José Luis Morales Charnaud Espectrofotometría de UV-visible y Herramientas

Estadísticas Para Mediciones Espectroscópicas

201122788 Laboratorio de Análisis Instrumental

Espectrofotometría de UV-visible y Herramientas Estadísticas Para Mediciones

Espectroscópicas
1. Asignación:

Determinación de las longitudes de onda óptimas para cada colorante alimenticio,

también determinar la curva de calibración con su análisis estadístico utilizando la
herramienta R de Pearson y la concentración de la muestra desconocida.

2. Instrumentación:

Pipeta 5 mL: PYREX VISTA™ ±0.5 mL

Balón Aforado 50 mL: Boro 3.3 LMS Made in Germany ±0.06 mL
Espectrofotómetro: Thermo ScientificTM 840-209700 ±0.005 mL

3. Analito:

Colorante: Rojo No.40 Colorante: Azul No.1

2-hidroxi-1-(2-metoxi-5-metil-4-sulfonato- a-(4-(N-etil-3-sulfonatobencilamino)-fenil)-
fenilazo)-naftaleno- 6-sulfonato disódico a-(4-Netil-3-sulfonatobencilamino)-
ciclohexa-2,5-dienilideno)-tolueno-2-
sulfonato disódico

Colorante: Amarillo No.5 Colorante: Naranja: Amarillo No.6

Tartrazina disodio; (5 E ) -6-oxo-5 - [(4-sulfonatofenil)
Trisodium 1-(4-sulfonatophenyl)-4-(4-
sulfonatophenylazo)-5-pyrazolone-3-carboxylate.
hidrazinilideno] naftaleno-2-sulfonato
4. Procedimiento:

Diluir 1mL de colorante alimenticio para cada colorante con agua desmineralizada en
un balón aforado de 50mL, preparar el espectrofotómetro en modo barrido para
determinar la longitud absorción máxima de cada muestra, lavar la celda de vidrio con
agua desmineralizada y luego con la muestra a leer, agregar cantidad suficiente y
adecuada de la disolución en la celda, tratando de dejar la misma altura para cada una
de las muestras a leer, se limpian los residuos de agua o de la muestra en la parte
exterior de la celda con toallas húmedas, colocar la celda dentro del aparato, tomando
en cuenta la indicación de este hacia el cual atravesara el haz de luz, se tapa el equipo,
se inicia el barrido de la muestra, se repite el proceso para cada una de las muestras
de diferentes coloraciones.

5. Datos:
Colorante Absorción Máxima λ(nm)
Rojo 0.4859 505
Azul 0.1641 629
Amarillo 0.5436 286
Naranja 0.1962 482

Crojo (ppm o mg/L) V(mL) Absorbancia

5 5 2.645
4 4 2.146
3 3 1.647
2 2 1.108
1 1 0.526
0.5 0.5

C muestra desconocida Absorbancia

3.43 1.837
6. Muestra de Calculo:

Determinar la Curva de Calibración de la Absorción respecto a la concentración:

𝐴 = 𝑚𝐶 + 𝑏
Donde
𝐴 = 𝐴𝑏𝑠𝑜𝑟𝑐𝑖ó𝑛
𝐶 = 𝐶𝑜𝑛𝑐𝑒𝑛𝑡𝑟𝑎𝑐𝑖ó𝑛
𝑚 = 𝑃𝑒𝑛𝑑𝑖𝑒𝑛𝑡𝑒
𝑏 = 𝐼𝑛𝑡𝑒𝑟𝑐𝑒𝑝𝑡𝑜

Ejemplo: Determinar la curva de calibración de la absorción respecto a la

concentración para el color rojo utilizando los valores obtenidos con el
espectrofotómetro.

𝐴 = 0.5681𝐶 − 0.1222

Cálculo de la concentración de la muestra desconocida

:
𝐴 + 0.1222
𝐶=
0.5681

Donde
𝐴 = 𝐴𝑏𝑠𝑜𝑟𝑐𝑖ó𝑛
𝐶 = 𝐶𝑜𝑛𝑐𝑒𝑛𝑡𝑟𝑎𝑐𝑖ó𝑛

Ejemplo: Calcular la concentración de la muestra desconocida del color rojo

utilizando los valores obtenidos por el espectrofotómetro en donde la absorción es
de 1.837.

1.837 + 0.1222
𝐶= = 3.44𝑝𝑝𝑚
0.5681

7. Resultados:
Colorante λ(nm)
Rojo 505
Azul 629
Amarillo 286
Naranja 482

Curva de Calibración R Rc
𝐴 = 0.5681𝐶 − 0.1222 0.99741628 > 0.811

C(ppm) muestra desconocida

3.44
8. Interpretación:

Para obtener los valores de las longitudes de onda óptima para los distintos
colorantes rojo, azul, amarillo y naranja se debe utilizar un instrumento de medición
en este caso es el espectrofotómetro de Uv-visible para los que se obtuvieron las
longitudes de onda; para el colorante rojo fue de 505 nm lo cual cumple la relación
de colores absorbidos y los colores observados, en este caso el color rojo es el
observado y el color absorbido es el verde que se encuentra en el rango de longitud
de onda de 480nm a 560nm; para el colorante azul fue de 629nm lo cual cumple la
relación de colores absorbidos y los colores observados, en este caso el color azul
es el observado y el color absorbido es el color naranja que se encuentra en el rango
de longitud de onda de 590nm a 630nm; para el colorante amarillo fue de 286nm lo
cual no cumple con la relación de colores absorbidos y los colores observados ya
que en este caso el color absorbido debió ser el violeta que se encuentra en el rango
de longitud de onda de 400nm a 430nm, el origen del error pudo ser ocasionado por
un error del instrumento o por el error humano en el momento de manipular el
instrumento; para el colorante naranja fue de 482nm lo cual no cumple la relación
de colores absorbidos y los colores observados, en este caso el color naranja es el
observado y el color absorbido debió ser el color azul que se encuentra en el rango
de longitud de onda de 430nm a 480nm, el origen del error pudo ser ocasionado por
un error del instrumento o por el error humano en el momento de manipular el
instrumento.

Para obtener el valor de la concentración de la muestra desconocida se

obtuvieron los datos de absorción y concentración de 6 muestras del mismo color a
distintas concentraciones con el cual se realizo una curva de calibración con un
modelo matemático de un grado con el cual se obtuvo una concentración de
3.44ppm de la muestra desconocida, para verificar que esta curva de calibración
representa valores que cumplen con el fenómeno de absorción del experimento se
utilizó la herramienta estadística R de Pearson con la cual se obtuvo una 𝑅 2 de
0.9897 y un valor de Rc para 6 datos con una confiabilidad del 95% es de 0.811 al
ser mayor 𝑅 2 que la Rc entonces el modelo matemático cumple y puede representar
la tendencia de los datos obtenidos experimentalmente pero una de las
instrucciones del instructivo de la práctica indica que 𝑅 2 deber ser mayor a 0.999
para considerarse aceptable por lo que a nivel laboratorio del curso de análisis
instrumental esta curva de calibración no cumple para representar el fenómeno
experimental de manera aceptable.

9. Referencias:
Douglas A. Skoog (6ta Ed.). Principios de Análisis Instrumental. (2008).
México: CENGAGE LEARNING.
10. Anexos:

Espectrofotómetro:

Balones Aforados (colorantes rojo y azul):

Hoja de Datos Originales: