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Determinacion de Proteinas Por El Metodo de Kjeldahl
Determinacion de Proteinas Por El Metodo de Kjeldahl
I. Introduccin
Las protenas son un componente abundante en todas las clulas, y casi todas
excepto protenas de almacenamiento son importantes para las funciones biolgicas y la
estructura celular. Las protenas de los alimentos son muy complejas. Muchos han sido
purificados y caracterizados.
Las protenas se pueden clasificar por su composicin, estructura, funcin
biolgica o propiedades de solubilidad.
Por ejemplo, las protenas simples contienen slo aminocidos tras la hidrlisis,
pero las protenas conjugadas tambin contienen componentes no aminocidos.
Las protenas tienen conformaciones nicas que podran ser alteradas por
desnaturalizantes tales como calor, cido, lcali, urea 8M, guanidina-HCl 6M, disolventes
orgnicos y detergentes. (Ruiz , 2011)
II. Marco terico
El anlisis de las protenas se complica por el hecho de que algunos componentes
de los alimentos poseen propiedades fisicoqumicas similares. El nitrgeno no proteico
podra provenir de aminocidos libres, pequeos pptidos, cidos nucleicos, fosfolpidos,
aminocidos, porfirina y algunas vitaminas, alcaloides, cido rico, urea y iones amonio.
Por lo tanto, el nitrgeno orgnico total en los alimentos representara nitrgeno
principalmente de protenas y en menor medida de todas las sustancias no proteicas
orgnicas que contienen nitrgeno. Dependiendo de la metodologa, otros componentes
importantes de los alimentos, incluidos los lpidos y los hidratos de carbono, pueden
interferir fsicamente con el anlisis de las protenas alimentarias.
Numerosos mtodos se han desarrollado para medir el contenido de protenas. Los
principios bsicos de estos mtodos incluyen las determinaciones de nitrgeno, enlaces
peptdicos, aminocidos aromticos, capacidad de unin al colorante, absorcin de
ultravioleta de protenas y propiedades de dispersin de la luz. Adems de factores como
la sensibilidad, la precisin, la precisin, la velocidad y el costo del anlisis, lo que
realmente se est midiendo debe considerarse en la seleccin de un mtodo apropiado
para una aplicacin particular. (Nielsen, 1998)
Mtodo Kjeldahl :
Fundamento
El mtodo se basa en la destruccin de la materia orgnica con cido sulfrico
concentrado, formndose sulfato de amonio que en exceso de hidrxido de sodio libera
amonaco, el que se destila recibindolo en:
a) cido sulfrico donde se forma sulfato de amonio y el exceso de cido es valorado con
hidrxido de sodio en presencia de rojo de metilo, o
b) cido brico formndose borato de amonio el que se valora con cido clorhdrico.
(Ruiz , 2011)
III. Objetivo
Determinar el contenido en protenas de diversos alimentos haciendo uso del
mtodo Kjeldahl.
IV. Equipos y materiales
Balanza analtica ( Henkel) cido sulfrico concentrado
Equipo Kjeldahl (KDN) 0.1 N
Alimentos Sulfato de potasio
Bureta (Isolab) Sulfato cprico
Erlenmeyer 150 ml (Isolab) Hidrxido de sodio 30%
Vasos de precipitacin 50 Indicador Tashiro
ml(Isolab) cido brico al 2 %
Indicador fenolftalena
V. Procedimiento
a. Digestin
b. Destilacin:
Se agrega en un vaso 50 ml de cido brico al 2 % y unas gotas de indicador ta-
shiro.
Conectar al equipo de destilacin. Colocar el tubo de digestin con la muestra
digestada mas unos 10 ml de agua destilada y unas gotas de fenolftalena en el equipo de
destilacin.
Adicionar hidrxido de sodio al 30 % , abriendo la llave del embudo que est
conectado al baln ( hasta que aparezca color rosa-fucsia) , luego encender la hornilla
calefactora , observar que el color del lquido destilado cambia ,lavar la alargadera con
agua destilada .Retirar el vaso que contiene el destilado y luego desconectar la hornilla.
c. Titulacin:
Valorar el destilado con una solucin de cido sulfrico o clorhdrico 0.1
N (Estandarizado), hasta cambio de color.
Figura 1 Tubo de digestin con la muestra Figura 2 Adicionar (NaOH)
VI. Resultados y discusiones
6.1 Caihua:
%N = V*N*14*100/m*1000
%N = (1.9)*(0.177)*(14)*(100)/1*1000
%N = 0.47
% Protena = %N*F
%Protena= 0.47*6.25
%Protena =2.9375
6.2 Caqui:
%N = V*N*14*100/m*1000
%N= (1.2)*(0.177)*(14)*100/(1.05)*(1000)
%N = 0.28
% Protena = %N*F
% Protena = 0.28*6.25
% Protena= 1.77
Segn las tablas de composicion de alimentos en 100gr de caqui exite 0.5% de
proteinas , en 1.5 gramos sera 0.0075 , el analisis se obtuvo 1.77% . ( Reyes Garca,
Gmez-Snchez Prieto, Espinoza Barrientos, Bravo Rebatta, & Ganoza Morn, 2009)
Figura 4 Titulacin (1.2 gasto)
VII. Conclusiones
El mtodo kjeldahl es el mtodo patrn para determinar la protena contenida en
cereales, carnes y otros materiales biolgicos.
