INSTITUTO POLITCNICO NACIONAL

UNIDAD PROFESIONAL INTERDISCIPLINARIA

DE BIOTECNOLOGA
DISEO DE FRMACOS

CIDO CLAVULNICO

Profesora:
Dra. Yolanda de las Mercedes Gmez y Gmez

Alumnos:
I.B.Q. Elsa Daz Montes
I.E. Daniel Gasperin Bulbarel
I.B.Q. Mirna Griselda Herrera Ovando

Ciudad de Mxico, Mayo 2016

Artculo: Clavulanic acid: A review

Autores: Parag S. Saudagar, Shrikant A. Survase & Rekha S. Singhal.

Revista de publicacin: Biotechnology Advaces.
Ao de publicacin: 2008.
Objetivo del artculo: Discutir la ruta biosinttica, la produccin fermentativa, el procesamiento downstream, as como las
aplicaciones del cido clavulnico.
Compuesto a sintetizar: cido clavulnico (CA).
Organismo productor: Streptomyces clavuligerus.
Origen: Natural
Historia:
En nuestros das la aparicin de cepas de microorganismos resistentes a los antibiticos por medio de la produccin de lactamasas es uno de los fenmenos ms frecuentes en la clnica infecciosa humana. Las -lactamasas son enzimas de
naturaleza proteica, codificadas a travs de la expresin de un gen de tipo cromosmico o transferidas por plsmidos o
transpones que tienen un origen bacteriano inducible o constitutivo y que son capaces de hidrolizar el anillo -lactmico
dejndolo inactivo. En forma de protena excretada (no membranaria), las -lactamasas hidrolizan el anillo -lactmico del
antibitico provocando su desestabilizacin qumica y su posterior destruccin (Giner, 1996).
El cido clavulnico es un importante antibitico -lactmico y fue descubierto independientemente por Brown et al. en
1976 y Napier et al. en 1981 como un producto del organismo Streptomyces clavuligerus.
S. clavuligerus haban sido aislados en 1971 en un programa de para la producccin de los compuestos -lactmicos con
resistencia mejorada a la beta lactamasas. Irnicamente, la seleccin de S. clavuligerus en este proyecto se debi a su
capacidad de producir Cefamicina C; el cido clavulnico fue descubierto cuando las cepas se examinaron posteriormente
para la produccin de inhibidores de la -lactamasa.

Figura 1. Estructura qumica de cido clavulnico

La estructura qumica de cido clavulnico fue identificada por Howarth et al. (1976) (Figura 1). Se encontr que este
compuesto es un anlogo de la estructura bsica de la penicilina. En la molcula del CA, el tomo de oxgeno est
sustituido por azufre, una caracterstica de la penicilina.
Modo de accin:

El cido clavulnico (CA), un potente inhibidor -lactmico de origen natural de bacterias -lactamasas y es activo contra un
amplio espectro de bacterias Gram-positivas y Gram-negativas (Saudagar et al., 2008).
Los antibiticos -lactmicos (Cuadro 1), cuyo mecanismo de accin es la inhibicin de la ltima etapa de la sntesis de la
pared celular bacteriana (Figura 2), interfiriendo la sntesis de los peptidoglicanos, que es el componente estructural
principal de la dela misma, y activando enzimas autolticas que se encuentran en ella (Suarez & Gudiol, 2009; BlogInfec).
Los peptidoglicanos estn formados por largas cadenas de polipptidos en las que se alternan residuos de N-acetil
glucosamina (NAG) y acido N-acetil muramico (NAM); entre estas cadenas existen entrecruzamientos o puentes de
naturaleza polipptidicos que determinan una estructura similar a una malla y confieren rigidez a la pared celular. Tanto el
NAG, el NAM y los polipptidos son sintetizados en el citoplasma bacteriano y luego transportados a travs de la
membrana; luego, son ensamblados fuera de ella mediante diversas enzimas denominadas transpeptidasas,
carboxipeptidasas y endopeptidasas. Estas enzimas, responsables de las ltimas etapas de la sntesis de los
peptidoglicanos se localizan a nivel de la membrana citoplasmtica y son el sitio blanco de los antibiticos -lactmicos; se
conocen como protenas fijadoras de penicilinas o PBP (BlogInfec).
El sector amida de los -lactmicos es similar a las PBP, por lo que la unin de las PBP al antibitico determina la
inactivacin de la enzima. Las distintas especies bacterianas varan ampliamente en tipo, nmero, estructura y funcionalidad
de las PBP, as como la afinidad de estas mismas por los distintos -lactmicos. El efecto de un determinado -lactmico
depende de la inactivacin de determinadas PBP y la importancia de esa PBP en la sntesis de la pared celular (BlogInfec).

