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Manual de Micología PDF
Manual de Micología PDF
DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGA
INTEGRANTES:
MSP. MA DE LA CRUZ MENESES SANCHEZ
MEC. ANA BERTHA ESCOBEDO LOPEZ
MC. PATRICIA GUADALUPE SUAREZ
ALBORES
D.C. ANA MARTA DE LOS ANGELES LOBO
SANCHEZ
MC. ALEJANDRO RUIZ TAGLE
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BENEMRITA UNIVERSIDAD AUTNOMA DE PUEBLA
DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGA
INDICE
Bibliografa 41
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BENEMRITA UNIVERSIDAD AUTNOMA DE PUEBLA
DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGA
Prctica No. 1
Seguridad en el Laboratorio
Introduccin
Los laboratorios de Micologa son ambientes especiales con respecto a la seguridad de
aquellos que trabajan en ellos, las muestras clnicas de pacientes recibidas para su estudio
significan un riesgo para el personal debido a los agentes infecciosos que pueden contener.
Los cultivos de agentes infecciosos producto de muchas de las actividades del
miclogo clnico tambin constituyen una amenaza.
La educacin del personal que manipula a diario los agentes potencialmente
infecciosos y la educacin por medio de avisos sobre riesgos biolgicos, as como
instrucciones escritas y verbales de aquellos que solo tienen una exposicin limitada al
ambiente del laboratorio son las medidas disponibles ms importantes para prevenir las
infecciones adquiridas en el laboratorio, los riesgos de un laboratorio de Micologa pueden
extenderse a laboratorios adyacentes.
Adems del riesgo por infeccin los laboratorios de Micologa tambin estn
expuestos a todos los riesgos asociados a cualquier ambiente de laboratorio como incendio,
riesgos elctricos, qumicos, materiales radiactivos, mal funcionamiento de los equipos,
peligros dependientes de desastres naturales, situaciones ambientales como pisos
deslizantes, sistemas de circulacin de aire deficiente.
Se debe poseer un manual de seguridad que contenga informacin sobre la conducta
a seguir en caso de una contingencia.
Objetivo
Dar a conocer a los alumnos a travs de un seminario las reglas de seguridad a
seguir durante el desarrollo de las prcticas a realizar.
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Tcnicas a emplear
Material a emplear.
Acetatos y diapositivas
Desarrollo de la prctica
1. Exposicin oral
2. Ronda de preguntas
3. Aclaracin de dudas
Reporte
Cuestionario
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Prctica No. 2
Aislamiento y siembra de hongos en placa y tubo
Introduccin
La mayora de los alimentos y productos agrcolas, son invadidos por diversos
microorganismos durante su desarrollo y su almacenamiento, siendo los hongos los ms
abundantes y la principal causa de los procesos de putrefaccin de los alimentos y de los
granos, ocasionando severas prdidas econmicas.
Algunos hongos se encuentran como flora normal de diversas cavidades y mucosas
del organismo humano, as como estn presentes en el suelo y las plantas, donde se
considera que tales sitios son su hbitat normal.
Objetivo
El alumno se familiarizar y aprender a manejar las diversas tcnicas de
aislamiento y siembra de hongos para su posterior identificacin.
Tcnicas a emplear
A) Tcnica de dilucin y vertido en placa (sustratos slidos o lquidos muy
contaminados).
1. Preparar de 4 a 5 tubos con 9 mL de agua destilada, o bien, solucin salina
isotnica, esterilizar y numerar del 1 al 5.
2. Se suspende en el tubo 1, un mL, o bien, un gramo de alimento muestra a analizar.
3. Homogenizar perfectamente la prueba.
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4. Con ayuda de una pipeta estril, tomar 1 mL del tubo 1 y traspasarlo al tubo 2; con
otra pipeta estril, se toma una alcuota de 1 mL y se lleva al tubo 3; as
sucesivamente hasta llegar al tubo 5.
5. De las dos ltimas, tomar 1 mL de cada una y depositarlos respectivamente en las
placas de Petri estriles y vacas.
6. Adicionar aproximadamente 20 mL del medio PDA o SDA, estril, fundido y
enfriado a 45C.
7. Homogenizar por rotacin de las placas sobre la mesa.
8. Dejar solidificar e incubar a 28C por 4 a 5 das.
9. Hacer observaciones cada 48 h hasta la aparicin de colonias caractersticas de
hongos.
Material a emplear
1. Suelo.
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2. Refrescos embotellados.
3. Granos (arroz, trigo, frjol, etc.)
4. Alimento (chocolate, yogurt, queso, etc.)
5. Placas con medio SDA o PDA.
6. Tubos con tapn de rosca con medio SDA o PDA.
7. Tubos con solucin salina isotnica, o bien, agua estril.
8. Placas de Petri y pipetas de 1 mL estriles.
Desarrollo de la prctica
1. Proceder al aislamiento de hongos por la tcnica de dilucin y vertido en placa.
2. Proceder al aislamiento de hongos por la tcnica de puntos en placa o tubo.
3. Proceder al aislamiento de hongos por la tcnica de exposicin de placas.
Cuestionario
1. Defina el trmino aislamiento
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Prctica No. 3
Reconocimiento de las estructuras bsicas de los hongos
Introduccin
La mayora de los que deben relacionarse con la rama micolgica, a menudo se sienten
confundidos y desalentados en sus tentativas para estudiar los hongos debido a la gran
variacin en el aspecto macroscpico de las colonias, a la multiplicidad de las estructuras
microscpicas y a la nomenclatura poco conocida.
Sin embargo, estas dificultades son ms psicolgicas que reales y cuando se llegan a
dominar unos cuantos conceptos bsicos basados en las morfologas macroscpica y
microscpica, la identificacin de los hongos resulta ms fcil y rpida que en otras
bacterias ordinarias.
Los hongos emiten una o ms prolongaciones tubulares llamadas tubos germinales o
tambin llamadas hifas, que se alargan por el crecimiento de su extremo distal. La hifa
puede dividirse por formacin de paredes transversales a intervalos regulares.
Las hifas divididas por tabiques se denominan hifas tabicadas, sin embargo algunos
hongos no desarrollan tabicaciones en las hifas y se denominan no tabicadas o cenocticas.
Finalmente, el conjunto de hifas desarrollan lo que se conoce como micelio, la
diferenciacin de los hongos se basa principalmente en su aspecto colonial y morfologa
microscpica.
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e. Luz reflejada.
f. Luz transmitida.
g. Bordes.
Objetivo
El alumno ser capaz de diferenciar las colonias de los hongos y los diversos tipos
de estructuras bsicas, como por ejemplo, el micelio por medio de tcnicas de observacin
en fresco o directa y algunas preparaciones facilitadas por el profesor, valorando estos
parmetros como fundamentales en la identificacin de los hongos.
Tcnicas a emplear
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4. Dilacerar el fragmento de la colonia con ayuda da agujas de diseccin o bien con la
misma asa micolgica.
5. Colocar sobre la preparacin un cubre objeto evitando formar burbujas de aire.
6. Observar al microscopio a seco dbil y seco fuerte, nunca usar aceite de inmersin.
Material a emplear
Desarrollo de la prctica
Dibujos:
a) Hifa.
b) Micelio.
c) Micelio macrosifonado septado.
d) Micelio macrosifonado cenoctico.
e) Micelio septadofugilaginoso.
f) Micelio microsifonado.
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Descripcin macroscpica de las cepas tipo proporcionadas por la responsable del
laboratorio.
Cuestionario
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Prctica No. 4
Estructuras de reproduccin asexual en hongos saprfitos
Introduccin
La espora se refiere a un rgano que tiene como funcin la multiplicacin del hongo, las
esporas tienen una forma definida que puede ser redonda, ovalada, ms o menos larga etc.
Pueden ser unicelulares o pluricelulares; su tamao vara de 2 a varias decenas de
micras, su pared es sencilla o doble. Las esporas asexuadas se forman ya sea en el interior
de un saco por lo que se conoce como endosporas o en el exterior conocindolas como
exosporas, fijadas a la extremidad o sobre el trayecto de una hifa.
Tambin pueden ser producidas por rganos especiales, al ser puestas en libertas las
esporas pueden multiplicarse y dar origen a una colonia. Las esporas asexuadas son el
resultado de la transformacin de la hifa, sin el concurso de fenmenos sexuales y se
dividen en tres grupos:
B) Conidiosporas.
C) Esporangiosporas.
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Objetivo
Tcnicas a emplear
Material a emplear
Desarrollo de la prctica
1. Realizar la tcnica de microcultivo a partir de las colonias obtenidas en tubo.
2. Observar y comparar al microscopio los diversos tipos de esporas asexuales en
preparaciones fijas proporcionadas por el profesor.
