Los virus se replican dentro de las clulas vivas y usan la maquinaria
celular para la sntesis de su genoma y otros componentes. Para acceder, se han desarrollado una variedad de mecanismos que permiten la entrada de sus genes y protenas accesorias al husped. Muchos virus animales aprovechan la va endoctica que les permite la entrada mediante un programa complejo. En la interaccin entre la clula y el intruso, la clula proporciona seales crticas que permiten sufrir transformaciones moleculares que conducen a una internalizacin exitosa y un transporte efectivo del virus.
Aunque es extremadamente simple en su estructura y composicin, los
virus son maestros del camuflaje y el engao. Desprovisto de cualquier medio de independiente locomocin, que difunden mediante la explotacin clulas y organismos. Con la ayuda de los roedores, insectos y aves migratorias, y pasado a lo largo por el comercio mundial y los viajes, que se mueven en torno el mundo a una velocidad sorprendente. Una vez que entran el cuerpo de un husped potencial, pueden penetrar capas, se mueven a travs del torrente sanguneo, y se dispersan con la ayuda de clulas mviles y vas neuronales. Un momento crtico se produce cuando un virus partcula alcanza un potencial de la clula husped y agregados asimismo a la superficie. Ahora debe entregar sus accesorios de la cpside y las protenas de las clulas en una forma de replicacin competente, idealmente con un dao mnimo a la clula y dejando poca evidencia de su entrada para la deteccin de las defensas inmunes. Este no es un problema trivial porque las membranas celulares son impermeables a las macromolculas. Informacin general: La entrada de virus Las partculas virales median en la transferencia del genoma y accesorios proteicos virales de una clula husped infectada a una clula husped no infectada. La tarea consiste en empaquetar el genoma viral (ARN o ADN) y protenas accesorias, liberando el paquete de la clula infectad adems de la proteccin de los componentes esenciales durante transmisin extracelular, y la entrega de en una nueva clula husped. Muchos virus con un genoma de ADN deben entrar en el ncleo, mientras que los virus de ARN, con algunas excepciones, se replican en el citosol. En general, los virus utilizan una estrategia de "caballo de Troya" en el que la vctima asiste al intruso. Para extraer la asistencia de la clula husped, los virus utilizan la detallada "Informacin privilegiada" que han adquirido durante millones de aos de coevolucin con sus anfitriones. En una partcula tpica de virus animal, el viral ARN o ADN se condensa en icosadrica o nucleoprotena complejos helicoidales llamados cpsides. En los virus con envoltura, las cpsides son rodeadas por una bicapa lipdica que contiene glucoprotenas en punta virales. Adems, algunos virus contienen transcriptasas inversas, ARN polimerasas, quinasas, y otras protenas que son importantes durante la no capa, la replicacin, u otras etapas tempranas intracelulares. Para infectar una clula diana, una partcula de virus procede a travs de un proceso de entrada de mltiples etapas, durante donde cada paso es pre-programado y estrechamente regulada en el tiempo y el espacio. La figura 1 muestra micrografas electrnicas de algunos escalones de entrada de virus: la unin a la clula, la endocitosis, y nuclear importar. Otro paso crtico en la infeccin es un proceso, durante el cual el lpido debe ser derramado y las cpsides debe ser al menos parcialmente desmontada para exponer una competente para la replicacin del genoma. Una vez que la capa se ha producido, la movilidad del genoma dentro de la clula se restringe. El progreso a travs de la entrada y no capa programa depende de "seales" que la clula proporciona. Incluyen la interaccin con la superficie celular receptores, la exposicin a un pH bajo, y reinmersin en un ambiente reductor. Dichas seales activan cambios conformacionales pre programados y disociacin eventos en la partcula del virus. Para responder a las seales, las partculas de virus o algunas de sus protenas componentes (tales como la glucoprotenas en punta) se presentan en meta estable y fcilmente modificado estados conformacionales. Cuando desencadenada por una seal, el estado metaestable puede ser relajado para permitir cambios marcados en viral propiedades sin el aporte de energa externa. A continuacin, describimos varios ejemplos de este proceso. Los receptores y factores de fijacin: Para infectar, un virus debe unirse primero a la superficie de una clula. Las molculas a las que se los virus se unen constituir una coleccin diversa de protenas celulares, carbohidratos y lpidos. Ellos difieren de un virus a otro, y que van desde abundante y ubicuo a lo raro y celular especfica. Algunos de ellos simplemente sirven como factores de unin que se concentran los virus en la superficie de la clula. Otros son verdaderos receptores en que no slo se unen los virus sino que tambin son responsables de guiar el lmite virus en vas endoctica y para la transmisin de seales al citoplasma. Los receptores tambin pueden servir como seales que inducen cambios conformacionales que conducen a la membrana fusin y penetracin. La identidad y la distribucin de factores de unin y receptores determina en gran medida que los tipos de clulas, tejidos y organismos un virus puede infectar. Algunos virus utilizan mltiples factores de unin y los receptores en paralelo o en sucesin. En el caso de virus de la inmunodeficiencia humana (VIH) - 1, por ejemplo, contactos iniciales implican a menudo clula factores de unin de superficie tales como manosa miembros de la familia del receptor de lectina de tipo C de unin, la adhesin intercelular especfica de clulas dendrticas molcula (ICAM) -3- agarrando nonintegrin (DCSIGN), o el hgado y los ganglios linfticos especfica ICAM-3-agarrando nonintegrin (L-SIGN) (1, 2). Estas interacciones iniciales no inducen conformacional cambios en la glicoprotena. Cuando el glicoprotena 120 (gp120) de la subunidad del virus envolvente se une a la inmunoglobulina ms externa G dominio de CD4, se somete a un conformacional cambio que permite que el virus de asociar con sus co- receptores, los receptores de quimioquinas CXCR4 o CCR5 (3). La interaccin entre gp120 y CCR5 o CXCR4 desencadena la conversin de la subunidad gp41 sobre la fusin-competente conformacin (4, 5). Una situacin similar se observa para alphaherpes virus, para los que heperan proteoglicanos de sulfato de servir como factores de unin iniciales para una de las glicoprotenas (GC). Membrana fusin es inducida por otras glicoprotenas virales despus de interactuar con receptores adicionales, tales como la entrada del virus del herpes mediador (HVE), nectins, o integrinas (6). La interaccin individual entre un virus y un nico factor de unin o receptor puede ser dbil con una constante de unin tan bajo como milimolar (7, 8). Sin embargo, cuando se multiplica ms numerosos contactos, la avidez hace unin virus prcticamente irreversible. Envuelto virus tales como myxo- y paramixovirus que se unen a grupos de cido silico tienen pico glicoprotenas con actividad de la neuraminidasa. Ellos sirven como factores de receptores de destruir que la liberacin de los virus con destino si stos partculas virales no pueden proceder de su entrada programa (9). Las protenas de unin al receptor: En virus envueltos, son las glucoprotenas en punta que se unen a los receptores. A menudo son protenas multifuncionales que sirven adicionalmente como factores de fusin de membranas y / o receptordestroying enzimas. Datos estructurales sobre la espiga existen interacciones glicoprotena-receptor para varios virus con envoltura incluyendo hemaglutinina (HA) del virus de la influenza con cota cido silico (7), para gp120 del VIH-1 con CD4 unida (10), para la glicoprotena D de herpes virus simplex 1 (HSV-1) con lmite HVEA (11), para gp42 del virus de Epstein-Barr con el antgeno del linfocito humano unido (HLA) DR (12), y para la enfermedad de Newcastle protena HN de virus con el anmero beta de cido silico (13). En los virus no envueltos, las estructuras de los receptores se unen con proyecciones o muescas en la superficie de la cpside. Los adenovirus tienen fibras con prominentes homotrimeric perillas globulares que se proyectan desde cada uno de los 12 vrtices. La estructura cristalina de rayos X del adenovirus 12 mando, junto con el N- terminal Dominio de la Coxsackie y adenovirus receptor (CAR), muestra un gran contacto rea en el lado lateral de cada subunidad en el pomo (14). La base pentn de muchos adenovirus subfamilias contiene un RGD expuesta secuencia que asocia con las integrinas (15). En rinovirus y enterovirus, incluyendo polio, los receptores se unen en una hendidura en el la superficie de la cpside llamado el "can" (16). Para algunos virus, la unin puede causar la desestabilizacin de la partcula de virus, una primera etapa hacia la no capa. Encuadernacin de virus: Interacciones de carbohidratos / protenas tienen larga data, se sabe que juega un papel importante en viral la invasin (17). Algunos virus se unen especficamente a los grupos que contienen cido silico, y otros unirse a glicosaminoglicanos o glicolpidos. sulfato de heparn se ha identificado como una factor de unin de los virus del herpes, adenoasociados los virus, el virus del dengue, transmitida por garrapatas virus de la encefalitis, virus del papiloma, paramixovirus 3, y el virus de Sindbis (6, 18 23). Para algunos de estos, el grado de sulfatacin del heparn sulfato o la presencia de grupos generados por sulfotransferasas especficos es importante (6, 24). En la mayora de los casos, los hidratos de carbono sirven como factores de unin que no desencadenan cambios conformacionales. Virus Simian 40 (SV40) y el virus del polioma uso de ganglisidos (GM1, GD1a, y GT1b) durante la unin (25, 26). En polioma virus, el cido silico disacrido? 2,3- galactosa presente en estos ganglisidos se une a un bolsillo poco profundo en la cpside mayor protenas, VP1 (8). En algunos sistemas de virus, la lectina se encuentra en la superficie celular y el ligando de carbohidratos se encuentra en el virus. Sindbis VIH-1, virus, el virus de Dengue, citomegalovirus humanos, virus de la hepatitis C, y el virus del bola se unen todos a lectinas de la superficie celular, tales como DC-SIGN y L-SIGN, a travs de alta glicanos N-ligados manosa en su envoltura glicoprotenas (27-32). Endocitosis: Muchos virus animales confian en la endoctica de la clula maquinaria para la infeccin roductiva. Figura 2 muestra esquemticamente la endoctica vas de entrada de tres virus que replican en el ncleo: denovirus 2, influenza A, y SV40. Una de las ventajas de entrada endoctica es que los virus son dado un "viaje gratis" de profundidad en el citoplasma. Esto se debe a endoctica vesculas estn diseados para atravesar el barreras impuestas por el citoesqueleto cortical y el citoplasma altamente estructurado. Dependiente sobre el virus, partculas de virus entrantes pueden ver entrar estructuras endosomal, lisosomas, el retculo endoplasmtico (ER), y en ocasiones, el complejo de Golgi (33, 34). Una ventaja adicional de la endocitosis es que virus entrantes estn expuestos a compartimental ambientes que difieren de la extracelular medio. Para muchos virus, el ligeramente pH cido en los endosomas proporciona una cue esencial que desencadena la penetracin y no capa (35-37). Penetracin de intracelular vacuolas tambin tiene la ventaja de dejar no hay glicoprotenas virales expuestas en la celda superficie para la deteccin inmunolgica. Por ltimo, si la penetracin es ltico, como es el caso de los adenovirus-endosomal lisis de la membrana es probable a ser menos perjudicial para la clula que la lisis de la membrana plasmtica. Uno de los riesgos durante la endocitosis es posible la entrega al lisosoma, un compartimiento de degradacin y un callejn sin salida para la mayora de los virus. Esto es por qu los virus han ajustado cuidadosamente el umbral pH de activacin para que coincida con la de principios (pH 6 a 6,5) o endosomas tardos (pH 5-6) (38, 39). Que los endosomas tempranos y tardos constituyen distinta sitios de entrada ha sido confirmado recientemente con mutantes dominantes negativos de asociados-endosoma pequeas guanosina trifosfatasa (GTPasas) (40). Un mutante constitutivamente inactivo de rab5 (endosoma temprano) bloqueado la entrada de ambos virus Semliki Forest (pH 6,2) y la influenza virus (pH 5,4), mientras que el correspondiente mutante Rab7 (endosomas tardos) solamente la entrada del virus de la gripe bloqueado. El progreso de las partculas de virus individuales a travs endoctica compartimentos pueden ser rastreados con microscopia de vdeo en tiempo real (41 a 44). Individual partculas de virus fluorescentes se pueden observar para unirse a la superficie celular, a lo largo de difundir la membrana, se quedan atrapados en hoyos revestidos o caveolas, entrar por endocitosis, moverse a lo largo microtbulos, y as sucesivamente. Con el uso de tintes fluorescentes especficos, la acidificacin de partculas de virus y la fusin de la viral sobre con las membranas celulares puede ser supervisado. Balsa de Lpidos-Endocitosis media de los virus: SV40 y algunos otros virus eligen endoctica vas que pasan por alto la endocitosis mediada por clatrina. Uno de ellos consiste en caveolas, en forma de botella indentaciones de la membrana de plasma enriquecido en colesterol y esfingolpidos, caveolinas, y la sealizacin factores (45-48). Aunque en general inmvil, caveolas son conocidos para apoyar la internalizacin de ciertos ligandos fisiolgicos (49-51). Despus de la unin al ganglisido GM1, SV40 mueve lateralmente a lo largo de la membrana plasmtica hasta atrapado en un caveolae (42, 52) (Fig. 2). Entrada procede a travs de una vescula caveolar, la caveosome, y luego el buen ER. Penetracin en el citosol se cree que ocurre en el ER, despus de la cual el virus entra en el ncleo a travs de la complejos de poro nuclear (CPN). Esta va tiene muchas caractersticas interesantes e inesperadas [Para revisiones, vase (53-56)]. Caveolas son tambin utilizados por el virus del polioma en algunos tipos de clulas, virus del papiloma, virus y Echo 1 (57- 60). Adems de la caveolae, es evidente que clulas tienen otras vas clathrin independiente de endocitosis (55, 61). Estos noncaveolar, balsa vas dependientes de los lpidos son todava mal caracterizados. Pueden servir como una primaria ruta de entrada en busca de virus tales como poliomavirus (59, 62) y como una va de entrada alternativa para SV40 en clulas que carecen de caveolae (63). La presencia de mltiples vas y previamente no observadas retos orgnulos endoctica los supuestos establecidos sobre la entrada de muchos virus. Los procesos celulares pueden ser ms compleja de lo previsto, que se ilustra porla reciente observacin de que el virus de influenza, que fue pensado para entrar por revestidas de clatrina endocitosis hoyo, puede infectar clulas en las que revestidas de clatrina el transporte de vesculas se bloquea (64). Penetracin: La penetracin de los virus con envoltura se produce por fusin de membrana catalizada por protenas de fusin en la envoltura viral. La maquinaria involucrada es bastante simple, al menos si se compara al aparato necesario para intracelular eventos de membrana de fusin. Una razn de la simplicidad es que se utilizan los factores de fusin viral slo una vez. La actividad de fusin se desencadena por seales en forma de unin al receptor o baja pH (como se mencion anteriormente). Inducen, como una regla general, los cambios conformacionales irreversibles. Factores de fusin virales son actualmente divididos en dos clases principales. Factores de tipo I consisten de glucoprotenas en punta en la que homotrimrica las subunidades se unen mediante bobinas largo enrollado. Ellos son protenas de membrana que se sintetizan como protenas precursoras, plegadas, ensambladas y en oligmeros en la sala de emergencias. En trnsito a travs de la va secretora, se someten escisiones proteolticas postsynthetic que hacen ellos conformacionalmente metaestable y fusin competente (4, 65). Su estado metaestable permite la conversin de cooperacin en una menor conformacin de energa. Cuando se activa, la resultante conformacin expone hidrfobo secuencias de fusin que se insertan en el objetivo membrana. Se utiliza la energa libre liberada para obligar a las membranas ms cerca juntos en una sitio focal, lo que resulta en la fusin. HA de la gripe es la mejor estudiados en esta clase. Para ms informacin sobre este proceso bien estudiado, vase comentarios recientes (5, 7, 66, 67). Tipo II protenas de fusin se producen en flavivirus y en los virus alfa (68, 69). Ellos tener secuencias de fusin interna y se sintetizan y montados de manera heterodmeros con otra protena de la membrana. Cuando se expone a pH bajo, se produce un cambio en el cuaternario estructura; las subunidades de fusin. Los virus no envueltos tambin implican cooperativa cambios en partculas de virus desencadenados por pH de unin del receptor o baja (16, 72, 73). Los los virus se vuelven ms hidrfobo e interactan con las membranas directamente. En los adenovirus, se convierte en la base Penton ltico a pH bajo, y el virus se libera de endosomas rotos intactas con el resto de contenido endosomal (74, 75). Una variacin de el mismo tema es utilizado por reovirus, en que un pptido hidrfobo en protena de la cpside? 1 se expone, por lo que la ltica de la cpside (76). En el caso de virus picorna, receptor la unin a la can conduce a la prdida de la protena VP4 y la exposicin de la grupo cido mirstico en el trmino N de VP1. El virus es pensado para hundirse en la bicapa y la forma un "canal" protena forrado a travs del cual el ARN viral puede entrar el citosol (72). Transporte intracelular: Despus de la penetracin, el genoma de la mayora de los virus deben ser transportados ya sea para el ncleo o para citoslica especfica membranas. Difusin en el abarrotado y muy estructurado citosol no es eficiente dadas las grandes dimensiones de la mayora de cpsides y las largas distancias deben viajar (77, 78). Para moverse en el interior la clula, virus entrantes menudo explotar el citoesqueleto y celular protenas motoras. Como se ha revisado recientemente (77), hay dos formas principales de hacerlo; los virus puede permitir que las vesculas de endocitosis para transportar a ellos como luminal de carga pasiva, o la cpside penetrado s puede interactuar con los motores correspondientes. En el ltimo caso, una protena de la cpside se une y interacta con los factores celulares. El transporte a ncleo, generalmente implica el menos-enddirected dependiente de microtbulos dinena motor y su adaptador de protenas, dynactin. Actina tambin puede jugar un papel en la entrada del virus. Debido a que es rico en filamentos de actina, la cortical citoesqueleto plantea una barrera contra la movimiento hacia dentro de las cpsides y virus que entrar directamente a travs de la membrana plasmtica (79). Para superar la barrera, algunos virus, tales como SV40, activar la tirosina quinasa cascadas de sealizacin inducidas que llevan a la disociacin local de la actina filamentosa (52). La actina tambin se ha encontrado para promover vescula gemacin en la superficie celular y para propulsar virus que contiene vesculas de endocitosis a travs el citoplasma (44, 52). La liberacin de baculovirus desde los endosomas induce la polimerizacin de actina a un extremo de la cpside baculovirus, que promueve el movimiento de la cpside hacia el ncleo (80). Una de las protenas de la cpside (p78 / 83) tiene homologa con la de los mamferos Wilkott-Aldrich la protena del sndrome (WASP) y es por lo tanto probable que interactuar con Arp2 / 3, un complejo protena implicada en el montaje de actina (81). Sealizacin durante la entrada de virus: En los ltimos aos, tiene quedado claro que la el intercambio de informacin entre los virus entrantes y la clula husped no se limita a las seales dado al virus por la clula. Para muchos virus, toma la forma de un dilogo bidireccional en la que el virus se ventaja de la celda de propia transduccin de seales sistemas para transmitir seales a la clula (82, 83). Estas seales inducen a cambios que facilitan la entrada, preparan a la clula para la invasin, y neutralizan las defensas del husped. Las seales son generalmente generada en el superficie de la clula a travs de la la unin a receptores virus que son en s mismos molculas de sealizacin o moduladores (Por ejemplo, receptores de factores de crecimiento, receptores de quimioquinas, integrinas, y ganglisidos) y se puede activado por el virus de la agrupacin de unin o inducida por el virus. Miembros de la familia de SV40 y adenovirus C basar su estrategia de entrada totalmente de sealizacin (Figura 2). Mediante la activacin de tirosina quinasas en las caveolas, SV40 provoca la normalmente latente, ligandinducible va endocitosis caveolar. Un segundo la seal se induce en el caveosome de inducir el transporte caveosome-a ER (55). Al agrupar sus receptores principales, adenovirus 2 activa una variedad de protenas quinasas, fosfatidilinositol-3-OH quinasa, y pequeas GTPasas (82-84). Los principales cambios se producen en la superficie celular dinmica, y en el transporte de microtbulos mediada, que promuevan la internalizacin, la penetracin, y el trfico intracelular del virus entrante. citomegalovirus humano, un virus del herpes, activa varias vas de sealizacin a travs de la interaccin entre glicoprotena de envoltura B y el receptor del factor de crecimiento epidrmico (85). Importacin Nuclear: El ncleo proporciona excelentes funciones de "servicio" para la replicacin del virus, que van desde DNA y polimerasas de ARN a ARN de empalme y -modifying enzimas. Sin embargo, el ncleo es difcil de entrar y salir, y los virus debe de nuevo confiar en mecanismos celulares [para revisiones, vase (56, 86, 87)]. En las clulas en interfase, la importacin de virus y cpsides virales se produce a travs de los NPC (Fig. 3). Para la orientacin, los virus utilizan la localizacin nuclear seales y receptores de importacin citoslica. VIH-1 y se unen a adenovirus importin 7 y humana virus del papiloma 11 y 45, virus de la hepatitis B cpsidas, y nucleoprotenas del virus de la influenza, y (88- 92). Estudios recientes muestran que el lmite superior de dimetro de partcula para el transporte a travs de la NPC es de 39 nm (93). Los virus ms pequeos y cpsides, as como cpsidas helicoidales en extendida la forma, por lo tanto, pueden ser importados en el ncleo sin desmontar o deformacin. Entre las partculas icosadrica, parvovirus (Dimetro de 18 a 24 nm) y las cpsidas de virus de la hepatitis B (dimetro de 36 nm) son probablemente importados intactos (94). Las cpsidas de virus de la hepatitis B no tienen cubierta en la cesta en el lado nuclear del complejo de poros (95). Virus y cpsides de mayor tamao deben ser deforme ni se desmontan para permitir que el genoma para pasar a travs de la APN. Adenovirus 2 se une a NUP214 / CAN, una protena localizada en la base de los filamentos que se extienden en el citosol del poro nuclear (94) (Fig. 2). Interaccin del virus unido con la histona H1 y importins y 7 induce desmontaje del virus cpside. El ADN viral liberado as ha sido importado en el nucleoplasma. Las cpsidas HSV-1 (Dimetro 120 nm) tambin se unen a la CPN de una manera dependiente de importin, pero el se libera ADN a travs de una de las icosadrica vrtices de la cpside sin ms desmontaje cpside (96, 97). La cpside vaca permanece unido al complejo del poro por horas despus de que el ADN ha sido expulsado (98). Con la excepcin de los lentivirus, tales como VIH-1, los retrovirus no utilice el CPN para entrada en el ncleo. Complejos de pre-integracin slo puede entrar en el ncleo durante la mitosis cuando el nucleares sobre est temporalmente ausente, lo que limita su infectividad de las clulas en