Figura 2. Pared celular bacteriana.

Cuadro 1. Antibiticos -lactmicos.

Obtenido de http://www.shutterstock.com/

ESTRUCTURA QUMICA
BSICA

ANTIBITICO

MICROOGANISMO PRODUCTOR

Penicilinas

Penicillium chrysogenum
Aspergillus nidulans
Cephalosporium acremonium
Streptomyces clavuligerus

Penam

Ceph-3-em
Cefalospoinas

Cephalosporium acremonium

Ceph-3-em
Cefamicinas

Norcadia lactamdurans

cido clavulnico

Streptomyces clavuligerus

Tienamicinas
cidos olivnicos

Streptomyces catleya
Streptomyces olivaceus

Monolactmicos

GLunobacter sp.
Pseudomonas acidophila
Acetobacter sp.

Norcadicinas

Norcadia uniformis

Clavam

Carbapenem

Monolactam

Adaptado de Luiz et al., 2009.

Enzimas de la biosntesis:
Cuadro 2. Enzimas participantes en la biosntesis de cido clavulnico.
ENZIMA

NOMBRE IUPAC

NUMERO EC

REACCIN QUE CATALIZA

CEA-sintetasa

N2-2-carboxietilarginina sintetasa

2.5.1.66

Gliceraldehido 3-fosfato + Arginina N2-2carboxietil-arginina

-lactmico-sintasa

Carboxietil-arginina
-lactamico-sintasa

6.3.3.4

N2-2-carboxietil-arginina cido desxiguanidino

proclavamnico

Clavaminato
sintetasa

Clavaminato
sintetasa

1.14.11.21

cido desxiguanidino proclavamnico cido

guanidino proclavamnico

Proclavamnico
aminidino hidrolasa

Agmatinasa

3.5.3.11

cido guanidino proclavamnico cido

proclavamnico

Clavaminato
sintetasa

Clavaminato
sintetasa

1.14.11.21

cido proclavamnico cido

diidroproclavamnico

Clavaminato
sintetasa

Clavaminato
sintetasa

1.14.11.21

cido diidroproclavamnico cido clavamnico

CAD

cido clavulnico
deshidrogenasa

1.1.1._

cido clavamnico Clavaldedo

CAR

Clavaldedo
reductasa

1.1.1._

Clavaldedo cido clavulnico

Obtenido de http://enzyme.expasy.org

Reacciones de la biosntesis (8 reacciones):

Produccin a gran escala:

El clsico proceso de fermentacin comercial para la produccin de productos metablicos secundarios se puede subdividir
en tres fases y el cido clavulnico no es una excepcin:
-

Fase 1. Desarrollo de inculo.

Fase 2. Sntesis de antibiticos por microorganismos.

Fase 3. Recuperacin del producto.

Los siguientes criterios son reconocidos actualmente como necesarios para obtener el inculo satisfactorio:
-

Encontrarse en un estado activo para reducir al mnimo la duracin de la fase de latencia en la fermentacin
posterior.

Proporcionar un inculo de tamao ptimo (3-10% del medio volumen).

Debe estar en una forma adecuada morfolgica.

Debe estar libre de contaminacin.

La biomasa inoculada debe conservar su capacidad de formacin de productos.

La mejora de la cepa es una parte esencial del desarrollo del proceso de los productos de fermentacin microbiana:
-

Permite la reduccin de costos mediante el desarrollo de cepa con mayor productividad (medida como el ttulo o el
rendimiento total).

Confiere la capacidad de utilizar materias primas baratas

Proporciona caractersticas especiales ms deseables, como la mejora de las propiedades de filtracin

Capacidad para producir, bajo ciertas condiciones de temperatura o tensin de oxgeno.

Los hidratos de carbono son las fuentes de energa ms simples para el crecimiento y la produccin de metabolitos
secundarios; sin embargo, el rpido catabolismo de la glucosa y otros hidratos de carbono disminuye la velocidad de la
biosntesis de antibiticos. Por lo que la fuente preferida para la produccin de cido clavulnico es un lpido donde el
glicerol es esencial para la biosntesis, sumado a esto la protena de soja es el nutriente ms importante para la produccin
de cido clavulnico. El fosfato juega un papel importante en la sntesis de cido clavulnico.
Los aminocidos sobre la produccin de cido clavulnico son la ornitina y arginina, aminocidos en el ciclo de la urea, los
cuales son los mejor utilizados para la produccin de cido clavulnico.