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3. Hacer los dibujos y anotar en nombre del hongo correspondiente:
a) Artrosporas.
b) Blastosporas.
c) Clamidosporas.
d) Esporangiosporas.
e) Conidiosporas.
f) Macroconidias.
g) Dictiosporas.
h) Fialosporas
Cuestionario
2. Mencione los grupos de esporas por las cuales se reproducen los hongos
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Prctica No. 5
Identificacin macro y microscpica de los hongos saprofitos ms
frecuentes
Introduccin
La presencia de hongos en alimentos y productos alimenticios no es una novedad, se
conoce desde hace mucho tiempo y de hecho estos hongos, levaduras o mohos han sido
utilizados para alterar de manera deseable el sabor y olor de algn alimento (maduracin de
quesos y carnes, produccin de vinos y cerveza). Los hongos tambin se conocen como
deterioradores de los alimentos, actualmente existen ciencias especializadas en el estudio de
los hongos, ya que stos han demostrado gran relevancia en las reas mdica, alimenticia,
agrcola, etc.
En el rea mdica por los diversos cuadros clnicos que producen en el humano,
causando hasta la muerte (esto es cuando no se lleva a cabo un buen diagnstico de
laboratorio y mdico). En el rea de la industria alimenticia posee gran valor como
contaminantes de materia prima y producto terminado, causando en la mayora de los casos
perdidas econmicas a la empresa, o bien son utilizados como elementos de gran valor en la
produccin de diversas enzimas, antibiticos y vitaminas. En el rea agrcola, pueden
producir destruccin de cosechas, o bien se asocian a otros microorganismos del suelo
contribuyendo al logro de cultivos frondosos.
Los diferentes tipos de hongos saprfitos pueden entonces tener efectos nocivos o
bien aportar beneficios.
Objetivo.
Que el alumno establezca los diversos parmetros macro y microscpicos para la
identificacin propia y definitiva de los hongos saprfitos ms frecuentes.
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Material a emplear.
1. Preparaciones obtenidas a partir del microculivo.
2. Preparaciones fijas proporcionadas por el profesor.
3. Cepas de hongos saprfitos proporcionados por el profesor.
Desarrollo de la prctica.
1. Desmontar la preparacin del microcultivo. Teir y sellar.
2. Hacer comparaciones microscpicas entre las preparaciones obtenidas por los
equipos y las preparaciones fijas proporcionadas por el profesor.
3. Hacer los dibujos correspondientes a:
a. Rhizopus.
b. Mucor.
c. Aspergillus.
d. Penicillum.
e. Geotrichum.
f. Hormodendrum.
4. Describir la morfologa macroscpica de los hongos filamentosos.
5. Describir la morfologa macroscpica de los hongos levaduriformes.
Cuestionario
1. Qu parmetros se deben considerar para hacer una identificacin microscpica de
los hongos?
2. Anote la ficha de identificacin de los siguientes hongos
a. Rhizopus
b. Mucor
c. Aspergillus niger
d. Penicillum sp
e. Ulocladium sp
f. Alternaria sp
g. Sacharomyces cereviceae
h. Rodhotorula sp
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Prctica No. 6
Dermatofitos (tias)
Introduccin
Las tias constituyen un grupo de micosis causadas por hongos taxonmicamente
relacionados que afectan los tejidos queratinizados: piel, cabello, uas en el humano,
plumas, cuernos y piel de animales. Estos hongos pertenecen a numerosas especies
agrupadas en tres gneros: Trichophyton, Microsporum, Epidermophyton.
Los hongos pertenecientes a estos gneros tienen como caracterstica comn la de
poseer enzimas queratinofilicas para atacar a la queratina presente en la piel y otras
estructuras del hospedero, por lo que se conocen con el nombre de dermatofitos y
dermatofitosis o tias a las enfermedades que ellos producen.
Los dermatofitos manifiestan su estado parasitario a travs de hifas ramificadas o
bien hifas con artrosporas, esta forma la adquieren en el tejido que atacan. En el estado
saprofito o vegetativo estos hongos presentan estructuras ornamentadas y variadas que se
toman como base para la diferenciacin entre diferentes gneros y especies a nivel
microscpico.
Objetivo
Familiarizar al alumno con las diversas tomas de muestras clnicas de acuerdo a la
zona afectada por los dermatofitos; instruirlo en el manejo de las tcnicas en fresco a travs
de la cual buscara el estado parasitario de los mismos en las diferentes muestras clnicas
Tcnicas a emplear
A) Obtencin de escamas.