divisin. La base molecular para la captacin nuclear de lentivirus preintegration complejos no es del todo clara, pero no hay pruebas que tres protenas virales son importantes: la protena de la matriz, la enzima integrasa, y el vpr pequea protena accesoria. Adems, es informado de que un pequeo solape de triple cadena en el ADN provirus puede ser esencial al menos en algunas clulas. Para una discusin ms detallada de este tema, vase (87, 99, 100). Transferencia de clula a clula y sin infeccin de virus: Por ltimo, la infeccin se puede transmitir directamente de clula a clula. Los virus como el sarampin, la cual expresar en las protenas de la envoltura de la membrana plasmtica que son fusognico a pH neutro, a menudo inducir la fusin de clulas infectadas con infectada las clulas vecinas. Por lo tanto, los genes virales pasan directamente de clula a clula, se produce y la infeccin sin la participacin de las partculas virales. En una estrategia alternativa para la clula a clula transferencia, las partculas del virus vaccinia extracelular estn prcticamente empujado en una clula adyacente por polimerizacin de actina localizada en el interior de la clula infectada (101). La polimerizacin de actina se desencadena por una protena viral que recluta a la membrana plasmtica WASP, Arp2 /3, y otros factores celulares que promueven la polimerizacin de actina. La observacin de que el VIH-1 y otros lentivirus en algunos tipos de clulas brote en endosoma-como vacuolas ha planteado la posibilidad que las partculas del virus pueden ser liberados por el clula infectada de manera polarizada por los medios de secrecin regulada (102). VIH-1 partculas pueden, en este caso, ser directamente transmitida desde un macrfago a una clula T como parte de la interaccin normal de clula a clula. Tambin hay evidencia de que dendrtica clulas, sin ser infectado, pueden concentrarse VIH-1 en las regiones de contacto de clula a clula y por lo tanto promover la infeccin (103, 104). Perspectivas: Los virus siguen representando una grave amenaza para la vida y el bienestar de los seres humanos, animales, y otros organismos. En el pasado, la bsqueda para los medicamentos antivirales se centr principalmente en replicasas y otras enzimas virales. Esa entrada y uncoating pueden servir como un objetivo de antivirales ha sido recientemente demostrado por nuevos inhibidores contra la gripe neuraminidasa y la protena de fusin de VIH-1 (105, 106). Con nuestra informacin rpidamente alcanzar el nivel molecular, puede ser posible desarrollar nuevos enfoques para bloquear la entrada de virus .Aprovechando su capacidad para entrar clulas y expresar sus genes, los virus se utilizan como vectores para la expresin de protenas recombinantes en las clulas y para la produccin de protenas. En la terapia gnica, los virus se utilizan para entregar genes a las clulas y tejidos. Aunque todava hay muchos problemas con este tipo de terapia, ms informacin sobre los receptores de virus y los mecanismos de entrada ayudar a que los virus ms seguro y ms tiles como herramientas teraputicas. Anlisis de virus tiene tradicionalmente proporcionado informacin sobre los principios bsicos de la expresin gnica, la biologa molecular, y cncer. Hoy en da, los virus siguen siendo de gran alcance herramientas en muchas reas de investigacin, incluyendo biologa celular, biologa molecular e inmunologa. El anlisis cuidadoso de virus-clula temprano es probable que se extienda an nuestra interaccionescomprensin incompleta de la membrana plasmtica dinmica, la fusin de membranas, endoctica vas, y muchos otros aspectos de la funcin celular. Fig. 1. Micrografa electrnica de la entrada del virus. virus (A) Semliki Forest, una toga envoltura sencilla (alfa) virus, se une a la superficie del beb de rin de hmster (BHK-21) clulas en grandes cantidades. Algunos de los virus estn asociados con las microvellosidades, mientras que otros se localizan en hendiduras que corresponden a depresiones revestidas de clatrina (flechas). [Cortesa: J. Heuser y A. Helenius] (B) partculas de virus Semliki Forest en clathrincoated vesculas. [Cortesa: J. Kartenbeck y A. Helenius] (C) de SV40 partculas (puntas de flecha) son internalizados por vesculas caveolar ajustados y transportados a caveosomes que contienen mltiples virus. [Cortesa: J. Kartenbeck y A. Helenius] (D) Las cpsides de humanos virus de la hepatitis B (puntas de flecha) pasar a travs de los NPC en trnsito desde el citoplasma al nucleoplasma. En el experimento se ilustra en la esta micrografa, partculas de cpside recombinantes de tipo eran micro-inyectados en ovocitos de Xenopus, y su interaccin con los poros nucleares visualizado en secciones micrografa electrnica. Filas de cpsides alineados dentro de los NPC (flechas). [Cortesa: N. Pante y M. Kann].
