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Cuantificacic3b3n de Protec3adnas1 (1) Grafico
Cuantificacic3b3n de Protec3adnas1 (1) Grafico
INTRODUCCIN
Las protenas ocupan un lugar de mxima importancia entre las molculas
constituyentes de los seres vivos (biomolculas). Prcticamente todos los procesos
biolgicos dependen de la presencia o la actividad de este tipo de molculas (Berg
et al, 2008).
OBJETIVO GENERAL
Aplicar un mtodo colorimtrico para determinar la concentracin de protena en
una muestra problema.
OBJETIVOS PARTICULARES
- Aprender el manejo del espectrofotmetro y su aplicacin en los mtodos
colorimtricos.
- Aprender el empleo de una curva patrn para la determinacin de la cantidad
de molculas presentes en una muestra, en este caso de protenas.
- Determinar la concentracin de protenas en una muestra de leche, utilizando
el mtodo de Biuret.
HIPTESIS
Si se mide la absorbancia a 540 nm de una muestra coloreada con el reactivo de
Biuret sta ser proporcional a la concentracin de protena de dicha muestra.
MATERIAL Y MTODO
En seguida, los tubos 7 con 0.25ml y 8 con 0.5ml de casena, el 9 con 0.25ml y el
10 con 0.5ml de sobrenadante, el 11 con 0.25 ml y el 12 con 0.5ml de leche diluida,
(todo esto obtenido en la prctica anterior); a todos los tubos se les agrego Cloruro
de Sodio al 0.9% con diferente cantidad de 2.9ml al 2, 2.8ml al 3, 2.6ml al 4, 2.2ml
al 5 y 2ml al 6. Para tener una solucin de 3ml y reactivo de Biuret con la misma
cantidad de 3 ml, as logramos una solucin de 6ml, se homogenizo la solucin por
medio de un agitado tipo vortex. (Solamente al tubo 1 se le agregaron 3 ml de
reactivo de biuret y 3 ml de NaCl)
Con los valores de la tabla anterior, tubos dos a seis, se realiz la grfica 1, de la
curva patrn de protena, obtenida por el mtodo de regresin lineal de mnimos
cuadrados; donde las abscisas (x) representan la concentracin en mg de protena,
y las ordenadas (y) los valores de la absorbancia de cada concentracin.
0.35
0.25
0.2
0.15
0.1
0.05
0
0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10
Proteina (mg)
DISCUSIN
De acuerdo a los resultados finales (tabla 4) obtenidos en la determinacin de la
concentracin de protena en las muestras de casena, sobrenadante y leche
diluida, que aunque no son los esperados, pues, la concentracin de protenas
tendra que ser mayor en la leche diluida que en el sobrenadante y los valores de la
concentracin de cada muestra problema iguales entre s, no se descarta este
mtodo de cuantificacin de protenas, pero es recomendable utilizar los materiales
de laboratorio correctos para hacer las diluciones y ser precisos, mas aun exactos,
en la medicin de volmenes.
CONCLUSIN
Efectivamente, aplicando el mtodo Biuret se puede determinar la concentracin de
protena en una o varias muestras problema, que resultan al interpolar los valores
de absorbancia en una curva patrn originada a partir de concentracin de protena
conocida.
BIBLIOGRAFA
Berg, J.M.; John, L.T.; Lubert, S. (2008) Bioqumica. 2 ed. Revert, Barcelona.
Harris, D.C. (2003). Quantitative chemical analysis. San Francisco: W.H. Freeman.
ANEXO (CUESTIONARIO)
1.- describa que es el espectrofotmetro y para que sirve.
Sirve para calcular las concentraciones de las distintas sustancias en funcin de la
absorcin del color. Tcnicas de bioqumica y biologa moleculas.freifelder David.
Editorial reverte.2003
6.- explique si una curva patrn puede ser empleada para cuantificar sustancias
diferentes a las protenas y cual seria la diferencia con estas.
8.-realice una curva patrn con los datos de absorbancia y protena obtenidos en
una determinacin hipottica:
Se realizo una solucin estndar de albmina (10mg/ml).
Los valores de absorbancia referidos se determinaron por duplicado.
9.-con los datos obtenidos en el ejemplo anterior, determina la ecuacin de la recta
que representa la curva patrn.
11.- elabore una lista de 5 compuestos que se podran cuantificar empleando una
curva patrn, y menciona que importancia tiene determinar la cantidad de dichos
compuestos.