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CLASIFICACION DE LAS BACTERIAS DISOLVENTOGENAS
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2. CARACTERISTICA NUTRICIONALES
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0 Fermentan almidón y sacarosa

[ *($@'*(&
'('*
0Vtilizaun medio que en su composición incluye
biotina y ácido p-amino-benzoico y elementos
minerales.
2. CARACTERISTICA NUTRICIONALES

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0 áacterias mesófilas
0 Crecimiento activo: 30 Ȃ 40 °C
0 Fácil aislamiento de suelos o vegetales
diversos: patata, dalias, granos de maíz, etc.
0 Preponderantemente de suelos calientes
donde descomposición de materia orgánica
es rápida.
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CINETICA Y BALANCE DE LA FERMENTACION DISCONTINUA
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r Cae el pH
r Excreción de ácido acético y butírico alcanzando un maximo a
12-18 horas.
r Se produce un desprendimiento gaseoso de H2 y CO2.
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r El metabolismo de los azucares surge una reorientación y se
producen directamente acetona, butanol y etanol. La acidez
decrece.
r El desprendimiento gaseoso aumenta de nuevo se enriquece
en CO2 y empobrece en H2.
r Crecimiento lento y después estacionariod
Ê + Ê  , Ê+, , Ê- 
r ?a c ce traci fi al e is lve tes es
r xi a a 2 l-1
r ?a r cci es ecifica e 6-8
is lve tes r ( es sec ) e cél las.
r te i e ta l 6 -8 % e l s
is lve tes ( / ), e acet a 2 -35 %
( / ).
© Ml control de pH puede asegurarse según 2
técnicas:
© Por regulación a un valor constante,
variable según las cepas o siguiendo un
perfil determinado gracias a la adición de
un agente alcalino (NH4OH, KOH,NaOH).
© Por adición de un tampón al medio.
FERMENTACION CONTINUA
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?a fermentación continua es una practica
atractiva para la mejora de la producción
sobre todo en una fermentación limitada
por la inhibición por los productos.

[ '**./'**(''&*&
)*
?a inmovilización (en geles de alginato) y el
confinamiento de la biomasa constituyen en
general dos métodos de elección para mejorar
las productividades volúmicas.
INHIBICION POR EL BUTANOL

a ?a producción de AáM constituye un ejemplo típico


de una fermentación limitada.
a Ms el butanol con su acumulación en el medio que
disminuye y detiene la fermentación.
a ?a acetona a la concentración presente no ejerce
inhibición notable.
a Técnicas de mejora de la resistencia de cepas al
butanol:
r Adaptación de las cepas a través de cultivos en medios
progresivamente enriquecidos en butanol.
r Acción de agentes mutagénicos asociada a la selección
de mutantes por su resistencia al butanol.
INFLUENCIA DEL OXIGENO
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© Mnlentecimiento.
© Detenimiento el crecimiento y síntesis de ADN,
ARN y proteínas.
© Detenimiento de la producción de ácido butírico.
No de ácido acético.
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 induce una NADH oxidasa.
RELACION ENTRE ESPORULACION Y DISOLVENTOGENESIS

©        0  las células vegetativas


son móviles por cilios perítricos. Forma de bastones
alargados y netamente positivas al Gram.

©         1-2 horas antes del punto de


ruptura del pH , las células se cargan de granulosa,
polímero de reserva parecido a la amilopectina que
colorea de azul violeta al yodo.
RELACION ENTRE ESPORULACION Y DISOLVENTOGENESIS
©       0  la célula inicia la
fase estacionaria. Pierde movilidad y toma la
morfología clostridiana (forma de cigarros puros
inflados, refringentes rodeados de cápsulas de
polisacáridos). Son formas bacterianas donde el
mecanismo de esporulación entra en acción hasta los
estadios I y II. Prosigue la formación del endosporo
(estadio III) y la síntesis de cortex (estadio IV).
AUTOLISIS

© Mste fenómeno parece observarse desde el


final de la fase exponencial de crecimiento.
© Se caracteriza por una liberación masiva de
autolisina al medio que provoca,
paralelamente a la disminución de la
biomasa en el reactor, un descenso marcado
de la productividad volúmica de disolvente.
2.7. DEGENERACION
© Consiste en una evolución considerada irreversible de
la forma clostridiana hacia una forma Dzdegeneradadz,
anesporulada, acidógena y no disolventógena.
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VIAS METABOLICAS
© ?os clostridios disolventógenos utilizan una gran
variedad de azúcares.

