Etapas del Ciclo de Krebs

Reaccin 1: Citrato sintasa (De oxalacetato a citrato)

El sitio activo de la enzima, activa el acetil-CoA para hacerlo afn a un centro
carbonoso del oxalacetato. Como consecuencia de la unin entre las dos molculas,
el grupo tioster (CoA) se hidroliza, formando as la molcula de citrato.
La reaccin es sumamente exoergnica (G'=-31.4 kJ/mol), motivo por el cual este
paso es irreversible. El citrato producido por la enzima, adems, es capaz de inhibir
competitivamente la actividad de la enzima. Incluso estando la reaccin muy
favorecida (porque es exoergnica), la citrato sintasa puede ser perfectamente
regulada. Este aspecto tiene una notable importancia biolgica, puesto que permite
una completa regulacin del ciclo de Krebs completo, convirtiendo a la enzima en
una especie de marcapasos del ciclo.

Reaccin 2: Aconitasa (De citrato a isocitrato)

La aconitasa cataliza la isomerizacin del citrato a
isocitrato, por la formacin de cis-aconitato. La enzima
cataliza tambin la reaccin inversa, pero en el ciclo de Krebs tal reaccin es
unidireccional a causa de la ley de accin de masa: las concentraciones (en
condiciones estndar) de citrato (91%), del intermediario cis-aconitato (3%) y de
isocitrato (6%), empujan decididamente la reaccin hacia la produccin de
isocitrato.
En el sitio activo de la enzima est presente un clster hierro-azufre que, junto a
algunos residuos de aminocidos polares, liga el sustrato. En concreto, la unin al
sustrato se asegura por la presencia de un resto de serina, de arginina, de histidina y
de aspartato, que permiten slo la unin estereospecifica del citrato 1R,2S,
rechazando la forma opuesta.

Reaccin 3: Isocitrato
isocitrato a oxoglutarato)

deshidrogenasa

(De

La isocitrato deshidrogenasa mitocondrial es una enzima dependiente de la

presencia de NAD+ y de Mn2+ o Mg2+. Inicialmente, la enzima cataliza la oxidacin del
isocitrato a oxalsuccinato, lo que genera una molcula de NADH a partir de NAD +.
Sucesivamente, la presencia de un in bivalente, que forma un complejo con los
oxgenos del grupo carboxilo en posicin alfa, aumenta la electronegatividad de esa
regin molecular. Esto genera una reorganizacin de los electrones en la molcula,
con la consiguiente rotura de la unin entre el carbono en posicin gamma y el grupo
carboxilo adyacente. De este modo se tiene una descarboxilacin, es decir, la salida
de una molcula de CO2, que conduce a la formacin de -cetoglutarato,
caracterizado por dos carboxilos en las extremidades y una cetona en posicin alfa
con respecto de uno de los dos grupos carboxilo.

Reaccin 4: -cetoglutarato deshidrogenasa (De

oxoglutarato a Succinil-CoA)
Despus de la conversin del isocitrato en -cetoglutarato
se produce una segunda reaccin de descarboxilacin
oxidativa, que lleva a la formacin de succinil CoA. La descarboxilacin oxidativa del
-chetoglutarato es muy parecida a la del piruvato, otro -cetocido.
Ambas reacciones incluyen la descarboxilacin de un -cetocido y la consiguiente
produccin de una unin tioster a alta energa con la coenzima A. Los complejos
que
catalizan
tales
reacciones
son
parecidos
entre
ellos.
La -cetoglutarato deshidrogenasa (o, ms correctamente, oxoglutarato
deshidrogenasa),
est
compuesta
de
tres
enzimas
diferentes:
*
Subunidad
E1:
las
dos
cetoglutarato
deshidrogenasas.
*
Subunidad
E2:
la
transuccinilasa.
(La subunidad E1 y E2 presentan una gran homologa con las de la piruvato
deshidrogenasa.)
* Subunidad E3: la dihidrolipoamida deshidrogenasa, que es el mismo polipptido
presente en el otro complejo enzimtico.

