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Estudio de la diferencia entre una célula sana y una célula

cancerosa de la piel utilizando microarrays de DNA


Abad Myriam
Departamento de Ciencias de la Vida. Ingeniería en Biotecnología. Sangolquí, Ecuador.
Universidad de las Fuerzas Armadas ESPE
meabad2@espe.edu.ec

RESUMEN: Este trabajo tuvo como objetivo utilizar microarrays de DNA para comparar
las diferencias de los niveles de expresión génica entre células sanas y cancerosas. Para
ello primero se tomó una muestra de tejido de piel sana y de melanoma del mismo
individuo; de ambas muestras se extrajo el RNA y se aisló solo el mRNA, posteriormente
se hizo copias marcadas de DNA, las cuales se aplicaron en el microarray, finalmente éste
fue escaneado para realizar el análisis correspondiente. Lográndose determinar que el gen
4263 es uno de los genes que está expresándose en las células cancerosas, produciendo
que se apague la expresión de varios genes controlados por este. Además se pudo
visualizar que el gen 6219 es transcrito tanto en las células cancerosas como en las
normales, sin embargo en las primeras el mRNA es defectuoso; esta anormalidad no pudo
ser detectada con microarrays ya que en ambas células se está transcribiendo el gen, es
por ello que para detectar este defecto la mayoría de científicos ha utilizado técnicas de
análisis de expresión proteica.

PALABRAS CLAVE: microarrays, nivel de expresión génica, células cancerosas.

ABSTRACT: This work aimed to use DNA microarrays to compare the differences
between the levels of gene expression of healthy and cancerous cells. For this, a sample
of healthy skin tissue and melanoma from the same individual was first taken; from both
samples the RNA was extracted and only the mRNA was isolated, then copies of DNA
were made, which were applied in the microarray, finally this was scanned to perform the
corresponding analysis. Being able to determine that the 4263 gene is one of the genes
that are expressing in the cancer cells, producing that they extinguish the expression of
several genes controlled by this one. It can also be visualized the 6219 gene is transcribed
in the cancer cells as in the normal ones, however in the first the mRNA is defective; this
abnormality could not be detected with microarrays since in both cells the gene is being
transcribed, that is why to detect this defect, most scientists have used protein expression
analysis techniques.
KEYWORDS: microarrays, level gene expression, skin cancer cells.

INTRODUCCIÓN desactivados en ese momento (Gálvez,


2017).
Una célula normal pasa a convertirse en
una célula cancerosa debido a un cambio Genetic Science Learning Center (2018)

o mutación en el ADN, estas células a menciona que cada punto en un

veces mueren o son eliminadas, debido a microarray contiene múltiples hebras

que la mutación producida en ellas las idénticas de ADN (llamadas también

hace no viables; sin embargo otras veces, sondas) y la secuencia de ADN en cada

siguen con vida y se reproducen de punto es única, de forma que representa

forma descontrolada e irregular un solo gen. Estos puntos están

produciendo tumores (Garza & Juárez, ordenados en filas y columnas y su

2014). ubicación se registra en una base de


datos informática.
De acuerdo a American Cancer Society
(2012) la mayoría de células cancerosas Los ácidos nucleicos de las muestras a

de la piel cuando se observan en un analizar se marcan por métodos

microscopio son similares a las células fluorescentes o enzimáticos y se incuban

sanas, de manera que es un tanto difícil sobre el microarray, permitiendo la

poder identificarlas de esta manera para hibridación. Es así que las cadenas de

ser estudiadas. Es así que los científicos cDNA marcadas se unirán a sus

están utilizando técnicas como los complementarias en el microarray,

microarrays de ADN para investigar consiguiendo identificar y cuantificar el

además de cáncer, enfermedades DNA presente en la muestra haciendo

cardiovasculares, inflamatorias, e uso de un escáner y herramientas

infecciosas, así como desordenes informáticas (López, Mallorquín, &

psiquiátricos (Tomislav, 2017). Vega, 2002).

Un microarray es una gran cantidad de MATERIALES Y MÉTODOS

puntos de ADN unidos a una superficie


Esta práctica fue desarrollada de forma
que generalmente es de vidrio y su
virtual en la página de Genetic Science
función es medir niveles de expresión de
Learning Center (2018).
varios genes a la vez, permitiendo así
saber que genes están activados o
Primero se tomó una muestra de tejido de un microarray utilizando una
piel sana y de melanoma del mismo micropipeta, posteriormente este fue
paciente utilizando un bisturí y se colocó lavado para quitar los cDNAs que no se
cada muestra en un tubo eppendorf se unieron y finalmente se escaneó el
vacío. microarray para analizar los resultados.