Downstream:
El cido clavulanico o sus sales se pueden extraer directamente del medio de cultivo de diversas formas, pero normalmente
las clulas de los clavuligerus son eliminadas del medio de cultivo por filtracin o centrifugacin antes de que se inicie
dichos procedimientos de extraccin. Todo el caldo extraccin tambin se puede emplear.
En las etapas de la extraccin de cido clavulanico se encuentran:

Filtracin por
membranas

Extraccin por
solventes

Centrifugacin

Filtracin

Lavado

Precipitacin

En la filtracin por membranas se utilizan micro y ultra filtradoras, las cuales son en 3 etapas para concentrar el
cultivo. En esta etapa es separado el agua del resto del cultivo. El uso de membranas vara en tamaos, desde
150, 15 a 20 Kda y a presiones de 10 Bar.

La extraccin por solventes usa solventes orgnicos, para separar el medio de cultivo del producto. Tales como
metil-isobutil cetona. En esta etapa se requiere de baja temperatura y pH acido para facilitar la disolucin del cido
clavulanico con metil isobutil cetona (MIK).

En la centrifugacin se separan los slidos del medio lquido, en el medio liquido se encuentra el cido clavulanico
disuelto en MIK, los slidos son la biomasa as como sustrato y subproductos formados en la fermentacin.

El precipitado es necesario para formar el clavulanato de potasio, en esta etapa el cido clavulanico entra en
contacto con sal de terbutilamina, separa las trazas de cidos orgnicos del cido clavulanico.

Un lavado es necesario para eliminar las trazas de otros compuestos que no pudieron ser retirados durante los
procesos anteriores. Se ocupa acetona debido a que es inmiscible con el agua y es un compuesto orgnico
encontrado comnmente en la sangre con 2 mg/dl.

Se utiliza el filtro Nustche para la separacin de los solventes del clavulanato de potasio. Es una versin de filtro
Buchner, a escala industrial. Usa vaco para la separacin

Aplicaciones:
La eficacia de la funcin del cido clavulnico contra patgenos Gram-negativos depende de muchos factores, uno de los
cuales es la penetracin del inhibidor a travs de la membrana externa. El cido clavulnico penetra las membranas
externas de las cepas E. coli, Klebsiella pneumoniae y Enterobacter cloacae; en comparacin con otros inhibidores como
sulbactam, tazobactam y BRL 42715.
Con lo anterior se contribuy a medir la eficacia de las combinaciones de cido clavulnico con -lactmicos en la lucha con
patgenos resistentes a los antibiticos. En el caso de amoxicilina- cido clavulnico, este ha demostrado ser el agente ms
activo contra bacterias Gram positivas, como: Staphylococcus aureus, Staphylococcus epidermidis, Enterococcus faecalis,
Streptococcus pyogenes, Streptococcus pneumoniae incluyendo cepas resistentes a la penicilina y macrlidos intermedios.
Sin embargo muestra una dbil actividad contra Proteus mirabilis y Proteus vulgaris. Amoxicilina- cido clavulnico tiene
una actividad significativa contra muchas especies de bacterias Gram-negativos no enterobacterias incluyendo Haemophilus
influenzae, Haemophilus parainfluenza y M. catarrhalis.
Amoxicilina- cido clavulnico ha sido uno de los primeros tratamientos de eleccin para la infeccin del tracto respiratorio,
desde su introduccin hace casi 25 aos. Desde entonces, se ha convertido en el "estndar de oro" contra el cual se
comparan la mayora de los nuevos antimicrobianos orales, pero ninguno de estos nuevos agentes ha demostrado una
eficacia superior. Dos estudios recientes compararon la eficacia de amoxicilina- cido clavulnico contra azitromicina,
cefixima, o ciprofloxacino en el tratamiento de las exacerbaciones agudas de la bronquitis crnica y han demostrado una
eficacia ms alta de amoxicilina- cido clavulnico.
En el caso de infecciones del tracto urinario en nios, se trataron con diferentes antibiticos dando como resultado que
todas las cepas fueron susceptibles a la cefuroxima y resistente a la ampicilina. La susceptibilidad a la amoxicilina-CA fue
del 77,8% y para nitrofurantona fue del 67%.
En el caso de ostetis alveolar, se usa la combinacin de amoxicilina oral ms CA y enjuague de clorhexidina para reducir la
incidencia de la ostetis alveolar asociada a la extraccin de los terceros molares mandibulares, ya que la incidencia
disminuye y la previene. As pues en el caso de infecciones endodnticas se demostr que las bacterias tratadas con
amoxicilina- cido clavulnico eran ms susceptibles en comparacin con amoxicilina, clindamicina, metronidazol y
claritromicina. La eficacia de Augmentin (amoxicilina + CA) en diarrea an no se ha examinado en un ensayo controlado.
La Amoxicilina-CA sigue manteniendo una excelente actividad contra la mayora de los patgenos especficos pesar de 20
aos de uso clnico (Cuadro 3).