© Ml metabolismo de la glucosa por 6 



sigue la vía glucolítica ( Vía de Mmbden-Meyerhof-
Parnas), usada por los clostridios sacarolíticos.

© ?os azúcares con 5 C: vía Pentosa Fosfato.

© Ml piruvato entra en una secuencia de reacciones que


conduce a la formación de ácidos y disolventes.
VÍA DE ACIDOGÉNESIS Y DE DISOLVENTÓGENAS
EN CLOSTRIDIUM
VÍA DE ACIDOGÉNESIS Y DE DISOLVENTÓGENAS
EN CLOSTRIDIUM
Balances de las reacciones a los que conducen estas
vías a partir de la glucosa
REGULACION DE LAS VIAS METABOLICAS: TRANSICION DE LA
ACIDOGENESIS A LA DISOLVENTOGENESIS
© ?a regulación de las vías metabólicas, es
crucial para la comprensión y control de la
fermentación acetonobutílica.
© Ml punto central objeto de intensos estudios,
es la transición de las fases acidogénesis /
disolventogénesis
Fisiología de la transición
© Parece que el fenómeno conocido como <efecto
desacoplante de los ácidos > sea el origen de la
transición hacia la disolventogénesis
© ?a disolventogénesis:
© Aunque produce menos ATP que la acidogénesis (Tabla
5) es más favorable energéticamente
© Produce menos protones
© Permite el reconsumo de ácidos
© Mlimina el gasto energético que provoca la presencia de
ácidos ejerciendo un papel de detoxificación.
Mecanismo de la transición
a?a transición acidogénesis/disolventogénesis se
manifiesta por una baja de las actividades
enzimáticas características de la acidogénesis y por
un importante, aunque variable de las actividades
especifica de la producción de acetona y butanol.
a?a conversión en disolventes del acetato y del
butirato producidos (o añadidos al medio de
fermentación) se efectúa en realidad por la
intermediación del acetoacetil CoA.
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OBTENCION DE MUTANTES
a Mutagénesis en 6 
 :
r Se pueden obtener mutantes resistentes a los antibióticos y
al butanol.
r ?os mutágenos que actúan por acción directa (MMS, N-
metil-N´nitro-N nitrosoguanidina) son eficaces, mientras
que los que implican la intervención de los mecanismos
celulares falibles de reparación del DNA (rayos VV) son
malos mutágenos.
0 Vna técnica particularmente útil es el empleo de sustratos-
suicida (derivados halogenados del acetato y del butirato)
SISTEMAS DE TRANSFERENCIA
GENETICA
a Se puede realizar transferencias genéticas.
a Transferencia a 6 
 de genes de resistencia
a antibióticos portados por plásmidos de estreptococos
conocidos por su amplio espectro de hospedadores.
a Se ha observado una buena expresión en M 
de los
genes de 6 

a ?a transformación plasmídica de protoplastos o fusión
de protoplastos es una técnica atrayente pues ofrece una
amplia posibilidad de manipulación genética de las
cepas.
FAGOS
© ?os fagos constituyen otro tipo de vector susceptible de ser
utilizado para las transferencias genéticas.
© Numerosos estudios, dedicados a los fagos de estos
clostridios han sido motivados por la considerable
importancia, de prevenirse frente a la contaminación por
los fagos.
© Fagos de 6 
  
© Obtención de mutantes resistentes .
© Mstudio de propiedades y clasificación de fagos obtenidos.
© Mspectro reducido de hospedadores
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·.1. AISLAMIENTO
a Se aprovecha la propiedad de resistencia al calor de
los esporos
a Muestras de tierra o materia orgánica en
descomposición se somete a shok térmico violento (1
o 2 minutos a 100 °C ) o pasteurización (5-10 minutos
a 70- 0 °C)
a ?a germinación y crecimiento bacteriano tiene lugar
en anaerobiosis estricta en tubos de medio líquido.
a ?os tubos con cubierta de espuma o que desprenden
un olor de alcohol butílico se extienden sobre placas
petri en anaerobiosis.
a Resembrar las colonias aisladas en medio líquido y
someter a prueba de producción de disolventes.
CONSERVACION DE LAS CEPAS
© Mn estado esporulado mezcladas con tierra o
arena estéril por años
© Métodos clásicos de la microbiología de los
anaerobios
© Congelación
© ?iofilización de las formas esporuladas
© Conservación a 4 °C en medio liquido en
anaerobiosis