Ser procedió a extraer el RNA de las RESULTADOS


muestras colocando en cada tubo una
Las manchas verdes mostraron los genes
mezcla de solventes orgánicos, para
que se transcriben en las células sanas de
poder separar el DNA, proteínas y otros
la piel, las manchas rojas revelaron los
componentes celulares del RNA y dejar
genes que se transcriben en las células de
únicamente este en solución. Ambos
melanoma y las manchas amarillas
tubos fueron llevados a agitación en el
mostraron los genes que se trascriben en
vortex y luego a la centrífuga.
ambos tipos de células (ver figura N°01).

Con una micropipeta se tomó el


sobrenadante (fase donde se encuentra el
RNA) y se lo puso en un tubo nuevo,
entonces se lavó sobre columnas llenas
de pequeñas cuentas que solo se unirían
a las cadenas de RNA que tienen cola de
Figura N°01: Resultados del microarray
poly-A (mRNA). escaneado (Abad, 2018).

Entonces se lavó estas columnas con una Se determinó que el gen 4263 es uno de

solución buffer para despegar el mRNA los genes que está expresándose en las

de la cuentas. Una vez hecho esto se células cancerosas, produciendo que se

obtuvo el cDNA correspondiente apague la expresión de varios genes

añadiendo a cada tubo una mezcla que controlados por este (ver figura N°02).

contenía: Poly-T primers, transcriptasa


reversa y nucleótidos marcados con
fluorescencia (verde para células sanas y
rojo para cancerosas).

Se añadió entonces las cadenas de cDNA


tanto de células sanas como cancerosas a Figura N°02: Gen 4263 expresado en células
cancerosas (Abad, 2018).
Se pudo visualizar que el gen 6219 se momento dado y en diferentes
transcribe tanto en las células cancerosas tipos de células o tejidos.
como en células normales (ver figura  La tecnología de los microarrays
N°03). pueden detectar niveles de
expresión génica sin embargo no
puede identificar defectos en ella.

RECOMENDACIONES

 El uso de microarrays se debería


complementar con técnicas de
análisis de expresión proteica.
Figura N°03: Gen 6219 expresado en células  Antes de usar microarrays se
cancerosas y sanas (Abad, 2018).
sugiere tener conocimiento de
Sin embargo en las células cancerosas el cómo están hechos, de manera
mRNA es defectuoso. Esta anormalidad que se pueda saber si son
no pudo ser detectada con microarrays ya apropiados para el estudio a
que en ambas células se está realizar.
transcribiendo el gen, es por ello que
para detectar este defecto la mayoría de REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS
científicos ha utilizado técnicas de American Cancer Society. (2012). Cáncer
análisis de expresión proteica. de piel: células basales y células
escamosas. Obtenido de
https://www.migrantclinician.org/fi
CONCLUSIONES les/SkinCancerBasalCellsAndFlaky
Cells_0.pdf
 Trabajar con un microarray fue
Gálvez, F. (2017). Hidden Nature.
muy eficaz ya que permitió Obtenido de Chips de ADN o
microarray: https://www.hidden-
analizar miles de genes al mismo
nature.com/chips-de-adn-o-
tiempo. microarray/
 Se logró diferenciar los niveles Garza, J., & Juárez, P. (2014). El Cáncer.
Menterrey: Universidad Autónoma
de expresión génica entre células
de Nuevo León.
sanas y cancerosas de la piel.
Genetic Science Learning Center. (2018).
 Gracias a los microarrays se DNA Microarray. Obtenido de
https://learn.genetics.utah.edu/conte
puede saber que genes están
nt/labs/microarray/
activados o apagados en un
López, M., Mallorquín, P., & Vega, M.
(2002). Microarrays y Biochips de
ADN, Informe de Vigilancia
Tecnológica. España: Genoma
España, Salud Humana.
Tomislav, M. (2017). Aplicaciones del
Microarray. Obtenido de
https://www.news-medical.net/life-
sciences/Microarray-Aplications-
(Spanish).aspx