semen, clulas de la piel, e incluso por el sudor que dej en la escena del
crimen. Cualquiera que sea el crimen, el criminal a menudo dejar alguna
forma de evidencia de ADN, incluso si es la mnima gota de sangre de un
rasguo. Esta evidencia tambin se puede usar para sealar a una persona
exacta como responsable de un crimen.

Identificar un cuerpo

La evidencia de ADN se puede utilizar para determina la identidad de una

persona que falleci. A veces, un cuerpo tiene lesiones que alteraron el fsico, o
est en un estado de descomposicin que hace imposible determinar cmo
luca cuando estaba vivo. La identificacin gentica de ADN se puede
comparar con la informacin de ADN de personas perdidas, o con familiares de
las personas perdidas para saber si es la persona que se busca.

Predecir enfermedades heredadas genticamente

La identificacin gentica de ADN se puede usar para determinar las

posibilidades de que dos personas hereden una enfermedad genticamente a
su hijo. Este tipo de prueba tambin se puede hacer para ver si un recin
nacido tiene un gen que indica que tiene o desarrollar una enfermedad
gentica.