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1. El laboratorista deber de proveerse de alcohol, gasa, lancetas estriles, placas de
Petri y un marcador.
2. Se localiza la parte afectada y se analiza macroscpicamente la lesin anotando si
hay o no descamacin, resequedad, si hay bordes, etc.
3. Se limpia la zona afectada con gasa y alcohol.
4. Se hace un raspado ligero con uno de los bordes de la lanceta (de ser posible obtener
fragmentos de la lesin con pinzas).
NOTA: Cuando el paciente es un nio y no resiste el raspado, o si la descamacin
no es visible, la muestra se toma adhiriendo a la piel un trozo de cinta "SCOTCH" y
retirndola de golpe, la cual se colocara en un porta objeto para su transporte y
observacin.
5. El producto de la lesin se recolecta en placas de Petri.
6. Se toman los datos del paciente escribindolos con marcador en la parte superior de
la placa.
7. En el laboratorio, con una parte de la muestra se realiza una preparacin en fresco
de la siguiente manera:
a) Sobre un porta objetos agregar una gota de NaOH o KOH del 5 al 10%
(solucin aclarante).
b) Se deposita un pequeo fragmento de muestra y se deja reposar por 10 min.
c) Se deposita un cubre objetos sobre la preparacin, tratando de no formar
burbujas de aire y se deja reposar la muestra por 15 min.
d) La preparacin se observa al microscopio con el objetivo seco dbil y seco
fuerte, tratando de buscar la fase parasitaria del hongo.
8. En zona de esterilidad junto a un mechero, la muestra clnica sobrante se siembra
por la tcnica de punto en placa y en tubos con medios de cultivo que contengan
SDA, PDA, Agar microbitico, etc.
9. Se encuban las placas a 28C durante 4 a 5 das haciendo la revisin de las siembras
cada 48 h hasta la aparicin de las colonias caractersticas.
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2. El borde del dedo afectado se deposita sobre el margen de la placa de Petri.
3. Se raspa la ua con una navaja de afeitar nueva, yendo de la parte proximal a la
distal.
4. La muestra se recolecta en la caja de Petri y se tapa para su transporte.
NOTA: SI ms de una ua est afectada, se debe usar un equipo limpio para cada
ua (navajas limpias).
Material a emplear
1. Diversas muestras clnicas parasitadas por dermatofitos.
2. Tubos con medio SDA, PDA, Micobiotico.
3. KOH o NaOH al 5-10%.
4. Cepas de:
a) Trichophyton (T. mentagrophytes, T. rubrum, T. tonsurans, T.
concentricum).
b) Microsporum gypseum.
c) Epidermophyton floccosum.
Desarrollo de la prctica
1. Hacer preparaciones en fresco con las muestras de pelo y/o escamas, de piel y/o
uas.
2. Buscar artrosporas e hifas ramificadas (fase parasitaria comn de los dermatofitos)
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3. Cultivar las muestras clnicas por la tcnica de punto en placa o en tubo, empleando
los diversos medios de cultivo.
4. Hacer microcultivo de las cepas tipo proporcionadas por el profesor.
5. 5.- Hacer la descripcin macroscpica de las cepas tipo proporcionadas por el
profesor.
Dibujos
Cuestionario
1. Defina el trmino tia.
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Prctica No. 7
Identificacin macro y microscpica de los dermatofitos
Introduccin.
Se ha podido llegar a una clasificacin simplificada de los dermatofitos mediante el cultivo
de los mismos y la seleccin de ciertos caracteres morfolgicos especficos como criterios
para la diferenciacin entre gneros y especies.
Por este mtodo, Emmons demostr con claridad mxima que tan solo procede
considerar tres gneros: Microsporum, Trichophyton, Epidermophyton, la diferenciacin de
los gneros y sus respectivas especies se basa en las caractersticas macroscpicas de las
colonias y en la morfologa microscpica.
Gnero Trichophtyon: Por examen macroscpico, la colonia tiene aspecto
algodonoso, pulverulento o polvoriento o velloso, liso o creo. La pigmentacin vara
notablemente, ya que en cultivo pueden ser blancos, rosados o rojos, purpreos, violetas,
anaranjados, amarillos o pardos. Puede presentarse pigmento difusible al medio, que se
aprecia al reverso de la placa o tubo; este pigmento puede variar del color beige al caf o
rojo vino intenso.