Cuadro 3. Aplicaciones de amoxicilina con cido clavunlico.

Amoxicilina-CA para el tratamiento de las siguientes infecciones en adultos y nios
Sinusitis bacteriana aguda
Neumona
Otitis media aguda
Cistitis
Exacerbacin aguda de bronquitis crnica
Pielonefritis
Infecciones de la piel y tejidos blandos
Infecciones de huesos y articulaciones

La toxicidad de la combinacin de estos frmacos ha sido altamente estudiada, en estudios realizados en 2001, se concluy
que el tratamiento durante el embarazo es de bajo riesgo sobre anomalas congnitas en recin nacidos, cuando se usa la
dosis teraputica habitual, sin embargo se requieren de ms estudios. Sin embargo la disfuncin heptica es una reaccin
rara adversa, asociada a esta combinacin de antibiticos. La disfuncin heptica puede ser grave y ms frecuente en
pacientes de edad avanzada, es generalmente reversible, aunque se han reportado enfermedades crnicas del hgado y la
muerte. Entre otros efectos adversos se encuentra: cefalea, eritema, urticaria, dermatitis exfoliativa, nauseas, vmitos,
candidiasis vaginal y reacciones de hipersensibilidad (Villatoro, 2002).
Las dosis es oral, para neonatos y lactantes< 3 meses: 30mg/Kg/da cada 12 horas; nios< 40Kg: 20 a 40mg/Kg/da cada 8
horas o 25 a 45mg/kg/da dividido cada 12 horas; adultos 250mg cada 8 horas o 500g cada 12 horas; en infecciones ms
graves 500mg cada 8 horas o 875mg cada 12 horas (Villatoro, 2002).

Conclusiones del artculo:

Una bsqueda de cepas superiores productoras de cido clavulnico, junto con una permanente bsqueda del mecanismo
implicado en la produccin de cido clavulnico, se realiza a fin de mejorar su rendimiento; siendo esto importante para el
desarrollo de cepas recombinantes y protocolos de fermentacin, de igual manera los esfuerzos dirigidos a la estabilizacin
de la molcula, sin prdida de bioactividad, y nuevas tcnicas de procesamiento downstream ms simples y desarrollo de
formulaciones ms efectivas que contienen cido clavulnico dirigidas contra organismos son la necesidad del da. Esto
requerira esfuerzos de investigacin interdisciplinario extensas en los campos de la biologa molecular, tecnologa de
fermentacin, farmacutico, entre muchos otros.

Referencias consultadas:
Giner S., Cans M., Rodilla F. y Ferrer C. (1996). Valoracin de los inhibidores de las betalactamasas. Farm Hosp 1996; 20
(4): 225-235.
Luiz de Oliveira J.H.H., Granato A.C., Hirata D.B., Hokka C.O. Barboza M. & Trsic M. (2009). Clavulanic acid and
cephamicin c: a perspective of the biosynthesis, isolation and action mechanism. Quim Nova, Vol. 32, No. 8, 2142-2150.
Saudagar P.S., Survase S.A. & Singhal R.S. (2008). Clavulanic acid: A review. Biotechnology Advances, 26: 338-351.
Surez C. & Gudiol F. (2009). Antibiticos betalactmicos. Enfermedades Infecciosas y Microbiologa Clnica, 27(2): 116129.
Villatoro A. (2002). Manual de medicina de urgencias. Editorial el Manual Moderno. Mxico. pg. 741
Base de datos de nomenclatura de enzimas, consultada de http://enzyme.expasy.org
Base de datos de genomas de microorganismos, consultada de http://www.genome.jp
BlogInf: Blog Informativo Infecto, consultado de http://www.infecto.edu.uy/terapeutica/atbfa/cef/4.html
Video: -Lactams, Mechanisms of Action and Resistance, consultado de https://www.youtube.com/watch?v=qBdYnRhdWcQ