Fig. 2. La entrada de adenovirus, virus de la gripe, y SV40 en sus clulas
husped. (A) La inclusin de adenovirus 2. Los adenovirus son virus no envueltos de ADN con una cpside icosadrica compuesta por hexn protenas, complejos de base pentona, y fibras homotrimrica. El proceso de inscripcin incluye la siguiente pasos (82-84): (1) Las fibras se unen a la Repblica Centroafricana. (2) Las fibras se disocian, y los pentones exponen RGD secuencias que se unen a integrinas. (3) La agrupacin de las integrinas se activa la fosfatidilinositol-3-OH quinasa, Rac y Cdc42, lo que resulta en reordenamientos del citoesqueleto. (4) El complejo virus-integrina interioriza en las vesculas revestidas de clatrina. (5) El virus se transporta a los endosomas tempranos. (6) A un pH de 6, la base pentn sufre un cambio conformacional y el virus se escapa en el citosol por lisis endosomal. (7) Las partculas de virus se unen dinena y son transportados a lo largo de los microtbulos a la APN. (8) cpsides muelle en la protena de la APN CAN / NUP214, desmontar, y (9) liberar el virus ADN para el transporte a travs del poro. (B) Entrada del virus de la influenza tipo A. A es una envoltura virus de ARN de cadena negativa. Entrada procede a travs de endosomas por medio de los siguientes pasos (37, 85, 108, 109): (1) Viral HA se une a las glicoprotenas que contienen cido silico o glicolpidos. (2) Los virus internalizados por clathrin revestido se transportan por medio de los endosomas tempranos a la endosomas tardos. (3) pH bajo se activa el canal de iones de protena M2 en la membrana viral, lo que permite la cpside interna que se acidific. (4) fusin HA-mediada se produce entre la envoltura viral y la membrana endosomal provocada por un pH bajo (5,5). (5) ribonucleoprotenas virales (RNPs) separar una de la otra, se unen importin, y moverse a travs de la APN y (6) en el ncleo. (C) Entrada de SV40. SV40 es un virus sin envoltura de ADN que se replica en el ncleo. Sus escalones de entrada deben parcialmente conocidos e incluyen los siguientes (53-56): (1) SV40 se une a ganglisidos en el plasma membrana, y (2) se incluye en las balsas de lpidos. (3) Despus de secuestro en las caveolas, la activacin de tirosina quinasas induce la fosforilacin local que resulta en la disociacin, la acumulacin de actina F-actina alrededor del caveolas, dynamin 2 reclutamiento y la activacin de la endocitosis caveolar. (4) caveolas que contiene el virus se interiorizan y se entrega al caveosomes. (5) Los virus induce formacin de vesculas sin caveolina y (6) se transporta por la dinena por medio de los microtbulos a el RE liso. (7) El virus penetra en el citosol de la ER, y (8) se produce la importacin nuclear a travs de CPN. Fig. 3. La importacin de virus y en el cpsides ncleo. Cuatro formas diferentes se muestran por que los virus utilizan los NPC para la importacin. (Izquierda) El genoma del virus de la influenza est contenido dentro de los ocho ARN subgenmicos que son individualmente empaquetado en complejos de ribonucleoprotenas. Una vez que estos se liberan en el citosol despus de la fusin de la membrana viral, que interactan con importin y se importan en el ncleo. Ellos son lo suficientemente pequeos para pasar a travs de la NPC. (Izquierda Medio) Las cpsides de HSV-1 se unen a la cara citoslica del poro, un vrtice en se abre la cpside, y el ADN pasa a travs del poro dejando atrs una intacta cpside vaca. (Oriente derecha) Los adenovirus tambin se unen a los poros pero luego someterse desmontaje. Las partculas virales muelle con el NPC protena CAN / NUP214 y desmontar con la ayuda de la histona H1. El ADN viral con terminales de las protenas con enlaces covalentes se libera y entra en el ncleo. (Derecha) Los parvovirus y las cpsides de virus de la hepatitis B son lo suficientemente pequeos para pasar a travs del poro en forma intacta. Uncoating ocurre en el ncleo.
La invasin bacteriana: los paradigmas
de Enteroinvasiva Patgenos Pascale Cossart1 * y Philippe J. Sansonetti2 * Las bacterias invasoras inducen activamente su propia absorcin por la fagocitosis en clulas que normalmente no fagocticas y luego o bien establecen un nicho protegido dentro de las que sobrevivir y replicarse, o difunden de clula a clula por medio de un proceso basada en la motilidad actina. Los mecanismos de entrada subyacente bacteriana, fagosoma maduracin, y difusin revelan las estrategias comunes, as como las tcticas nicas desarrolladas por especies individuales para establecer la infeccin. Establecer y mantener una infeccin exitosa, microbios patgenos han desarrollado una va- riedad de estrategias para invadir el anfitrin, evitar o resistir la respuesta inmune innata, daar las clulas y multiplicarse en regiones especficas y estriles Mally nor-. Sobre la base de su capacidad para hacer frente a estos problemas crticos, las bacterias se pueden agrupar en diferentes categoras. Aqu se revisan los llamados bacterias invasivas, es decir, bacterias que son capaces de inducir su propia fagocitosis en clulas que normalmente no fagocticas. Nos centramos en las tcticas utilizadas por las bacterias enteropatgenas para desencadenar su absorcin por las clulas epiteliales y discutir sus estilos de vida intracelular. Los mecanismos de