Por examen microscpico las macroconidias son raras o no existen en algunas
especies, a menos que el hongo se desarrolle sobre un medio de cultivo apropiado y se
observan como grandes estructuras fusiformes en mazo, de pared gruesa o lisa de 4 a 6
micras de ancho por 10 a 50 micras de longitud.
Pueden verse tambin otras estructuras como micelio en raqueta, clamidosporas y
cuerpos nodulares o hifas en espiral.
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Gnero Microsporum: En cultivo desarrollo un micelio areo, algodonoso, lanudo,
pulverulento o polvoriento, cuyo color vara del ante al blanco o matices ms intensos del
pardo.
Por examen microscpico, la pared espinosa de las macroconidias caracteriza al
gnero, puede ser pequea (de dos septos) o grande (de 6 a 12 septos), fusiforme u oval, de
pared gruesa o delgada, se presentan microconidias, se advierten tambin hifas septadas
similares a clamidosporas.
Gnero Epidermophyton: Por su aspecto macroscpico, los cultivos son
caractersticamente aterciopelados o pulverulentos, con surcos radiales ventrales y color
amarillo verdoso.
Por examen microscpico solo producen grandes macroconidias de pared delgada,
lisas, multitabicadas y en mazo. En el micelio se ven clamidosporas e hifas en raqueta, este
gnero solo incluye una especie (E. floccosum)
Objetivo
Familiarizar al alumno con los parmetros macro y microscpicos de los dermatofitos en
base a las cepas tipo.
Material a emplear
Desarrollar la prctica
b) Trichophyton rubrum.
c) Trichophyton mentagrophytes.
d) Microsporum gypseum.
e) Epidermophyton floccosum.
Cuestionario
1. De la clasificacin con gnero y especie de Dermatofitos
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Prctica No. 8
Cromomicosis y esporotricosis
(micosis subcutneas)
Introduccin.
Esporotricosis, es una micosis generalmente subcutnea y benigna, pero que en raros casos
puede ser generalizada y mortal.
Afecta especialmente las extremidades superiores e inferiores y excepcionalmente
produce enfermedad pulmonar primaria al penetrar por va respiratoria.
La esporotricosis prevalece en campesinos, empacadores de alfarera y vendedores
de diversos zacates, la va de entrada es a travs de la piel, mediante un traumatismo
cutneo con espinas u otros objetos vegetales.
En su fase parasitaria, el hongo se observa como levaduras gemantes alargadas (en
forma de puro) o redondeadas de 3 a 10 micras de dimetro. En la fase saprobia el hongo
tiene micelio delgado (1 a 2 de dimetro), tabicado, ramificado, que esporula mediante
conidiforos en forma de flor de margarita.
El examen directo del pus no permite en general visualizar al hongo; raramente se
pueden observar las formas parasitarias en frotes de pus teidos por el mtodo de
Hotchkiss-Mac Manus.
El cultivo es el mejor mtodo diagnstico de la esporotricosis, mediante la siembra
del pus en placa con SDA, las colonias al principio son pequeas y blancas y crecen de
micelio areo; a medida que aumenta el crecimiento, la superficie de la colonia adquiere
aspecto hmedo, rugoso y membranoso, el color puede variar de crema al negro.
Cromomicosis, es una micosis verrucosa, crnica, de evolucin lenta, generalmente
se localiza en miembros inferiores. Se caracteriza por la formacin de ndulos cutneos
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verrucosos y lesiones ulcerocostrosas que a veces son pedunculadas, dando apariencia de
coliflor.
Es prevalente en campesinos del sexo masculino, especialmente en los que no
protegen sus pies adecuadamente de los traumatismos causados por plantas, en algunas
lesiones, el hongo se halla en las escamas, en el pus y los tejidos subcutneos a travs de
biopsias.
En el examen en fresco de estos productos biolgicos, se observan unas clulas
redondeadas de color castao y paredes gruesas, aisladas, o en grupos, llamadas
Corpsculos de Meddlar, en ocasiones, estas llamadas clulas fumagoides miden de 6 a 12
de dimetro y aparecen divididas transversalmente.
Esta micosis es producida por diversos hongos negros, todos pertenecientes al grupo
de los Dematiceos, entre los ms conocidos cabe citar al gnero Phialophora, que posee
una sola especie patgena: P. verrucosa, caracterizada por la produccin de filides en
forma de botella que producen esporas en su interior, las cuales son expulsadas por el
cuello de la filide, aparentando un florero
Cladosporium carrionil, nica especie considerada patgena, se identifica porque
slo puede esporular en forma de cladosporio, es decir, cadenas de conidias acroptalas de
longitud moderada.