El caihuaco tiene ms porcentaje de protena a comparacin con el caqui e2.937%
y 1.77% respectivamente, comparando con la literatura es mucha la diferencia.
Los resultados no se asemejan con lo que nos dice la literatura eso se debe talvez
por error durante el proceso de digestin : perdida de nitrgeno durante la digestin ,
digestin incompleta de la muestra porque falta de tiempo o falta de cido sulfrico .
VIII. Cuestionario
8.1 Para que es importante el anlisis de las protenas
El anlisis de protenas es importante para:
Etiquetado nutricional
Precios: El costo de ciertos productos bsicos se basa en el contenido de
protena medida por el contenido de nitrgeno (por ejemplo, granos de cereal,
leche para producir ciertos productos lcteos, por ejemplo, queso).
Investigacin de propiedades funcionales: Las protenas de diversos tipos de
alimentos tienen propiedades funcionales nicas en alimentos: por ejemplo,
gliadina y gluteninas en harina de trigo para panificacin, casena en leche
para coagulacin en productos de queso y albmina de huevo para espumar.
Determinacin de la actividad biolgica: Algunas protenas, incluyendo
enzimas o inhibidores enzimticos, son relevantes para la ciencia alimentaria
y la nutricin: por ejemplo, las enzimas proteolticas en la ablandamiento de
las carnes, las pectinasas en la maduracin de los frutos y los inhibidores de
la tripsina en las semillas de leguminosas son protenas. Para comparar entre
muestras, la actividad de las enzimas a menudo se expresa en trminos de
actividad especfica, lo que significa unidades de actividad enzimtica por mg
de protena. (Nielsen, 1998)
El anlisis de protenas es necesario cuando se quiere saber:
Contenido total de protenas
Contenido de una protena particular en una mezcla
Contenido proteico durante el aislamiento y purificacin de una protena
Nitrgeno no proteico
Composicin de aminocidos.
Valor nutricional de una protena.
8.2 Porque no es igual el factor de conversin de nitrgeno a protena para todos los
alimentos por el mtodo Kjeldahl? Y como se calcula el factor 6.25?
Se utiliza un factor para convertir el porcentaje de N en porcentaje de protena
bruta. La mayora de las protenas contienen 16% de N, por lo que el factor de
conversin es 6,25 (100/16 = 6,25). % N / 0,16 =% de protena .
O% N 6,25 =% de protena
Tabla 1 Nitrogen to Protein Conversion Factors forVarious Foods
8.3 Exprese en ecuaciones lo que sucede en el proceso de anlisis de nitrgeno por el
mtodo Kjeldahl.
Preparacin de la muestra Los alimentos slidos se mueven para pasar una
malla de 20 mallas. Las muestras para el anlisis deben ser homogneas. No se requieren
otros preparados especiales.
Digestin Colocar la muestra (pesada con precisin) en un matraz Kjeldahl.
Aadir cido y catalizador; Digerir hasta obtener una descomposicin completa de toda
la materia orgnica. El sulfato de amonio no voltil se forma a partir de la reaccin de
nitrgeno y cido sulfrico.
Clculos
Moles de HCl = moles de NH3
= Moles de N en la muestra [5]
Se debe hacer un blanco de reactivo para sustraer el nitrgeno del reactivo del
nitrgeno de la muestra.
Dnde:
NHCl = normalidad de HCl, en mol / 1000 ml
Vol. cido corregido. = (Ml de cido estril para la muestra) - (ml de cido estndar
para blanco)
14 = peso atmico del nitrgeno
Se utiliza un factor para convertir el porcentaje de N en porcentaje de protena bruta.
La mayora de las protenas contienen 16% de N, por lo que el factor de conversin
es 6,25 (100/16 = 6,25). (Nielsen, 1998)
El vaso precipitado contiene cido brico. Con el siguiente indicador tashiro (rojo metilo
y verde de bromo crisol), formndose ion borato de amonio en el vaso. (Chiroque Garcia
, 2012)
Bibliografa
Reyes Garca, M., Gmez-Snchez Prieto, I., Espinoza Barrientos, C., Bravo Rebatta, F., &
Ganoza Morn, L. (2009). TABLAS PERUANAS DE COMPOSICIN DE ALIMENTOS. Lima.