gens entryandlife- stylesofotherintracellularpatho- han sido revisados en otras partes (1-4). Durante la fagocitosis por los fagocitos, las bacterias desempean un papel pasivo. Por el contrario, durante la fagocitosis inducida por bacterias, la Mycobacterium bacteriemia es el jugador clave y activo en la compleja interaccin entre el microbio invasor y la clula husped (5). Otro importante componente es el citoesqueleto, cuya plasticidad es crtica y explotados de manera ptima. Despus de la internalizacin, algunas bacterias permanecen en una vacuola, en el que se replican. Impiden la maduracin normal y la trata del fagosoma y entorpece sus actividades normales bacteriolgicas. Otras bacterias escapar de la vacuola y se replican en el citosol. En algunos casos, tambin se mueven y difundir por medio de un proceso basada en la motilidad actina. Cmo la clula detecta los intrusos bacterianos y ajusta sus programas de transcripcin y traduccin a su nueva vida con un parsito es un tema importante. La apoptosis y la apoptosis anti-, as como ciclo-celular y vas de sealizacin relacionadas infor--matorios, son reprogramado despus de la infeccin para ayudar a la clula para sobrevivir a la tensin inducida por la infeccin. El xito de una infeccin depende de los mensajes que los dos jugadores-la bacteria y la clula se envan entre s. En cada paso del proceso infeccioso, la bacteria explota la maquinaria de la clula husped para su propio beneficio. Mecanismos de entrada entre en las clulas no fagocticas tales como clulas epiteliales intestinal, algunos patgenos microbianos expresan una protena de superficie capaz de unirse a receptores de la superficie eukary- ticas menudo involucrados en la matriz de clula o la adhesin clula- clula. La expresin de esta protena conduce a la formacin de un ole vacu- que envuelve a la bacteria a travs de un proceso de "Pering zip-" en el que relativamente modestos reordenamientos del citoesqueleto y las extensiones de la membrana se producen en respuesta al acoplamiento del receptor. Las interacciones iniciales entre la protena bacteriana y su receptor desencadenan una cascada de seales, incluyendo fosforilaciones de protenas y / o reclutamiento de res adaptaciones y los efectores, y la activacin de los componentes Eton cytoskel- que culminan en el cierre de taza ic phagocyt- y la internalizacin bacteriana . Otros patgenos han ideado mecanismos para unir una protena que puede en s mismo actuar como un puente entre la bacteria y un receptor transmembrana, que luego media la entrada proceso pro-. Por ltimo, los patgenos tambin pueden pasar por alto la primera etapa de la adhesin y de interactuar directamente con la maquinaria celular que regula la dinmica del citoesqueleto de actina mediante la inyeccin de fectors zos a travs de un sistema secretor dedicado. Las molculas efectoras causan cambios toskeletal ci- masivas que desencadenan la formacin de un bolsillo macropinocytic, dbilmente unido al cuerpo bacteriana. El Mecanismo de cremallera de entrada Yersinia pseudotuberculosis y Listeria monocytogenes ambas protenas de adhesin celular transmembrana del arns como receptores para la entrada en las clulas de mamferos (Figs. 1A y 2A). La entrada se puede dividir en tres etapas sucesivas: (i) de contacto y adherencia. Este paso es independiente del citoesqueleto de actina y slo implica el ligando y su receptor bacteriano. Conduce al receptor de la agrupacin. (Ii) la formacin de taza fagocticas. Este paso se desencadenado por las seales transitorias que se producen despus de la formacin de los primeros complejos ligando-receptor y que se propagan alrededor del microbio vading in-. Estas seales inducen la polimerizacin de actina y la extensin de la membrana. (Iii) el cierre de taza de fagocitosis y retraccin, y despolimerizacin de la actina. La protena de membrana externa Yersinia in- Vasin une a los receptores que tienen la cadena? 1 y, normalmente, estn implicados en ad- herence de las clulas a la matriz extracelular (6) de la integrina. Invasina no posee el motivo RGD presente en la fibronectina, pero ambas protenas interacten con las integrinas por un dominio estructuralmente similares. Invasina tiene una mayor afinidad por tegrins entrada y puede oligomerizar, la induccin de la agrupacin sonrisa integracin y eficiente naling seal aguas abajo. La cola citoplasmtica de la cadena? 1, que normalmente interacta con el citoesqueleto en los complejos de coordinacin de placas de adhesin, es crtico para la entrada, pero, sorprendentemente, las alteraciones de este dominio que deterioran la interaccin con el citoesqueleto aumento internalizacin cin. Por lo tanto, una menor afinidad de la integrina para el citoesqueleto podra permitir una mayor movilidad de los receptores en la membrana. La activacin de las integrinas conduce a la fosforilacin de la tirosina eventos necesarios para la entrada. La tirosina quinasa FAK (adhesin focal nase Ki) es el candidato ms atractivo para transmitir una seal de integrinas agrupados al citoesqueleto, debido a que la cadena 1? Cy dominio toplasmic se une a FAK, y las mutaciones Nant-inhibidor dominacin en FAK perjudicar fuertemente la absorcin de invasina mediada (7). Src, fosfoinostido 3-quinasa (PI 3-quinasa).