El gnero Fonsecae comprende a las especies siguientes: F. pedrosoi, F. compacta,
F, dermatitidis, especialmente F. pedrosoi esporula de tres maneras diferentes: acrotecas,
cladosporios y por filides.
Acroteca, se caracteriza por la produccin de conidiforos semejantes a clavas, de
donde nacen las conidias en la punta y a los lados.
Objetivo
Familiarizar al alumno con el manejo y conocimiento macro y microscpico de las
cepas como agentes etiolgicos de la esporotricosis y cromomicosis.
Tcnicas a emplear
A. Tcnica de observacin directa o en fresco.
B. Tcnica de microcultivo (cepas tipo).
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Material a emplear
1. Placas para microcultivo.
2. Placas con agar Saboraud seccionadas en cuadros.
3. Glicerol estril al 10%.
4. Formol al 10%.
5. Pipetas estriles.
6. Colorante azul de algodn.
7. Cepas proporcionadas por el profesor.
8. Porta y cubre objetos.
Desarrollo de la prctica
1. Sembrar microcultivo con las cepas tipo.
2. Hacer preparaciones directas a partir de las cepas tipo (es recomendable no usar
colorante para que se observe el tipo de micelio en el caso de los hongos
dematiceos).
3. Hacer la descripcin macroscpica de las cepas tipo.
Dibujos
a) Sporothrix schenkii.
b) Phialophora verrucosa.
c) Fonsecae pedrosoi.
d) Cladosporium carrionii.
Descripcin macroscpica de las cepas tipo.
Cuestionario
1. Cules son las micosis subcutneas mas frecuentes en Mxico?
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Prctica No. 9
Criptococosis
(Micosis oportunistas)
Introduccin
La criptococosis es una micosis oportunista que afecta primariamente a pulmones,
producindose una enfermedad que generalmente cursa en forma asintomtica, pudiendo
diseminarse a cualquier rgano de la economa, particularmente a meninges y sistema
nervioso central, donde produce meningitis subaguda o crnica.
El hongo fue aislado por primera vez por Emmons del excremento y nidos de
palomas; Sanfelice lo aisl del zumo de frutas.
El diagnstico de laboratorio se hace en base a los productos biolgicos como
esputo y lquido cefalorraqudeo, el hongo se manifiesta en el producto de la lesin como
un organismo en forma de levadura con pared gruesa y en gemacin, de 5 a 20 micras de
dimetro, rodeado por una cpsula ancha, refrctil.
Deben cultivarse todos los materiales en agar sangre a 37C y en agar Saboraud a
temperatura ambiente, puede aadirse cloranfenicol al medio para evitar la presencia de
bacterias en las muestras, pero nunca cicloheximida, dada la sensibilidad de Criptococcus
neoformasa la misma. Sobre agar glucosa Saboraud a temperatura ambiente, el organismo
crece con lentitud, produciendo colonias en forma de levadura que al principio pueden ser
blancas, rugosas y granulosas.
En las preparaciones macroscpicas se comprueba la presencia de organismos y
clulas en gemacin con tubos germinales, en la etapa de crecimiento no se advierte
cpsula, la colonia se desarrolla a 37C sobre agar Sabouraud con apariencia mucoide,
viscosa, de color crema a pardo, en su morfologa se observan levaduras encapsuladas al
teir con tinta china.
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Objetivo
Tcnicas a emplear
A. Obtencin de esputo.
B. Concentracin de esputo.
C. Obtencin de Lquido Cefalorraqudeo (es preferible que esta muestra sea obtenida
por un profesionista experto en la obtencin de dicho lquido).
Material a emplear
Desarrollo de la prctica
Dibujos
a) Criptococcus neoformans.
Descripcin macroscpica de las cepas tipo.
Cuestionario
1. Qu estructura es caracterstica de Criptococcus neoformans?
3. Cules son los cuadros clnicos mas graves que puede ocasionar este hongo?
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Prctica No. 10
Candidiasis
(Micosis oportunista)
Introduccin
La Candidiasis, por los diversos cuadros clnicos que presenta, puede causar desde una
micosis superficial, una subcutnea, hasta una profunda o bien comportarse como
oportunista. Candida albicans puede causar infeccin aguda o subaguda, produciendo
lesiones en boca, vagina, piel, uas, bronquios, pulmones y ocasionalmente, septicemia,
endocarditis o meningitis.