Reaccin 5: Succinil-CoA sintetasa (De SuccinilCoA a succinato)

El succinil-CoA es un tioster a alta energa (su G de
hidrlisis est en unos -33.5 kJ mol-1, parecido al del ATP
que es de -30.5 kJ mol-1). La citrato sintasa se sirve de un intermediario con tal
unin a alta energa para llevar a cabo la fusin entre una molcula con dos tomos
de carbono (acetil-CoA) y una con cuatro (oxalacetato). La enzima succinil-CoA
sintetasa se sirve de tal energa para fosforilar un nuclesido difosfato purinico como
el
GDP.
La energa procedente del tioster viene convertida en energa ligada a una unin
fosfato. El primer paso de la reaccin genera un nuevo intermediario a alta energa,
conocido como succinil fosfato. Sucesivamente, una histidina presente en el sitio
cataltico remueve el fosfato de la molcula glucdica, generando el producto
succinato y una molcula de fosfohistidina, que dona velozmente el fosfato a un
nuclesido difosfato, recargndolo a trifosfato. Se trata del nico paso del ciclo de
Krebs en el que se produce una fosforilacin a nivel de sustrato.
El GTP est implicado principalmente en las rutas de transduccin de seales, pero
su papel en un proceso energtico como el ciclo de Krebs es, en cambio,
esencialmente trasladar grupos fosfato hacia el ATP, en una reaccin catalizada por
la enzima nuclesido difosfoquinasa.

Reaccin 6: Succinato
succinato a fumarato)

deshidrogenasa

(De

La parte final del ciclo consiste en la reorganizacin de

molculas a cuatro tomos de carbono hasta la
regeneracin del oxalacetato. Para que eso sea posible, el
grupo metilo presente en el succinato tiene que
convertirse en un carbonilo. Como ocurre en otras rutas, por ejemplo en la beta
oxidacin de los cidos grasos, tal conversin ocurre mediante tres pasos: una
primera oxidacin, una hidratacin y una segunda oxidacin. Estos tres pasos,
adems de regenerar oxalacetato, permiten la extraccin ulterior de energa
mediante
la
formacin
de
FADH2
y
NADH.
La primera reaccin de oxidacin es catalizada por el complejo enzimtico de la
succinato deshidrogenasa, la nica enzima del ciclo que tiene como aceptor de
hidrgeno al FAD en vez de al NAD +. El FAD es enlazado de modo covalente a la
enzima por un residuo de histidina. La enzima se vale del FAD ya que la energa
asociada a la reaccin no es suficiente para reducir el NAD +.
El complejo enzimtico tambin es el nico del ciclo que pasa dentro de la
membrana mitocondrial. Tal posicin se debe a la implicacin de la enzima en la
cadena de transporte de los electrones. Los electrones pasados sobre el FAD se
introducen directamente en la cadena gracias a la unin estable entre la enzima y el
cofactor mismo.

Reaccin 7: Fumarasa (De fumarato a L-malato)

La fumarasa cataliza la adicin en trans de un protn y un
grupo OH- procedentes de una molcula de agua. La
hidratacin
del
fumarato
produce
L-malato.

Reaccin 8: Malato deshidrogenasa (De L-malato

a oxalacetato)
La ltima reaccin del ciclo de Krebs consiste en la
oxidacin del malato a oxalacetato. La reaccin,
catalizada por la malato deshidrogenasa, utiliza otra
molcula de NAD+ como aceptor de hidrgeno,
produciendo NADH.
La energa libre de Gibbs asociada con esta ltima reaccin es decididamente
positiva, a diferencia de las otras del ciclo. La actividad de la enzima es remolcada

por el consumo de oxalacetato por parte de la citrato sintasa, y de NADH por parte
de la cadena de transporte de electrones.