Como pueden aislarse cepas patgenas de Candida albicans en piel normal, mucosa
oral y vaginal normales y en la materia fecal de individuos sanos, salta a la vista que la
mayor parte de las infecciones tienen un origen endgeno y la determinacin de la fuente
de infeccin constituye un problema tan difcil como en el caso de infecciones de
Staphylococcus aureus.
La presencia de Candida en el individuo normal explica la diseminacin durante las
enfermedades debilitantes, padecimientos malignos del sistema hematopoytico, diabetes,
lupus eritematoso, enfermedades granulomatosas, etc...
La Candidiasis ataca a personas de todas las edades y razas y en ambos sexos,
habindose reconocido ciertos factores predisponentes. Los antibiticos de amplio espectro
y las drogas citotxicas favorecen la infeccin por Candida albicans y otras especies de
Candida.
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tambin capaces de producir enfermedad en el hombre: Candida krusei; Candida
tropicalis; Candida guillemondii; Candida pseudotropicalis; Candida parakrusei.
Objetivo
Tcnicas a emplear
A) Tomar de exudados farngeos.
1. El paciente debe presentarse sin haber tomado alimentos, con aseo bucal hecho al
menos 12 h antes de tomar la muestra.
2. Se coloca al paciente sentado en posicin odontolgica. Auxiliarse con una lmpara
adecuada para visualizar perfectamente la cavidad oral.
3. Mediante un abatelenguas estril sujetar la lengua e introducir un hisopo estril,
raspando con la punta del algodn las partes ms afectadas de las amgdalas, sin
tocar vula.
4. Repetir la operacin con otro hisopo estril.
5. Se colocan los hisopos dentro de un tubo con solucin salina estril.
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C).- Tcnica de siembra por punto en tubo y placa.
En el caso de que la muestra sea de escamas o raspado de uas.
Tincin de Gram
1. Fijar el frote por calor.
2. Cubrir el porta objetos con cristal violeta por un minuto.
3. Lavar con agua corriente.
4. Cubrir la preparacin con lugol durante un minuto.
5. Lavar con agua corriente.
6. Decolorar con solucin alcohol-cetona.
7. Lavar con agua corriente.
8. Contrastar con safranina por 30 segundos.
9. Lavar con agua corriente.
10. Examinar al microscopio con aceite de inmersin.
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1. Inocular una pequea cantidad de clulas en 0.5 mL del suero (de preferencia de
pacientes diabticos).
2. Incubar a 37C en agitacin durante 30 a 60 min o en condiciones estacionarias
durante 2 h.
3. Montar entre portada y cubre objetos una gota de la suspensin y observar al
microscopio a seco dbil y seco fuerte.
De la cepa problema hacer una suspensin en solucin salina estril para sembrar los
medios para la fermentacin y asimilacin de carbohidratos.
Zimograma:
1. Utilizar una serie de tubos de hemlisis conteniendo cada uno 4 mL de medio base
de Wickerham y 1 mL de los azcares a probar al 6%. Adicionar una campana de
Durham como indicador de la produccin de gas.
2. Inocularlos con dos gotas de la suspensin.
3. Incubar a 28C durante 72 h.
4. Hacer las lecturas de produccin de cido y gas.
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Auxonograma:
1. Utilizar una serie de tubos de 16 x 150 mm con tapn de rosca, conteniendo cada
uno 4.5 mL del medio base y 0.5 mL de los azcares a probar al 5%.
2. Inocular con dos gotas de la suspensin.
3. Incubar a 28C y observar el crecimiento cada 48 h.
Material a emplear
1. Cepa del gnero Candida (Candida albicans).
2. Exudado farngeo.
3. Exudado vaginal.
4. Suero humano.
5. Placas Petri con:
a) Gelosa sangre.
b) Saboraud dextrosa.
c) Clamidospora.
d) Oxgall y Biggy.
6. Tubos de medio de:
a) Saboraud inclinado.
b) Micobiotico inclinado.
7. Medio base de Wickerham.
8. Medio base para asimilacin de carbohidratos.
9. Solucin salina estril.
10. Abate lenguas e hisopos estriles.
a. Pipetas Pasteur estriles.
11. Equipo de tincin de Gram.
12. NaOH o KOH al 10%.
13. Preparaciones fijas.
Desarrollo de la prctica
1. Proceder a la toma del exudado farngeo.
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2. Trabajarlo simultneamente con las muestras proporcionadas por el profesor
(exudado vaginal y/o uas o escamas), siguiendo la metodologa para el diagnstico
de Candida.
3. Identificar hasta especie las levaduras aisladas de las muestras problema.
4. Observar la morfologa parasitaria de Candida albicans en preparaciones fijas
proporcionadas por el profesor.
Dibujos
a) Observacin en fresco de exudado farngeo.
b) Observacin en fresco de exudado vaginal.
c) Frote de exudado farngeo. Tincin de Gram.
d) Frote exudado vaginal. Tincin de Gram.
Cuestionario
1. Aparte de Candida albicans, qu otras especies existen?
2. Cules son los cuadros clnicos que con mayor frecuencia produce Candida
albicans?
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Prctica No. 11
Aspergilosis
(Micosis oportunistas)
Introduccin
La Aspergilosis es micosis de animales y seres humanos causadas por hongos oportunistas
del gnero Apergillus en especial A. fumigatus, A. nigery A. flavus.
Pueden dar enfermedad pulmonar alrgica o invasora, aspergiloma, diseminarse a
sistema nervioso central u otros rganos o localizarse, en inmunodeprimidos es sistmica y
letal. Es una enfermedad cosmopolita y rara que afecta a cualquier edad, raza o sexo,
predomina en varones adultos, los aspergilomas se ha observado en tuberculosos curados.
Objetivo
Familiarizar al alumno con la bsqueda de la fase parasitaria del hongo a travs del
examen en fresco y que a la vez conozca la morfologa colonial macroscpica del agente
etiolgico.
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Tcnicas a emplear
Material a emplear
Desarrollo de la prctica
Dibujos
a) Especies de Aspergillus.
Descripcin macroscpica de cada una de las cepas tipo.
Cuestionario
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DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGA
Prctica No. 12
Accin fungicida de Desinfectantes utilizados en la eliminacin de hongos
en superficies inertes
Introduccin.
Los desinfectantes son preparaciones con propiedades germicidas es decir que eliminan
microorganismos patgenos, deben su accin a los ingredientes activos que contienen.
Entre los principales tenemos: fenol, cresol, aceite de pino, alcohol isopropilico, los
ingredientes activos son completamente emulsificantes y otros ingredientes inertes como el
agua, colorantes,fijadores, teniendo las siguientes caractersticas :
Deben tener una buena concentracin de ingredientes activos lo cual garantiza su
efectividad y poder residual.
Si son desinfectantes para ambientes domsticos deben tener un aroma agradable,
para lo cual se pueden adicionar esencias aromticas, las cuales no alteran en absoluto el
poder del ingrediente activo.
No deben contener sustancias txicas para el organismo humano o para animales
menores, esto quiere decir que al aplicarse el producto este no contamine
Objetivo
Determinar la accin de desinfectantes utilizados en la eliminacin de hongos a
nivel de superficies inertes.
Tcnicas a emplear
A. Preparacin de placas Petri con en medio de cultivo seleccionado
B. Preparacin de los diferentes desinfectantes a las concentraciones a probar
C. Purificar las cepas de hongos causantes de contaminacin ambiental.
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Material a emplear
1. Placas Petri
2. Agar Saboraud y/o Agar Papa Dextrosa.
3. Asa micolgica
4. Benzal, hipoclorito de sodio, fenol, aceite de pino, alcohol isoproplico
5. Cepas a probar
Desarrollo de la prctica
1. Previamente las placas fueron preparadas con una mezcla entre los desinfectantes y
el agar correspondiente
2. Sembrar las diferentes cepas a probar en las cajas Petri con la mezcla previa
3. Debern prepararse 2 placas por cada una de las cepas, una solo con agar, la
segunda con agar y el desinfectante
4. Los desinfectantes debern encontrarse a una concentracin conocida, la primera
placa ser la relacin del desinfectante con el agar correspondiente de uno a uno, la
segunda sin ninguna concentracin del agente
5. Diariamente por aproximadamente una semana ser medido el crecimiento radial de
cada una de las placas, para poder llevar as un control de crecimiento.
Reporte
Todas las mediciones sern graficadas para denotar la relacin de crecimiento entre estas,
para poder identificar as el mejor desinfectante
Cuestionario
1. Defina que es un desinfectante
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DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGA
BIBLIOGRAFA
a) Segretain, G., E. Drouhet y F. Mariat. 1995. Diagnstico de Laboratorio en
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